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miRNA-101调控转化生长因子-β1信号通路促进肝纤维化研究
目的 探讨微小RNA-101及转化生长因子-β信号通路在肝纤维化中的作用.方法 选取2013年1月至2018年1月间宜宾市第一人民医院收治的40例原发性肝癌合并肝纤维化患者手术切除的肝纤维化组织为研究组,另选取40例因肝转移癌患者行肝脏切除的肝正常组织为对照组.采用免疫组化法分别检测肝组织中转化生长因子-β(TGF-β1)和平滑肌α-肌动蛋白(α-SMA)表达水平,采用qRT-PCR检测肝组织中miR-101表达情况,分析TGF-β1和α-SMA与miR-101的相关性.结果 肝纤维化组织中TGF-β1蛋白表达阳性率高于正常肝组织,差异有统计学意义(P＜0.05);两组标本中α-SMA表达阳性率比较,差异无统计学意义(P＞0.05).TGF-β1和α-SMA蛋白在肝纤维化组织中的阳性表达随肝纤维化程度的加重而增强,呈正相关性,差异均有统计学意义(均P＜0.05).TGF-β1和α-SMA蛋白阳性的表达率呈正相关,差异有统计学意义(P＜0.01).肝纤维组织miRNA-101水平低于正常肝组织,差异有统计学意义(P＜0.05).miR-101与TGF-β1和α-SMA蛋白表达呈负相关,差异均有统计学意义(均P＜0.01).结论 miRNA-101下调在肝纤维化过程中起重要作用,可能通过调控TGF-β1而参与肝纤维化.
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MiR-101负性调节人结肠癌细胞HCT116增殖机制的研究
目的 研究miR-101对结肠癌细胞增殖能力的影响及与分子学机制.方法 人工干预miR-101在结肠癌细胞株HCT116中的表达,分别转染阴性对照物(对照组)、miR-101抑制物(实验Ⅰ组)、miR-101模拟物(实验Ⅱ组)48 h后,用细胞增殖法分析其对人结肠癌HCT116细胞增殖能力的影响.用免疫印迹法测定miR-101在调节Notch1表达中的作用.结果 实验Ⅰ组、实验Ⅱ组及对照组的miR-101表达量分别为0.467,1.767,0.967.与对照组相比,mimic-miR-101使HCT116细胞中miR-101的表达水平明显提高,差异有统计学意义(P＜0.05).实验Ⅱ组细胞miR-101的表达水平较对照组显著降低,差异有统计学意义(P＜0.05).在72 h,实验Ⅰ组、实验Ⅱ组及对照组OD值分别为1.10,0.76,0.91.在96 h,实验Ⅰ组、实验Ⅱ组及对照组OD值分别为1.57,0.92,1.20.与对照组相比,实验Ⅱ组的细胞增殖能力明显被抑制,差异均有统计学意义(均P＜ 0.05).miR-101调节结肠癌细胞HCT116增殖的影响是通过靶向调节Notch1的表达来实现的.结论 在结肠癌发生及进展过程中,miR-101发挥抑癌基因作用,可靶向干扰Notch1的表达,进而负性调节结肠癌细胞的增殖.
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miRNA-101调控转化生长因子-β1信号通路参与肝纤维化的研究
目的 探讨miRNA-101及转化生长因子(TGF)-β1信号通路在肝纤维化中的作用.方法 选取2013年1月～2018年1月新疆医科大学第二附属医院手术切除的20例肝纤维化组织作为研究组,选择20例正常肝脏组织作为对照.采用免疫组化法分别检测肝组织中TGF-β1、平滑肌α-肌动蛋白(α-SMA)的表达水平,采用实时定量PCR(qRT-PCR)检测肝组织中TGF-β1、α-SMA的mRNA及miRNA-101的表达情况,分析TGF-β1、α-SMA及miRNA101的相关性.结果 肝纤维化组织中TGF-β1的mRNA表达水平明显高于正常肝组织(P＜0.05),肝纤维化组织中α-SMA的mRNA表达水平与正常肝组织比较,差异无统计学意义(P＞ 0.05).TGF-β1和α-SMA在肝纤维化组织中的阳性表达随肝纤维化程度的加重而增强,呈正相关(r=0.53、0.57,均P＜0.05).TGF-β1和α-SMA的mRNA表达水平呈正相关(r=0.633,P＜ 0.01).肝纤维化组织miRNA-101水平低于正常肝组织,差异有统计学意义(P＜0.05).miRNA-101与TGF-β1、α-SMA的mRNA表达水平呈负相关(r=-0.442、-0.327,均P＜ 0.01).结论 miRNA-101下调可能通过调控TGF-β1而参与肝纤维化.
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miR-101靶向调控肝癌增殖和转移的机制研究及临床意义
目的 探究微小RNA-101 (miR-101)过表达对人肝癌HepG2细胞侵袭和迁移的影响及其分子机制.方法 将HepG2细胞分为空白组、阴性对照组和miR-101转染组.利用慢病毒载体建立稳定过表达miR-101的HepG2细胞株,化学发光法检测miR-101过表达情况,蛋白质印迹法(Western Blot)检测血管内皮生长因子(VEGF)蛋白的表达,划痕实验分析细胞迁移,Transwell实验检测细胞侵袭能力.结果 转染miR-101后HepG2细胞中的miR-101表达明显上升,且miR-101与VEGF存在直接靶向关系.与阴性对照组相比,miR-101转染组细胞中的VEGF蛋白水平显著下调,差异具有统计学意义(P＜0.01),细胞划痕愈合能力和侵袭能力均降低.结论 miR-101过表达可通过靶向VEGF抑制人肝癌HepG2细胞的侵袭和迁移.
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miR-101在胰腺癌组织中的表达水平及对癌细胞侵袭能力的影响
目的:检测分析胰腺癌组织和胰腺癌细胞株中微小RNA(miRNA)的表达情况及对胰腺癌细胞侵袭能力的影响.方法:收集临床患者胰腺癌组织、癌旁组织标本及4种典藏胰腺癌细胞株,用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测所有样本中miR-101的表达水平;采用Transwell侵袭试验检测miR-101对胰腺癌细胞株PANC-1和MIA PaCa-2的侵袭能力,同时采用Western Blotting检测转染miR-101的模拟物(mimic)后胰腺癌细胞株MIA PaCa-2的Rho相关卷曲螺旋蛋白激酶2(Rhoassociated coiled coil forming protein kinas,ROCK2)蛋白表达水平.结果:4种胰腺癌细胞株中miR-101表达量较正常胰腺细胞明显降低(P<0.05),胰腺癌组织中miR-101表达量也明显低于癌旁组织(P<0.05).转染组miR-101的胰腺癌细胞株PANC-1和MIA PaCa-2的侵袭能力较未转染组明显减弱(P<0.05),转染组胰腺癌细胞株MIA PaCa-2中ROCK2蛋白表达也显著低于未转染组(P<0.05).结论:胰腺癌组织和胰腺癌细胞株均低表达miR-101,可能靶向抑制ROCK2蛋白,减弱胰腺癌细胞的侵袭能力.
关键词： 微小RNA-101 胰腺癌 侵袭 Rho相关卷曲螺旋蛋白激酶2 -
长链非编码RNA HOX转录反义RNA通过影响微小RNA-101的表达影响食管癌细胞的生物学行为
目的 观察长链非编码RNA HOX转录反义RNA(lncRNA HOTAIR)在食管癌中的表达以及对细胞生物学的影响.方法 实时荧光定量核酸扩增检测系统(FQ-PCR)检测lncRNA HOTAIR在食管癌组织和癌旁正常组织中的表达差异,细胞计数检测实验(CCK-8)实验检测lncRNA HOTAIR对食管癌细胞增殖能力的影响,细胞侵袭实验(Transwell)实验检测lncRNA HOTAIR对食管癌细胞侵袭能力的影响;流式细胞术检测lncRNA HOTAIR对食管癌细胞凋亡的影响;体内实验检测lncRNA HOTAIR对食管癌细胞裸鼠成瘤的影响;双荧光素酶报告验证lncRNA HOTAIR与微小RNA(miRNA,miR)-101的相互作用关系.结果 食管癌组织中lncRNA HOTAIR的表达显著高于癌旁正常组织[(1.95±0.12)比(1.25 ±0.13),P=0.031],lncRNA HOTAIR能促进食管癌细胞的增殖能力[(118.4±7.5)比(52.0±6.2),P=0.021]、侵袭能力[(126.4±13.4)比(75.6±8.7),P=0.008],抑制食管癌细胞的凋亡,下调lncRNA HOTAIR能减弱食管癌细胞在裸鼠体内的增殖[体积(0.5 ±0.1) cm3比(2.0±0.3)cm3,P=0.016,质量(0.6±0.2)g比(1.5±0.2)g,P=0.022],miR-101可以直接与lncRNA HOTAIR结合位点结合并影响荧光素酶活性.结论 lncRNA HOTAIR通过调控miR-101的表达促进食管癌细胞的恶性生物学行为的发生.
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微小RNA-101靶向果蝇zeste基因增强子同源物2基因对人前列腺癌PC-3细胞生物学行为的影响
目的 观察微小RNA-101(miR-101)通过靶向抑制果蝇zeste基因增强子同源物2(EZH2)基因对人前列腺癌PC-3细胞生物学行为的影响.方法 应用miR-101模拟物转染PC-3细胞;实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)和Western blot法检测转染后miR-101和EZH2的表达;噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖、流式细胞仪检测细胞周期;膜联蛋白V(Annexin V)/碘化丙锭(PI)双染色法测量细胞凋亡率;划痕实验检测细胞迁移能力;Transwell侵袭实验检测细胞侵袭力.结果 miR-101在PC-3细胞中的表达明显低于RWPE-1细胞,EZH2 mRNA和蛋白在PC-3细胞中的表达显著高于RWPE-1细胞,miR-101的表达量与EZH2表达量呈负相关(P＜0.05).miR-101模拟物转染PC-3细胞后,细胞中的miR-101表达上调(P＜0.05),而EZH2 mRNA和蛋白表达水平也明显降低(P＜0.05).MTT法显示:转染后48、72、96 h miR-101模拟物转染组细胞增殖明显低于两个对照组(P＜0.05);流式细胞仪测定结果显示:转染后48 h,miR-101组发生了G0/G1期阻滞(P＜0.05);细胞凋亡率检测结果显示:空白对照组、阴性对照组及miR-101模拟物转染组PC-3细胞凋亡率分别为(2.53±0.36)％、(2.71±0.42)％、(9.84±0.83)％,转染组凋亡率明显高于两个对照组(P＜0.01).划痕实验显示:miR-101模拟物转染组细胞迁移能力明显低于两个对照组(P＜0.01).Transwell侵袭实验结果显示:miR-101组穿过Matrigel凝胶的细胞数显著少于两个对照组(P＜0.01).结论 miR-101负向调控EZH2基因,上调miR-101可抑制PC-3细胞中EZH2的表达,具有显著的肿瘤抑制效应.
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微小RNA-101对前列腺癌干细胞EZH2表达及增殖迁移的影响
目的 调控前列腺癌干细胞(PCSCs)中微小RNA-101(miR-101)表达,观察细胞中EZH2表达及其增殖迁移能力的变化.方法 通过流式分选从LNcap细胞株中获取PCSCs;采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)、Western blot、双荧光素酶、细胞凋亡、细胞周期、细胞迁移实验观察miR-101对前列腺癌干细胞EZH2表达及增殖迁移能力影响.结果 在PCSCs中转染miR-101后,实验组较未处理组EZH2表达量下降46％ (P ＜0.05)；双荧光素酶实验证实PCSCs中miR-101直接调控EZH2；凋亡实验中,实验组细胞凋亡率为(3.79±0.24)％,较对照组凋亡率明显增加(P＜0.05)；周期实验中,实验组细胞G1期比例为(82.95±0.78)％,较对照组比例增加(P＜0.05),细胞被阻滞在G1/S期；迁移试验中,细胞迁移率为0.38±0.01,明显低于对照组(P＜0.05).结论 过表达miR-101能下调前列腺癌干细胞中EZH2的表达并能降低细胞的增殖迁移能力.
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微小RNA-101在结肠癌组织的表达及其与患者预后的关系
目的 探讨微小RNA(miRNA,miR)-101在结肠癌组织中表达及与患者预后的关系.方法 选取择期行根治性手术治疗的结肠癌患者137例,利用实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测结肠癌及癌旁组织中miR-101和Zeste基因增强子人类同源物-2(EZH-2)基因表达,根据结肠癌组织中miR-101表达量的四分位数间距,将患者分为高表达组[表达量≥上四分位数(P25)]和低表达祖(表达量＜ P25),所有患者随访至2015年7月31日,利用Kaplan-Meier法分析患者术后总体生存时间,利用Cox比例风险模型分析影响患者术后总体生存时间的相关因素.结果 结肠癌组织中miR-101表达量显著低于癌旁组织,而EZH-2 mRNA表达量则高于癌旁组织,差异均有统计学意义(P＜0.05);结肠癌组织中miR-101和EZH-2 mRNA表达量均与分化程度、TNM分期、淋巴结转移和远处转移有关(P＜0.05);Pearson相关分析显示,结肠癌组织中miR-101表达量与EZH-2 mRNA表达量呈负相关(r=-0.348,P＜0.05);生存分析显示,高表达组患者术后总体生存时间为51.5个月,显著高于低表达组的30.9个月,差异有统计学意义(x2=10.903,P＜0.01);Cox比例风险模型分析显示,miR-101[风险比(HR)=0.492,95％可信区间(CI):0.334 ～0.795,P＜0.05]和TNM分期(HR=2.576,95％CI:1.572～3.874,P＜0.05)是影响结肠癌患者术后总体生存时间的独立风险因素.结论 结肠癌组织中miR-101呈低表达,可能与结肠癌发生及转移过程有关,可作为患者术后生存时间的预测指标,其机制可能与上调EZH2表达有关.
关键词： 结肠癌 微小RNA-101 Zeste基因增强子人类同源物-2 预后 -
微小RNA鄄101在心房颤动心房纤维化中的作用
目的：探讨微小RNA-101（miRNA-101）在心房颤动心房纤维化中的作用。方法：59例开胸手术患者（心脏瓣膜病47例，先天性心脏病12例），分为房颤组30例、窦律组29例。qPCR及锁定核苷酸原位杂交技术检测两组右心耳 miRNA-101表达；qPCR 检测两组右心耳转化生长因子βⅠ型受体（ TGFβRⅠ）、Ⅰ型胶原（COL1）mRNA 表达；免疫印迹法检测两组右心耳 TGFβRI、COL1蛋白表达；Masson 染色观察两组右心耳胶原的沉积。结果：房颤组右心耳 miRNA-101表达明显低于窦律组（P ＜0．05），原位杂交显示miRNA-101主要分布于心房结缔组织，房颤组 miRNA-101表达较窦律组下降24．9％；房颤组 TGFβRⅠmRNA表达与窦律组无明显差异（P ＞0．05），但蛋白表达明显高于窦律组（P ＜0．05）；COL1mRNA及蛋白表达均明显高于窦律组（P ＜0．05）；房颤组右心耳胶原沉积明显多于窦律组（P ＜0．05）。结论：miRNA-101下调在心房颤动心房纤维化过程中起重要作用，其可能通过调控TGFβRⅠ而参与心房纤维化。
关键词： 心房颤动 微小RNA-101 心房纤维化 转化生长因子βⅠ型受体 -
微小RNA-101在结肠癌组织中的表达及其与患者预后的关系研究
目的 探讨在结肠癌组织中微小RNA-101的表达水平及预后判定的临床意义.方法 采用锁定核苷酸原位杂法检测结肠癌组织中的微小RNA-101的表达水平,分析其的表达与结肠癌患者预后之间的关系.结果 微小RNA-101在癌旁正常组织中的表达较高为78.6%(22/28);但其在结肠癌组织中的阳性表达(55.65%,64/115)显著低于癌旁正常组织,差异显著(P<0.01).微小RNA-101的表达与结肠癌的肿瘤大小、临床分期、远处转移均有密切关系(P均<0.05),但与患者的性别、年龄、浸润深度等不相关.单因素分析显示临床分期、远处转移、微小RNA-101表达与结肠癌患者的总生存率相关(P<0.05);将单因素分析中P<0.05的预后相关因素进行Cox多因素分析结果显示:远处转移、微小RNA-101表达是影响结肠癌患者预后不良的独立风险因素.结论 微小RNA-101表达水平与结肠癌发生发展及预后密切相关.微小RNA-101的表达可成为结肠癌患者不良预后的重要指标.
