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清热化瘀Ⅱ号方对大鼠脑缺血再灌注损伤TLR3、TRAM mRNA表达的影Ⅱ向
目的:观察清热化瘀Ⅱ号方对大鼠脑缺血再灌注损伤Toll样受体3(TLR3)、TRIF相关受体衔接分子(TRAM)的影响,探讨清热化瘀Ⅱ号方对大鼠脑缺血再灌注损伤神经元保护的作用机制.方法:将192只健康SD大鼠随机分为两大组,每大组再分为4个亚组:空白组、假手术组、脑缺血再灌注组、清热化瘀Ⅱ号方组.采用二次线栓法制备大鼠局灶性脑缺血再灌注模型.假手术组、缺血再灌注组和清热化瘀Ⅱ号方组大鼠分别在术后缺血再灌注2h后3、6、12、24、48h进行标本采集.取材后,常规HE染色并观察各组大鼠脑组织病理形态学改变,应用荧光定量PCR法检测缺血侧海马区TLR3、TRAM mRNA的表达.结果:HE染色:光镜下空白组及假手术组均未见神经元损伤,脑缺血再灌注组及清热化瘀Ⅱ号方组有不同程度的神经元损伤,清热化瘀Ⅱ号方组在各时间点的受损神经元明显少于脑缺血再灌注组.荧光定量PCR结果:空白组与假手术组TLR3、TRAM mRNA呈现低水平表达;脑缺血再灌注组TLR3、TRAM mRNA的表达较假手术组明显增加,差异有统计学意义(P＜0.05);脑缺血再灌注组和清热化瘀Ⅱ号方组中,在缺血再灌注3h,TLR3、TRAM mRNA表达开始增加,至24h达高峰,48h后表达逐步下降.清热化瘀Ⅱ号方组TLR3、TRAM mRNA表达活性在同一时间点相比均低于脑缺血再灌注组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:清热化瘀Ⅱ号方可能通过下调TLR3、TRAM mRNA表达,抑制TLRs信号通路的传导,减轻炎性级联反应,保护神经元,发挥其防治脑缺血再灌注损伤的作用.
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金欣口服液含药血清对呼吸道合胞病毒感染RAW264.7细胞Toll样受体3表达的调控作用
目的:通过研究金欣口服液含药血清对呼吸道合胞病毒(RSV)活化诱导的Toll样受体3(TLR3)的干预作用,探讨其治疗RSV肺炎可能的免疫学机制.方法:RSV感染体外培养的RAW264.7细胞,采用金欣口服液含药血清进行干预,并设利巴韦林阳性对照,24h后收集细胞,Real time RT-PCR法测定TLR3 mRNA的表达变化；激光共聚焦显微镜观察免疫荧光细胞化学染色法处理的各组细胞TLR3表达水平；ELISA法检测各组细胞培养上清中白细胞介素-6(IL-6)含量,在核酸及蛋白水平探讨金欣口服液含药血清抗RSV感染的作用机制.结果:RSV感染RAW264.7细胞后24h,细胞中TLR3 mRNA和蛋白表达水平以及细胞培养上清中IL-6表达明显升高(P＜0.01),而金欣组TLR3及IL-6表达均显著低于RSV感染组(P＜0.01,P＜0.05),且效果优于利巴韦林组(P＜0.01,P＜0.05).结论:金欣口服液含药血清能下调RSV活化诱导的TLR3及其下游炎症因子IL-6的高表达,推测其为金欣口服液抗RSV感染的机制之一.
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呼吸道合胞病毒与TLR3、TLR4的关系及其中医药研究进展
文章结合免疫学、细胞分子生物学及中医学相关理论和方法,以Toll样受体3(TLR3)、Toll样受体4(TLR4)的化学生物学特性为基点,结合国内外新研究进展,从TLR3、TLR4的信号通路、此信号通路与呼吸道合胞病毒(RSV)感染性肺炎的关系及RSV对TLR3、TLR4信号通路表达的影响几个方面,阐述了TLR3、TLR4与RSV的病理生理联系,并在此基础上结合中医药在呼吸道合胞病毒性肺炎防治中的新研究成果,探讨了运用中药提取物、中药复方及中成药治疗RSV型肺炎的优势,以期在分子、蛋白水平为中医药治疗RSV型肺炎提供必要的理论依据.
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人滋养细胞TLR3信号通路活化抑制血管生成因子表达
目的 研究人类妊娠早期滋养细胞Toll样受体3(TLR3)活化对胎盘血管生成相关因子表达的影响,探讨该通路在妊娠期高血压疾病中的作用.方法 以TLR3配体刺激原代滋养细胞和永生化滋养细胞系swan71,不同时间点收集上清液及细胞.ELISA测定培养上清液中sFlt-1和PIGF浓度,real-time PCR法测定上述分子mRNA表达水平.结果 Poly(I∶C)刺激swan71后24、48和120 h,sFlt-1浓度显著高于未处理组(P＜0.05).Poly(I∶C)刺激原代滋养细胞后sFlt-1 mRNA水平升高,PlGF mRNA水平下降(P＜0.05).Poly(I∶C)诱导sFlt-1 mRNA的表达呈时间和剂量依赖性,24 h时效分析见其在处理2h达到峰值,PlGF mRNA则跌至低水平(P＜0.05).Poly(I∶C)处理8～12 h,TLR3 mRNA水平亦显著升高(P＜0.05).结论 滋养细胞TLR3信号通路激活诱导sFlt-1表达,抑制PlGF表达,导致血管生成障碍,可能参与妊娠期高血压疾病的发生.
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慢性乙型肝炎患者外周血单个核细胞Toll样受体3的表达降低
目的 探讨慢性乙型肝炎患者外周血单个核细胞Toll样受体3(TLR3)的表达及其临床意义.方法 分别采集慢性乙型肝炎患者和健康志愿者外周血,荧光定量PCR法检测血清HBV DNA复制水平；使用RT-PCR、流式细胞术以及免疫印迹技术分别检测外周血单个核细胞TLR3的mRNA、蛋白的表达；使用ELISA法检测血清中肿瘤坏死因子α(TNF-α)和干扰素β(IFN-p)水平.结果 慢性乙型肝炎患者外周血单个核细胞中的TLR3表达显著低于健康志愿者,且降低水平与血清HBV DNA复制水平相关；慢性乙型肝炎患者外周血TNF-α、IFN-β浓度显著低于健康志愿者,且降低的水平与血清HBV DNA复制水平相关.结论 慢性乙型肝炎患者外周血单个核细胞TLR3的表达与乙肝病毒的复制水平相关.
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TLR3对细胞凋亡相关信号通路的调控
Toll样受体3(TLR3)作为特异性模式识别受体(PRR)能特异性识别模式相关分子双链RNA(dsRNA)从而发挥免疫作用.近研究表明TLR3还可以诱导多种细胞发生凋亡,特别是在肿瘤中TLR3信号通路更倾向诱导凋亡,这为进一步研究TLR3激动剂干预肿瘤提供了依据.
关键词： Toll样受体3 肿瘤细胞 凋亡 dsRNA(双链RNA) -
TLR3途径诱导多发性骨髓瘤细胞株增殖抑制和凋亡机制研究
目的 研究聚肌苷酸胞苷酸( polyI:C)激活的TLR3通路对多发性骨髓瘤RPMI8226细胞的增殖抑制和凋亡相关的生物学作用及相关机制.方法 RPMI8226细胞培养于RPMI 1640培养基,以不同浓度的polyI:C与该细胞作用不同的时间.收集细胞后,分别利用CCK-8和流式细胞术分析其增殖抑制和凋亡情况,同时抽提总RNA,相对定量PCR测定TLR3通路相关基因表达.结果 PolyI:C对RPMI8226的增殖抑制效应随着作用剂量的增加和时间的延长而增加,24h:12.30％±2.04％、22.50％±2.20％、37.90％±1.30％;48h:17.80％±1.52％、29.60±0.85％、45.80％±1.68％;72 h:25.10％±1.01％、34.60％±1.27％、60.50％±2.08％,差异有统计学意义(P＜0.05).浓度为50、100、200μg/ml的polyl:C与RPMI8226作用48 h后,细胞凋亡率分别为5.60％±1.06％、8.71％±1.06％、13.93％±1.17％,差异具有统计学意义(P＜0.05),而且随着polyI:C作用浓度增加,RPMI8226细胞中TLR3和TRIF mRNA相对于内参β-actin的表达均显著增高,TLR3:1.41±0.10、2.24±0.16、4.08±0.13;TRIF:1.07±0.16、1.97±0.13、3.56±0.19,各组间差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 TLR3途径可以有效地抑制多发性骨髓瘤细胞增殖,并且诱导其凋亡,对多发性骨髓瘤的生物治疗具有潜在应用价值.
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TLR3/NF-κB信号通路在百草枯致急性肺损伤的研究
目的 观察Toll样受体3 ( Toll-like receptor-3,TLR3 )、TLR诱导核转录因子(nuclear factor-κappaB, NF-κ B)及下游炎性因子肿瘤坏死因子α (TNF-α )、白细胞介素-1 β (IL-1β )、白细胞介素-6 (IL-6)的改变,从TLR3/NF-κB信号通路探讨百草枯(paraquat, PQ )致急性肺损伤的发病机制.方法 利用PQ暴露构建小鼠的急性肺损伤模型和拟Ⅱ型肺泡上皮细胞(A549)的急性损伤模型;观察小鼠肺组织病理改变,进行支气管肺泡灌洗液(BALF)细胞计数及细胞分类,酶联免疫吸附试验法(ELISA)检测炎性因子,阐述PQ对小鼠肺组织的损伤作用;利用CCK8检测细胞存活率,观察PQ致A549细胞损伤;并通过Real-time PCR和Western-blotting观察小鼠肺组织和A549细胞的TLR3、Phospho-NF-κ Bp65及下游炎性因子 TNF-α、IL-1 β、IL-6的mRNA和蛋白水平表达变化.结果 与对照组小鼠相比,PQ组存在小鼠呼吸困难,活动能力下降,进食减少,体质量下降等症状.与对照组比较,PQ组BALF细胞总数明显升高[NS:(0.018 8±0.102 1) × 105 vs. PQ: ( 0.237 4 ± 0.121 7 ) × 105,t=9.804, P＜0.01], 伴有巨噬细胞[NS: ( 0.162 8 ± 0.086 53 ) × 105 vs. PQ:( 1.063 3 ±0.343 3 ) × 105,t=8.043,P＜0.01],淋巴细胞[NS: (0.006 6 ± 0.005 2 ) × 105 vs. PQ:(0.171 2 ± 0.099 1 ) × 105,t=5.243,P＜0.01]和中性粒细胞[NS: ( 0.000 04 ± 0.000 1 ) × 105 vs. PQ: (0.901 9 ±0.652 5 ) × 105,t=4.370, P＜0.01]显著升高.PQ组小鼠肺组织充血水肿明显,病理HE染色见炎性细胞浸润和肺间质充血.ELISA结果表明,与对照组相比,PQ组支气管肺泡灌洗液的TNF-α、IL-1 β、IL-6表达均明显上升[TNF-α : t=3.030,P＜0.05, NS: (2.782 1± 3.521 5 ) vS. PQ: ( 7.512 6 ± 3.459 8 ) pg/mL;IL-1 β : t=5.391, P＜0.01, NS: (22.687 5±14.229 3 ) vs. PQ: ( 163.100 4 ± 81.118 3 ) pg/mL ; IL-6: t=4.841,P＜0.01,NS: ( 1.653 3±0.442 7 ) vs. PQ: ( 648.565 6±422.606 1 ) pg/mL].细胞实验中, CCK8结果示在剂量200～400 μmol/L PQ处理24 h后,A549细胞存活率与对照组相比较分别下降了25.3％和36.4％ (均P＜0.05 ).Real-time PCR结果提示,PQ组小鼠肺组织和A549细胞TLR3、TNF-α、 IL-1β、IL-6在mRNA水平表达均高于对照组(均P＜0.05).Western-blotting结果发现PQ组的小鼠肺组织和A549细胞的TLR3、Phospho-NF-κ Bp65蛋白水平表达明显高于对照组(均P＜0.05 ).结论 PQ可能通过TLR3/NF-κ B信号通路上调炎性因子TNF-α、IL-1 β、IL-6的表达而诱导加重急性肺损伤.
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异甘草酸镁对慢性乙型肝炎患者外周血单个核细胞 TLR3信号途径的影响
目的：研究异甘草酸镁对慢性乙型肝炎患者外周血单个核淋巴细胞TLR3信号途径的影响。方法分离外周血单个核细胞（ PBMC ），检测异甘草酸镁对细胞生长的影响。 PolyI：C和异甘草酸镁加入PBMC培养液，半定量PCR检测TLR3信号途径中的TLR3、TRIF（ Toll样受体接头分子）、肿瘤坏死因子α（TNFα）、干扰素β1（IFNβ1）的表达。结果异甘草酸镁对单个核细胞的生长抑制作用呈剂量依赖型，800、400、200、100、50、25、12.5和6.25μg/ml八组的抑制率分别为58％，52％，40％，30％，23％，17％，8％，6％，除12.5和6.25μg/ml两组间比较无统计学差异（ P＞0.05）外，其余各组间比较均有统计学差异（ P＜0.01）。RT-PCR结果显示IFNβ1在200μg/ml异甘草酸镁组和空白对照组表达分别为14.6±2.43，9.79±3.02，P＝0.0003；TNFα在200μg/ml组、100μg/ml组、空白对照组分别为10.59±1.67，13.3±2.07，15.7±1.59，各组间比较差异均有统计学意义（ P＜0.05）。 TLR3和TRIF在各组间的表达无显著差异。结论异甘草酸镁可能促进单个核细胞产生干扰素，同时又能抑制炎症因子TNFα的转录，这可能是该药的抗炎、免疫调节机制之一。
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人Toll样受体3基因表达水平的实时荧光定量PCR测定
目的 建立检测人Toll样受体3(TLR3)mRNA表达水平的实时荧光定量逆转录PCR(FQ-RT-PCR)法,及探讨其在外周血单个核细胞(PBMC)中的表达水平.方法 用Beacon Designer2.1软件设计TLR3基因特异性引物和荧光探针,逆转录扩增目的片段,构建重组体pMD18-T-TLR3作为定量标准品.在ABI Prism 7000型荧光定量分析仪上,通过荧光强度达到一定阈值时的循环数来定量起始模板,建立标准曲线;并检测30名正常人及20例原发性胆汁性肝硬化(PBC)患者,20例慢性乙型肝炎肝硬化患者外周血PBMC TLR3基因的荧光强度,根据标准曲线及循环阈值,由软件自动计算样本中TLR3 mRNA的起始拷贝数.结果 FQ-RT-PCR检测TLR3基因的线性范围为102～108拷贝数/μl RNA(r=-0.9974),内参β-actin的线性范围为103～108拷贝数/μl RNA(r=-0.9984);高浓度样本批内和批间变异系数(CV)分别为6.7%和8.7%,低浓度样本批内及批间CV分别为12.3%和14.0%,30名健康人,20例PBC及20例慢性乙型肝炎肝硬化患者PBMC中均有TLR3 mRNA的表达,分别为3.46×102～4.51×103拷贝/μg RNA、4.92×102～1.42×104拷贝/μgRNA和2.58×102～7.17×103拷贝/μg RNA.结论 成功建立检测TLR3 mRNA的FQ-RT-PCR方法,可作为临床和基础研究TLR3基因表达的工具.
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慢加急性肝衰竭患者Toll样受体3触发后DC分泌细胞因子的变化
目的探讨慢加急性肝衰竭(ACLF)患者外周血单核细胞衍生的树突状细胞(MoDC)上TLR3 触发后细胞因子的分泌情况.方法选择ACLF患者60例,慢性乙型肝炎(CHB)患者40例,20例健康者作对照组(NC组),取其抗凝全血,通过密度梯度法离心及免疫磁珠阳性选择法分离单核细胞,体外诱导培养为MoDC,经poly(I:C)刺激后,实时荧光定量PCR检测TLR3及核因子κB和干扰素调节因子3的表达,液相蛋白流式检测促炎性因子IL-6、IL-8、IL-10、IL-12p70、IL-1β和TNF-α的分泌水平,均数间两两比较采用t检验.结果 poly(I:C)刺激后,ACLF组患者NF-κB mRNA显著高于CHB组和NC组(P ＜ 0.01),而其IRF3 mRNA低于CHB和NC组(P ＜ 0.01).3组研究对象MoDC分泌的IL-6及TNF-α差异有统计学意义(P ＜ 0.005),其分泌水平为ACLF组＞ CHB组＞ NC组.分泌的IL-10在ACLF组低于CHB组(P = 0.021),但与NC组差异无统计学意义.IL-12p70的分泌水平在ACLF组显著低于CHB组和NC组(P ＜ 0.001).IL-8分泌水平为ACLF组＜ CHB组＜ NC组(P ＜ 0.005).IL-1β的分泌水平在ACLF组与NC组(P = 0.001)、CHB组与NC组(P = 0.007)间差异均有显著统计学意义.结论 ACLF患者单核细胞来源的树突状细胞TLR3信号转导通路受损,促炎性细胞因子分泌异常,可能是肝细胞免疫功能严重受损的原因之一.
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Toll样受体3介导的信号通路在原发性胆汁性肝硬化模型中的作用
目的 初步探索Toll样受体3(TLR3)介导的信号通路在原发性胆汁性肝硬化(PBC)发病中的作用以及趋化因子受体3(CXCR3)对其影响.方法 6～8周雌性C57BL/6野生鼠和CXCR3基因敲除(CXCR3-/-)鼠,腹腔注射5 mg/kg的聚肌胞(poly I:C),每周2次,第8、16、24周收集小鼠肝脏标本,免疫印迹法比较正常对照组和PBC模型组之间小鼠肝脏中TLR3、TIR区域的调节分子1(TRIF)和转录因子核因子κB(p-NFκB p65)的含量差异.结果 与对照组相比,PBC模型组的线粒体抗体滴度和碱性磷酸酶水平明显增高,P<0.05;poly I:C腹腔注射后,第8周可见小胆管周围炎性细胞浸润,胆管上皮细胞变性坏死;第16周可见小叶间胆管增生,炎性细胞浸润;第24周可见小胆管损伤、闭塞,胆管内胆栓形成.免疫印迹结果显示,PBC模型组小鼠肝脏中TLR3的相对含量均较正常对照组升高,不同时期野生鼠PBC模型组之间TLR3的相对含量无明显差异,与第8周相比,第16和24周CXCR3-/-小鼠TLR3的相对含量有下降趋势:各个时期PBC模型组肝脏中的TRIF的相对含量较正常小鼠无明显变化,野生鼠和CXCR3-/-小鼠PBC模型组之间TRIF的相对含量无明显差异;各个时期野生鼠PBC模型组肝脏中的p-NFκB p65的相对含量与正常小鼠无明显差异,CXCR3-/-小鼠PBC模型组肝脏中的p-NFκB p65的相对含量较正常小鼠升高.结论 TLR3介导的信号通路在PBC模型发病中可能发生一定的作用;TLR3介导的信号通路可能主要通过IRF-3产生1型干扰素诱导疾病的发生;CXCR3对PBC模型发病中TLR3介导信号通路的作用无显著影响.
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Toll样受体3~4、果糖胺和糖化血红蛋白对老年陈旧性心肌梗死患者冠脉支架置入术后再狭窄和再闭塞的预测
目的 探讨循环Toll样受体3(TLR3)、Toll样受体4(TLR4)、果糖胺(FMN)和糖化血红蛋白(HbA1c)水平变化对高龄陈旧性心肌梗死患者冠状动脉(冠脉)支架置入术后再狭窄和再闭塞的预测价值. 方法 回顾性研究,连续入选2007年1月至2016年9月陈旧性心肌梗死冠脉支架置入术后再狭窄高龄患者51例.测定冠脉再狭窄组和冠脉无再狭窄组患者TLR3、TLR4、FMN和HbA1c的水平变化. 结果 冠脉再狭窄组患者TLR3、TLR4、FMN和HbA1c水平升高.冠脉无再狭窄组较冠脉多支再狭窄组患者TLR3 (7.6±0.5)%比(51.3±0.8)%、TLR4(12.7±10.0)%比(89.0±12.1)%、FMN(0.8±0.6)mmol/L比(7.1±0.9)mmol/L、HbA1c(4.7±0.5)%比(12.0±1.0)%,差异有统计学意义(均P<0.01);冠脉再狭窄程度70%~89%与冠脉再狭窄100%患者TLR3 (18.9±0.6)%比(49.5±0.9)%、TLR4 (20.1±7.2)%比(69.0±11.3) %、FMN(3.1±0.3)mmol/L比(6.9±0.8)mmol/L、HbA1c (8.1±0.4)%比(16.1±0.9)%,差异有统计学意义(均P<0.01);左心室射血分数(LVEF)25~36%与 LVEF 49~59%患者 TLR、TLR4、FMN和HbA1c比较,差异有统计学意义(均P<0.01);NYHAⅡ级与NYHA Ⅳ级患者TLR、TLR4、FMN和HbA1c比较,差异有统计学意义(均P<0.01). 结论 TLR3、TLR4、FMN和HbA1c水平的变化可能预测高龄陈旧性心肌梗死冠脉支架置入术后再狭窄的严重程度.
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慢性丙型肝炎患者外周血Toll样受体3和7与Ⅰ型干扰素基因表达的研究
目的 观察慢性丙型肝炎(CHC)患者外周血单个核细胞(Peripheral blood mononuclear cells,PBMC)中Toll样受体3(Toll like receptor 3,TLR3)和7(TLR7),以及Ⅰ型干扰素α(Interferonα,IFN-α)和β(IFN-β) mRNA的表达,探寻CHC治疗的新方法.方法 选择2013年9月至2014年5月武汉大学人民医院收治住院的30例CHC患者,并选择同期体检的健康人群30名作为健康对照组.采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测肝功能指标;用实时荧光定量PCR检测TLR3、TLR7、IFN-α和IFN-β mRNA表达,并用2-△△Ct方法计算相对表达量.两样本均数比较采用t检验,TLR mRNA与IFNmRNA表达、肝功能指标及HCV RNA载量之间的相关性采用Pearson相关性分析.结果 健康对照组的基因表达量为1,CHC组TLR3、TLR7、IFN-α和IFN-β mRNA的相对表达量分别为0.086、0.633、0.145和0.423,两组间比较差异均有统计学意义(=4.25,2.39,2.37和2.80,P值均＜0.01).Pearson相关性分析显示,TLR3和TLR7 mRNA表达量与IFN-β mRNA表达量呈正相关性(r=0.381和0.487,P值均＜0.05),但与IFN-α mRNA表达量、HCV RNA载量、丙氨酸转氨酶(ALT)和天冬氨酸转氨酶(AST)水平无相关性(P值均＞0.05).结论 CHC患者TLR3、TLR7mRNA以及IFN-α、IFN-β mRNA表达均降低,且TLR3和TLR7mRNA表达与IFN-β mRNA呈正相关,提示可通过提高TLR受体的表达为CHC的治疗提供新的方法.
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Toll样受体3及肿瘤坏死因子α与特发性胎儿生长受限发病的关系
目的 探讨妊娠特发性胎儿生长受限(IFGR)产妇胎盘组织中Toll样受体3(TLR-3)、产妇外周血及新生儿脐血中肿瘤坏死因子α(TNF-α)的表达变化及其与匀称型及非匀称型IFGR发病的关系.方法 选择2008年4月-2009年4月在郑州大学第三附属医院妇产科分娩的42例单胎初产妇及其IFGR患儿为研究对象,均以足月剖宫产术分娩.按重量指数(PI)分型法分为匀称型20例(匀称型组),非匀称型22例(非匀称型组).另随机选取足月正常产妇42例及其新生儿为对照组,均因骨盆狭窄或社会因素行剖官产术分娩.采用免疫组化即用型非生物素二步法检测各组产妇胎盘组织中TLR-3蛋白表达;采用酶联免疫吸附试验检测各组产妇外周咀及新生儿脐血中的TNF-α水平.结果 (1)3组产妇胎盘组织中均有TLR-3蛋白不同程度的阳性表达,对照组及匀称型组TLR-3蛋白主要定位于胎盘合体滋养细胞、绒毛间质Hofbouer细胞胞质和(或)胞膜中;非匀称型组TLR-3蛋白主要定位于绒毛问质Hofbouer细胞胞质中,合体滋养细胞中有少量表达.(2)匀称型组及非匀称型组胎盘合体滋养细胞中的TLR-3蛋白表达水平分别为111 ±14及118±11,均明显低于对照组的156±9,分别比较,差异均有统计学意义(P<0.01).匀称型组胎盘绒毛间质Hofbouer细胞中的TLR-3阳性细胞数为(8.9±2.8)个,明显低于对照组的(17.5±2.8)个,两组比较,差异有统计学意义(P<0.01);非匀称型组胎盘绒毛问质Hotbouer细胞中的TLR-3阳性细胞数为(23.8±3.7)个,明显高于对照组,两组比较,差异有统计学意义(P<0.01).(3)匀称型组及非匀称型组产妇外周血中TNF-α水平分别为(90±10)及(86 4-11)μg/L,均明显高于对照组的(73±9)μg/L,分别比较,差异均有统计学意义(P<0.01);匀称型组及非匀称型组新生儿脐血中TNF-α水平分别为(92±12)及(96±8)μg/L,均明显高于对照组的(79±9)μg/L,分别比较,差异均有统计学意义(P<0.01).(4)匀称型组产妇外周血中TNF-α水平与新牛儿脐血中TNF-α水平无相关性(r=-0.366,P>0.05);非匀称型组产妇外周血中TNF-α水平与新牛儿脐血中TNF-α水平也无相关性(r=-0.273,P>0.05).(5)匀称型组及非匀称型组产妇外周血中TNF-α水平与Hofbouer细胞中TLR-3蛋白表达水平无相关性(P>0.05);新生儿脐血中TNF-α水平与Hofbouer细胞中TLB-3蛋白表达水平呈正相关关系(P<0.05).结论 (1)胎盘组织中TLR-3表达紊乱及其脐血中TNF-α水平升高与IFGR发病相关;(2)匀称型IFGR的发生可能与Hofbouer细胞中TLR-3蛋白表达水平降低有关,非匀称型IFGR的发生町能与Hofbouer细胞中TLR-3蛋白表达水平升高有关.
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急性轮状病毒腹泻患儿外周血单核细胞Toll样受体3 mRNA表达及血清γ干扰素和肿瘤坏死因子α水平
目的 探讨外周血单核细胞Toll样受体3(TLR3)mRNA表达与急性轮状病毒(RV)腹泻的关系.方法 选取61例急性RV腹泻患儿为研究对象,以实时荧光定量RT-PCR检测外周血单核细胞TLR3 mRNA表达,采用ELISA法检测血清IFN-γ、TNF-α,水平.结果 重型腹泻组外周血单核细胞TLR3 mRNA表达及血清IFN-γ、TNF-α水平分别为0.820±0.051、(33.67±12.88)pg/ml、(62.21±14.65)pg/ml,而轻型腹泻组为0.717±0.040、(24.01±10.06)pg/ml、(50.99±12.18)pg/ml,正常对照组为0.525±O.029,(12.52±5.19)pg/ml、(28.65±7.44)pg/ml.与正常对照组相比,重型和轻型腹泻组TLR3 mRNA表达及血清IFN-γ、TNF-α水平明显升高,差异有非常显著性(P<0.01),重型腹泻组与轻型腹泻组相比,差异有非常显著性(P<0.01).外周血单核细胞TLR3表达和血清IFN-γ、TNF-α水平呈正相关(r=0.431,P<0.05,r=0.372,P<0.05).结论 急性RV腹泻患儿外周血单核细胞TLR3 mRNA表达上调,TLR3及其介导的免疫应答与急性RV腹泻的发生发展存在一定的相关性.
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拓展年龄相关性黄斑变性发病机制的研究思路
在发达国家,年龄相关性黄斑变性(AMD)是50岁以上人群不可逆性严重视力下降的首要原因,是65岁以上人群主要的致盲眼病.随着我国经济水平的提高,进入老龄化社会的加速,AMD患者不断增多,日益受到全社会的关注.AMD的病因学和发病机制至今未明,是全世界眼科研究的热点.目前多数研究者认为环境与基因、氧化损伤、炎症免疫、血管生成与抑制生成因子失调等因素参与AMD的发生与发展.如何从纷繁复杂的相关因素中,探索我国人群AMD的发病机制是值得国内研究者认真关注的重要问题.笔者认为应善于从学术争议中寻找突破点,以拓展AMD发病机制的研究思路,为临床治疗AMD提供理论依据.
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Toll样受体3在动脉粥样硬化中的作用研究进展
动脉粥样硬化(AS)是一种慢性炎症疾病.Toll样受体(TLR)尤其是TLR3作为介导天然免疫反应的一类模式识别受体,在AS进程中发挥着重要的作用.TLR3属于TLR/IL-1受体超家族的Ⅰ型跨膜蛋白,由胞外区、侧翼区、跨膜区和胞质尾区4部分组成.TLR3在胎盘和胰腺组织表达高,选择性地表达于树突状细胞的内涵体,在其他细胞类型则表达于细胞膜.TLR3识别病毒来源的双链RNA,激活干扰素调节因子及NF-κB,引起炎性细胞因子的释放.研究发现,TLR3与AS早期病变(内皮受损和泡沫化细胞形成)密切相关;也有研究发现TLR3在AS进程中具有潜在的保护效应.本文就TLR3在AS疾病进程中的作用的研究进展做一综述.
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TOLL样受体3在大鼠心肌缺血/再灌注损伤中的作用机制
目的 探讨TOLL样受体3(TLR3)在大鼠心肌缺血/再灌注(I/R)损伤中的表达及作用机制.方法 制备TLR3基因敲除大鼠及野生型大鼠,采用球囊结扎冠脉方法制作心肌缺血/再灌注动物模型,将60只大鼠随机分为假手术组(野生型)(n=15)、缺血/再灌注组(野生型)(n=15)、假手术组(TLR3-/-)(n=15)、缺血/再灌注组(TLR3-/-)(n=15).检测各组大鼠的心肌组织MDA、GSH、CK-MB、LVESV、LVEDV、LVEF及TLR3、NF-κB表达.结果 缺血/再灌注组(TLR34-)的MDA[(9.72±6.15) nmol/L]、CK-MB含量[(1075.76±3.27) U/L]低于缺血/再灌注组(野生型)[(14.85±5.2)nmol/L,(1842.16±4.28) U/L],GSH含量[(152.46±2.82) mg/L]高于缺血/再灌注组(野生型)[(128.72±1.82)mg/L],差异有统计学意义(P＜0.05).缺血/再灌注组(TLR3-/-)组的LVEDV[(602.0±2.7)μl]、LVESV[(516.0±2.9)μl]低于缺血/再灌注组(野生型)[(702.0±4.5)、(516.0±2.9)μl],LVEF[(42.0±2.8) ％]于缺血/再灌注组(野生型)[(36.0±4.2)％],差异有统计学意义(P＜0.05).缺血/再灌注组(野生型)TLR3 (0.862±0.158)、NF-κB (0.786±1.784)蛋白表达均高于假手术组(野生型)(0.315±1.834,0.206±1.924),差异有统计学意义(P＜0.05).缺血/再灌注组(TLR3-/-)的TLR3蛋白(0.076±1.52)及NF-κB表达(0.625±2.824)低于缺血/再灌注组(野生型),差异有统计学意义(P＜0.05).结论 TOLL3受体基因缺失在心肌缺血损伤中具有心脏保护作用,其保护机制与减轻NF-κB,减轻心肌缺血/再灌注炎症反应有关.
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细胞因子信号抑制蛋白1与卵巢癌的关系
细胞因子信号抑制蛋白1（ SOCS1）是一种常见的抑制性信号调节蛋白，参与负反馈调节Janus激酶／信号转导及转录激活因子、Toll样受体信号通路、干扰素信号通路等，从而调控细胞因子、生长因子和激素对细胞的作用，这些信号通路在肿瘤的发生、发展中起一定的作用。其中以 SOCS－1基因启动子的甲基化所致的基因沉默为热点，同时为卵巢恶性肿瘤机制的研究及治疗开辟了新的道路。
