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灯盏花素对大鼠液压冲击伤性脑水肿水通道蛋白4表达的影响
目的:观察灯盏花素对大鼠液压冲击伤性脑水肿水通道蛋白4(AQP4)表达的影响.方法:成年SD大鼠80只,应用Dixon法制作脑损伤模型,随机分为两组:模型组和干预组,各40只.干预组应用灯盏花素90mg/kg腹腔注射.两组动物均于术后6、12、24h、3、7d进行神经功能评分和组织学观察,并用干湿重法、免疫织化法分别测定水肿脑组织含水量及其AQP4表达.结果:与模型组比较,干预组大鼠脑组织水肿程度减轻,脑组织含水量则以24h、3d减轻为明显(P＜0.05);神经功能评分出现明显改善,以12h、24h、3d、7d 4个时间点为显著(P＜0.05),同时AQP4表达也出现不同程度减少,尤以12h、24h、3d、7d为著(P＜0.05).结论:灯盏花素能够通过下调AQP4表达减轻液压冲击脑损伤脑水肿,发挥神经保护作用.
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原代培养大鼠海马神经元液压冲击后PAFR、COX-2和GluR2基因表达比较研究
[目的]研究海马神经元在中度液压冲击损伤后PAFR、COX-2和2GluR2基因表达时序性变化的相关性.[方法]原代培养大鼠海马神经元,复制改良Scott's中度液压冲击神经元损伤模型,采用免疫荧光双标技术鉴定神经元纯度,应用RT-PCR技术对PAFR mRNA、COX-2 mRNA和GluR2 mRNA的表达进行定量研究.[结果]对照组COX-2 mRNA呈低表达,损伤后表达逐渐增高,12 h达高值,损伤后12 h组与对照组相比差别有显著性(P＜0.05);对照组GluR 2mRNA呈高表达,损伤后表达逐渐减弱,8 h达低值,损伤后8 h、12 h组与对照组相比差别有显著性(P＜0.05);对照组PAFR mRNA呈高表达,损伤后表达逐渐减弱,8 h达低值,损伤后8 h、12 h组与对照组相比差别有显著性(P＜0.05).[结论]正常时COX-2 mRNA在体外培养神经元中仅有少量表达,损伤后4 h表达增加,12 h达高值,48 h时仍高于正常.正常时GluR2 mRNA在体外培养神经元有较多表达,损伤后4 h表达下降,8 h达低值,48 h时仍低于正常.正常时PAFR mRNA在体外培养神经元中有较多表达,损伤后4 h表达下降,8 h达低,48 h时仍低于正常.PAFR mRNA、COX-2 mRNA和GluR2 mRNA在体外海马神经元中度液压冲击损伤中表达的时序性变化特点基本一致,三者关系密切,共同参与脑损伤病理生理过程.
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液压脑损伤大鼠大脑皮质突触素的动态变化
目的:探讨液压脑损伤后突触素在皮质区表达的动态变化.方法:应用液压脑损伤复制脑损伤动物模型,应用免疫组织化学和计算机图像分析技术定量分析皮质受损区突触素表达的动态变化.结果:突触素在皮质受伤区表达呈现两次高峰:分别为3～12h和15～30d,90d表达接近正常.结论:突触素在皮质受伤区第2次表达增高可能与脑的结构和功能恢复有关.急性期表达增高则可能与脑的直接损伤有关.
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大鼠液压冲击脑损伤脑组织Toll样受体4表达与神经功能的关系
目的 观察大鼠液压冲击脑损伤Toll样受体4(TLR4)表达变化,探讨其与神经功能的关系.方法 成年雄性SD大鼠56只,随机分为损伤组(n=48)和假手术组(n=8).采用液压冲击制备颅脑损伤模型,术后1h、6h、12h、24 h、3d、7d对动物进行神经功能评分,并用干湿重法、免疫组化法和Western Blot 分别测定水肿脑组织含水量及TLR4蛋白表达.结果 神经功能评分6h出现下降[(3.86±0.42)分],24 h下降至低值[(2.65±0.32)分],3d逐渐升高[(3.25±0.17)分];免疫组化和Western Blot均显示水肿脑组织TLR4的表达均6h开始增高,24h至3d达到高峰,7d后降低.线性相关性分析发现TLR4表达与神经功能评分呈显著负相关(r1=-0.824,rw=-0.867,P＜0.05).结论 大鼠颅脑液压冲击伤TLR4出现高表达,可能诱发了继发性炎性脑损伤导致神经功能障碍.
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大鼠液压冲击脑损伤炎性细胞因子表达与神经功能评分的关系
目的 观察大鼠液压冲击脑损伤炎性细胞因子白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)表达变化,探讨其与神经功能评分的关系.方法 成年雄性SD大鼠48只,制作液压冲击颅脑损伤模型,术后6h、12h、24 h、3d、7d对动物进行神经功能评分,并用干湿重法、免疫组化法分别测定水肿脑组织含水量及其IL-1β、IL-6、TNF-α、ICAM-1表达.结果 神经功能评分6h出现下降[(3.78±0.84)分],24h下降至低值[(2.65±0.32)分],3d逐渐升高[(4.75±0.71)分];免疫组化显示水肿脑组织IL-6、IL-1[β、TNF-α、ICAM-1的表达均6h开始增高,24 h至3d达到高峰,7d后降低.线性相关性分析发现IL-6、IL-1β、TNF-α、ICAM-1表达与神经功能评分呈负相关关系(相关系数分别为r=-0.912,r=-0.892,r=-0.794,r=-0.887,P＜0.05).结论 大鼠颅脑液压冲击伤IL-1β、IL-6、TNF-α、ICAM-1均出现高表达,与神经功能评分呈负相关,可能与炎性因子造成的继发性脑损伤有关.
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不同冲击压力脑损伤大鼠神经功能评分差异性与病理学特征的关系
目的 观察不同冲击压力液压冲击脑损伤大鼠神经功能评分差异性,探讨与病理学变化的关系及其临床意义.方法 采用0.1,0.2,0.3 NPa三种不同打击压力,制作不同冲击压力大鼠液压冲击脑损伤模型,观察生命体征变化、比较死亡率,观察造模后1h、6h、12h、24h、3d、7d时神经功能评分和脑水含量,比较其组织学演变趋势.结果 应用0.1MPa冲击,动物出现一过性呼吸减弱,死亡率2.08％,神经功能评分低降至(7.17±0.75)分,但恢复较快,脑含水量高达(81.12±0.03)％,脑损伤仅累及冲击伤处脑皮层的浅层;应用0.2MPa冲击,动物呼吸暂停时间(10.88±2.69)s,死亡率4.17％,神经功能评分低降至(4.83±0.75)分,脑水含量高达(82.74±1.11)％,脑损伤深达海马结构;应用0.3MPa冲击,大鼠呼吸暂停时间(20.60±3.02)s,死亡率16.67％,神经功能评分低降至(2.67±0.52)分,而且恢复较慢,脑水含量高达(83.89±0.04)％,脑损伤深达海马下结构、脑干.结论 轻、中、重三种不同冲击压力液压脑损伤大鼠神经功能评分依次降低,与其病理学的严重程度呈正相关.
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实验性大鼠液压冲击脑损伤神经功能评分与脑水肿、水通道蛋白4表达的关系
目的 观察液压冲击脑损伤大鼠神经功能评分,及其与脑水肿和水通道蛋白4(AQP4)高表达的关系.方法 制作SD大鼠液压冲击脑损伤模型并对动物进行神经功能评分,应用干湿重法测定脑组织含水量,免疫组织化学染色方法和免疫蛋白印迹检测AQP4表达变化.结果 TBI 组动物神经功能评分12h出现下降[(11.17±1.32)分],24h下降至低值[(10.17±0.75)分],3d逐渐升高[(10.66±1.37)分]；脑含水量12h明显增加[(80.27±1.47)％],24h达到高[(82.19±0.97)％],持续至3d开始下降[(81.74±1.69)％]；Western Blot结果显示AQP4表达于12h明显增高(OD:0.65±0.05),24h达到高值(OD:0.72±0.08),3d下降(OD:0.56±0.07),7d(OD:0.49±0.09)仍高于对照组(OD:0.15±0.05)；免疫组化显示AQP4表达趋势与Western Blot结果一致.线性相关分析发现神经功能评分与脑含水量之间存在负相关性(r=-0.615,P＜0.01)；神经功能评分与AQP4蛋白表达之间也呈负相关(r=-0.605,P＜0.05).结论 液压冲击伤大鼠的神经功能评分降低,其与脑水肿和AQP4表达呈负相关,可能与AQP4通过介导脑水肿的发生、间接参与神经功能损伤有关.
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灯盏花素对大鼠液压冲击脑损伤的神经保护作用及其机制
目的 观察灯盏花素对大鼠液压冲击脑损伤神经保护作用并探讨其机制.方法 成年雄性SD大鼠80只制作颅脑损伤模型,随机分为两组:模型组和干预组.干预组应用灯盏花素90 mg/kg腹腔注射.两组大鼠均于术后6、12、24 h、3、7d进行神经功能评分和组织学观察,并用干湿重法、免疫组织化学法和Western blot分别测定水肿脑组织含水量及其水通道蛋白4(AQP4)的表达变化.结果 与模型组比较,干预组大鼠神经损伤明显缓解,脑组织水肿程度减轻,以24 h、3d减轻为明显[24 h:(82.54±1.89)％比(80.84±1.08)％;3d:(80.61±0.49)％比(79.11 ±1.14)％];神经功能评分明显改善,以24 h、3、7d3个时间点为显著(24 h:5.83 ±0.41比7.33 ±0.82;3d:6.17 ±0.75比7.50 ±0.55;7 d:7.00±0.63比8.33 ±0.52),同时AQP4蛋白表达也出现不同程度减少,尤以24 h、3、7d显著(24 h:0.83 ±0.03比0.57 ±0.04;3 d:0.91 ±0.02比0.61 ±0.02;7d:0.64±0.05比0.42±0.07).结论 灯盏花素能够改善神经细胞受损程度,通过下调AQP4表达减轻液压冲击脑损伤脑水肿发挥神经保护作用.
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核因子-κB对大鼠液压冲击脑损伤炎性因子表达的影响
目的 观察大鼠液压冲击脑损伤核因子(NF)-κB和炎性细胞因子白细胞介素(IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)表达规律,探讨其机制.方法 雄性SD大鼠56只制作脑损伤模型,术后1、6、12、24 h及3、7d用干湿重法、免疫组织化学法测定脑含水量及NF-κB、IL-1β、IL-6、TNF-α、ICAM-1表达规律.结果 脑含水量6h时稍升高[(79.11±1.28)％],12 h显著升高[(80.26±1.47)％],24h～3d达高峰[(82.74±1.10)％、(82.04±1.69)％],7d降低[(80.72±1.87)％].组织学观察印证了脑水肿趋势.免疫组织化学法显示水肿脑组织NF-κB、IL-6、IL-1β、TNF-α、ICAM-1表达均于6h开始增高,24h～3d达到高峰,7d后降低.线性相关性分析发现NF-κB与炎性因子表达呈正相关,后者与脑含水量呈正相关(P＜0.05).结论 大鼠脑液压冲击伤NF-κB表达上调,可能诱导IL-1β、IL-6、IL-10、TNF-α高表达引发继发性脑损伤.
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小鼠液压冲击脑损伤模型的建立和分级
目的 建立稳定的不同级别小鼠液压冲击颅脑损伤模型.方法 采用60 ～ 80、160 ～180、260 ～ 280 kPa,3种不同的液压冲击力建立小鼠液压冲击脑损伤模型.造模后进行生命体征观察;造模后第12小时、第1、2、3、7天进行改良神经功能缺损评分(mNSS);造模后第1、3、7天行大体标本观测、2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色、苏木素-伊红(HE)染色和小动物核磁共振成像(MRI)检查;造模后第7～12天行Morris水迷宫实验.结果 各组小鼠目标象限百分率分别为:对照组(31.2±8.0)％,轻型损伤组(30.0±l1.7)％,中型损伤组(26.4±17.4)％,重型损伤组(15.0±9.0)％.重型损伤组小鼠目标象限百分率与对照组小鼠目标象限百分率比较差异有统计学意义[(15.0±9.0)％比(31.2±8.0)％,P＜0.05].打击力度越大,小鼠脑损伤越重,死亡率越高,mNSS评分越高,脑水肿越重,脑挫裂伤灶和MRI影像学改变越明显.结论 本实验模型可以稳定地建立不同程度小鼠颅脑创伤.
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Toll样受体蛋白4对大鼠液压冲击脑损伤炎性因子的调控作用
目的 观察液压冲击脑损伤大鼠Toll样受体蛋白4(TLR4)与炎性细胞因子白细胞介素(IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达变化,探讨TLR4对炎性因子的调控作用.方法 成年雄性SD大鼠48只,制作液压冲击颅脑损伤模型,术后6、12、24 h、3、7d断头处死,用干湿重法、免疫织化法分别测定水肿脑组织含水量及其TLR4、IL-1β、IL-6、TNF-α表达.结果 创伤性颅脑损伤(TBI)组大鼠脑含水量从6h开始增加[(78.86 ±0.54)％],24 h时达到大值[(83.07±0.27)％],持续至3d开始下降[(81.85±1.26)％];免疫组织化学显示水肿脑组织TLR4、IL-1β、IL-6、TNF-α的表达均在6h时开始增高(1.50±0.58、3.75±0.48、3.50±0.58、5.75 ±2.36),在12h或24 h时达到高峰(5.50±1.00、7.80±1.64、7.75±1.05、7.50±1.73),7d后降低.线性相关分析显示TLR4表达与IL-1β、IL-6、TNF-α表达呈正相关(r=0.941、0.907、0.836,P＜0.05).结论 大鼠颅脑液压冲击伤TLR4、IL-1β、IL-6、TNF-α均出现高表达,TLR4可能通过调控炎性因子介导继发性脑损伤.
关键词： Toll样受体蛋白4 炎性细胞因子 脑损伤 液压冲击
