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MTHFR、TGF-β3基因多态性与非综合征性唇腭裂
目的:探讨MTHFR、TGF-β3基因多态性与非综合征性唇腭裂(NSCL/P)发生的关系.方法:查阅国内外的相关文献,对MTHFR、TGF-β3基因多态性与非综合征性唇腭裂发生的关系进行分析、总结.结果:关于MTHFR、TGF-β3基因多态性在NSCL/P发病过程中是否起作用,在不同人种、不同地区的报道结果不一致.结论:MTHFR、TGF-β3基因多态性在NSCL/P发病过程中的作用还不确定,有待进一步的研究证实.
关键词： 非综合征性唇腭裂 5 10-亚甲基四氢叶酸还原酶 转化生长因子-β3 基因多态性 -
转化生长因子-β3对肝脏和胰腺纤维化的影响
组织纤维化的基本特征是细胞外基质降解减少、过度沉积,导致组织结构的改建.TGF-β3通过抑制胶原的沉积,促进其降解而具有抗纤维化作用,并被证实在创伤愈合过程中可减轻伤后疤痕的形成.本文着重介绍了TGF-β3在肝脏及胰腺纤维化中的表达及其作用,以进一步了解其对纤维化疾病的影响.
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四氯二苯二噁英致胎鼠腭裂作用机制的初步探讨
目的 探讨四氯二苯二噁英(2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin,TCDD)致胎鼠先天性腭裂的可能作用机制.方法 12只C57BL/6J孕鼠于妊娠第10天随机分为实验组和对照组,每组6只,实验组以TCDD 64 μg/kg灌胃,对照组以等量玉米油灌胃,于妊娠第18.5天在解剖显微镜下观察胎鼠腭裂的发生率.另取18只C57BL/6J孕鼠,于妊娠第10天随机分为实验组和对照组,每组9只,处理方法同前,根据标本采集时间不同,每组又分为妊娠第13.5、14.5和15.5天3个亚组,每个亚组3只,分别于妊娠第13.5、14.5和15.5天剪取胎鼠腭突组织提取RNA和DNA,采用RTPCR检测Smad 2～4及Smad 7 mRNA的表达情况、甲基化特异性PCR(methylmion specific PCR,MSP)检测转化生长因子-β3(transforming growth factor-β3,TGF-β3)基因启动子甲基化水平.两样本间均数比较采用t检验.结果 TCDD成功诱导建立C57BL/6J胎鼠先天性腭裂模型,实验组腭裂发生率为100％,对照组无腭裂发生.在妊娠第13.5、14.5和15.5天,RT-PCR显示实验组Smad 2mRNA的相对表达值分别为0.263±0.088、0.296±0.016和0.159±0.027,对照组为0.180±0.042、0.282±0.029和0.165±0.018,差异无统计学意义(t=- 1.474、- 0.762、0.321,P＞0.05)；实验组Smad 3 mRNA的相对表达值分别为0.453±0.153、0.551±0.160和0.328±0.049,对照组为0.375±0.126、0.510±0.145和0.259±0.035,差异无统计学意义(t=-0.678、- 0.336、-2.005,P＞0.05)；实验组Smad 4 mRNA的相对表达值分别为0.675±0.174、0.577±0.070和0.396±0.066,对照组为0.557±0.138、0.587±0.080和0.441±0.054,差异无统计学意义(t=- 0.926、0.161、0.927,P＞0.05)；实验组Smad 7 mRNA的相对表达值分别为0.283±0.050、0.320±0.068和0.169±0.045,对照组为0.207±0.043、0.288±0.051和0.155±0.040,差异无统计学意义(t=-2.003、-0.651、-0.391,P＞0.05).MSP显示实验组和对照组TGF-β3基因启动子均处于非甲基化状态.结论 TCDD可致C57BL/6J胎鼠发生先天性腭裂,其机制不是通过经典的TGF-β/Smad信号通路和TGF-β3基因甲基化修饰而发生作用.
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转化生长因子-β3与纤维连接蛋白在子宫肌瘤及子宫肌层内的表达水平与生物学意义
目的:探讨转化生长因子(TGF)-β3与纤维连接蛋白(FN)在绝经或未绝经妇女子宫肌瘤及子宫肌层中表达的水平变化及其意义.方法:采用免疫组化法(SP)检测40例绝经后子宫肌瘤妇女(绝经组)、40例未绝经子宫肌瘤妇女(未绝经组)肌瘤组织及肌壁组织中的TGF-β3、FN的表达差异,同时将绝经组妇女根据肌瘤是否发生萎缩分为萎缩组(17例)、未萎缩组(23例)并进行上述指标的比较.结果:绝经组的肌瘤组织、肌壁组织中的TGF-β3表达评分分别为(3.11±0.78)分、(1.85±0.69)分均显著的低于未绝经妇女的(3.98±0.67)分、(2.31±0.82)分(P＜0.05);两组妇女肌瘤组织和肌壁组织中的FN表达评分差异不显著(P＞0.05).子宫肌瘤萎缩和未萎缩患者的子宫肌瘤组织、肌壁组织中TGF-β3、FN表达在两组间差异均不显著(P＞0.05),萎缩组和未萎缩组的肌瘤组织TGF-[β3表达分别为(2.90±0.65)分、(3.32±0.74)分均显著的高于本组肌壁组织中的(1.85±0.67)分、(2.25±0.61)分(P＜0.05);两组肌瘤和肌壁组织中的FN表达差异不显著(P＞0.05).结论:TGF-β3表达可能与患者绝经前后的激素水平改变有关.
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TGF-β3通过调控MMP-9/TIMP-1比例和VEGF表达延缓小鼠放射性肺纤维化
目的 观察经60 Coγ射线全胸照射后小鼠肺脏的改变,探究转化生长因子-β3(transforming growth factor-β3,TGF-β3)对放射性肺纤维化的相关调节机制.方法 180只C57BL/6雌性小鼠随机分为对照组、照射组和TGF-β3组.照射组和TGF-β3组经60 Coγ射线单次20 Gy胸部照射,照射后每7 d分别腹腔注射0.5 ml 0.9%生理盐水和TGF-β3(1μg/kg)1次.于照后1、3和6个月分别观察小鼠的体质量和肺质量,活杀后进行常规病理检查和Masson三色染色观察,免疫组织化学法检测肺组织中基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)和基质金属蛋白酶组织抑制剂-1(tissue inhibitor of metalloproteinases-1,TIMP-1)的表达,检测肺泡灌洗液(bronchoal-veolar lavage fluid,BALF)中血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)含量.结果 经胸部照射后,3组小鼠体质量均逐渐升高,照射组和TGF-β3组小鼠体质量较对照组呈明显下降趋势;小鼠肺质量在照后3个月和6个月时照射组和TGF-β3组明显高于对照组,照后6个月时,TGF-β3组小鼠肺质量高于照射组.病理切片HE染色和Masson三色染色结果显示与对照组相比,照后6个月时,照射组小鼠肺组织结构有显著的纤维化病灶形成,而TGF-β3组肺组织纤维化发病程度与照射组相比病症明显减轻;免疫组化结果显示加入TGF-β3后,肺组织MMP-9/TIMP-1的比例显著升高,并随照后时间延长而进一步增强;同时照射组的VEGF表达水平在照后明显增高,而TGF-β3组较对照组相比显著降低,从3个月开始表达水平趋于和对照组相同.结论 TGF-β3可能通过调节肺内MMP-9/TIMP-1比例升高,降低肺内VEGF的表达水平,从而减轻或延缓小鼠放射性肺纤维化.
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转化生长因子-β3对牙髓干细胞成骨早期蛋白的影响
目的 研究转化生长因子-β3(TGF-β3)对体外培养的兔牙髓干细胞(DPSCs)成骨向分化的影响.方法 采用酶消化法分别将兔牙髓与颅骨分离培养获得DPSCs与成骨细胞(OB),通过光镜观察细胞形态,免疫组化染色和茜素红染色对OB进行鉴定.取第3代DPSCs与OB,分为3组:DPSCs组(空白对照组)、OB组(阳性对照组)及DPSCs+TGF-β3组(实验组).培养第5天采用免疫组化染色检测各组细胞内Runt相关转录因子2(Runx-2)的表达;培养第7天采用碱性磷酸酶(ALP)活性测定试剂盒检测各组细胞内ALP的活性;培养第1、3、5、7天采用蛋白质印迹法(Western Blot)检测各组成骨特异性标志物Runx-2及TGF-β3蛋白的表达.结果 兔DPSCs多呈长梭形,突触多,OB多呈短梭形或成纤维样细胞形态,突触少而丰满;DPSCs与OB鉴定阳性.培养第5天,OB组与DPSCs+TGF-β3组细胞中的Runx-2蛋白表达均呈强阳性;培养第7天,两组细胞内的ALP活性差异无统计学意义(P>0.05).Western Blot结果显示,培养各时间点DPSCs组与另外两组比较Runx-2和TGF-β3蛋白相对表达量差异均具有统计学意义(均P<0.05);培养第7天,DPSCs+TGF-β3组Runx-2和TGF-β3蛋白相对表达量均高于另外两组,差异均具有统计学意义(均P<0.01).结论 TGF-β3可促进DPSCs成骨早期特异性蛋白的表达.
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转化生长因子β3在子痫前期胎盘中表达及意义
[目的]探讨转化生长因子β3 (TGF-β3)mRNA及蛋白在子痫前期胎盘组织中的表达变化及意义.[方法]应用实时定量PCR,检测10例子痫前期和10例正常妊娠的胎盘组织中TGF-β3 mRNA表达的水平,应用Western blot检测两组胎盘组织中TGF-β3 岛蛋白表达水平.[结果]与正常妊娠胎盘组织相比,子痫前期胎盘组织中TGF-β3 mRNA和蛋白表达水平明显增加(P＜0.05).[结论]TGF-β3 岛在子痫前期胎盘组织中表达增高,可能与子痫前期的发病机制有关.
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转化生长因子-β3对增生性瘢痕成纤维细胞的生物学作用
背景:哺乳类动物有3种TGF-β异构体即TGF-β1,β2,β3,这3种异构体各自具有独特而不同的生物学作用,TGF-β1是明显的促瘢痕形成因子,而TGF-β3可减少TGF-β1,β2的产生,从而减少细胞外基质(ECM)合成,因此,TGF-β3有可能是人体内天然的抗瘢痕形成因子.目的:通过外源性TGF-β3对增生性瘢痕成纤维细胞(HSFB)生长增殖及Ⅰ,Ⅲ型胶原及TGF-β1蛋白表达的影响,了解其生物学行为,为临床治疗提供理论依据.设计:随机对照实验研究.地点和对象:汕头大学医学院第二附属医院整形烧伤外科完成,对象为新鲜无菌增生性瘢痕组织,来源于本科收治及门诊手术的增生性瘢痕患者6例,男3例,女3例;年龄5～45岁.干预:6例增生性瘢痕成纤维细胞体外培养,分为4组,实验组又分为5,10,50 mg/L组分别加TGF-β3 5,10,及50 mg/L,对照组加入FBM1.5 mL,采用MTT比色法测定TGF-β3对HSFB增殖活性的影响,3H-脯氨酸掺人法测定其胶原合成,免疫组化检测Ⅰ,Ⅲ型胶原及TGF-β1蛋白表达情况.主要观察指标:TGF-β3对HSFB体外增殖,HSFB Ⅰ,Ⅲ型胶原及TGF-β1蛋白表达的影响,TGF-β3作用后HSFB胶原合成情况.结果:转化生长因子β3可抑制HSFB细胞增殖,作用120 h后实验组细胞密度分别为(6.34±0 51),(6.01±0.38),(5.24±0.65)×105/瓶,明显低于对照组(10.69±0.76)x105/瓶(F=102.432～163 024,P＜0.01);转化生长因子β3可抑制胶原蛋白合成,实验组(10,50mg/L组)脯氨酸含量分别为(164.01±70.27),(151 02±49 85)min-1明显低于对照组9231.56±67.83)min-1(q=32.124,31.021,P＜0.01);下调TGF-β1蛋白及Ⅰ型胶原蛋白表达;而对Ⅲ型胶原影响较小.结论:TGF-β3可抑制HSFB细胞增殖,下调TGF-β1蛋白表达,减少胶原合成,显示其具有抗组织纤维化的作用,具有临床应用价值.
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外源性转化生长因子-β3对肝星状细胞内源性转化生长因子-β3表达及其增殖的影响
目的 探讨外源性转化生长因子-β3( TGF-β3)对大鼠肝星状细胞(HSC)分泌内源性TGF-β3及细胞增殖的影响.方法 取大鼠HSC接种于12孔板,一组用不同浓度(0.08、0.4、2、10和50 ng/ml)的外源性TGF-β3干预2h后收集上清液,另一组用10 ng/ml外源性TGF-β3干预后在不同时间点(15 min、30 min、lh、2h、4h、8h,13 h)收集上清液,应用ELISA法检测TGF-β3含量.另取HSC接种于96孔板,一组用不同浓度(0.001、0.005、0.02、0.08、0.32、1.25、5、20、100、500 ng/ml)的外源性TGF-β3干预24 h,另一组用5 ng/ml外源性TGF-β3干预24和48 h,用噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖情况.倒置显微镜下观察空白对照组和外源性TGF-β3干预组HSC的大体形态.结果 当外源性TGF-β3浓度达2ng/ml时可明显促进内源性TGF-β3表达,随后内源性TGF-β3的表达量呈外源性TGF-β3浓度依赖性增长(F=210.168,P=0.00),该作用3h时达高峰[(0.845±0.028) ng/ml比(0.026±0.022) ng/ml].外源性TGF-β3浓度≥0.32 ng/ml时对HSC增殖有较弱的促进作用,但无剂量依赖关系(F=0.68,P=0.57).经TGF-β3干预的HSC镜下形态与空白对照组相比未出现明显变化.结论 外源性TGF-β3可促进HSC中内源性TGF-β3的表达,还可促进HSC增殖.外源性TGF-β3干预对HSC细胞大体形态无明显影响.
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龟鹿二仙胶汤含药血清对兔体外BMSCs向软骨细胞分化的干预作用
目的:探讨龟鹿二仙胶汤含药血清对骨髓间充质干细胞(BMSCs)向软骨细胞分化的干预作用.方法:抽取兔骨髓液,经体外分离、纯化、培养获得兔BMSCs,将第2代兔BMSCs分为龟鹿二仙胶汤中药含药血清组、软骨细胞组、单纯诱导剂组及空白对照组,进行培养1、2、3周后,通过细胞染色、透射电子显微镜、免疫组化等实验技术,观察各组对BMSCs诱导成软骨细胞的影响.结果:在转化生长因子-β3(TGF-β3)等诱导下龟鹿二仙胶汤中药血清可以明显促进软骨表型化BMSCs的GAG分泌及Ⅱ型胶原mRNA的表达,与软骨细胞组和单纯诱导剂组有显著性差异(P＜0.01).结论:龟鹿二仙胶汤含药血清可促进BMSCs向软骨细胞转化,优化骨组织工程的种子细胞体系,改善软骨组织的质量,延缓软骨的退化过程.
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盐酸氨溴索、地塞米松对大鼠胎肺TGF-β3表达的影响
目的 比较产前给药盐酸氨溴索、地塞米松对大鼠胎肺转化生长因子-β3(TGF-β3)基因和蛋白表达的影响.方法 9只孕鼠随机分为生理盐水对照组、地塞米松组、盐酸氨溴索组,每组3只.孕16、17、18 d腹腔注射给药3剂.孕19 d取胎鼠肺, RT-PCR法检测TGF-β3基因表达水平;免疫组织化学法检测TGF-β3蛋白表达水平.结果 地塞米松组和盐酸氨溴索组TGF-β3基因和蛋白的表达均明显高于对照组 (P＜0.05).地塞米松组TGF-β3基因和蛋白的表达高于盐酸氨溴索组(P＜0.05).结论 产前给药盐酸氨溴索、地塞米松均能促进胎肺发育相关因子TGF-β3基因及蛋白的表达,从而促进胎肺功能的发育.
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TGF-β3在关节软骨组织工程的研究进展
骨关节炎目前尚无有效治疗方法.转化生长因子-β3(TGF-β3)是转化生长因子超家族蛋白之一,可与生物支架联合诱导细胞成软骨分化,可诱导骨髓间充质干细胞、软骨细胞、脂肪间充质干细胞、滑膜间充质干细胞等种子细胞成软骨分化,可与成纤维细胞生长因子、胰岛素样生长因子、骨形态发生蛋白等其他生长因子联合促进软骨细胞生长,在骨关节的软骨生长和重建中起着关键性的作用.
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骨形成蛋白-2与转化生长因子-β3对牙髓干细胞成骨向分化的对比研究
目的 探讨转化生长因子-β3(transforming growth factor-β3,TGF-β3)、骨形成蛋白-2(bone morphogenetic protein-2,BMP-2)对牙髓干细胞(dental pulp stem cells,DPSCs)成骨向分化的影响.方法 健康新西兰幼兔4只,取牙髓组织采用酶解组织块法分离培养获得DPSCs,镜下观察细胞形态及生长状况.将培养的第3代DPSCs分为BMP-2组和TGF-β3组,分别加入浓度为80 μg/L的BMP-2、TGF-β3的完全培养液,采用免疫组织化学法于诱导第3、7天检测Ⅰ型胶原蛋白(collagen-Ⅰ,COL-Ⅰ)表达,于第7、14天检测骨钙素(osteocalcin,OC)表达;诱导第7、14天,对BMP-2组、TGF-β3组行碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)染色后,倒置显微镜下观察ALP活性染色结果.结果 兔DPSCs分离、培养48 h,组织块周围有细胞游出、贴壁生长,培养的第3代兔DPSCs大多为长梭形,也可为多角形,呈巢式或集落生长;TGF-β3组诱导第3天COL-1表达的累计吸光度(integrated optiacal density,IOD)值(159 676.79±63 959.56)高于BMP-2组(44 047.33±15 853.65) (P＜0.05),诱导第7天COL-1表达的IOD值(245 378.26±60 084.60)与BMP-2组(223 294.43±80 266.72)比较差异无统计学意义(P＞0.05);TGF-β3组诱导第7天OC表达的IOD值(109 568.82±14 079.88)高于BMP-2组(55 168.57±1 694.93)(P＜0.05),诱导第14天OC表达的IOD值(411 544.95±82 803.24)与BMP-2组(360 103.54±20 835.36)比较差异无统计学意义(P＞0.05);BMP-2组、TGF-β3组诱导第7天出现少量淡蓝色ALP阳性区,诱导第14天蓝色ALP阳性区增大且蓝染颜色加重,镜下观察2组无明显差异.结论 与BMP-2比较,TGF-β3对早期兔DPSCs向成骨细胞分化有较明显的促进作用.
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外源性转化生长因子-β3联合兔牙髓干细胞对兔骨缺损处成骨细胞转化生长因子-β3表达的影响
目的 探讨转化生长因子-β3(transforming growth factor-β3,TGF-β3)联合体外培养的兔牙髓干细胞(dental pulp stem cells,DPSCs)对兔骨缺损处成骨细胞TGF-β3表达的影响.方法 37只新西兰大白兔,取其中1只兔牙髓组织采用酶解组织块法分离培养获得DPSCs,体外培养,光镜下行细胞形态学观察,将DPSCs传代至第3代,冷冻储存待用.余36只新西兰大白兔随机分为PBS组、DPSCs组、TGF-β3+DPSCs组,每组12只.在兔下颌前牙及磨牙区颊侧随机人工制备约8 mm×2 mm×3 mm骨缺损区域,PBS组植入Bio-Oss粗颗粒骨粉0.30 g+PBS 20 μL,DPSCs组植入Bio-Oss粗颗粒骨粉0.30 g+1×108/L DPSCs 20 μL,TGF-β3+ DPSCs组植入Bio-Oss粗颗粒骨粉0.30 g+1×108/L DPSCs20 μL+80 ng/L TGF-β320 μL.术后第4、8周3组分别处死6只兔,在骨缺损处行锥形束CT检查观察牙槽骨长度、宽度和高度丧失情况,采用茜素红染色观察骨缺损处骨愈合情况,采用免疫组织化学法观察种植体骨缺损处成骨细胞TGF-β3表达水平.结果 原代培养的兔DPSCs呈集落生长,多呈梭形,少数呈多角形或纺锤形;术后4周TGF-β3+DPSCs组茜素红染色较PBS组、DPSCs组出现更多红色钙化结节,术后8周钙化结节进一步增多;术后4、8周,TGF-β3+ DPSCs组牙槽骨长度、宽度和高度丧失均少于DPSCs组和PBS组,DPSCs组少于PBS组(P＜0.05);术后4周,TGF-β3+ DPSCs组成骨细胞TGF-β3表达水平(0.33±0.02)明显高于DPSCs组(0.15±0.01)和PBS组(0.09±0.03)(P＜0.05),DPSCs组与PBS组比较差异无统计学意义(P＞0.05);术后8周,TGF-β3+ DPSCs组成骨细胞TGF-β3表达水平(0.46±0.01)明显高于PBS组(0.29±0.02)(P＜0.05),与DPSCs组(0.38±0.04)比较差异无统计学意义(P＞0.05),DPSCs组与PBS组比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 DPSCs具有高度增殖的生物学特性,并具有成骨向分化潜能;外源性TGF-β3联合DPSCs可增强内源性TGF-β3的表达.
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肝素促进转化生长因子-β3在体外诱导兔牙髓干细胞成骨向分化中的作用
目的 探讨转化生长因子(transforming growthfactor,TGF)-β3联合肝素在体外诱导兔牙髓干细胞(dental pulpstem cells,DPSCs)成骨向分化中的能力.方法 新西兰幼兔4只,采用酶解组织块法分离培养兔DPSCs,传代培养至第3代兔DPSCs,分为空白对照组、TGF-β3组和TGF-β3+肝素组;空白对照组正常培养,TGF-β3组在细胞培养基中加入20 μg/L TGF-β3,TGF-β3+肝素组在细胞培养基中同时加入20 μg/L TGF-β3和5 u/mL肝素.采用碱性磷酸酶(alkailine phosphate,ALP)试剂盒检测各组兔DPSCs成骨向诱导后第7、14天细胞内ALP活性,细胞爬片采用免疫细胞化学法检测成骨细胞标记物RUNT相关转录因子2(runt related transcription factor 2,RUNX-2)和骨钙素(osteocalcin,OC)表达情况,采用茜素红染色观察矿化结节形成情况.结果 兔DPSCs在诱导体系中生长状态良好;TGF-β3+肝素组第7、14天ALP活性[(27.20±1.01)、(29.06±1.39) u/(mg·pro)]高于TGF-β3组[(12.69±1.03)、(9.44±1.05)u/(mg· pro)]和对照组[(5.96±3.68)、(6.10±3.66)u/(mg·pro)](P＜0.01),TGF-β3组高于对照组(P＜0.01);TGF-β3组和TGF-β3+肝素组成骨诱导第7天RUNX-2开始出现阳性表达,第14天OC有阳性表达,对照组均为阴性;第21天茜素红染色对照组为阴性,TGF-β3组为阳性,TGF-β3+肝素组为强阳性.结论 肝素有促进TGF-β3体外诱导兔DPSCs成骨向分化的能力.
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转化生长因子-β3对兔牙髓干细胞增殖及骨向分化的影响
目的 探讨转化生长因子-β3(transforming growth factor-β3,TGF-β3)对体外培养的兔牙髓干细胞(dental pulp stem cells,DPSCs)增殖和分化的影响.方法 采用酶解组织块法将兔DPSCs分离培养获得DPSCs,光镜下行形态学观察;将体外培养的第3代DPSCs分为5组,分别为对照组、20 μg/L TGF-β3组、40 μg/L TGF-β3组、80 μg/L TGF-β3组和100 μg/L TGF-β3组,分别加入0、20、40、80、100μg/L TGF-β3;采用MTT法检测5组DPSCs A490值,采用免疫细胞化学法检测成骨细胞标记物骨钙素(osteocalcin,OC)、Ⅰ型胶原酶(collagen Ⅰ,Col-Ⅰ)、骨涎蛋白(bone sialoprotein,BSP)表达情况,采用茜素红染色检测出现矿化结节情况,并进行比较.结果 兔DPSCs呈集落状生长,在体外有一定克隆形成能力;对照组及20、40、80、100 μg/L TGF-β3组兔DPSCs A490值分别为0.34±0.55、0.34±0.19、0.33±0.47、0.33±0.30、0.34±0.47,各组间两两比较差异均无统计学意义(P＞0.05);80、100 μg/L TGF-β3组诱导后第3天出现Col-Ⅰ阳性表达,第7天开始消失,第5～7天出现BSP阳性表达,第7～14天出现OC阳性表达,第7天出现矿化结节;40 μg/L TGF-β3组第5～7天均有Col-Ⅰ阳性表达,第7天出现BSP阳性表达,第14天出现OC阳性表达,第14天出现矿化结节;20 μg/L组第7天出现Col-Ⅰ阳性表达,第14天消失,第14天出现BSP阳性表达,第21天出现OC阳性表达,第21天出现矿化结节;对照组Col-Ⅰ、BSP和OC均为阴性,未出现矿化结节.结论 TGF-β3对体外培养的兔DPSCs增殖无影响,但对兔DPSCs向成骨细胞分化能力有一定促进作用,并在一定范围内呈浓度依赖关系.
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转化生长因子-β3和牙髓干细胞在兔面神经损伤修复中作用
目的 探讨再生室内联合应用牙髓干细胞(dental pulp stem cells,DPSCs)和转化生长因子-β3(transforming growth factor-β3,TGF-β3)修复兔面神经横断性损伤的可行性,比较各时间段不同药物干预后面神经的恢复情况.方法 健康成年新西兰大白兔36只,随机分为DPSCs+ TGF-β3组(实验组)、TGF-β3组和PBS组,每组各12只,3组均于兔左面颊部分离面神经上颊支并切断,利用硅胶管作为再生室桥接离断的神经上颊支,建立面神经上颊支横断伤模型.实验组在再生室内加入100 ng/μL TGF-β3液和1×108/LDPSCs悬液0.1 mL,TGF-β3组加入等量100 ng/μL TGF-β3液,PBS组加入等量PBS液,术后4、12周比较3组兔面神经修复再生情况.结果 4、12周时实验组神经纤维数[(1 034.58±94.28)、(1 425.92±188.98)根]和纤维直径[(2.05±0.14)、(7.18±0.40)μm]高于TGF-β3组[(935.00±44.60)、(1 053.42±135.26)根,(1.56±0.12)、(6.21±0.47)μm]和PBS组[(555.50±80.20)、(694.36±24.11)根,(1.26±0.08)、(3.64±0.56)μm] (P＜0.05);12周时3组再生神经纤维总数和纤维直径均高于4周时(P＜0.05).结论 TGF-β3与DPSCs联合应用可有效促进面神经再生,二者联合应用较单用TGF-β3修复效果好;DPSCs可作为种子细胞应用于面神经组织工程.
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重组转化生长因子-β3基因对大鼠肝星状细胞内、外蛋白表达的影响
目的 探讨重组转化生长因子-β3(TGF-β3)基因对大鼠肝星状细胞(HSC)内、外蛋白合成及分泌的影响.方法 构建质粒pcDNA3.1(+)-TGF-β3和pcDNA3.1(+)-TGF-β1.稳定转染:通过脂质体介导的方法,将peDNA3.1(+).TGF-β1转染HSC-T6,经G418筛选建立稳定高表达pcDNA3.1(+)-TGF-β1的HSC-T6细胞阳性克隆.再将pcDNA3.1(+).TGF-β3转染HSC-T6克隆细胞,用Western blot法和酶联免疫吸附法(ELISA)分别检测细胞内外TGF-β1、Ⅰ型胶原、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9及金属蛋白酶组织抑制剂(TIMP)-1的蛋白表达量.结果 pcDNA3.1(+)-TGF-β3转染HSC-T6阳性细胞克隆后,与单纯阳性克隆组相比,TGF-β1、Ⅰ型胶原、TIMP-1细胞内蛋白表达及培养上清中的分泌水平均明显降低(P＜0.05),MMP-2的表达也降低,但两者间差异无统计学意义(P＞0.05),而MMP-9的表达明显增高(P＜0.05).结论 重组质粒pcDNA3.1(+)-TGF-β3能减少细胞内外Ⅰ型胶原的合成及分泌;通过调节MMP-9及TIMP-1的表达,可抑制细胞外基质的合成,促进其降解.
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转化生长因子-β3在子宫肌瘤组织中的表达和消癥煎膏的干预作用
目的 研究消瘢煎膏对大鼠子宫肌瘤以及子宫肌瘤中TGF-β3的影响.方法 造模大鼠60只,随机分成5组,每组12只:实验组消癥煎膏分高、中、低3个剂量组,直肠给药;中桂组,予桂枝茯苓胶囊溶液灌服,每次0.5 ml/kg;模型组.另设空白组12只,每天灌服0.9%生理盐水,0.5 ml/kg次,以上各组均给药3次/d,共4周.停药后第1天内处死大鼠,立即取标本实验研究.结果 治疗组大鼠子宫重量明显减轻,宫颈和宫体处大直径显著缩小,与模型组比治疗组子宫系数降低明显;实验组3个剂量的TGF-β3水平与模型组比较P<0.05,有显著意义;中桂组与模型组比较,P<0.05;模型组与空白组比较,P<0.01,有非常显著意义.结论 消癥煎膏能使子宫肌瘤缩小,明显降低TGF-β3表达,抑制子宫肌瘤细胞增殖,使肌瘤缩小,因此推测其内可能含有TGF-β抗体类物质在起作用.
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转化生长因子-β3/胰岛素样生长因子-1联合基因转染诱导间充质干细胞成软骨细胞分化
目的 重组慢病毒介导转化生长因子(TGF)-β3/胰岛素样生长因子-1(HIGF-1)联合基因转染兔骨髓间充质干细胞,诱导其软骨细胞分化,比较与TGF-β3单基因转染诱导其软骨细胞分化的效率.方法 全骨髓贴壁法分离、培养骨髓间充质干细胞,流式细胞术检测细胞表面抗原,培养后通过重组慢病毒分别转染阴性对照(N组)、TGF-β3单基因(T组)、TGF-β3/HIGF-1联合基因(TB组),培养14 d后,荧光显微镜下观察各组细胞形态,反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、Western blot分别检测性别决定区Y框蛋白9(SOX9)、蛋白多糖、Ⅱ型胶原在基因水平与蛋白水平的表达量.结果 流式细胞术检测造血干细胞标志物(CD34,2.07％)、白细胞表面抗原[人类白细胞抗原DR基因(HLA-DR),1.73％]均为阴性,透明质酸受体(CD44,82.79％)为阳性,荧光显微镜观察诱导后细胞形态多为多角形、方形或者类圆盘状;RT-PCR结果显示:T组SOX9、蛋白多糖、Ⅱ型胶原基因表达量为0.645±0.024、0.587±0.018、0.616±0.019,显著高于C组(0.192 ±0.012、0.241±0.021、0.273 ±0.015),N组(0.211±0.014、0.224±0.016、0.232±0.022) (P =0.000);TB组基因表达量为0.832±0.013、0.746±0.024、0.951 ±0.026,显著高于T组(P=0.000).T组SOX9、蛋白多糖、Ⅱ型胶原蛋白表达量为1.36±0.20、0.39±0.05、0.68±0.09,显著高于C组(0.58±0.11、0.12±0.08、0.23 ±0.15),N组(0.62±0.14、0.13 ±0.06、0.25±0.02,P=0.000);TB组蛋白表达量为1.83±0.13、1.35±0.24、1.51 ±0.26,显著高于T组(P=0.000).结论 TGF-β3/HIGF-1联合基因转染骨髓间充质于细胞能诱导其成软骨细胞分化,且联合基因转染效率高于TGF-β3单基因转染.
关键词： 骨髓间充质干细胞 软骨分化 转化生长因子-β3 胰岛素样生长因子-1
