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介导HCV入胞相关分子的研究进展
丙型肝炎病毒(HCV)受体一直是HCV研究的热点之一,除了已经提出的可能受体:CD81、低密度脂蛋白受体、粘多糖、清道夫受体及C型(钙离子依赖型)凝集素DC/L-SIGN等,目前研究者又发现了新的受体claudin、occludin等.本文就上述HCV受体相关分子的研究进展作一综述.
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丙型肝炎病毒侵入细胞机制的研究进展
丙型肝炎病毒可通过侵入肝细胞而感染人类.本文介绍了丙型肝炎病毒的结构特点以及细胞的丙型肝炎病毒受体,并在此基础上对丙型肝炎病毒侵入细胞机制的研究进展做一综述.
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抗CD81抗体对星形胶质细胞增殖的抑制作用
目的 研究抗CD81抗体在星形胶质细胞增殖中的作用.方法 将纯化的星形胶质细胞分为6组,加入不同浓度抗CD81抗体,其浓度依次为0、0.1mg/L、0.5mg/L、1mg/L、5mg/L、10mg/L,以四甲基噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞活性.在此检测结果的基础上,选出3个有意义的浓度组,加入浓度分别为0、0.5mg/L、5mg/L的抗CD81抗体,采用流式细胞术观察抗CD81抗体对星形胶质细胞周期的影响并进行统计学分析.结果 抗CD81抗体对星形胶质细胞的增殖有抑制作用,并呈一定的剂量依赖性.加入抗CD81抗体培养24 h后,实验组的星形胶质细胞处于G0/G1期的细胞指数减少,S期细胞指数增多.结论 抗CD81抗体抑制了星形胶质细胞的增殖,使星形胶质细胞的细胞周期受阻,阻滞于S期.
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人CD81胞外大环在大肠杆菌中的克隆表达及活性研究
目的:构建人CD81分子胞外大环(EC2)的原核表达质粒,并研究胞外大环同HCV E2蛋白的结合性能.方法:从人外周血淋巴细胞中经RT-PCR克隆出CD81胞外大环序列,插入原核表达载体pBVIL1中,构建表达质粒pBVIL1-EC2并在大肠杆菌中表达.表达产物经纯化后用间接ELISA法测定同E2蛋白的结合能力.结果:经序列测定证明,CD81分子胞外大环正确插入载体.融合蛋白得到高效表达,以包涵体形式存在,经Q-Sepharose FF阴离子交换柱得到有效纯化.初步结果表明,重组CD81胞外大环能同原核表达的截短的HCV E2(384-661)蛋白结合.结论:本研究为进一步研究CD81同E2及HCV的相互作用和制备抗EC2单克隆抗体奠定了基础.
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丙型肝炎病毒受体研究进展
CD81是四跨膜蛋白超家族成员之一,能结合E2和HCV,是丙型肝炎病毒的吸附受体,但介导感染的能力弱.关于低密度脂蛋白受体(LDLr)可结合HCV并介导病毒穿入的机制尚不明了,可能还有其他因素参与HCV的吸附感染过程,尚需进一步研究.
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CD81与HCV间交互作用的研究进展
丙型肝炎病毒(HCV)是脂膜包裹的单股正链RNA病毒,被归为黄病毒科.HCV的感染呈世界性分布,无职业、年龄和季节限制,是慢性病毒性肝病常见的病因.
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丙肝病毒受体CD81与肝外胆管癌的相关性
目的:探讨肝外胆管癌与丙型肝炎病毒受体CD81的相关性.方法:采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和链霉菌抗生物素蛋白-过氧化酶法(SP法)检测62例肝外胆管癌及30例胆道良性病变组织中HCV RNA、CD81mRNA序列片段以及HCV NS5抗原、CD81蛋白的表达.结果:肝外胆管癌组织中HCV RNA和CD81 mRNA的阳性率分别为58.1%和72.6%,与对照组相比差异有显著性(x2=22.030,P＜0.001;x2=7.453,P＜0.01);HCV RNA阳性的肝外胆管癌组织CD81 mRNA表达率为55.6%,HCV RNA阴性的CD81 mRNA表达率为96.2%,两者差异有显著性(x2=12.503,P＜0.001);免疫组化检测均有类似结果.HCV RNA阳性肝外胆管癌的CD81 mRNA丢失与否与分化状况有关(x2=14.103,P＜0.01);分化Ⅳ级与Ⅰ级的CD81 mRNA丢失差异有显著性(P＜0.05/3).结论:肝外胆管癌组织中有HCV基因的高表达;CD81作为HCV感染胆管细胞的受体与肝外胆管癌分化有一定的相关性.
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HCV通过抑制T细胞IL-2分泌逃避人体免疫机制的实验研究
目的:探讨丙型肝炎病毒(hepahtis C virus,HCV)抑制T细胞IL-2分泌的机制,为预防、诊断和治疗丙型肝炎提供新思路.方法:利用卟啉醇肉豆蔻酸乙酸酯(phorobol 12-myristate 13-acetate,PMA)、植物血凝素(phytohaemagglutinin,PHA)、Ca2+以及抗CD3抗体(Ortho Kung T cell 3,OKT3)、抗CD81单克隆抗体以及HCV表面蛋白(envelope protein of HCV,EP)刺激jurkat T细胞,采用ELISA方法检测培养液中IL-2的产生量并讨论.结果:单独采用PMA和PHA,PHA和Ca2+,OKT3和抗CD81单克隆抗体刺激jurkat T细胞24h,会产生大量的IL-2.如果在采用上述刺激之前,分别使用抗CD81单克隆抗体或EP预处理jurkatT细胞1 h,则在上述刺激之后IL-2的产量明显减少.结论:由于EP可与CD81分子特异结合,可以说明HCV EP通过T细胞表面的CD81分子抑制了IL-2的分泌,导致免疫功能受损.
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中国HCV/HIV合并感染者T淋巴细胞表面CD81、CXCR3表达的研究
目的探讨T淋巴细胞表面受体CD81、CXCR3,在丙肝病毒(HCV)单纯感染,艾滋病病毒(HIV)单纯感染和HCV/HIV合并感染过程中的表达及意义.方法采用流式细胞术,检测HCV感染组(n=21),HIV感染组(n=14),HCV/HIV感染组(n=28)及正常对照组(n=30)人外周血CD4+T淋巴细胞和CD8+T淋巴细胞表面CD81、CXCR3的表达.结果HIV感染组及HCV/HIV合并感染组CD4+T细胞表面CD81、CXCR3表达显著降低(P＜0.001),CD8+T细胞表面CD81、CXCR3表达显著升高(P＜0.001);HCV感染组CD4+及CD8+T细胞表面CXCR3表达轻度升高但差异不显著,CD81在CD4+T细胞表面轻度升高而在CD8+T细胞表面明显升高(P＜0.01).结论中国HCV/HIV合并感染患者外周血T淋巴细胞表面受体CD81、CXCR3,在CD4+T细胞表面表达降低,而在CD8+T细胞表面表达升高.
关键词： CD81 趋化因子CXC受体3 HCV/HIV合并感染 -
丙型肝炎受体研究动态
CD81分子(TAPA)属于4次跨膜超家族成员,近年来发现CD81分子和HCV-E2糖蛋白的结合与丙型肝炎病毒感染宿主细胞有关,被认为是HCV的细胞膜受体, LDLr(低密度脂蛋白受体分子)是一种细胞膜表面糖蛋白,目前也发现它可结合HCV或HCV-LDL,且结合力相对较强,也被认为是HCV的细胞膜受体,人们对HCV感染靶细胞所涉及的这两个受体分子进行广泛研究.本文将就丙型肝炎受体研究作相关综述.
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人CD81细胞外区大环原核表达载体的构建及在大肠杆菌中的表达和纯化
目的:构建人CD81-LEL基因的原核表达载体,并在大肠杆菌中进行表达. 方法:通过PCR扩增得到CD81-LEL基因编码区片段,与pMD18-T载体连接,经序列测定后,再将该扩增片段亚克隆入原核表达载体pET32a(+)中.酶切鉴定正确的表达载体pET32a-CD81-LEL转化表达菌BL21(DE3)进行诱导表达,用SDS-PAGE和Western-blot对表达产物进行鉴定,用镍离子亲和层析法纯化融合蛋白. 结果:成功构建了原核表达载体pET32a-CD81-LEL;SDS-PAGE显示目的蛋白大量表达且呈可溶性状态,Western-blot显示目的蛋白正确表达,并用镍离子亲和层析法获得纯化的重组蛋白. 结论:CD81-LEL可以在大肠杆菌中表达,为进一步研究CD81与丙型肝炎病毒(HCV)包膜糖蛋白E2的结合提供了有用的研究资料.
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HCV感染的分子机制研究
由于缺乏丙型肝炎病毒(HCV)体外感染传代细胞和小动物感染模型,对HCV感染细胞的分子机制还不清楚.目前人们发现HCV感染靶细胞涉及CD81、LDLr(低密度脂蛋白受体)和SR-BI(清道夫受体B类Ⅰ型分子)三个受体分子,本文对参与HCV感染的这三个受体分子的研究进展作了综述.
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丙型肝炎病毒感染细胞的相关分子研究进展
病毒与细胞表面分子结合是病毒感染的前提.研究丙型肝炎病毒(HCV)感染细胞的相关分子,对于阐明HCV的感染机制、预防和治疗丙型肝炎以及建立感染模型具有重要意义.近年来,该方面研究取得了一些重要进展,几种能介导病毒感染的细胞分子被相继发现,如低密度脂蛋白受体(LDLr)、CD81、GAGs和Sip-L等.本文旨在对这些细胞分子作一综述.
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CD81在HCV致病机制中的重要意义
CD81是近年发现的HCV受体分子,具有极广泛的生物学功能.CD81与HCV E2分子结合,可辅助病毒的感染、成熟与包装,并调节机体免疫功能,与HCV持续性感染、免疫逃逸及免疫病理损伤关系密切,在HCV致病机制中具有重要的意义.
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pcDNA3.1-CD81载体在人肝癌细胞中的表达及意义
目的研究人白细胞分化抗原CD81真核表达载体pcDNA3.1-CD81在人肝癌细胞系HepG2中的表达及意义.方法由人Molt-4细胞提取细胞总RNA,根据已公布的序列设计引物,运用RT-PCR及PCR方法扩增出人CD81基因,应用TA克隆插入PMD-18T载体;定向克隆入真核表达载体pcDNA 3.1(+);通过脂质体介导转染人肝癌细胞系HepG2,用免疫组织化学方法(ABC法)及流式细胞技术检测目的蛋白的表达.结果由RT-PCR及PCR方法扩增出人CD81编码基因与Genebank公布的序列完全一致.重组真核表达载体pcDNA 3.1-CD81经酶切和PCR鉴定分析正确.免疫组织化学方法(ABC法)及流式细胞技术证明转染的HepG2细胞表面能有效地表达CD81蛋白.结论所构建的pcDNA3.1-CD81真核表达载体在HepG2细胞有良好的表达,该转染细胞可作为研究CD81在HCV感染中的作用提供细胞模型,为研究丙型肝炎病毒(HCV)与CD81相互作用奠定基础.
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CD81在正常大鼠神经视网膜上的表达
目的 观察CD81在正常大鼠神经视网膜上的表达.方法 用抗CD81抗体对正常大鼠视网膜组织进行免疫组织化学染色,并对神经视网膜进行Western blot分析,同时用细胞免疫组织化学染色法检测体外培养视网膜神经胶质细胞的CD81表达.结果 大鼠视网膜神经节细胞层、内丛状层和外丛状层呈阳性网状致密染色;Western blot分析神经视网膜层出现CD81阳性条带;体外培养的大鼠视网膜神经胶质细胞也呈CD81阳性表达.结论 正常大鼠的神经视网膜表达CD81,视网膜神经胶质细胞是表达CD81的一种细胞类型.
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抗CD81抗体对培养大鼠RG的增生抑制作用
目的观察抗CD81抗体EAT2和H121对培养大鼠视网膜神经胶质细胞(RGC)增生活性的影响.方法分别将2 μg/ml、10 μg/ml抗CD81抗体EAT2和H121加入体外培养SD大鼠RGC中,7 d后以MTT法测定细胞生长抑制率.结果加入抗CD81抗体后RGC增生活性下降,H121对RGC的细胞生长抑制率可达50.37%.结论抗CD81抗体EAT2和H121可以抑制培养大鼠RGC的细胞增殖活性.
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高表达四跨膜蛋白CD81在食管癌侵袭转移中的作用
目的 探讨四跨膜蛋白CD81表达和食管癌细胞侵袭转移的关系.方法 采用实时定量逆转录聚合酶链反应(RT-qPCR)及Western blot检测正常食管上皮细胞与3株不同转移潜能的食管癌细胞中CD81的表达;免疫组织化学检测12例食管癌及相应癌旁组织中CD81表达;慢病毒干扰CD81表达,研究CD81对食管癌细胞侵袭的影响;并研究CD81表达与E-钙黏蛋白(E-cadherin)表达的关系;后通过免疫组织化学法检测食管癌组织中CD81与E-cadherin表达,以进一步验证.结果 CD81在食管癌细胞中表达明显高于正常食管上皮细胞(mRNA:1.87±0.09比1.25 ±0.05;蛋白:1.53 ±0.06比0.39±0.02),在食管癌细胞KYSE150、KYSE450、KYSE510中CD81 mRNA表达分别为2.40 ±0.11、2.10±0.08与1.10 ±0.09,蛋白表达为1.73 ±0.10、2.21 ±0.07与0.64±0.01;免疫组织化学检测显示12例癌组织中表达明显均高于癌旁组.食管癌细胞中干扰CD81表达后,细胞的侵袭能力下调(121 ±23比45 ±19;152 ±48比75 ±37),E-cadherin表达上调.食管癌组织中高表达CD81伴E-cadherin表达下调.结论 高表达四跨膜蛋白CD81可能通过下调E-cadherin蛋白表达促进食管癌侵袭.
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抗CD81抗体与星形胶质细胞增殖抑制的时效关系
目的 研究抗CD81抗体作用星形胶质细胞不同时间后对细胞增殖的影响.方法 纯化的星形胶质细胞培养12 h后,加入抗CD81抗体(4 μg/ml),分别作用18、32及96 h后,采用MTT比色法检测星形胶质细胞的细胞活性,计算细胞抑制率;用流式细胞仪检测细胞周期时相.结果 MTT法检测结果显示与未作用细胞相比,抗CD81抗体作用18、32、96 h后,星形胶质细胞增殖显著受抑制,其抑制率分别为11.17%、13.17%、27.49%.流式细胞术检测结果显示抗CD81抗体作用18 h后,S期细胞指数与未作用细胞相比,增加了16.09,星形胶质细胞主要被阻滞于S期;作用32 h后, G0/G1期细胞指数与未作用细胞相比增加了4.08;96 h后,G0/G1期细胞指数与未作用细胞相比增加了5.87,细胞主要滞留于G0/G1期.结论 抗CD81抗体作用不同时间均对星形胶质细胞有显著抑制作用,抑制作用随作用时间延长而增强.早期,抗CD81抗体使星形胶质细胞阻滞于S期,随着作用时间的延长,逐渐使细胞阻滞于G0/G1期.
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CD81分子与丙型肝炎病毒感染
CD81(TAPA-1)是一种非糖基化膜蛋白和细胞膜表面粘附分子,在体内分布广泛,是四跨膜蛋白(TM4SF)超家族成员之一.具有影响细胞的粘附激活、形态改变、增殖分化及信号传导等生物学功能.新近研究表明,CD81能与HCV包膜糖蛋白E2结合,它可能是丙型肝炎病毒(HCV)感染靶细胞的受体分子.
