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  • 脐带间质干细胞与壳聚糖支架的生物相容性研究

    作者:孙晓春;蔡花;许文荣;许化溪;郑铁生

    探讨脐带间质干细胞与壳聚糖支架的生物相容性.分离培养脐带间质干细胞,将其种植到壳聚糖支架上,观察细胞在支架上的形态特征,并检测细胞黏附性和细胞增殖活性.脐带间质干细胞能够在壳聚糖支架上黏附生长,并保持良好的细胞形态,与对照组相比,其黏附率和细胞增殖活性均无显著性差异.脐带间质干细胞与壳聚糖支架之间具有良好的生物相容性,可应用于复合材料的制备.

  • 6例脐带间充质干细胞移植治疗完全性脊髓损伤患者的护理

    作者:申艳;虞容豪;楚淑芳;旷水红

    脊髓损伤(spinal cord injuries,SCI)是一类中枢神经系统严重的致残性疾病,它导致严重的神经后遗症,到目前为止还没有有效的治疗方法.由于脊髓轴突再生能力的有限性.恢复的可能性是极小的[1].

  • 人脐带间质干细胞对大鼠的免疫毒性研究

    作者:李岩;刘拥军;秦超;陈威;徐萌;刘广洋;朱德琳;高虹

    目的:研究人脐带间质干细胞(UCMSC)对Wistar大鼠的免疫毒性作用.方法:SPF 级 Wistar 大鼠 112 只分为 4 组:溶媒组(给予溶媒5 ml/kg)、低剂量组(给予人UCMSC 1×10<'7>个/kg)、高剂量组(给予人UCMSC 5×10<'7>个/kg)和对照组(给予大鼠UCMSC 1×10<'7>个/kg).每组28只大鼠,雌雄各14只.大鼠尾静脉注射给药,2周 1 次,共注射 4 次.给 UCMSC 后每周进行受体鼠临床移植物抗宿主病(GVHD)评分,末次注射UCMSC后1、13周检测血IgG、IgM含量,CD3<'+>、CD4<'+>、CD8<'+>T细胞数量,并对大鼠淋巴结、胸腺、脾脏进行脏器系数计算和组织病理学检查.结果:给予UCMSC后,各组大鼠的GVHD评分值均为0.末次给予UCMSC后1周,低、高剂量组雌性大鼠IgG[(0.65±0.12)、(0.63±0.14)g/L]和IgM含量[(0.06±0.01)、(0.06±0.01)g/L]明显高于溶媒组雄性大鼠[(0.41±0.17)g/L、(0.04±0.01)g/L,P<0.01或P<0.05];高剂量组雄性大鼠IgM含量[(0.05±0.01)g/L]明显高于溶媒组雄性大鼠[(0.03±0.01)g/L,P<0.01];对照组雌性、雄性大鼠IgM[(0.06±0.02)、(0.05±0.02)g/L]也明显高于溶媒组(P<0.01或P<0.05).末次给予UCMSC后13周,各剂量组雌、雄性大鼠IgG、IgM与溶媒组相比差异均无统计学意义(均P>0.05).末次给予UCMSC后1周,低、高剂量组雌性大鼠的脾脏系数[分别为(0.274±0.016)%、(0.294±0.019)%]明显高于溶媒组[(0.232±0.012)%,P<0.01];高剂量组雄性大鼠的脾脏系数[(0.242±0.027)%]明显高于溶媒组[(0.202±0.012)%,P<0.01];对照组雌、雄性大鼠脾脏系数[分别为(0.261±0.019)%、(0.236±0.014)%]也明显高于溶媒组(P<0.05或P<0.01).末次给予UCMSC后13周各组大鼠的脾脏和胸腺系数差异均无统计学意义(均P>0.05).各组大鼠CD3<'+>、CD4<'+>、CD8<'+>T细胞百分比及CD4<'+>/CD8<'+>'比值均在正常范围内.各组大鼠胸腺、脾脏和肠系膜淋巴结组织病理学检查均未见明显异常.结论:人脐带间质干细胞可引起正常Wistar大鼠免疫球蛋白含量和脾脏系数的升高,该作用具有一过性和可逆性.

  • 葛根素对脐带间质干细胞增殖与成骨分化的作用

    作者:蔡花;吴乐乐;孙晓春;朱伟;钱晖;胡嘉波;许文荣

    葛根素是从豆科植物野葛的干燥根中提取的一种异黄酮类化合物.已广泛应用于临床,可治疗多种疾病,如冠心病、心绞痛、心肌梗死等.文献报道葛根素能够促进大鼠成骨细胞增殖,抑制破骨细胞的骨吸收活性,且能够促进大鼠骨髓间质干细胞成骨分化,对骨质疏松症有治疗作用.

  • 人脐带间质干细胞培养上清液可下调肝星状细胞转化生长因子β的表达

    作者:李明亮;姚志成;钟跃思;林楠;许瑞云;邓美海

    背景:人脐带间质干细胞有望成为治疗肝纤维化新的种子细胞,但目前相关的体外实验报道较少.目的:探讨人脐带间质干细胞培养液上清对大鼠肝星状细胞纤维化形成生物学活性的影响及可能的作用靶点.方法:将肝星状细胞以1.0×108 L-1接种于六孔板内,无血清培养24 h后,加入2 mL 脐带间质干细胞培养液上清处理肝星状细胞,设为实验组;对照组为加入等量完全培养基处理肝星状细胞;RT-PCR 法检测肝星状细胞内转化生长因子β1、collagen-α1、TIMP-2 mRNA 表达;Western blot 法检测肝星状细胞内转化生长因子β1 蛋白表达.结果与结论:实验组中肝星状细胞内转化生长因子β1、collagen-α1、TIMP-2 mRNA 表达较对照组明显下调,且随处理时间的延长,mRNA 表达的下调程度亦随之增强(实验组72 h> 实验组48 h> 对照组);实验组肝星状细胞内转化生长因子β1 蛋白表达较对照组下调,同时具有时间依赖性(对照组>实验组48 h>实验组72 h,P < 0.05).提示脐带间质干细胞可抑制肝星状细胞纤维化形成的生物学活性,并可能是通过针对转化生长因子β靶点及其下游基因产物起作用.

  • 5-氮杂胞苷诱导脐带间充质干细胞向成肌细胞分化研究

    作者:蓝建发;罗新;宋泓;石海燕;郭红宇

    目的 探讨人脐带间充质千细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,HuMSCs)向成肌细胞分化.方法 贴壁法分离HuMSCs;流式细胞仪分析其表面抗原;透射电镜及原子力电镜观察细胞超微结构;5-氮杂胞苷诱导细胞向成肌细胞分化;逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测成肌细胞特异基因结蛋白(desmin)和重链肌球蛋白(myosin heavy chain,MHC)表达;蛋白质印迹法(Western Blot)检测特异蛋白desmin和MHC表达.结果 贴壁法稳定从脐带分离出细胞;HuMSCs不表达CD31、CD34、CD45,强表达CD29、CD90、CD44、CD105,极低表达HLA-DR、CD40;5-氮杂胞苷诱导后干细胞表达成肌细胞特异基因及蛋白明显高于对照组.结论 贴壁法分离HuMSCs可靠、纯度高;5-氮杂胞苷可诱导HuMSCs向成肌细胞分化.

  • 脐带间充质干细胞对T细胞的免疫调控研究

    作者:张颢;龚伟;孟磊;池颖;张浪辉;陈志哲;刘拥军;韩忠朝

    目的:研究脐带源间充质干细胞(UC-MSCs)异源T淋巴细胞的免疫调节作用.方法:从脐带中分离和培养间充质干细胞,流式细胞术检测其表面标志以鉴定纯度;用Brdu法测定细胞增殖率,观察UC-MSCs对异体T淋巴细胞增殖的影响;流式细胞仪检测共培养体系中CD4+、CD8+水平检测及UC-MSCs对T淋巴细胞转化的影响;且用ELISA法检测共培养上清细胞因子IL-4、IFN-γ的表达水平.结果:从脐带获得的MSC免疫表型分析显示,其不表达HLA-Ⅱ抗原.对PHA刺激的脐带血T淋巴细胞,UC-MSCs对其的增殖反应具有抑制作用,呈细胞数量剂量依赖性;UC-MSC与脐带血单个核细胞共培养体系中,CD8+细胞比例降低,与对照组有显著性差异(P<0.01),CD4+细胞比例无明显变化(P>0.05);UC-MSC抑制了共培细胞养体系中IFN-γ分泌,然而促进了IL-4的分泌,与对照组有显著性差异(P<0.01).结论:UC-MSCs抑制PHA刺激的T淋巴的增殖,能够改变T细胞亚群及T细胞分泌的细胞因子,这种抑制特性表明,UC-MSCs对免疫反应具负调节作用,可能为GVHD的防治以及自身免疫性疾病治疗提供一条新途径,有助于UC-MSC的临床应用.

  • 还原型谷胱甘肽对脐带间质干细胞生物学特性的影响

    作者:孙晓春;孙敏;谢岩;吴乐乐;朱伟;陈巧林;陆荣柱;许文荣

    目的 探讨还原型谷胱甘肽(GSH)对脐带间质干细胞生物学特性的影响.方法 用MTT法检测脐带间质干细胞活力、细胞计数法绘制细胞生长曲线、流式细胞仪检测细胞周期和表面标志,成骨诱导后组织化学检测碱性磷酸酶(ALP)表达.结果 GSH浓度低于0.15 mg/ml时可促进脐带间质干细胞的增殖,高于此浓度时对细胞的抑制作用随浓度加大而逐步增强.GSH可缩短脐带间质干细胞到达生长平台期的时间并延长细胞传代的代数,细胞周期检测显示S期显著增加,同时GSH对脐带间质干细胞表面标志无明显影响,成骨诱导分化后ALP表达阳性率无明显改变.结论 低浓度GSH可促进脐带间质干细胞的增殖,0.15 mg/ml浓度可以达到佳促进增殖效果,同时对细胞表面标志与向成骨细胞分化的能力无明显影响,可以用于体外对脐带间质干细胞的扩增.

  • 人脐带间质干细胞来源的exosomes对肝细胞过氧化损伤的保护作用

    作者:王冰莹;肖宇晴;蒋留留;李里明;李霞;贾浩源;周颖;叶惠慧;许文荣

    目的 探讨人脐带间质干细胞来源的exosomes (hucMSC-Ex)对四氯化碳(CCL4)诱导的肝细胞氧化应激损伤的保护作用.方法 将体外培养的人肝细胞系HL7702分为对照组(常规培养)、CCL4损伤组及hucMSC-Ex处理组(CCL4+ hucMSC-Ex).免疫荧光检测CM-Dil染料标记的hucMSC-Ex进入HL7702细胞的情况;免疫组织化学法分析细胞过氧化物8-羟基脱氧鸟嘌呤(8-OHdG)的表达水平;比色法检测培养上清中谷胱甘肽(GSH)和丙二醛(MDA)的含量;western blot分析P38MAPK通路的活化情况.结果 免疫荧光结果显示,hucMSC-Ex可转移进入HL7702细胞;比色法结果表明,与对照组相比,CCL4损伤组HL7702细胞培养上清中GSH含量下降,MDA上升(P<0.01),hucMSC-Ex处理组GSH和MDA含量无显著性变化;免疫组化结果显示,与对照组相比,CCL4损伤组8-OHdG表达阳性的HL7702细胞(胞核棕黄色)数量明显增高,而hucMSC-Ex处理组阳性细胞数量无明显变化;western blot结果表明,CCL4损伤组P-P38蛋白表达水平明显上升,而hucMSC-Ex处理组P-P38蛋白表达下降,其P-P38与P38/GAPDH蛋白的灰度值较CCL4损伤组下降约2.4倍.结论 HucMSC-Ex可减轻CCL4诱导的肝细胞过氧化损伤.

  • 脐带间质干细胞来源的外泌体抑制TGF-β1诱导的NRK-52E细胞上皮-间质转化

    作者:俞静;张荣雪;贾浩源;王娟娟;纪成;许文荣;钱晖

    目的: 探讨脐带间质干细胞来源的外泌体(exosome from human umbilical mesenchymal stem cells, hucMSC-ex)对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的NRK-52E细胞上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition, EMT)的影响及其机制.方法: 体外培养大鼠肾小管上皮NRK-52E细胞,TGF-β1诱导使其发生EMT作为诱导组,未经任何处理的NRK-52E细胞为对照组,TGF-β1处理24 h后加入hucMSC-ex共培养48 h为干预组.倒置显微镜下观察各组细胞形态;蛋白质印迹法检测细胞中E-钙黏蛋白、N-钙黏蛋白、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、I型胶原α1链(Col1A1)和TGF-β1等蛋白表达,qRT-PCR检测miR-199a表达.结果: TGF-β1诱导24 h后,细胞由卵圆形变为长梭形,且细胞密度降低.给予hucMSC-ex干预后,细胞形态恢复.与对照组相比,诱导组E-钙黏蛋白表达降低,N-钙黏蛋白,α-SMA、Col1A1和TGF-β1表达升高;干预组相关蛋白表达较诱导组发生逆转;诱导组中miR-199a表达下调,而hucMSC-ex干预组表达增加.结论: hucMSC-ex通过上调NRK-52E细胞miR199a表达逆转由TGF-β1诱导的EMT作用.

  • 脐带间质干细胞多向分化潜能的鉴定

    作者:徐飞;钟天鹰;武开宏

    目的:研究脐带间质干细胞的多向分化潜能,为心血管组织工程研究提供一个新的种子细胞来源.方法:采用胶原酶胰酶消化脐带组织,将获得的细胞传代培养,流式细胞仪鉴定细胞表面分子,再以不同方法使其向骨、脂肪、心肌和内皮细胞方向诱导,分别采用Yon Kossa、油红O染色和免疫组化对分化的细胞进行鉴定.结果:脐带间质干细胞分别向成骨细胞和成脂肪细胞诱导培养后,Von Kossa染色和油红O染色阳性.在5-氮胞苷诱导后,心肌特异性抗体肌动蛋白α-actin和肌球蛋白mvosin免疫组化染色阳性.在VEGF诱导后,细胞形成网格样结构,免疫荧光示CD31、CD34染色阳性.结论:脐带间质干细胞具有分化为骨、脂肪、心肌和内皮细胞的潜能,是非常有前途的心血管组织工程种子细胞来源.

  • 不同来源间质干细胞对大鼠肝纤维化的治疗作用

    作者:李明亮;钟跃思;徐见亮;姚志成;颜见;邓美海

    目的 观察脐带间质干细胞(UMSCs)和骨髓间质干细胞(BMSCs)对CCl4诱导大鼠肝纤维化的治疗作用.方法 通过50% CCl4橄榄油皮下注射10周建立大鼠肝纤维化模型,随机平均分为UMSCs组、BMSCs组及空白对照组,UMSCs组经尾静脉输注1ml UMSCs(2×109/L),BMSCs组输注1 ml BMSCs (2×109/L),空白对照组输注1 ml生理盐水,移植处理3周后处死所有大鼠.抽取血液检测移植处理前后各组大鼠肝功能指标[谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、总胆红素(TBIL)、白蛋白(ALB)],取肝脏标本苏木素-伊红(HE)染色行病理检查及量化计分.结果 (1)移植处理3周后,与空白对照组大鼠ALT、AST、TBIL指标[(637.60±42.38) U/L、(525.80 ±40.20) U/L、(17.26±0.68)μmol/L]比较,BMSCs组[(168.80±8.35) U/L、(352.00±33.64) U/L、(14.12±0.34),mol/L]和UMSCs组[(163.60±7.30) U/L、(339.00±44.94) U/L、(13.96±0.29) μmol/L]均降低,差异均有统计学意义(P<0.05),ALB指标差异无统计学意义(P>0.05);与BMSCs组比较,UMSCs组大鼠ALT、AST、TBIL及ALB指标差异均无统计学意义(p>0.05).(2)与移植处理前各组ALT、AST、TBIL指标[空白对照组:(337.80±13.97)U/L、(436.40±23.27) U/L、(15.20±0.57) μmol/L; BMSCs组:(337.40±14.10) U/L、(439.40±15.27) U/L、(15.52±0.47) μmol/L;UMSCs组:(337.40±16.21) U/L、(437.20±25.15) U/L、(15.54±0.72).μmol/L]比较,处理3周后BMSCs组和UMSCs组相应指标均降低,空白对照组相应指标均升高,差异均有统计学意义(P<0.05);移植处理前后各组大鼠ALB指标差异无统计学意义(P>0.05).(3)与空白对照组比较,BMSCs组和UMSCs组肝脏炎症活动度及纤维化程度均减轻,量化计分(空白对照组:13.20±1.79、15.90±5.28;BMSCs组:4.70±1.57、6.00±1.70; UMSCs组:4.30±1.79、5.90±0.82)差异有统计学意义(P< 0.05);UMSCs组与BMSCs组计分差异无统计学意义(P>0.05).结论 UMSCs和BMSCs移植均可改善CCl4诱导的肝纤维化大鼠的肝功能,减轻肝脏的炎症活动度及纤维化程度,其中UMSCs的改善效果稍优于BMSCs.

  • 人脐带间质干细胞体外条件下调控人肝细胞生长及功能的研究

    作者:胡昆鹏;姚志成;刘波;陈骋;熊志勇;钟跃思;许瑞云;邓美海

    目的 探讨人脐带间质干细胞体外条件下调控人原代肝细胞增殖及功能的作用及其机制.方法 实验组将人脐带间质干细胞/原代肝细胞按1 ×105/1 ×105(个/孔)的比例接种于Transwell共培养板上下层共培养;对照组为原代肝细胞单独培养;共培养1、3、7d后应用流式细胞仪分析细胞周期;酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测白蛋白(ALB)和尿素的分泌;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测ALB、细胞角蛋白-18(CK18)、肝细胞生长因子(HGF)及c-met mRNA的表达.结果 共培养1、3、7d后原代肝细胞处于S期细胞比例与对照组比较明显增多,且增殖作用随共培养时间的增多而加强,差异有统计学意义(55.71% >44.53% >36.02% >29.13%,P<0.05);共培养组ALB分泌量(μg/L)明显增加,差异有统计学意义(21.18> 17.12,30.90> 13.46,15.14>8.80,P <0.05),尿素分泌量(mg/L)得出同样的结果(211.18> 190.40,280.84> 75.64,152.06> 33.90,P <0.05),在共培养各组别中,共培养3d时,尿素及白蛋白达到峰值,差异有统计学意义(P<0.05),而且共培养7d时仍保持较高水平的尿素及白蛋白分泌水平,与共培养1d比较,差异无统计学意义(P>0.05);与对照组比较,共培养各组别(1、3、7d)均可上调细胞内ALB、CK18、HGF及c-met mRNA的表达,共培养3d时原代肝细胞(PHHs)细胞内ALB mRNA上调显著,而CK18、HGF及c-met mRNA的表达上调则在共培养7d时为显著.结论 人脐带间质干细胞在体外条件下可通过旁分泌机制促进人原代肝细胞的生长增殖,保护其细胞功能,上调人原代肝细胞内HGF及其受体的表达可能是其中的机制之一.

  • 脐带间充质干细胞治疗难治性系统性红斑狼疮临床分析

    作者:杨桂鲜;潘丽萍;宋薇;周巧艳;陈志琴;汪成孝;吴艳波;王晞;陈强

    目的:探讨脐带间充质干细胞(umbilical cord mesenchymal stem cells, UC-MSCs)移植治疗难治性系统性红斑狼疮(systemic lupus erythe matosus, SLE)的疗效和安全性。方法:40例难治性SLE随机分成两组,1组糖皮质激素加CTX治疗,2组在此基础上移植UC-MSCs,观察两组病例治疗前和治疗后2周、1个月、2个月、3个月、6个月、9个月、12个月的临床表现和实验室检查的变化。结果:治疗后2周患者SLEDAI评分降至<10分者1组12例(60%),2组18例(90%),两组比较差异有统计学意义(字2=7.619,P=0.006);治疗1年后观察结果显示:PLT、ALB、C3均数2组较1组高(P<0.05),SLEDAI、U-Pro、ESR、hs-CRP 1组较2组高(P<0.05),WBC、Cr、C4两组差异无统计学意义(P>0.05);1组复发率为45%,2组15%,两组差异有统计学意义(χ2=4.286,P=0.038)。结论:难治性SLE在使用糖皮质激素加CTX治疗的基础上移植UC-MSCs安全、有效,但其远期疗效及不良反应有待进一步观察。

  • 脐带间充质干细胞移植治疗狼疮性肾炎的临床疗效

    作者:杨桂鲜;潘丽萍;陈志琴;宋薇;周巧艳

    目的:观察脐带间充质干细胞(umbilical cord mesenchymal stem cells, UC-MSCs)移植治疗狼疮性肾炎(lupus nephritis, LN)的临床效果。方法:UC-MSCs 移植治疗20例 LN 患者,每例患者移植3×107个 MSCs 2次,观察患者移植前及移植后2周、1、2、3、6、9、12个月的临床表现和实验室指标的变化。结果:随访12个月,1例患者失访,移植后1个月内患者 SLE 疾病活动度指数(SLEDAI)、尿蛋白(U-Pro)、血沉、高敏C 反应蛋白、血肌酐明显下降,白蛋白、补体 C3、补体 C4升至正常,与移植前比较差异有统计学意义(P <0.05),移植后1~6个月上述指标较稳定,移植后9~12个月 SLEDAI、U-Pro 数值有所回升,但仅2例复发,与移植前比较差异仍有统计学意义(P <0.05);移植前后白细胞、血小板差异无统计学意义(P >0.05);移植中患者无不适,随访期间未发现移植相关并发症。结论:UC-MSCs 移植治疗难治性 SLE、LN 能明显改善病情,复发率低,到目前为止未发现不良反应,但由于随访时间有限,故其疗效及副作用有待进一步研究。

  • 脐带间质干细胞来源外泌体的安全性评估

    作者:骆峻;丁利军;周强;韩奕文;缪文玲

    目的 评估脐带间质干细胞(huc-M SC)来源的外泌体作为一种临床应用生物制品的自身安全性.方法 超速离心法分离外泌体,利用蛋白质印迹法(WB)检测外泌体表面标记CD9、CD63,利用纳米颗粒跟踪分析技术(NT A)检测外泌体的大小及浓度.溶血试验、全身过敏性试验和血常规检测验证外泌体的自身安全性.结果 外泌体表达外泌体特异性分子CD9、CD63,外泌体不会引起溶血、全身过敏反应及血常规异常.结论 脐带间质干细胞来源的外泌体具有外泌体的一般特征,且具有一定的安全性,为外泌体今后在临床上的应用提供了实验依据.

  • 脐带间充质干细胞移植辅助治疗系统性红斑狼疮的疗效观察

    作者:杨桂鲜;潘丽萍;周巧艳;宋薇;陈志琴;汪成孝;吴艳波;王唏;陈强

    目的 观察脐带间充质干细胞(UC-MSCs)移植辅助治疗难治性系统性红斑狼疮(SLE)的疗效.方法 37例难治性SLE患者分为对照组(n=20)和治疗组(n=17),均接受糖皮质激素和环磷酰胺(CTX)治疗;治疗组加UC-MSCs移植治疗,每例患者静脉输注移植3×107个UC-MSCs,观察所有患者移植前及移植后2周、1月、2月、3月、6月、9月、12月的临床表现和实验室检查的变化.结果 两组治疗12月后24 h尿蛋白定量、抗核抗体、高敏C反应蛋白、血沉、狼疮活动指数均较治疗前下降(P<0.05),治疗组低于对照组(P<0.05);两组白蛋白(ALB)、补体(C3、C4)在治疗后高于治疗前,治疗后ALB、C3治疗组较对照组高(P<0.05);对照组抗双链DNA(Anti-dsDNA)治疗后阳性率[40%((8/20)]高于治疗组[5.88%(1/17)](P<0.05);对照组复发率[50%(10/20)]高于治疗组[11.76%(2/17)](P<0.05);未发现移植相关并发症.结论 在经典的糖皮质激素加CTX治疗基础上加用UC-MSCs移植治疗难治性SLE,安全有效,复发率低,但样本量小,观察时间短,长期疗效及副作用需进一步研究.

  • 无动物源成分培养基用于人脐带间充质干细胞培养的研究

    作者:任春红;张昕

    目的 建立一种无动物源成份无血清的间充质干细胞培养基XF/SF-MSCM,并探讨其支持人脐带间充质干细胞(hUC-MSCs)体外增殖、维持分化潜能的效果.方法 组织块贴壁法分离获得原代人脐带间充质干细胞,P1代起分别使用自制的XF/SF-MSCM培养基与含10%胎牛血清的传统培养基(SC-MSCM)对脐带间充质干细胞进行连续培养传代至P6代,观察比较两组P6代细胞的形态及增殖能力,以流式细胞术检测连续传代后细胞的免疫学表型,比较其成骨、成脂肪的分化潜能.结果 分离获得的原代P0脐带间充质干细胞,分别在XF/SF-MSCM与SC-MSCM两种培养基中连续培养传代,细胞增殖能力及形态无显著差别.两组P6代细胞的生长曲线相似,但XF/SF-MSCM组间充质干细胞贴壁的紧密程度稍低;流式细胞检测结果显示,XF/SF-MSCM组细胞保持了间充质干细胞的免疫学表型,高表达CD29、CD44、CD90,不表达CD31、CD34 、CD45并维持了良好的成骨和脂肪细胞的分化能力.结论 本室制备的无动物源成份无血清培养基XF/SF-MSCM可支持脐带间充质干细胞的体外扩增,维持其免疫学表型及分化潜能,提供数量充足的高质量间充质干细胞,满足临床治疗及生物医学研究的需要.

  • 脐带间充质干细胞治疗系统性红斑狼疮的量效关系

    作者:杨桂鲜;潘丽萍;陈志琴;周巧艳;汪成孝

    目的 观察脐带间充质干细胞(UC-MSCs)移植治疗难治性系统性红斑狼疮(SLE)的量效关系.方法 40例SLE患者随机分为两组,全部患者均接受糖皮质激素和环磷酰胺(CTX)治疗;1组加静脉输注3 × 107个UC-MSCs,2组加静脉输注3×107个UC-MSCs2次,观察患者治疗前及治疗后2周、1月、2月、3月、6月、9月、12月、18月的临床表现和实验室检查的变化.结果 两组治疗前各观察指标无显著差异(P>0.05);两组病例治疗前后WBC,Cr变化不大(P>0.05),而U-Pro,ANA,Hs-CRP,ESR,Anti-dsDNA阳性率在治疗后显著减低(P<0.05),血白蛋白、补体升高(P<0.05),SLEDAI也随之下降(P<0.05),且U-Pro,ANA,补体3、Anti-dsDNA阳性率在治疗后期2组低于1组(P<0.05),补体32组高于1组(P<0.05);UC-MSC输注时及输注后均未出现移植相关并发症.结论 在经典的糖皮质激素加CTX治疗基础上加用UC-MSCs治疗SLE,患者病情明显改善,疗效稳定,持续时间长,且剂量与疗效存在正相关,到目前为止未发现移植相关不良反应,但由于本研究样本量小,观察时间短,其作用途径、长期疗效及安全性有待进一步研究.

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