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脐带间质干细胞与壳聚糖支架的生物相容性研究
探讨脐带间质干细胞与壳聚糖支架的生物相容性.分离培养脐带间质干细胞,将其种植到壳聚糖支架上,观察细胞在支架上的形态特征,并检测细胞黏附性和细胞增殖活性.脐带间质干细胞能够在壳聚糖支架上黏附生长,并保持良好的细胞形态,与对照组相比,其黏附率和细胞增殖活性均无显著性差异.脐带间质干细胞与壳聚糖支架之间具有良好的生物相容性,可应用于复合材料的制备.
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骨髓间充质干细胞的三维培养
目的:研究三维培养环境下骨髓间充质干细胞的生长情况,探讨骨髓间充质干细胞复合支架构建组织工程软骨的可行性.方法:全骨髓培养法分离骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cells,BMSCs),免疫细胞化学测定其细胞表面抗原CD44、CD45,对BMSCs进行鉴定；冻干法制备壳聚糖(Chitosan,CS)支架,扫描电镜观测支架孔径；取BMSCs复合CS支架,通过三维培养观察BMSCs在CS支架上不同时段的生长情况.结果:三维培养环境下骨髓间充质干细胞生长良好,细胞在支架上分泌大量细胞外基质,并与支架黏附良好.结论:骨髓间充质干细胞可作为组织工程的种子细胞,构建组织工程软骨.
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壳聚糖支架与BGC-823细胞的体外生物相容性研究
目的 探讨壳聚糖(chitosan scaffold,CS)支架与细胞的生物相容性,为CS的体内安全应用提供实验依据.方法 采用细胞形态学和MTT法评价CS支架对人胃腺癌细胞系BGC-823生物学特性的影响.在细胞培养液中分别加入不同浓度的明胶固化CS支架浸提液,倒置显微镜下观察各组细胞形态学变化,计数并绘制生长曲线;用MTT法检测并计算细胞相对增殖率.结果 不同浓度的CS支架浸提液对体外培养的各组细胞形态无明显影响,对细胞增殖抑制不明显(P均＞0.05),不同浓度CS支架浸提液的细胞毒性均为0～1级.结论 CS支架与BGC-823细胞有良好的生物相容性,有望成为理想的医用生物材料.
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自体脂肪基质细胞组织-脱细胞骨基质-壳聚糖支架修复胫骨缺损及其生物相容性研究
目的:探讨自体脂肪基质细胞组织(SVF)-脱细胞骨基质-壳聚糖支架修复胫骨缺损及其生物相容性.方法:于2016年4月9日选取辽宁医学院动物实验中心4月龄大白兔40只,随机选取其中1只提取兔SVF组织10 g,体外分离培养脂肪基质细胞并行脂肪基质细胞多向分化(成脂和成骨诱导),以种植密度3×107个/cm2种植于脱细胞骨基质-壳聚糖支架上并制成SVF-脱细胞骨基质-壳聚糖支架,将P3代的兔纤维软骨细胞分别种植到SVF-脱细胞骨基质-壳聚糖支架(作为SVF组)和脱细胞骨基质-壳聚糖支架(作为对照组)并进行组织学和生物相容性检测,同时将所有大白兔的建立兔胫骨缺损模型,并用上述两种支架进行移植修复治疗,统计分析所有支架第0,4,7,14天的DNA含量、细胞存活率和第0,2,4,8周时兔胫骨骨矿物、骨密度水平及修复疗效、第8周时大弯曲度负荷、抗弯刚度、破坏扰度水平.结果:SVF组第4,7,14天时DNA含量明显高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05);SVF组第4,7,14天时细胞存活率明显高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05);术后第8周,SVF组大体观察可见仿生骨膜大部分完整、有骨痂生长,组织学观察可见软骨内骨化明显、缺损基本修复,免疫组织化学观察可见成熟骨基质部分BMP染色阳性、着色变浅,对照组大体观察可见膜降解呈碎片状、骨端骨痂较硬,组织学观察可见膜材大部分降解且出现幼稚髓腔样结构,免疫组织化学观察BMP轻度表达、软骨基质BMP染色阳性,前者第2,4,8周时骨矿物、骨密度和第8周时大弯曲度负荷、抗弯刚度、破坏扰度水平明显高于后者,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:SVF-脱细胞骨基质-壳聚糖支架具有良好的生物相容性,SVF可作为骨组织工程的种子细胞,可能通过协同诱导、传导效应等增强骨再生麓力,且具有良好的生物力学效果,有利于促进胫骨骨缺损的修复,值得临床进一步推广.
关键词： 自体脂肪基质细胞组织 脱细胞骨基质 壳聚糖支架 胫骨缺损 生物相容性 -
低频电磁场对两种不同支架培养的表皮干细胞增殖的影响
目的 观察低频电磁场(LFEMF)对三维环境中培养的人表皮干细胞(ESCs)增殖的影响，为LFEMF用于皮肤组织工程提供实验依据。方法 取人包皮来源的ESCs作为种子细胞，利用Ⅳ型胶原快速贴壁法体外分离纯化ESCs，并种植于胶原海绵和壳聚糖支架材料，外加LFEMF治疗仪（场强5 mT，频率分别为1 Hz、10 Hz和50 Hz）刺激ESCs(30 min/d)，用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT)检测支架材料细胞毒性，通过肉眼、HE染色后DAPI荧光核染色后镜下观察及扫描电镜观察ESCs生长情况，并收集培养2，7，10,14 d ESCs的DAPI核荧光染色数据，用显微图像软件分析细胞增殖数目，比较各时间点细胞增殖的区别。结果 LFEMF促进ESCs增殖的作用在不同频率组间的差异和两种支架上培养的ESCs增殖情况的差异均有统计学意义(P＜0.01)，10 d后胶原海绵支架上细胞增殖较壳聚糖支架上的细胞明显(P＜0.05)，各频率组LFEMF刺激均能促进ESCs增殖，频率不同，促增殖的效应不一(P ＜0.05)。结论 胶原海绵可较好地作为体外培养ESCs的支架，在LFEMF干预下可实现ESCs体外三维环境中较快扩增，LFEMF在皮肤组织工程中具有较大应用潜力。
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壳聚糖支架上猪肝细胞的内源性逆转录病毒分泌
由于肝移植受供体短缺的限制,基于功能肝细胞的生物人工肝(BAL)有望成为等待肝移植患者的过渡性治疗手段,但已有的BAL临床试验结果并不理想.如何通过合适的支架材料提高肝细胞体外功能一直是该领域的研究热点[1].
