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黄芪甲苷Ⅳ对卵清蛋白诱导的哮喘小鼠CD4+T细胞亚型Th1、Th2免疫活性的抑制作用
目的:探讨黄芪甲苷Ⅳ(ASTⅣ)对卵清蛋白(OVA)诱导的哮喘模型小鼠Th1/Th2平衡的免疫调节作用.方法:Ba1b/c小鼠随机分为4组:对照组、OVA组、ASTⅣ组、地塞米松(Dex)组,每组10只.ASTⅣ组小鼠灌胃ASTⅣ溶液,Dex组小鼠灌胃Dex溶液,对照组和OVA组灌胃等体积无菌0.9％氯化钠溶液.酶联免疫法检测上清液中各细胞因子水平,采用流式细胞仪检测脾细胞悬液中Th1(T-bet)和Th2(GATA-3)细胞比例情况,采用qRT-PCR分析转录因子mRNA的表达水平.结果:与OVA组比较,Dex组和ASTⅣ组小鼠Th2细胞因子(IL-4、IL-13、TNF-α)、GATA-3 mRNA明显降低(P＜0.05),Th1细胞因子(IFN-γ)、T-bet mRNA表达明显升高(P＜0.05).OVA组小鼠CD4+GATA-3+细胞明显高于对照组(P＜0.05).而Dex组和ASTⅣ组小鼠CD4+GATA-3+细胞明显降低(P＜0.05),CD4+T-bet+细胞占比明显升高(P＜0.05).结论:ASTⅣ可以纠正OVA诱导的哮喘模型小鼠中Th1/Th2的不平衡,表明该药物可能抑制哮喘的发展和严重程度.
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黄芪甲苷Ⅳ对大鼠主动脉平滑肌细胞增殖的抑制作用
目的 探讨从黄芪提取物黄芪甲苷Ⅳ对异常血管平滑肌细胞增殖的抑制作用.方法 离体培养大鼠主动脉平滑肌细胞,分别测定黄芪甲苷Ⅳ作用前后异常血管平滑肌细胞的增殖、凋亡、细胞一氧化氮(NO)和钙离子浓度的变化.用WST法测定细胞的增殖;细胞凋亡通过annexin Ⅴ标记法用流式细胞仪测定;细胞内NO和钙离子用荧光素DAF-2和Flue-3/AM分别标记,运用激光共聚焦显微镜测定其浓度变化;细胞醛糖还原酶的活性通过测定NADPH在340 nm的吸收光谱来表征.结果 黄芪甲苷Ⅳ显著抑制了由血清诱导的平滑肌细胞增殖(P<0.01);流式细胞测定表明黄芪甲苷Ⅳ促进平滑肌细胞的凋亡(P<0.01);黄芪甲苷Ⅳ和醛糖还原酶抑制剂依帕斯他显著抑制了醛糖还原酶的活性(P<0.01);在黄芪甲苷Ⅳ作用下,平滑肌细胞NO和钙离子浓度增加.结论 黄芪甲苷Ⅳ可能通过抑制醛糖还原酶的活性,促进细胞凋亡,增加NO的产生和钙离子浓度的途径来抑制异常血管平滑肌细胞的增殖.
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黄芪甲苷Ⅳ对溃疡性结肠炎大鼠的作用及其机制研究
目的 研究黄芪甲苷Ⅳ对溃疡性结肠炎(UC)大鼠的作用及其机制.方法 用2,4,6-三硝基苯磺酸钠(TNBS)结肠灌注建立UC大鼠模型.按照体重将大鼠随机分为6组:正常组、模型组、对照组和低、中、高3个剂量实验组,每组10只.正常组与模型组给予0.5％ CMC-Na灌胃;对照组给予柳氮磺胺吡啶300 mg·kg-灌胃;低、中、高3个剂量实验组分别灌胃黄芪甲苷Ⅳ10,20,40mg·kg-1,1次/天,连续8d.收集结肠并测定组织中髓过氧化物酶(MPO)活性;用酶联免疫吸附法检测结肠肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素1β(IL-1β)水平.结果 正常组、模型组和低、中、高3个剂量实验组结肠组织MPO活性分别为(0.11±0.04),(4.66±1.22),(3.63±0.40),(3.30±0.68)和(2.85±0.57)U·mg-1;这5组结肠组织TNF-α含量分别为(176.92±70.27),(478.96±91.27),(357.21±96.22),(328.37±99.24)和(287.09±87.57) pg·mg-1;这5组结肠组织IL-1β水平分别为(402.59±37.58),(1045.83±213.59),(817.93±104.60),(772.18±146.94)和(717.42±82.44) pg·mg-1.上述这3个指标:模型组与正常组比较,差异均有统计学意义(均P＜0.01);3个剂量实验组与模型组比较,差异均有统计学意义(均P＜0.05).结论 黄芪甲苷Ⅳ可明显改善UC肠道病变,其作用与减轻炎症反应、提高黏膜屏障功能有关.
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黄芪甲苷Ⅳ对老鼠的减肥作用
目的:研究黄芪甲苷Ⅳ对老鼠的减肥作用.方法:通过高脂饮食制造肥胖老鼠造模并且每日灌胃注入黄芪甲苷Ⅳ,分别记录老鼠的每周体重和每日进食量,利用生化试剂盒检测脂联素含量.结果:黄芪甲苷Ⅳ能够调节肥胖老鼠的新陈代谢促进其减轻体重.结论:黄芪甲苷Ⅳ能够有效降低肥胖老鼠的体重.
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黄芪甲苷Ⅳ通过影响β-actin对内皮型一氧化氮合酶的调节作用
目的:研究黄芪甲苷Ⅳ(AS-Ⅳ)对体外培养脐静脉内皮细胞中内皮型一氧化氮合酶(eNOS)的调节作用及可能的机制.方法:培养人脐静脉内皮细胞系EA.Hy926,用AS-Ⅳ进行干预,同时给予或不给予骨架蛋白β-actin聚合稳定剂phalloidin,用免疫共沉淀方法检测eNOS与单体β-ac血结合状态的变化,用L-3H-精氨酸转化为L3H-瓜氨酸的同位素法测定eNOS活性,I125环一磷酸鸟苷(cGMP)放射免疫法检测细胞内cGMP水平,Western blotting方法检测细胞中eNOS和蛋白激酶B(Akt)磷酸化水平,总蛋白水平.结果:①AS-Ⅳ作用10min后,细胞内单体β-actin与eNOS的结合明显增加(P＜0.05或P＜0.01),预先给予phalloidin显著抑制了AS-Ⅳ引起的两者结合的增加(P＜0.01).②AS-Ⅳ明显增加了eNOS活性(P＜0.05)、cGMP含量(P＜0.01)、eNOS Ser-1177磷酸化水平(P＜0.01)、Akt Ser-473磷酸化水平(P＜0.001),预先给予phalloidin明显降低了AS-Ⅳ引起的eNOS活性(P＜0.05)、cGMP含量(P＜0.01)和磷酸化水平的增加(P＜0.01),但对Akt的磷酸化没有影响.结论:单体β-actin与eNOS的结合在AS-Ⅳ激活eNOS的过程中起着不可或缺作用,其主要是通过促进Akt对eNOS Ser-1177的磷酸化来实现的.
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不同厂家产黄芪注射液中黄芪甲苷的含量考察
目的:以黄芪甲苷为含量测定指标,考察不同生产厂家生产的黄芪注射液的质量.方法:建立HPLC-ELSD测定黄芪甲苷的方法,对黄芪注射液中的黄芪甲苷进行含量测定.Hypersil ODS2 C18(250mm×4.6mm,5μm)色谱柱,柱温:40℃,流动相:乙腈-水(36:64),流速:1.0mL·min-1,ELSD检测器漂移管温度:100℃,气体(空气)流速:3.0L·min-1.结果:黄芪甲苷在2.4～12μg呈良好的线性关系,相关系数为r=0.9997,加样回收率为101.6%,RSD为2.9%,n=5.测定了5个厂家生产的10批黄芪注射液,结果样品间的黄芪甲苷含量的差异较大.结论:用HPLC-ELSD测定黄芪注射液中黄芪甲苷含量的方法快速简便,灵敏度高,结果可靠,重现性较好,可作为黄芪注射液质量评价的依据.目前,商品黄芪注射液中黄芪甲苷含量差异较大,可能会影响疗效.
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黄芪甲苷Ⅳ对非酒精性脂肪肝小鼠肝脏脂质代谢的作用
目的 探讨黄芪甲苷Ⅳ(AS-Ⅳ)对非酒精性脂肪肝(NAFLD)小鼠肝脏脂质代谢的影响.方法 5周龄雄性C57BL/6小鼠随机分为正常饮食组、高脂高糖组、高脂高糖+AS-Ⅳ[30 mg/(kg·d)]组、高脂高糖+AS-Ⅳ[60 mg/(kg·d)]组、高脂高糖+AS-Ⅳ[120 mg/(kg·d)]组.高脂高糖饮食构建NAFLD小鼠动物模型,同时用不同浓度的AS-Ⅳ[30、60、120 mg/(kg·d)]进行灌胃.正常饮食组给予等体积1％羧甲基纤维素(1％CMC)灌胃,每周测体质量、随机血糖,干预13周后,处死小鼠,留取并称量肝脏,采用H&E染色以及油红O染色检测小鼠肝脏脂质沉积情况.结果 高脂高糖诱导的NAFLD小鼠较正常饮食组小鼠的体质量、肝脏湿重及随机血糖增加(P<0.05);AS-Ⅳ未显著减轻NAFLD小鼠的体质量、肝脏湿重及随机血糖(P>0.05).与正常饮食组相比,高脂高糖诱导的NAFLD小鼠肝脏脂滴形成增加(P<0.05);而与高脂高糖组相比,不同浓度的AS-Ⅳ干预后,小鼠肝脏脂滴形成减少,以浓度为60 mg/(kg·d)的AS-Ⅳ组明显(P<0.01).结论 黄芪甲苷Ⅳ能改善非酒精性脂肪肝小鼠的肝脏脂质沉积.
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HPLC法同时测定益气祛白颗粒中2种成分的含量
目的:建立同时测定益气祛白颗粒中黄芪甲苷Ⅳ和木通皂苷D含量的方法.方法:采用高效液相色谱法.色谱柱为YMC-Pack ODS-AM(150 mm×4.6 mm,3 μm),流动相为乙腈-水(梯度洗脱),流速为0.8 ml/min,检测波长为203 nm.结果:黄芪甲苷Ⅳ和木通皂苷D的质量浓度分别在10～500、2.5～250 μg/ml范围内与各自峰面积积分值呈良好的线性关系(r分别为0.999 9和0.999 7);平均加样回收率分别为106.09％ 、99.45％,RSD分别为1.81％ 、3.24％(n均为6).结论:所建方法简单、稳定,结果准确、可靠,可为益气祛白颗粒的体内药动学研究提供依据.
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黄芪甲苷Ⅳ对梗死小鼠心肌新生血管成熟及HIF-1α、VEGF蛋白表达的影响
目的 观察黄芪甲苷(Astragaloside,Astra)-Ⅳ对梗死小鼠心肌新生血管成熟及缺氧诱导因子(Hypoxia induced factor,HIF)-1α和血管内皮生长因子(Vascular endothelial cell factor,VEGF)蛋白表达的影响.方法 结扎法制备小鼠心肌梗死(Myocardium Infarct,MI)模型,Astra-Ⅳ腹腔注射[2 mg/(kg·d)]21 d,通过小动物超声系统评价小鼠心功能;计算梗死面积(IS)与缺血区面积(AAR)的比值;CD31和α-SMA双荧光染色法观察梗死周边心肌组织新生和成熟血管密度;经鼠尾注射FITC-Lectin观察新生血管的灌注情况;Western blot检测MI区及其边缘组织HIF-1 α、VEGF表达的变化.结果 Astra-Ⅳ可提高小鼠的FS(％)和EF(％)[(61.0±2.7)％ vs.(40.2±3.9)％,P＜0.05;(44.1±3.2)％vs.(29.1±4.1)％,P＜0.05],减少MI范围[28.8±8.4)％ vs.(45.1±9.3)％;P＜0.05];MI+ Astra-Ⅳ组心肌新生血管密度(214.0±21.3/mm2),成熟血管密度(7.0 ±2.1/mm2),有效灌注新生血管密度为(0.39 ±0.11)×105/pixels,与MI组比较均具有显著差异(P＜0.01);MI+Astra-Ⅳ组显著增加周围组织的HIF-1 α、VEGF蛋白水平(P＜0.01).结论 Astra-Ⅳ缩小MI面积,提高梗死心肌功能,并促进促血管新生和成熟,实现缺血组织有效灌注,其分子机制可能与HIF-1α和VEGF蛋白的表达增加有关.
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黄芪中有效成分对人食道癌HCE-4细胞凋亡的影响
目的 研究黄芪有效成分芒柄花素与黄芪甲苷Ⅳ对人食道癌HCEq细胞的凋亡作用及其分子机制.方法 MTT法检测黄芪提取物(阳性对照药)、芒柄花素与黄芪甲苷Ⅳ对人食道癌HCE-4细胞的增殖抑制作用,Annexin V-FITC/PI双染法检测3种药物诱导HCE-4细胞凋亡的能力,Western blotting法检测凋亡相关蛋白的表达变化.结果 芒柄花素与黄芪甲苷Ⅳ对HCE-4细胞具有良好的生长抑制作用,其效果呈浓度依赖性;芒柄花素与黄芪甲苷Ⅳ能够诱导HCE-4细胞的凋亡且呈时间依赖性;芒柄花素与黄芪甲苷Ⅳ处理HCE-4细胞后,抗凋亡蛋白p-AKT的表达量明显减少,促凋亡蛋白cleaved-caspase-3表达量增加.结论 黄芪有效成分芒柄花素与黄芪甲苷Ⅳ通过调控AKT信号转导途径诱导人食道癌HCE-4细胞凋亡.
