人类乳腺癌基因表达分析

目的研究乳腺癌发生和发展相关基因群的表达及其初步功能.方法用4 096种人类基因多聚酶链反应(PCR)产物制成BioDoor4096型表达谱芯片,分离纯化正常乳腺组织和乳腺癌组织mRNA,制备表达谱探针,用ScanArray3000荧光扫描仪扫描芯片荧光信号图像,利用计算机分析正常乳腺组织和乳腺癌组织之间差异表达的基因.结果在4 096种基因中,正常乳腺组织和乳腺癌组织之间差异表达的基因有619条(15.11%).生物信息学分析显示,这些差异表达的基因可能与乳腺癌的发生和发展密切相关.结论乳腺癌的发生、发展中存在多基因表达调控的改变,对于相关基因群的研究有助于认识肿瘤发病机制,并为乳腺癌个体化治疗提供依据.

深低温停循环下兔脑内兴奋性氨基酸的早期变化与脑损伤研究

目的探讨体外循环(CPB)和深低温停循环(DHCA)下脑内兴奋性氨基酸(EAA)早期变化规律,及其"兴奋毒性"作用在脑损伤中的作用.方法建立应用脑微透析技术的兔CPB和DHCA模型.利用高效液相的电化学检测方法,测定兔脑海马CA1区脑细胞间液中EAA的连续性变化.术后利用透射电子显微镜给予组织学损伤评分.结果谷氨酸在CPB组各阶段变化差异无统计学意义(P>0.05);DHCA组在恢复循环早期明显升高(P<0.05),升高程度DHCA组明显高于CPB组(P<0.01).天冬氨酸在DHCA组恢复灌注30～60min阶段明显升高(P<0.01),但与CPB组的组间对照差异无统计学意义(P>0.05).透射电镜发现两组脑细胞超微结构均明显损伤,DHCA组损伤重于C组(P<0.05).结论 "兴奋毒性"作用与中低温CPB造成的脑损伤无关.DHCA可使再灌注早期兴奋性氨基酸升高,并导致脑损伤加重.

皮瓣缺血再灌注期间核因子-κB活性的变化及其意义

目的探讨核因子(NF)-κB活性变化在皮瓣缺血再灌注(I/R)损伤中的作用.方法 将60只雄性SD大鼠随机分为3组:对照组;I/R组;吡咯烷二硫氨基甲酸酯(PDTC)处理组.制备右下腹岛状皮瓣I/R模型.PDTC处理组于再灌注前及早期,分2次静脉注射PDTC(300mg/kg体重).采用免疫组织化学及凝胶电泳迁移率法,检测皮瓣NF-κB活化情况,并行组织学观察.结果 I/R组再灌注后NF-κB p65阳性细胞较对照组明显增加,NF-κB活性于再灌注1、3 h显著增强;PDTC处理组再灌注1、2 h阳性细胞数(7.90±3.73、10.60±3.20)较I/R组(19.50±6.93、18.50±5.68)明显减少(P均<0.01),再灌注1 h NF-κB活性受到抑制,中性粒细胞浸润及组织水肿程度较I/R组明显改善.结论 NF-κB活化可能在中性粒细胞介导的皮瓣I/R损伤中起重要作用.

白细胞介素-12抑制裸鼠肝癌Ang-2和血管内皮生长因子表达及其意义

目的探讨白细胞介素-12抑制裸鼠肝癌中血管生成素-2(Ang-2)和血管内皮生长因子(VEGF)基因表达及其意义.方法将小鼠白细胞介素-12基因转染小鼠肝癌H22细胞后,接种到裸鼠肾包膜下,第11天取出肿瘤组织.通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)观察实验组和对照组瘤组织中Ang-2和VEGF基因在mRNA水平上的差异.结果实验组Ang-2和VEGF基因的PCR产物条带亮度均弱于对照组(P<0.05),实验组Ang-2(0.787 8±0.1471)和VEGF(0.886 7±0.192 4)基因的PCR产物条带辉度比值低于载体对照组(1.031 9±0.157 4、1.174 4±0.118 9)和空白对照组(1.0361±0.153 6、1.187 4±0.175 2,P<0.05).结论 IL-12抑制Ang-2和VEGF基因在裸鼠肝癌组织中的表达,从而抑制了裸鼠肝癌的血管生成.

高强度聚焦超声对黑色素瘤小鼠局部肿瘤血管生长因子的影响

目的检测黑色素瘤瘤小鼠高强度聚焦超声(HIFU)治疗前后局部(靶区及边缘)血管内皮生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、转化生长因子(TGF)-β1和TGF-α等血管生长因子的表达,探讨HIFU治疗对局部肿瘤血管生长因子的影响.方法采用B16黑色素瘤动物模型,实验分3组,即HIFU组、手术组和假照组.于治疗后第3天取各组靶区肿瘤组织(手术组除外)及边缘皮肤组织.采用免疫组织化学法检测VEGF、bFGF、TGF-β1、TGF-α的表达.结果假照组靶区肿瘤组织VEGF、bFGF、TGF-β1、TGF-α表达阳性率分别为80.0%、50.0%、65.0%、80.0%,而HIFU组为阴性表达;假照组边缘皮肤组织为阴性表达,而手术组及HIFU组边缘皮肤组织的上述4种血管生长因子的阳性表达率均为100%,两组差异无统计学意义(P>0.05).结论 HIFU治疗能够破坏VEGF、bFGF、TGF-β1、TGF-α等血管生长因子在肿瘤组织中的表达,同时HIFU治疗也可以使靶区边缘血管生长因子的表达增加.

大鼠脊髓源神经干细胞胶质细胞源性神经营养因子基因转染实验研究

目的构建表达外源性胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)的脊髓源基因工程神经干细胞.方法体外分离纯化,扩增大鼠脊髓源神经干细胞,培养、诱导分化结果采用Nestin、NF-200、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)免疫组织化学鉴定;用自行构建的大鼠胶质细胞源性神经营养因子真核表达质粒转染神经干细胞,用荧光检测及GDNF免疫组织化学染色予以证实,转基因GDNF表达采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法定量分析.结果体外纯化获得大量脊髓源神经干细胞,在血清诱导下能分化为神经元和神经胶质细胞;转基因神经干细胞能稳定表达GDNF,在随后3周内,转基因神经球能持续表达外源性GDNF蛋白,表达量稳定在(93.0±6.5)ng/L左右.结论 胚胎脊髓源神经干细胞体外培养能保持干细胞生物学特点,转染GDNF后神经干细胞能稳定表达外源GDNF蛋白,为后续转基因治疗中枢神经系统疾病研究奠定了基础.

转染肿瘤mRNA的树突状细胞疫苗诱导抗肝癌免疫研究

目的探讨转染原发性肝癌(HCC)mRNA的树突状细胞(DC)能否诱导抗肿瘤特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL).方法采用HCC患者外周血单核细胞(PBMC)体外刺激分化为DC细胞;从人肝癌HepG-2细胞和3例HCC患者的肝癌组织中体外扩增mRNA.以mRNA转染DC细胞,并与PBMC混合培养诱导扩增CTL.流式细胞计数仪检测培养细胞中CD3+、CD4+、CD8+细胞的比例.51Cr释放法测定CTL的杀瘤活性.结果经扩增人肝癌HepG-2 mRNA和2例AFP(+)患者的AFP(+)HCC mRNA诱导3周后,CD3+、CD8+细胞占淋巴细胞总数由诱导前的27.8%、26.5%、29.6%升高至89.3%、73.6%、86.8%;而经扩增AFP(-)HCC mRNA诱导3周后,CD3+、CD8+细胞占淋巴细胞总数由诱导前的25.4%升高至53.6%.转染HepG-2细胞和AFP(+)的患者HCC mRNA的DC诱导的CTL对HepG-2细胞杀瘤活性明显高于AFP(-)的患者,其杀瘤特性由MHC-I限制的CD8+T细胞所介导.结论 HCC mRNA体外转染DC能诱导肿瘤特异性CTL,可为肝癌的免疫治疗提供新的有效手段.

以血管内皮生长因子受体为靶点抑制瘢痕血管增生的研究

目的以血管内皮生长因子受体-2(VEGFR-2/KDR)为靶点,观察其抗体对烧伤增生性瘢痕新生血管形成的作用.方法以人烧伤增生性瘢痕移植于裸鼠建立动物模型.治疗组KDR多抗分为10 mg/L和5 mg/L两组,以磷酸盐缓冲液(PBS)组和空白对照组作对照,每周2次,治疗1、2、3周分别观察瘢痕体积、组织形态学、微血管定量及Ⅰ、Ⅲ型胶原含量的变化.结果治疗3周后的瘢痕体积(mm3)、血管密度(个/mm2)、Ⅰ、Ⅲ型胶原含量(阳性面积),KDR两治疗组均与对照组差异有统计学意义(P<0.05).形态学显示瘢痕组织内有大量的血管内皮细胞坏死和血管闭塞,成纤维细胞凋亡,对照组变化不明显.结论 KDR抗体可通过抑制血管的形成治疗增生性瘢痕.

人体阴茎海绵体神经一氧化氮合成酶免疫组织化学研究

目的探讨人体阴茎海绵体神经中一氧化氮合成酶的分布情况.方法采用人体组织切片苏木素-伊红(HE)染色和神经性一氧化氮合成酶(nNOS)免疫组织化学染色方法,对1具成人尸体阴茎海绵体神经及相关组织进行染色分析.结果前列腺后外侧神经束中存在nNOS神经元细胞体和神经纤维.神经元细胞胞浆内可见均匀分布棕黄色颗粒,神经纤维则可见散在棕黄色颗粒.阴茎干背神经中,4条神经纤维截面发现有棕黄色颗粒,其他神经纤维均未发现棕黄色颗粒.龟头部组织中,未发现nNOS棕黄色颗粒神经纤维.结论前列腺后外侧阴茎海绵体神经束中存在nNOS,并且包含nNOS神经节细胞,它发出nNOS神经纤维到达阴茎海绵体,与背神经同行.

先天性巨结肠神经营养因子-3、酪氨酸激酶C的表达及其意义

目的探讨神经营养因子(NT)-3及其受体酪氨酸激酶(Trk)C在先天性巨结肠(HD)中的表达及其意义.方法采用免疫组织化学方法检测32例HD患者不同节段肠组织中神经节细胞NT-3、Trk C的表达水平.结果正常肠段肌间和黏膜下神经丛内神经节细胞呈NT-3、Trk C强阳性表达.HD狭窄段未见NT-3、Trk C阳性染色;移行段神经节细胞NT-3、Trk C阳性率(53.1%、28.1%)均较扩张段(93.8%、43.8%)显著降低(P<0.05).结论 NT-3及其受体TrkC在神经节细胞缺乏肠段的异常表达可能与HD的发病机制有关,对HD具有潜在诊断价值.

原发性肝细胞癌中错配修复基因hMLH1的表达及其意义

目的探讨错配修复基因hMLH1在原发性肝细胞癌(HCC)组织中的表达及其意义.方法采用免疫组织化学和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测48例肝癌组织、23例癌旁组织和25例正常肝组织中hMLH1蛋白和mRNA的表达情况,同时采用原位末端标记法测定癌组织的细胞凋亡指数.结果 48例肝癌组织、23例癌旁组织和25例正常肝组织的hMLH1 mRNA表达分别为62.5%(30/48)、100.0%(23/23)和100.0%(25/25),蛋白表达分别为60.41%(29/48)、91.30%(21/23)和100.00%(25/25).hMLH1表达与肝癌组织的临床分期有明显相关,hMLH1表达阳性的肝癌组织的细胞凋亡指数升高为(3.562±0.233)%.结论 hMLH1在肝癌组织中低表达,提示错配修复基因hMLH1功能缺陷在肝癌的发生、发展过程中起重要作用.

不同浓度曲拉通X-100对制备颌下腺脱细胞基质的影响

目的探讨制备颌下腺脱细胞基质生物衍生支架材料过程中曲拉通X-100的佳浓度.方法用3组不同浓度的曲拉通X-100试剂对30个颌下腺腺体进行脱细胞处理,并通过光镜、透射电镜及扫描电镜观察.结果 0.5%和1%曲拉通X-100组脱细胞后,光镜下见大部分细胞轮廓存在,呈拥挤状态.透射电镜下见细胞膜破损,细胞器破碎,形成多个散在的碎块.扫描电镜下见细胞膜被破坏,表面呈丰窝状改变.而3.0%曲拉通X-100组脱细胞后,光镜下见颌下腺细胞成分完全消失,胶原纤维呈网状排列.透射电镜下见细胞器及细胞核消失,只见残留的细胞轮廓.扫描电镜下见细胞完全消失,只残留空虚的陷窝,基质胶原纤维粗细不等,相互交错呈网状结构.结论在制备颌下腺脱细胞基质时曲拉通X-100试剂的佳浓度是3.0%.

脐血间充质干细胞移植对大鼠局灶性脑缺血的影响

目的从人脐血中分离纯化间充质干细胞(MSC),观察其移植对大鼠大脑中动脉栓塞后神经功能恢复的影响及细胞的存活、迁移向神经细胞分化的情况.方法雄性SD大鼠45只,用线栓法建立大鼠大脑中动脉栓塞(MCAO)模型,大鼠随机分为3组:MSC移植组、单核细胞组和生理盐水组.移植后1、7、14、21、28 d采用改良神经功能损害评分(mNSS)观察大鼠神经功能恢复情况,应用免疫组织化学和免疫荧光双标记技术检测5溴-2脱氧尿核苷(BrdU)标记的MSC细胞的存活、迁移及其胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和神经元特异性核蛋白(NeuN)的表达.结果 人脐血MSC细胞移植可显著提高大鼠局灶性脑缺血后神经功能的恢复(P<0.05).移植的MSC细胞可在大鼠脑组织中存活,并向缺血区域迁移,11.67%MSC细胞表达GFAP,3.72%MSC细胞表达NeuN.结论人脐血中含有MSC细胞并可促进局灶性脑缺血大鼠的神经功能恢复,移植细胞可在大鼠脑缺血区域中存活、迁移并向星形胶质细胞或神经元分化.

188Re标记小剂量奥曲肽方法学及其在小鼠体内分布的研究

目的建立188Re标记小剂量奥曲肽(octreotide)的方法,观察其在小鼠体内的生物学分布.方法 SnCl2·2H2O的用量为50～1 600μg,奥曲肽的用量为10、20或30μg,乙酸缓冲液的pH值从4.0至6.0,反应体系的温度为室温、60、80或100℃,淋洗液体积从0.05至0.20 ml,测定标记物的标记率及其在体外的稳定性.将标记物经小鼠尾静脉注射,于0.5、1、2、4、24 h取血液及主要脏器测量其放射性计数率值.结果 188Re直接法标记小剂量奥曲肽的佳条件:葡庚糖酸钠(0.3 mmol/L)0.1 ml,SnCl2·2H2O(16 g/L)0.05 ml,乙酸缓冲液(pH=5)0.1 ml,奥曲肽(0.1 g/L)0.1 ml,通氮气震荡反应1 h,再加入新鲜188Re淋洗液0.1ml,100℃水浴30 min,188Re-奥曲肽标记率可达到(95.3±1.8)%,室温下放置24 h放化纯为(89.6±2.5)%.188Re-奥曲肽在正常小鼠体内主要分布于肝脏、肾脏及肠道.结论研究建立的188Re标记奥曲肽操作简便,标记率高,体外稳定性好,无需进一步纯化,奥曲肽用量较小,预期能提高靶向定位质量,188Re-奥曲肽在小鼠体内主要被肠道、肝脏、肾脏等器官摄取,血液清除快.

生长抑素受体亚型在结直肠癌组织中的表达

目的探讨结直肠癌组织中生长抑素受体亚型(SSTR1-SSTR5)的表达和临床病理学意义.方法免疫组织化学染色方法(SP法)检测127例结直肠癌组织和40例正常结直肠黏膜中SSTR 5种亚型的表达.结果 SSTR 5种亚型在结直肠癌组织和正常结直肠黏膜均有表达,两组SSTR表达的优势亚型都是SSTR1,结直肠癌组织中SSTR4表达明显高于正常结直肠黏膜(18.9%比2.5%,P<0.05).SSTR2、SSTR4、SSTR5在中高分化结直肠癌表达明显高于低分化结直肠癌表达(P<0.05);淋巴结转移的结直肠癌SSTR1表达明显高于无淋巴结转移者(72.2%比54.5%,P<0.05);溃疡型结直肠癌SSTR2表达明显降低(P<0.05);此外,SSTR1表达率随Dukes分期呈升高趋势,而SSTR3,SSTR5则呈下降趋势,但没达到统计学水平.SSTR5种亚型表达均与患者年龄、性别、肿瘤位置、浸润深度、远处转移无明显相关.结论结直肠癌组织中SSTR1是优势表达亚型,SSTR2、SSTR4、SSTR5亚型表达与癌恶性程度有关,可能在结直肠癌发展过程中发挥重要作用,应选择SSTR5亲和力强的SSTA治疗结直肠癌.

壳聚糖及衍生物与大鼠脑的生物相容性研究

目的探讨壳聚糖及衍生物在大鼠脑内的生物相容性,筛选出适宜的药物载体.方法将壳聚糖及衍生物混悬液注射入脑内,分别在3、7、14、30 d检测血清神经元特异性烯醇化酶(NSE)和S100蛋白水平,同时作病理学检查,并用生理盐水作对照.结果第3、7、14、30天壳聚糖组NSE和S-100蛋白水平与生理盐水组比较差异均无统计学意义(P>0.05),高黏度壳聚糖组几乎均高于生理盐水组(P<0.05),且在7、14d高于壳聚糖组(P<0.05).羧甲基壳聚糖组NSE水平7 d高于壳聚糖组(P<0.05),14d高于生理盐水组(P<0.05).光镜下壳聚糖组反应与生理盐水组类似,高黏度壳聚糖组与羧甲基壳聚糖组胶质细胞增生明显,早中期有脑水肿,且降解迟缓.结论壳聚糖对神经系统损害轻微,具有良好的生物相容性,羧甲基壳聚糖次之.

卡介苗穿梭表达质粒pMS肿瘤坏死因子的构建与鉴定

目的构建分泌性表达肿瘤坏死因子(TNF)-α的重组卡介苗.方法分别以卡介苗(BCG)和TNF-α cDNA为模板,通过PCR扩增得到117bp的BCG-Ag85B信号肽序列和702 bp的TNF-α基因序列.将BCG-Ag85B信号肽序列插入大肠杆菌-卡介苗穿梭质粒pMV261,得到重组质粒pMS.再将TNF-α基因序列克隆至pMS中,得到重组质粒pMSTNF.结果质粒pMSTNF用双酶切和PCR扩增及测序鉴定证实,克隆基因BCG-Ag85B和TNF-α正确插入载体pMV261.结论重组质粒pMSTNF可望在BCG中分泌性表达细胞因子TNF-α,从而协同加强对肿瘤的杀伤作用,该质粒的成功构建为改造卡介苗、发展新型抗膀胱肿瘤疫苗提供了依据.

一氧化氮合酶抑制剂对延缓腰椎间盘退变的影响

目的探讨一氧化氮合酶(NOS)抑制剂L-N6-亚氨乙基-赖氨酸(L-NIL)和S-甲基异硫脲(SMT)对退变腰椎间盘组织代谢的影响.方法无菌条件下,取20例腰椎间盘突出症患者的椎间盘组织体外培养,分别加入1 mmol/L浓度的SMT和L-NIL,培养72 h后,通过检测硝酸盐和亚硝酸盐的含量来观察椎间盘NO的释放量及NOS的活性;原位杂交法检测椎间盘组织iNOSmRNA和MMP3 mRNA的表达.培养10 d后,化学比色法观察椎间盘蛋白多糖含量和羟脯氨酸释放量的变化.结果 L-NIL组髓核和纤维环NO释放量(65.6±4.5,68.8±5.7)μmol/L和SMT组髓核和纤维环NO释放量(69.5±6.5,69.1±6.1)μmol/L较对照组NO释放量(107.9±4.4,93.1±5.9)μmol/L明显减少(P<0.01).L-NIL组和SMT组髓核组织中蛋白多糖含量(51.3±9.6,48.2±8.5)kg/L,比对照组(32.1±6.4)kg/L明显增加(P<0.01),羟脯氨酸释放量(1.1±0.4,1.2±0.5)kg/L比对照组(3.4±0.8)kg/L显著减少(P<0.01);同时,原位杂交法未检测到iNOS mRNA和MMP3 mRNA的表达.结论 NOS抑制剂L-NIL和SMT能抑制过量NO的释放,对延缓椎间盘退变具有积极的作用.

重组人生长激素对大鼠肠缺血再灌注后肠壁组织T淋巴细胞亚群和浆细胞的影响

目的探讨肠道屏障功能损害时应用重组人生长激素(rhGH)对肠道免疫屏障中肠黏膜及固有层内T淋巴细胞亚群和浆细胞的影响.方法将60只Wistar大鼠雌雄各半随机分为实验组和对照组,按实验天数(2、4、6 d)又各分为3组,每组10只,以肠缺血再灌注模型造成肠道屏障功能损害的病理现象,实验组给与rhGH(每日1.33U/kg体重),观察回肠末端黏膜固有层内CD8+、CD4+、CD3+T淋巴细胞数及IgA浆细胞的数量变化.结果 (1)实验组CD8+、CD4+、CD3+T及IgA浆细胞第6天与第2、4天比较数量显著增多,差异有统计学意义(P<0.05).(2)实验组与对照组第6天,CD8+、CD4+T及IgA浆细胞的数量实验组均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05).(3)CD4+/CD8+比值第2天两组差异有统计学意义(P<0.05).结论肠道屏障功能损害时应用重组人生长激素能够调节肠黏膜的免疫屏障,其作用时间在第6天可能明显.

脑膜瘤肿瘤血管形成及瘤周水肿与基质金属蛋白酶-9表达的关系

目的探讨脑膜瘤中肿瘤血管生成及瘤周水肿与基质金属蛋白酶(MMP)-9表达的关系.方法采用免疫组织化学法检测59例脑膜瘤MMP-9和血小板-内皮细胞黏附因子-1(CD31),用全自动图像分析系统检测肿瘤组织的CD31微血管计数(MVC),通过MRI或CT测量瘤周水肿指数,对参数进行综合分析.结果 MMP-9表达强阳性组与弱阳性组、阴性组相比,水肿指数(EI)(分别为2.86±0.69、1.25±0.53、0.23±0.18),脑水肿发生率(分别为95.2%、76.7%、37.5%),微血管计数(MVC分别为25.6±8.5、10.5±4.6、4.3±1.33)的差异均有统计学意义(P<0.05).MMP-9的表达与MVC及瘤周水肿呈正相关(r分别为0.365、0.573,P<0.05).结论 脑膜瘤MMP-9表达、肿瘤血管生成及瘤周水肿形成之间有重要关系;MMP-9能促进脑膜瘤的肿瘤血管生成及瘤周水肿的形成,可能对脑膜瘤瘤周水肿的形成有重要作用.

整合素β1-局灶黏附激酶对体外培养的垂体瘤细胞侵袭性的影响

目的探讨整合素(INT)β1-局灶黏附激酶(FAK)信号传导通路在侵袭性垂体瘤中的作用及其意义.方法选取手术切除的新鲜垂体瘤标本8例,进行原代培养,利用Boyden小室侵袭模型,分别加入INTβ1抗体以抑制INTβ1-FAK的激活、加入蛋白激酶C激活剂以激活FAK,观察干预后垂体瘤细胞中FAK、磷酸化FAK(激活的FAK)、FAKmRNA的变化,以及相应的细胞侵袭能力的变化.结果在加入INTβ1抗体后,Y397-FAK水平明显降低(P<0.05),FAK的激活被抑制,同时伴随细胞侵袭率的显著降低(P<0.05);加入蛋白激酶C激活剂后,FAKmRNA水平明显增高(P<0.05);Y397-FAK水平明显增高(P<0.05),FAK被激活;同时细胞侵袭率增高(P<0.05).同时加入INTβ1抗体和TPA后,FAKmRNA水平明显增高(P<0.05);Y397-FAK水平明显增高(P<0.05),表明FAK仍然被激活,伴细胞侵袭率增高(P<0.05).结论垂体瘤中存在INTβ1-FAK信号传导机制,并且在垂体瘤的侵袭行为中具有重要作用;INTp1-FAK信号传导通路与蛋白激酶C信号传导通路之间存在交互通讯机制.

血管内皮生长因子在大鼠心脏移植急性排斥期的表达

目的观察血管内皮生长因子(VEGF)在大鼠心脏移植急性排斥期中的表达及其和排斥的关系.方法大鼠分对照组,CSA组,每组12只.分别静脉给予生理盐水及CSA干预,采用颈部心脏异位移植术式建立移植模型.常规监测排斥反应发生情况.每组5只用于观察移植物存活时间,7只用于动态切取标本.应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测移植物局部VEGF的表达水平.结果 CSA组移植心存活时间(20.4±5.1)d显著长于对照组(8.6±1.5)d,CSA组VEGF的表达强度弱于对照组,其时间变化趋势和高峰时间较对照组推迟并和移植心存活延长时间有相关性.病理观察显示移植心局部的炎性细胞和淋巴细胞浸润和VEGF表达有关.结论 VEGF高表达促进排斥反应的发生缩短移植心存活时间,提示VEGF的表达和移植心的炎性浸润以及急性排斥有密切关系.

反义转化生长因子-β1基因对骨肉瘤细胞表达转移相关因子的影响

目的探讨反义转化生长因子(TGF)-β1基因转染对骨肉瘤细胞MG-63表达基质金属蛋白酶(MMPs)和尿激酶型纤溶酶原激活因子(uPA)等肿瘤转移相关因子的影响.方法将反义TGF-β1基因转染MG-63,G418筛选转染细胞后,采用Northern blot法检测转染细胞MMP-2、MMP-9和uPA的表达情况.结果反义TGF-β1基因转染骨肉瘤细胞上清培养的Mv-1-Lu细胞增殖活性为0.975±0.016(对照组1.032±0.027,P>0.05);Northern blot法检测显示MMP-2和uPA mRNA的表达明显降低.结论通过反义基因技术阻断骨肉瘤细胞TGF-β1自分泌环,在降低肿瘤细胞TGF-β1表达的同时,也降低了转移相关因子MMP-2、uPA的表达,从而可能抑制肿瘤的侵袭和转移.

前体基因阿片促黑素原基因在功能性肾上腺瘤旁组织中的表达及其意义

目的检测肾上腺内前体基因阿片促黑素原(POMC)基因编码促肾上腺皮质激素(ACTH)的序列在功能性肾上腺瘤周围组织中的表达.方法检测35例皮质醇瘤、31例原醛瘤瘤组织和瘤旁组织ACTH的表达,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)半定量检测编码ACTH的POMC基因的表达量,并测定其序列与Gene bank中该基因进行同源性比较分析.结果肾上腺皮质醇瘤瘤旁组织和瘤组织ACTH表达率分别为91.4%和17.1%,肾上腺原醛瘤瘤旁组织和瘤组织ACTH表达率分别为90.3%和16.1%,差异有统计学意义(P<0.05);其前体基因POMC mRNA在皮质醇瘤周围和瘤组织表达分别为1.02±0.10和0.76±0.03,原醛瘤瘤旁组织与瘤组织表达分别为0.83±0.06和0.35±0.01,差异有统计学意义(P<0.05);肾上腺内编码ACTH的POMC基因序列与Gene bank中完全相同.结论肾上腺内局部尤其是瘤周围组织产生的ACTH可能是致肾上腺皮质瘤形成的重要因素.

脂质体-γ-干扰素DNA复合物肝内直接注射对大鼠肝纤维化的影响

目的探讨脂质体-γ干扰素(γ-IFN)DNA复合物肝纤维化肝脏内直接注射后的表达及对肝纤维化的影响.方法用阳离子脂质体包裹人γ-IFN DNA,并直接注射入肝纤维化大鼠的肝实质内,3周后,用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测血内γ-IFN水平并评估肝纤维化程度变化.结果肝内注射脂质体-γ-IFN DNA复合物的大鼠下腔静脉血中检测到了γ-IFN的表达(6.6±1.7)mg/L,而对照组却未检出;行γ-IFN基因肝内注射的大鼠在基因转导前后,肝纤维化分期、Ⅳ型胶原染色及肝纤维化的Chevallier评分无明显改变(P>0.05),且均显著轻于对照组(P<0.05).结论脂质体-DNA复合物进行肝实质内注射是一条肝纤维化肝内直接基因转导的有效途径,外源γ-IFN基因肝内直接注射具有预防或改善肝纤维化的作用.

亚甲蓝对C6胶质细胞的增殖抑制和促凋亡作用

亚甲蓝(MB)是噻嗪染料类化合物,为水溶性色素.对胶质瘤细胞代谢研究表明MB可直接杀伤及抑制其在体外的生长[1].我们采用大鼠C6脑胶质瘤细胞作为研究MB的工作模型,观察MB对C6细胞增殖抑制和诱导凋亡的作用,探讨MB的抗胶质瘤的作用.

膀胱癌三种细胞株体外侵袭力和黏附性的测定

本研究旨在寻找一种简单直观的测定肿瘤细胞侵袭能力和黏附性的方法,用细胞株进行验证,为临床应用提供依据.

儿童重型颅脑损伤的危险因素及干预对策

为了讨儿童重型颅脑损伤的危险因素及干预对策,我们对1998年1月至2003年1月救治131例儿童重型颅脑损伤进行研究.

双频双脉冲激光碎石术与体外冲击波碎石术治疗输尿管结石的比较

我们于2002年4月至2004年6月应用输尿管镜双频双脉冲激光碎石术(U100L)和体外冲击波碎石(ESWL)治疗输尿管结石369例,对两者疗效进行比较.

甲基强的松龙对人肝癌HepG-2细胞增殖抑制机制的研究

甲基强的松龙是人工合成的一种糖皮质激素,又是肝移植术后常用的免疫抑制剂,其对肝癌肝移植术后肝癌复发影响尚不清楚.我们通过检测甲基强的松龙作用的肝癌细胞凋亡、细胞周期及周期蛋白依赖性激酶抑制剂p21表达变化的研究,进一步对其作用机制进行较深入的探讨.

肝移植术后精神并发症的诊断与处理

2001年4月至今,我院已成功进行同种异体原位肝移植手术18例,术后受体出现不同程度的精神症状,其中症状严重者5例.

神经生长因子对小鼠坐骨神经损伤的痛觉恢复作用

神经生长因子(NGF)是神经营养因子家族成员之一,是具有生物活性的多肽类物质,广泛存在于动物体内多种组织中,对损伤的神经有营养及促进再生作用,与神经系统的发育、功能维持和损伤修复有密切关系.

姜黄素诱导人前列腺癌细胞株PC-3凋亡的研究

姜黄素是中药姜黄的主要成分,其性质稳定无毒,作为食物色素而被广泛使用,其药理作用包括抗炎、抗氧化和抗动脉粥样硬化等多种功能[1].近年来发现姜黄素具有显著的抗肿瘤作用,本研究旨在观察姜黄素对非激素依赖性前列腺癌PC-3细胞株的作用.

膀胱癌人端粒酶催化基团表达研究

为研究膀胱癌人端粒酶催化基团(hTRT)mRNA的表达情况,我们采用分子生物学核酸原位杂交技术对48例膀胱肿瘤组织和30例正常膀胱组织的端粒酶hTRT mRNA进行研究,同时采用TRAP-银染法对上述标本的端粒酶活性进行了测定.

胃癌前哨淋巴结的体外测图及病理学研究

胃癌术中进行体内前哨淋巴结活检(SLNB)的研究已有报道[1,2],但胃癌前哨淋巴结(SLN)的体外测图迄今未见报道.我们用专利蓝对19例外科切除的新鲜胃癌标本进行淋巴显像(LM),在体外定位和识别胃癌SLN,并对其作淋巴结微转移(LNMM)检测,以提高胃癌淋巴结病理分期的准确性,为胃癌患者的预后评估和制定术后辅助治疗方案提供可靠依据.

血红素氧化酶-1对紫绀型兔心脏复氧及缺血再灌注损伤的保护作用

近来的研究结果表明,血红素氧化酶-1(HO-1)及代谢产物是一种较强的内源性抗氧化物质.本研究旨在探讨长期低氧对紫绀型心脏HO-1活性的影响,以及HO-1活性改变对紫绀型心脏缺氧/复氧及缺血/再灌注损伤的影响及可能机制.

以HGF/C-Met为靶点治疗结肠癌及其与MEK2/ERK信号传导通路的关系

肝细胞生长因子(HGF)及其受体(c-Met)在相当一部分人类肿瘤中存在高表达,并与恶性肿瘤发生、发展及转移密切相关.其信号转导以及它与其他细胞因子的关系正日益受到关注.

Lazaroid对肝移植缺血再灌注损伤的肝保护作用

心脏停搏供体(NHBD)肝移植的临床应用将部分缓解供肝的短缺.我们先期的研究结果表明U-74389G的预处理可以显著提高心脏停搏供体肝移植的存活率,实验中尽管供肝获取经历45或60min的热缺血损伤,U-74389G预处理两组的1周存活率仍然可以达到58.3%和33.3%,显著高于非预处理两组25%和0%的1周存活率,并且U-74389G的预处理还能够改善术后肝功能和移植肝病理状况[1].在此基础上,我们利用大鼠原位肝移植的模型来探讨Lazaroid U-74389G预处理对供肝热缺血损伤的保护机制.

"友来特"对输尿管尿酸结石的排石促进作用

目的探讨尿液碱化剂"友来特"对输尿管尿酸结石排石治疗的促进作用.方法输尿管尿酸结石45例,其中男28例,女17例.结石大小为0.5～1.0 cm,平均0.7 cm.经腹部平片、静脉肾盂造影、逆行肾盂造影、螺旋CT及血、尿生化检查确诊.随机分成溶石排石组和单纯排石组.前者23例,口服"排石冲剂"的同时加服"友来特"(枸橼酸氢钾钠颗粒剂),调整尿液pH值至6.8,每日监测尿液pH值3次;后者22例,单纯服用"排石冲剂",疗程均为1个月.比较两组的排石成功率和平均排石时间.结果溶石排石组和单纯排石组分别排石18例和11例,排石成功率分别为78.3%和50.0%,两组排石成功率差异有统计学意义(P<0.05).溶石排石组平均排石时间(17±6)d较单纯排石组(22±7)d明显缩短,差异有统计学意义(P<0.05).结论尿液碱化剂"友来特"能显著提高输尿管尿酸结石的排石成功率,缩短排石时间.作用机制可能与"友来特"对尿酸结石的溶解作用有关.

肺隔离药物灌注治疗肺癌临床研究

目的探讨肺隔离药物灌注(ILP)治疗晚期肺癌的临床疗效.方法对39例不可切除的肺癌、肺功能不能耐受肺切除手术者或多发性转移性肺癌患者进行肺隔离药物灌注化疗,即建立与体循环完全隔离的受累肺/肺叶的体外循环并以阿霉素灌注,灌注起始浓度为6 mg/L,心泵流量(200±50)ml/min分,维持平均肺动脉压在20～25 mmHg(1 mmHg=0.133 kPa),常温(37℃)灌注,持续转流45 min.结果 (1)灌注前后生命体征平稳,ILP术后1 h MPaP、PVR及PAP升高,PaO2降低,但循环稳定.(2)灌注时肺隔离完全,能达到有效的肺内血药浓度[(4.05±1.04)mg/L～(4.19±0.33)mg/L].(3)肿瘤细胞坏死率97.9%.(4)全组肿瘤治疗总有效率89.7%.(5)术后1年生存率76.9%.(6)术后并发症主要是肺损伤,但阿霉素起始灌注浓度在6 mg/L时肺损伤是可逆的.结论 ILP直接通过肺动脉灌注给药,能大幅度提高局部化疗药物的浓度,提高患者的1年生存率,是治疗晚期肺癌的一种可供选择的有效方法之一.

溴隐亭逆转临床肝癌患者多药耐药性研究

目的利用溴隐亭逆转人肝癌化疗耐药性.方法 78例未经任何治疗的原发性肝癌患者先后行2次99mTc-甲氧基异丁基异腈(MIBI)单光子发射计算机断层显像(SPECT)检测,经外周静脉注射20 mCi99mTc-MIBI后15和120 min行平面显像半定量分析肿物部位的摄取比值(UR)第1次SPECT检测后口服溴隐亭2.5 mg/次,3次/d,连续3 d后进行第2次SPECT检测,两次检测结果进行对照比较.结果 68例肝癌患者99mTc-MIBI SPECT肿瘤无MIBI摄取,10例患者99mTc-MIBI SPECT肿瘤部位有MIBI摄取.经溴隐亭治疗后所有肿瘤MIBI排空者均出现99mTc-MIBI浓聚.结论溴隐亭作为一种新型逆转剂可有效逆转临床肝癌患者的多药耐药性.

心脏瓣膜置换术后低强度抗凝研究

目的研究我国南方地区人工机械瓣膜置换术后行低强度抗凝的可行性及安全强度.方法 75例置换人工机械瓣膜的患者按国际标准化比值(INR)分为A、B、C 3组.术后定时分别检测其凝血酶原时间(PT)及INR、D-二聚体浓度、抗凝血酶Ⅲ活性(AT-Ⅲ:C),并定时监测术后出血及血栓形成的发生率.结果机械瓣膜置换术后,INR控制于1.6～2.5范围,可保持D-二聚体浓度、AT-Ⅲ:C与对照组差异无统计学意义(P>0.05).255人次INR控制1.6～2.5之间,3组均未出现血栓形成,有16人次轻微出血,其中A组有4人次(4/155,2.5%);B组有5人次(5/70,7.1%);C组有7人次(7/30,23.3%),明显高于A、B两组(P<0.01).结论我国南方地区人工机械瓣膜置换术后低强度抗凝是可行的,INR控制在1.6～2.5范围较安全.

尿细胞角蛋白19在膀胱移行细胞癌术后监测中的应用

目的评价尿细胞角蛋白19片段(CK19,又称CYFRA21-1)在膀胱移行细胞癌(BTCC)术后监测中的作用.方法对67例保留膀胱的BTCC术后患者定期行膀胱镜检查发现21例复发,采用电化学发光免疫分析(ECLIA)技术测定复发组(21例)、未复发组(46例)和正常对照组(24例)的尿CK19含量.结果复发组尿CK19的平均值为(19.60±18.57)μg/L,明显高于未复发组(2.33±1.64)μg/L和正常对照组(1.82±0.83)μg/L.复发组与未复发组及正常对照组比较,差异有统计学意义(P<0.01).尿CK19对BTCC复发的敏感性为90.5%,特异性为76.0%.结论尿CK19是监测BTCC术后复发较为敏感、特异而且快速无创的指标.

肿瘤免疫逃逸与转化生长因子-β关系的研究进展

自从20世纪50年代后期Thomas和Burent提出免疫监视学说以来,肿瘤免疫一直是肿瘤学和免疫学者致力研究的重要内容.机体存在多种免疫监视机制,发挥其抗肿瘤作用,包括特异性和非特异性的、细胞和体液的免疫机制,而以T细胞、NK细胞和MФ细胞为主的细胞免疫发挥着更为重要的作用.

肝静脉阻塞型布加氏综合征动物模型的制作

目的探讨肝静脉阻塞型布加氏综合征的发病机制和合理的治疗方案.方法将20条杂种犬随机等分为实验组和对照组,在自动控制X光机监视下,利用介入技术将带侧孔的球囊导管分别放入肝左静脉和肝右静脉,球囊远端阻塞肝静脉远端后,实验组分别注入无水乙醇、明胶海绵和钢丝圈,对照组注入生理盐水.饲养5个月后在全身麻醉下,测定肝功能和门静脉压力,并行肝脏活检,与未行本项操作的家犬门静脉和肝脏组织进行比较.结果实验组均出现肝静脉闭塞或严重狭窄,出现胃底食管静脉曲张、瘀血性肝硬变,而对照组正常,实验组和对照组总胆红素(TB)分别为(31.6±2.1)和(13.7±1.1)μmol/L、丙氨酸氨基转移酶(ALT)分别为(156.23±17.67)和(28.44±3.12)U/L、碱性磷酸酶(AKP)分别为(177.89±11.22)和(58.33±17.23)U/L、白蛋白(ALB)分别为(40.33±5.10)和(55.32±4.10)g/L及门静脉压力(HPP)分别为(25.68±2.10)cmH2O和(11.56±1.70)cm H2O,差异均有统计学意义(P<0.01).结论利用介入技术可成功制作肝静脉阻塞型布加氏综合征家犬模型.

人肝癌组织多药耐药特性裸鼠模型的建立

目的在裸鼠肝脏建立人肝癌组织多药耐药(MDR)模型.方法用组织学完整的原发性多药耐药人肝癌组织种植于裸鼠肝脏.然后分别用免疫组织化学方法(SP法)和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测瘤源及裸鼠种植瘤组织中MDR1、LRP蛋白及其mRNA的表达.结果裸鼠原位种植瘤保持了人肝癌组织MDR特性.瘤源MDR1、LRP蛋白表达分别为31.26%和27.18%;其mRNA量分别为61.47%和56.71%.裸鼠种植瘤MDR1、LRP蛋白表达分别为(29.20±2.81)%和(25.44±2.43)%;其mRNA量分别为(65.42±13.59)%和(58.63±9.37)%,两种组织中MDR1、LRP蛋白及其mRNA表达量差异无统计学意义(P>0.05).结论人肝癌组织裸鼠原位种植瘤可保持瘤源的MDR生物学特征,是体内研究人肝细胞癌MDR、筛选敏感化疗药物的较理想模型.

颅内加压法巴马小型猪脑死亡模型建立过程中血压和心率的变化

目的观察缓慢间断颅内加压法巴马小型猪脑死亡模型建立过程中血压和心率的变化.方法巴马小型猪16头,随机分为2组:对照组(C组),5头,仅行麻醉维持;脑死亡组(B组),11头,应用改进的缓慢间断颅内加压法建立脑死亡模型.监测实验过程中动物平均动脉压(MAP)和心率(HR)变化.结果 B组中10头(10头/11头)建立脑死亡模型,1头(1头/6头)在开始颅内加压后"心肺死亡".与C组比较,B组颅内加压后MAP和HR变化显著:(1)MAP和HR随着间断颅内加压呈波浪式上升和下降,总体呈升高趋势;颅内加压过程中MAP(176.91±33.29)mmHg(1 mm Hg=0.133 kPa)和HR(182.71±25.67)次/分,与颅内加压前MAP(117.60±13.75)mmHg和HR(94.50±9.20)次/分比较,差异有统计学意义(P<0.05).(2)确认脑死亡后,MAP和HR缓慢下降;直到MAP≤60 mm Hg或收缩压≤90 mm Hg,需依赖液体支持来维持血压的稳定.与C组比较,确认脑死亡3 h后,B组MAP差异有统计学意义(P<0.05);确认脑死亡6 h后,B组HR差异无统计学意义(P>0.05).结论颅内加压法建立巴马小型猪脑死亡模型过程中血压和心率呈特征性变化.

大鼠胰十二指肠移植动物模型的制作

目的建立大鼠腔静脉内分泌引流、肠道外分泌引流的动物模型.方法雄性SD大鼠为供受者,供体鼠门静脉与受体鼠左肾静脉行袖套吻合,形成腔静脉内分泌引流;供者腹主动脉与受者腹主动脉行端侧吻合;供者十二指肠与受者近端空肠行侧侧吻合.结果 50只药物诱导的糖尿病大鼠移植术后超过24 h者46只,手术时间为(93±7)min.移植前大鼠血糖为(28.3±1.7)mmol/L,移植后43只大鼠血糖降至正常水平.结论该模型方法简单易行,可作为胰腺移植的理想模型.

我国胰腺外科研究的新进展

进入21世纪,临床外科领域中的胰腺外科展现了其独具的生命力.人们关注的是胰腺疾病的发病机制和转归治疗的新思路及新途径.尤其是重症急性胰腺炎(SAP)诱发引起全身炎症反应综合征(SIRS)和多器官功能障碍综合征(MODS)与细胞因子链启动所产生的瀑布反应内在关系.胰腺癌发生发展中的恶性生物行为与基因突变之间的相关性研究.这些研究给了人们许多新的启迪.值得注意的是胰岛细胞移植治疗糖尿病和胰腺内分泌肿瘤的基础研究更使胰腺外科实验研究有了拓展新空间.

大鼠胰腺移植急性排斥反应中调节激活正常T细胞表达和分泌因子的作用

目的探讨在大鼠胰腺移植急性排斥反应中调节激活正常T细胞表达和分泌因子(RANTES)的作用.方法对链脲佐菌素诱导的糖尿病大鼠模型施行胰腺移植.术后1、4、7、10 d4个时间点取材,采用酶联免疫吸附法检测受体血清RANTES的浓度,免疫组织化学法测定移植胰腺组织RANTES蛋白表达水平.结果急性排斥反应在术后7 d达高峰.术后1、4、7、10 d受体血清RANTES浓度在同系移植组分别为(357.87±63.26)、(274.77±58.22)、(265.87±43.40)、(267.55±48.91)ng/L,除1 d外与对照组比较差异无统计学意义(251.18±44.94)ng/L;在异系移植组分别为(388.48±104.45)、(586.72±90.06)、(746.28±92.64)、(631.49±106.34)ng/L,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05).移植胰腺组织RANTES蛋白的表达强度在同系移植组中与对照组比较无显著变化,而在异系移植组随排斥反应的发展呈动态变化,在4 d为中度阳性,至7 d表达为强阳性.结论胰腺移植急性排斥反应过程与RANTES的表达密切联系,移植术后对RANTES进行动态检测有助于胰腺移植急性排斥反应的早期诊断.

碱性成纤维细胞生长因子对大鼠急性水肿性胰腺炎的治疗作用

目的观察外源性碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对急性水肿性胰腺炎大鼠的治疗作用,并探讨其作用机制.方法予雄性SD大鼠间隔1 h皮下注射蛙皮素5.5μg/kg体重和7.5μg/kg体重诱导急性水肿性胰腺炎,3 h后腹腔内注射bFGF 100 μg/kg体重.观察各组大鼠胰腺炎生化及病理学等指标的变化.结果 bFGF治疗组大鼠的血清淀粉酶,脂肪酶以及胰腺组织湿/干质量比率(1 383.0±94.6)、(194.0±43.6)和(4.32±0.32)U/L明显低于非治疗组(P<0.01),而与空白对照组差异无统计学意义(P>0.05).光镜下显示其胰腺组织炎症表现显著改善.免疫组织化学结果显示该组胰腺腺泡细胞被5-溴-2-去氧胞苷标记的细胞核数[(18.9±1.4)个/显微镜视野,n=10]明显多于非治疗组(P<0.01).结论早期外源性bFGF对蛙皮素诱导的大鼠急性水肿性胰腺炎有显著的治疗作用,其作用机制是通过减轻胰腺炎症和促进胰腺组织再生来实现的.

溶血卵磷脂在胰性脑病发病机制中的作用

目的探讨溶血卵磷脂(LPC)在胰性脑病(PE)发病机制中的作用环节和效应机制.方法将SD大鼠随机分组,用Aho HJ法将实验组、对照组1制成急性水肿型胰腺炎模型,随后对实验组大鼠尾静脉应用LPC;对照组1从尾静脉注入生理盐水;对照组2是假手术组,经尾静脉注入LPC.连用LPC 5 d后的7～10 d,应用辣根过氧化物酶-二氨基联苯氨(HRP-DAB)显色法检测其血脑屏障(BBB)是否开放,同时行脑组织切片丽春红、固蓝染色观察有无脱髓鞘改变.结果实验组大鼠的BBB开放较明显,对照组的BBB几乎无开放.实验组脱髓鞘较明显,对照组脱髓鞘不明显,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 LPC对胰腺炎大鼠的BBB具有开放作用,对胰腺炎大鼠脑部有脱髓鞘作用;LPC是PE的致病因素之一,在PE发病机制中起一定作用.

供体脾脏对大鼠移植胰腺转化生长因子-β1mRNA表达的影响

目的观察供体脾脏对胰腺移植免疫反应的影响.方法制作异基因大鼠胰、脾、十二指肠移植模型,观察供体胰腺的病理学变化,测定供体胰腺组织中转化生长因子(TGF)-β1 mR-NA的表达、CD4+和CD8+T淋巴细胞的变化.结果胰、脾、十二指肠移植组(A组):术后3 d胰腺小叶间质、腺泡和胰岛轻度水肿;5 d炎细胞浸润,腺泡细胞灶状坏死;7 d腺泡和胰岛部分坏死、自溶.胰、十二指肠移植组(B组):术后3 d胰腺腺泡片状坏死;5 d胰腺小叶和部分胰岛坏死.7 d腺泡大片坏死,胰岛结构消失.供体胰腺组织中,术后3、5、7 d TGF-β1 mRNA阳性细胞数,A组分别为:66.75±8.56、36.50±6.70、36.88±6.06;B组分别为:16.38±3.85、10.38±4.03、6.0±2 73.A组术后各时点TGF-β1mRNA的表达均高于B组(P<0.01);结论 TGF-β是减轻受体大鼠对供体胰腺免疫排斥反应的重要因素之一;调高供体胰腺组织TGF-β mRNA的表达是供体脾脏发挥免疫抑制作用的机制之一.

前列腺素E1对大鼠急性胰腺炎细胞因子调控的影响

目的观察前列腺素E1(PGE1)脂微球(Lipo-PGE1)对大鼠急性胰腺炎(SAP)模型全身炎症反应(SIRS)期细胞因子调控的影响并探讨其作用机制.方法应用5%牛磺胆酸钠制作大鼠SAP模型,分为非治疗组和治疗组,各组内再分为3和6 h组,采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)方法测定胰腺组织内肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-6、IL-10、IL-2的表达.结果非治疗组内3组和6 h组比较,TNF-α、IL-6表达逐渐增强;IL-10,IL-2在3 h有弱表达,6 h表达显著增强;治疗组3、6 h的TNF-α、IL-6表达同非治疗组相比明显减弱;IL-10、IL-2表达在3 h无显著变化,6 h明显减弱.结论在大鼠SAP模型中,Lipo-PGE1可明显抑制炎性细胞因子TNF-α、IL-6和抗炎性细胞因子IL-10、IL-2的表达,使两者重新趋于平衡,对SIRS期细胞因子调控起到重要作用.

转染细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4免疫球蛋白基因的同供体大鼠树突状细胞对胰岛移植物存活的影响

目的探讨转染细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4(转染CTLA4Ig基因)的同供体大鼠DC细胞对同种大鼠胰岛移植的影响.方法链尿菌素(STZ)60 mg/kg体重腹腔内注射制作SD大鼠糖尿病模型,胶原酶法分离、Ficoll 400密度梯度离心法纯化胰岛,GM-CSF+IL-4诱生培育的方法,获得高纯度的DC,含目的基因CTLA4Ig重组腺病毒AdvCTLA4Ig,转染同供体DC细胞,与胰岛细胞同时移植于糖尿病受体大鼠肾包膜下,免疫组织化学、Dot-ELISA、逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测CTLA4Ig基因在实验组和对照组DC细胞中的表达,并检测受体大鼠的血糖浓度变化,同时观察受体存活情况.结果实验组DC细胞有CTLA4Ig表达,而对照组DC细胞没有CTLA4Ig表达,实验组正常血糖维持时间(17.3±2.4)d较对照组(10.1±1.5)d、空白对照组(8.3±1.2)d显著延长,实验组、对照组和空白对照组受体大鼠存活天数分别为(34.5±3.4)d、(14.7±2.3)d和(11.2±1.4)d,实验组高于对照组(P<0.01).结论表达CTLA4Ig基因的DC细胞可能诱异胰岛移植免疫耐受,延长胰岛移植物的存活时间.

外源性脂多糖在大鼠急性胰腺炎中的作用

目的观察外源脂多糖(LPS)在水肿性胰腺炎(AEP)重症化的作用及其对核因子(NF)-κB激活的水平的影响.方法用LPS(10 mg/kg体重)对AEP大鼠进行干预,并与未干预AEP大鼠和正常大鼠进行比较.在复模后分别于12、24、36、72 h用流式细胞术(FCM)检测了NF-κB激活的水平.同时进行胰腺病理分级.结果 LPS干预组中的NF-κB激活的水平在各个时间段均有所增高(P<0.05).LPS加剧了组织炎性浸润程度,使AEP大鼠发生重症化.结论 NF-κB的活化作为始动因子激活一系列的炎症介质,引起胰腺组织快速的炎症反应.LPS可以作为研究AEP重症化的预处理剂.

白细胞介素-1α、6对胰腺癌细胞分泌血管内皮生长因子A、C的调节作用

目的探讨细胞活素白细胞介素-1α、6(IL-1α、IL-6)对胰腺癌细胞产生和分泌血管内皮生长因子(VEGF)A、C的调节.方法用Northern杂交和Western杂交法分别分析人胰腺癌细胞株(ASPC-1、CAPAN-1、MIA-PaCa-2、PANC-1、COLO-357和T3M4)中VEGF-A、C基因和蛋白的表达;以细胞活素IL-1α(10 μg/L)或IL-6(100μg/L)刺激细胞株(CAPAN-1和COLO-357)后用逆转录-聚合酶链式反应技术(RT-PCR)分析其VEGF-A、C基因的表达.结果 Northern杂交法显示6种胰腺癌细胞株均有4.1kb VEGF-A基因和2.4kb VEGF-C基因的表达;Western杂交法显示这6种胰腺癌细胞株均有分子量为43 kDa的VEGF-A蛋白质和分子量为55 kDa的VEGF-C蛋白质的表达.RT-PCR分析法显示IL-1α使细胞株COLO-357产生VEGF-A、C基因分别增加1～2倍、1倍,但对细胞株CAPAN-1无明显刺激作用;而IL-6刺激细胞株CAPAN-1产生VEGF-A、C基因分别增加2～5倍、1倍,但对细胞株COLO-357无明显刺激作用.结论胰腺癌中血管内皮生长因子A、C和细胞活素IL-1α、IL-6间的相互作用导致了癌细胞的血行和淋巴转移,促进胰腺癌的进展恶化.

重症急性胰腺炎肿瘤坏死因子-α与低钙血症的关系

目的探讨重症急性胰腺炎(SAP)大鼠模型肿瘤坏死因子(TNF)-α与血清钙水平的关系.方法胰管内逆行注射5%牛磺胆酸钠的方法建立SAP大鼠模型.将SD大鼠分为假手术组21只,SAP组21只,治疗组21只.治疗组为模型制作前15 min自阴茎背静脉注入抗肿瘤坏死因子α单克隆抗体(TNF-α McAb,5 mg/kg体重),观察血中TNF-α与血钙的水平.酶联免疫吸附法(ELISA)测定细胞因子水平.结果重症急性胰腺炎TNF-α水平与血钙之间呈显著负相关(r=-0.69,P<0.01),在发病初期两者关系更紧密(6 h组:r=-0.73,P<0.01).TNF-α McAb能改善胰腺病理变化、降低淀粉酶、降低血清TNF-α、升高血钙,6 h SAP组血清钙(1.99±0.03)mmol/L,TNF-αMcAb治疗组血清钙(2.06±0.06)mmol/L,P<0.05;12 h SAP组血清钙(1.88±0.05)mmol/L,TNF-αMcAb治疗组血清钙(1.94±0.05)mmol/L(P<0.05).结论 TNF-α可能在SAP并发低钙血症的机制中发挥作用,尤其在疾病发生的早期.

创伤研究的某些进展

现代文明带来的副作用之一就是创伤的增多.在我国,创伤和中毒在1957年以前居第9位死因,1995年以后升至第4位.我国每年因创伤致死人数至少有20余万人,伤数百万人.从全球看,每年因创伤致死者约200余万人,伤数千万人.以下就创伤研究的部分进展分述如下:

中华医学会新增两大医学期刊系刊