中华实验外科杂志
Chinese Journal of Experimental Surgery 중화실험외과잡지
- 主管单位: 中国科学技术协会
- 主办单位: 中华医学会
- 影响因子: 0.75
- 审稿时间: 1-3个月
- 国际刊号: 1001-9030
- 国内刊号: 42-1213/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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小型猪简易原位灌注自体肝移植模型的建立
经典肝移植大动物模型建立手术难度大,不易掌握,且术后存在吻合口并发症以及排斥反应的风险,影响模型的成功率及术后长期观察.针对上述问题,我们应用小型猪设计了简易自体肝移植模型,收到了良好的效果.一、材料与方法1.实验动物:选取雄性健康巴马小型猪20只,体质量20~25 kg,猪龄9~12个月.实验动物于西安交通大学实验动物中心清洁动物房普通喂养.2.麻醉方式:所有实验猪均术前12 h禁食,4h禁水.应用2.5%硫喷妥钠1 mg/kg腹腔内注射诱导,阿托品0.05 mg/kg肌肉注射以减少呼吸道分泌物.行气管插管后,呼吸机辅助呼吸.耳缘静脉建立静脉通路,0.1%氯胺酮静滴维持.术中给予生理盐水500 ml+青霉素160万单位静脉滴注,根据术中情况必要时输注羟乙基淀粉.术后静脉输注晶体注射液至猪恢复自主活动.
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肿瘤射频消融裂解物致敏树突状细胞的抗肿瘤活性研究
目的 观察射频消融(RFA)肿瘤原位裂解物负载树突状细胞(DCs)抗肿瘤活性.方法 制备BALB/c小鼠骨髓来源的DCs,对BALB/c小鼠结肠癌(C26)皮下种植瘤进行RFA灭活,将其原位裂解的肿瘤组织反复冻融后取上清,Lowry蛋白定量法定量,以终质量浓度5 mg/L负载培养第5天的DCs(即Ag-DCs),采用流式细胞仪分析Ag-DCs与未负载抗原的DCs的表面分子[CD11c、人类主要组织相容性复合体(MHC)-Ⅱ、CD80与CD86]表达的差异.建立3组肿瘤治疗与预防模型分别是Ag-DC组(n=5)、DC组(n=5)与磷酸盐缓冲液(PBS)对照组(n=5),采用ANOVA方差分析比较3组间种植瘤体积的变化趋势,Log-rank检验比较3组小鼠的生存时间.结果 Ag-DCs的CD80、CD86、MHC-Ⅱ、CD11c表达率分别为86.3%、29.4%、75.4%、82.5%;未处理的DCs表面分子的CD80、CD86、MHC-Ⅱ、CD11c表达率分别为68.6%、15.1%、64.5%、66.7%;小鼠肿瘤预防模型提示7d成瘤率分别为:Ag-DC组60%(3/5)、DC组80%(4/5)、PBS对照组100%(5/5);且Ag-DC组小鼠的肿瘤体积生长缓慢,与PBS和DC组的免疫小鼠比较,差异有统计学意义(P<0.01).治疗模型提示:Ag-DC组小鼠的平均生存期为(39±8)d,DC组小鼠的平均生存期为(28±4)d,PBS对照组小鼠的平均生存期为(22±3)d,差异有统计学意义(P<0.01);且Ag-DC组小鼠的肿瘤体积生长缓慢,与PBS和DC组的免疫小鼠比较,差异有统计学意义(P<0.01).结论 肿瘤射频消融原位裂解物作为抗原可有效刺激DC产生特异性抗肿瘤免疫效应.
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载脂蛋白ApoE修饰脂质体对肝癌细胞的靶向转染
目的 将载脂蛋白E (ApoE)和普通脂质体(Lipoplexes)耦联,构建一种具有肝癌细胞靶向性的基因转运载体ApoE-Lipoplexes,以提高转染效率.方法 将ApoE与Lipoplexes耦联,形成ApoE-Lipoplexes,分别用两种载体包裹pGenesil-1质粒并转染HepG2和Huh-7肝癌细胞,用倒置荧光显微镜观察增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的表达,并用流式细胞仪检测转染效率,比较两种载体对肝癌细胞的转染效率.结果 构建了粒径150 nm的Lipoplexes和ApoE-Lipoplexes两种脂质体,Lipoplexes对HepG2和Huh-7的转染效率分别为(4.7±1.4)%和(21.0±0.6)%,ApoE-Lipoplexes的转染效率分别为(13.8±1.8)%和(51.5±1.8)%,ApoE-Lipoplexes对肝癌细胞的转染效率显著高于Lipoplexes(P<0.05).结论 成功构建一种对肝癌细胞具有较高转染效率的非病毒基因转运载体.
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程序性死亡因子配体1在脂肪间充质干细胞抑制大鼠肝移植术后排斥反应中的作用
目的 探讨脂肪间充质干细胞(ADMSCs)对大鼠肝移植术后排斥反应的影响及其机制.方法 分离培养SD大鼠ADMSCs,构建RNA干扰慢病毒载体转染ADMSCs阻断程序性死亡因子配体1(PD-L1).以SD为供体、Wistar大鼠为受体建立肝移植模型,随机分为A(空白组)、B(对照组)、C(实验组)3组,分别以生理盐水2 ml/ADMSCs(1×107个)/慢病毒转染后ADMSCs(1×10 7个)处理,比较3组大鼠肝移植术后7d肝功能、白细胞介素(IL)-2和IL-10、肝脏病理改变及干细胞凋亡、肝脏组织B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)和bcl相关X蛋白(bax)表达差异.结果 A组血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、总胆红素(TBIL)、IL-2和IL-10水平分别为(188.9±30.8)U/L、(177.1 ±27.9) U/L、(53.8±14.1)μmol/L、(296.32±56.25) ng/L、(74.92±10.98) ng/L;B组为(114.2±22.7) U/L、(134.8±18.1) U/L、(27.7±5.2)μmol/L、(186.36±17.84) ng/L、(194.56±36.87) ng/L;C组为(160.5 ±28.3) U/L、(155.6±25.6) U/L、(41.2±10.3) μmol/L、(250.95±42.68) ng/L、(125.52 ±26.34) ng/L,3组间差异有统计学意义(P<0.05).原位缺口末端标记法(TUNEL)检测A、B、C组的凋亡指数分别为35.86 ±5.92、12.39±2.23和28.47 ±4.32,3组间差异有统计学意义(P<0.05).B组大鼠肝移植模型术后bcl-2表达显著高于A组和C组,C组bcl-2表达低于A组;A组bax表达高于A组和C组,C组bax表达高于A组.结论 ADMSCs可显著降低肝移植术后排斥反应,PD-L1通路可能在其抑制排除反应中起重要作用.
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血管活性肠肽诱导裸鼠体内激素依赖性前列腺癌血管生成的研究
目的 检测裸鼠体内激素依赖性前列腺癌(LNCaP)组织中的血管内皮生长因子(VEGF) mRNA含量和微血管密度(MVD),探讨血管活性肠肽(VIP)促血管生成作用的机制.方法 利用雄性小鼠建立经100 nmol/L VIP和未经VIP处理的LNCaP动物模型,前者为实验组,后者为对照组.于第8天和第15天测量移植瘤的体积,利用实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR,SYBR染料法)检测移植瘤组织中的VEGF mRNA水平,利用CD34计算移植瘤组织中的MVD.结果 第8天和第15天裸鼠LNCaP移植瘤体积、VEGF mRNA含量、MVD实验组[(55.38±10.82)、(89.41±15.66) mm3;1.38±0.41、1.76 ±0.67;43.7±11.4、59.1±13.8]均大于对照组[(28.56 ±7.39)、(48.73±12.48) mm3;0.42 ±0.13、0.59 ±0.24;26.3 ±9.2、30.6± 10.5],差异均有统计学意义(P<0.05).结论 VIP对裸鼠LNCaP移植瘤生长起促进作用,可能与其促进肿瘤新生血管相关.
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沉默特异性核基质结合区结合蛋白-1对胶质瘤U251细胞侵袭的影响
目的 探讨特异性核基质结合区结合蛋白-1(SATB1)短发夹核糖核酸(shRNA)对人胶质瘤U251细胞侵袭的影响及其机制.方法 构建针对SATB1的shRNA重组质粒,采用电穿孔的方法转染U251细胞中,分为对照组、空载体转染组、重组质粒转染组,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测各组细胞SATB1 mRNA水平的变化,采用Western blot检测各组细胞SATB1蛋白水平的变化,并对肿瘤细胞中相关功能蛋白的表达进行分析;采用酶联免疫吸附试验法(ELISA)检测细胞外基质金属蛋白酶(MMP)-2和MMP-9浓度的变化;采用划痕实验和Transwell实验评价肿瘤细胞侵袭能力的变化.结果 转染后48 h,SATB1-shRNA重组质粒转染组细胞外MMP-2的浓度为(69.4±3.5) μg/L,较对照组的(152.5±2.6)μg/L和空载体转染组的(150.5±5.2)μg/L明显降低,差异有统计学意义(P<0.05).转染后48 h,ELISA法检测SATB1-shRNA重组质粒转染组细胞外MMP-9的浓度为(40.6±2.4) μg/L,较对照组的(86.7±6.7)μg/L和空载体转染组的(89.8±10.5)μg/L明显降低,差异有统计学意义(P<0.05).与对照组、空载体转染组比较,重组质粒转染组U251细胞SATB1、MMP-2和MMP-9的表达下降,而基质金属蛋白酶抑制因子2(TIMP-2)和SLC22A18表达上调,差异有统计学意义(P<0.05).划痕实验和Transwell实验显示重组质粒转染组细胞侵袭能力明显减弱.结论 针对SATB1的RNA干扰可以明显抑制U251胶质瘤细胞SATB1的表达,对U251胶质瘤细胞的侵袭能力产生明显抑制作用.
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雌激素受体β的表达对乳腺癌细胞体内致瘤能力的影响
目的 观察雌激素受体β(ERβ)的表达对乳腺癌细胞生物学特性以及裸鼠体内致瘤力的影响,探讨其在乳腺癌发生发展中的作用.方法 通过小干扰RNA(siRNA)的方法将ERβ高表达的MCF-7细胞敲降ERβ基因,筛选稳定表达株,利用裸鼠进行体内成瘤性实验,比较肿瘤生长曲线及裸鼠的生存期.结果 siRNA能明显降低乳腺癌细胞MCF-7中ERβ的表达,ERβ被敲降后MCF-7细胞的成瘤能力增强.RNA干扰组在裸鼠皮下接种的第12天开始可触摸到实体肿瘤的形成,对照组第27天开始可触摸到实体肿瘤的形成.RNA干扰组8只裸鼠中位生存时间为33d,对照组8只裸鼠中位生存时间为66 d.结论 ERβ基因对人乳腺癌细胞MCF-7在裸鼠体内皮下成瘤能力有明显的抑制作用.
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成骨微环境中低剂量射线对成骨细胞的影响
目的 观察成骨诱导微环境中低剂量X射线对成骨细胞的影响.方法 照射后分别检测细胞增殖、碱性磷酸酶(ALP)活性、细胞矿化、成骨特异性转录因子2(Runx2)、骨钙素(0C)的mRNA和蛋白表达.结果 1.0Gy组与对照组比较增殖受到抑制(P <0.05);ALP活性在0.1Gy组[(5.88 ±0.14) nmol对硝基苯磷酸二钠(pNPP)/μg蛋白]与对照组[(4.75±0.05) nmol pNPP/μg蛋白]比较升高(P<0.05);矿化定量0.1Gy组(6.57±0.20)与对照组(5.39±0.28)比较升高(P<0.05);诱导组Runx2基因0.1 Gy组(5.51±1.52)与对照组(2.43±0.3)比较升高(P<0.05),OC基因0.1 Gy组(2.92±1.34)与对照组(1.03±0.41)比较升高(P<0.05);诱导组Runx2蛋白表达0.1 Gy组(0.84±0.03)高于对照组(0.44 ±0.02,P< 0.05),OC蛋白表达0.1 Gy组[(427.7±64.2)ng/L]高于对照组[(278.9±53.7) ng/L,P<0.05].结论 成骨诱导微环境在低剂量射线促进成骨细胞的分化和矿化中起重要呈递作用.
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吉西他滨对胰腺癌细胞增殖、凋亡及保罗样激酶-1表达的影响
目的 观察吉西他滨对胰腺癌细胞增殖、凋亡及保罗样激酶-1(PLK-1)表达的影响.方法 采用不同浓度的吉西他滨处理胰腺癌AsPC-1细胞,在电镜下观察细胞的形态,噻唑蓝(MTT)法测定细胞生长抑制情况;不同浓度(2、5 μmol/L)的吉西他滨处理细胞12、24、48、72 h后,流式细胞分析法检测细胞凋亡,以半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot检测PLK-1 mRNA及PLK-1蛋白的表达.结果 MTT结果示随吉西他滨浓度增加,细胞增殖率明显下降(P<0.05);流式细胞分析法检测凋亡结果示:处理组凋亡率较空白对照组明显增加(P<0.05);RT-PCR和Western blot检测PLK-1 mRNA及PLK-1蛋白的表达结果显示,不同时间点PLK-1 mRNA相对表达量分别为:对照组0.70 ±0.15、0.65 ±0.27、0.72 ±0.13、0.68±0.30;2 μmnol/L组:0.88 ±0.58、0.95±0.53、2.36±0.57、3.53 ±0.89;5 μmol/L组:0.89 ±0.60、1.02±0.32、3.95±1.84、4.52 ±2.25及PLK-1蛋白的表达水平分别为:对照组:0.82 ±0.41、0.78 ±0.46、1.01 ±0.05、0.88±0.25;2 μmol/L组:0.89±0.28、1.61 ±0.88、1.66 ±0.18、3.28±1.33;5μ.mol/L组:0.85±0.36、1.89±0.18、2.73±0.78、4.32±2.13,也相应升高(P<0.05).结论 吉西他滨能诱导AsPC-1细胞凋亡,其机制可能与细胞内的PLK-1水平改变有关.PLK-1基因表达水平与胰腺癌化疗药物敏感性密切相关.
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乳腺癌术后生存期与表皮生长因子受体磷酸化水平的关系
有研究表明,表皮生长因子受体(EGFR)在许多肿瘤中被磷酸化激活,而激活的EGFR蛋白具有酪氨酸激酶活性,能将一系列细胞外生长因子信号传导到细胞内,是维持癌细胞增殖、侵袭、转移、复发的重要条件[1].本研究旨在检测乳腺癌组织中EGFR蛋白表达及其磷酸化活性水平,探讨其与乳腺癌患者术后生存期的关系.一、材料与方法1.一般资料:收集2006年至2010年本院收治的60例乳腺癌患者的详细临床及病理诊断资料,患者均为女性,年龄31~ 62岁,中位年龄49岁.小鼠抗人EGFR单克隆抗体、兔抗人磷酸化EGFR(p-EGFR)多克隆抗体和链菌素抗生物素蛋白-过氧化物酶(SP)双标记染色试剂盒购自福州迈新生物技术公司.2.免疫组织化学方法:采用SP法进行免疫组织化学染色.采用双盲法对每张切片在高倍镜(×400)下计数10个视野.以染色强度计分,结果以x2检验进行统计学分析.
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下调三磷酸腺苷结合转运蛋白G超家族成员2基因对人乳腺癌多西他赛耐药细胞株BT549/Docetaxel的作用
目的 下调人乳腺癌多西他赛耐药细胞株BT549/Docetaxel耐药相关基因三磷酸腺苷结合转运蛋白G超家族成员2(ABCG2)的表达,检测其生物学特性的改变.方法 采用中等浓度0.08 mg/L、间歇作用法建立人乳腺癌多西他赛耐药细胞株BT549/Docetaxel,构建ABCG2的pRNAT-U6.2/Lenti小干扰RNA(siRNA)表达载体转染BT549/Docetaxel,采用噻唑蓝(MTT)法测定转染前后细胞的耐药指数,高效液相色谱测定细胞内多西他赛的浓度.结果 感染ABCG2si2、ABCG2si1、ABCG2siC后的BT549/Docetaxel细胞与未感染的BT549/Docetaxel细胞ABCG2mRNA与β-actin比较其相对表达水平分别为0.11 ±0.02、0.26 ±0.01、0.88±0.03、0.92±0.02.感染ABCG2si1、ABCG2si2的细胞内ABCG2的表达减少,与对照ABCG2siC、BT549/Docetaxel比较差异有统计学意义(P<0.05),分别下降了71.7%和88.0%.4种细胞经Western blot检测显示,ABCG2蛋白表达水平不同,ABCG2si1、ABCG2si2对该蛋白的表达均有抑制作用,其中后者效果显著(P<0.05).经MTT法检测,感染有ABCG2si2、ABCG2siC的细胞与未感染的BT549/Docetaxel细胞对Docetaxel的半数抑制剂量(IC50)分别是:31.12、69.55、76.21 mg/L,其耐药指数分别为:8.13、18.16、19.90.其中前者与后两者比较对Docetaxel的敏感性显著增加(P<0.05).高效液相色谱测定细胞内多西他赛的含量,BT549/Docetaxel细胞内药物的含量为7.9 ng/106个细胞,感染后BT549/Docetaxel细胞内药物的含量为66.7 ng/106个细胞,正常培养基培养4h后,感染后BT549/Docetaxel细胞内药物的含量为53.1 ng/106个细胞,BT549/Docetaxel细胞内药物的含量4.3 ng/106个细胞,差异有统计学意义(P<0.05).结论 通过调控与乳腺癌耐药密切相关的ABCG2基因可以逆转BT549/Docetaxel的耐药性.
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瑞芬太尼在皮瓣缺血再灌注损伤中的作用及机制
目的 探讨瑞芬太尼在皮瓣缺血再灌注损伤中的作用及机制.方法 将80只雄性SD大鼠随机分为:假手术组(20只)、缺血再灌注(I/R)组(20只)、瑞芬太尼组(20只)、Toll样受体4(TLR4)抑制剂组(20只).制备皮瓣I/R模型.瑞芬太尼组和TLR4抑制剂组于再灌注前静脉注射瑞芬太尼1 μg/(kg· min)和E5564(5 mg/kg),分别于缺血再灌注后2、4、8h,采用实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)和Western blot检测TLR4和核因子-κB (NF-κB)在皮瓣组织中的表达.于术后7d,应用图像分析软件计算皮瓣存活比例.结果 Real-time PCR和Western blot检测显示I/R组比瑞芬太尼组和TLR4抑制组TLR4及NF-κB表达明显增强.瑞芬太尼组和TLR4抑制组再灌注后TLR4和NF-κB活性受到抑制.术后7dI/R组、瑞芬太尼组和TLR4抑制剂组皮瓣存活比例分别为(61.40±7.12)%、(80.31±11.63)%和(82.10±10.21)%,与I/R组比较差异有统计学意义(P<0.05).结论 瑞芬太尼可以通过抑制TLR4表达及减少NF-κB活化,减轻皮瓣缺血再灌注损伤.
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抑制Eph受体酪氨酸激酶A7基因对肝癌细胞SMMC-7721生物学特性的影响
目的 观察RNA干扰抑制Eph受体酪氨酸激酶A7(EphA7)基因对肝癌细胞株SMMC-7721生物学特性的影响.方法 EphA7小干扰RNA重组质粒采用脂质体介导法转染肝癌细胞株SMMC-7721,并设空载体转染组和未转染组.采用实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)和Western blot法检测转染干扰载体后肝癌细胞株SMMC-7721中EphA7 mRNA和蛋白的表达,噻唑蓝(MTT)比色法检测转染后细胞增殖能力的变化,流式细胞仪检测转染后细胞周期分布的改变,Transwell小室侵袭实验检测转染后对其体外侵袭能力的影响.结果 与空载体转染组(0.429 3±0.053 3、0.582 2±0.029 1)和未转染组(0.431 1 ±0.0410、0.583 2±0.015 4)比较,EphA7小干扰RNA(siRNA)可显著下调肝癌细胞株SMMC-7721中EphA7 mRNA (0.191 1±0.015 3、0.148 8±0.0199和0.0874 ±0.0123)和蛋白(0.278 6±0.039 2、0.301 1 ±0.0372和0.2142±0.0147)的表达(P<0.05).MTT法绘制生长曲线显示,转染组肝癌细胞株SMMC-7721增殖速度明显低于空载体转染组和未转染组(P<0.05).流式细胞检测结果显示EphA7 siRNA对肝癌细胞株SMMC-7721生长周期中G1、G2和S期的细胞分布比例无明显影响(P>0.05).Transwell小室侵袭实验发现,转染组肝癌细胞株SMMC-7721穿膜细胞计数[(27.00±5.57)、(13.40±3.43)和(23.60 ±3.65)个]明显低于空载体转染组[(68.60±6.50)个]和未转染组[(72.00±9.30)个],差异有统计学意义(P<0.05).结论 抑制EphA7基因可降低肝癌细胞株SMMC-7721的增殖活性及体外侵袭能力,EphA7可能在肝癌的恶性转化、侵袭和转移过程中发挥重要作用.
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硫化氢对老年门脉高压兔食管-胃交界区血管平滑肌细胞凋亡的影响及机制
目的 探讨硫化氢(H2S)对老年门脉高压兔食管-胃交界区血管平滑肌细胞凋亡的影响及作用机制.方法 老年大耳白兔成功建立门脉高压模型后随机分为:感染组(PH)、硫氢化钠组(PH+S)、炔丙基甘氨酸组(PH+ PPG)、左旋硝基精氨酸甲基酯+锌原卟啉组(PH +L+Zn)、PH+L+S+Zn组,每组10只,另取10只设为正常对照组.测量各组门静脉压力(PVP);检测血浆H2S、一氧化氮(NO)、一氧化碳(CO)含量、核因子-κB (NF-κB)及凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)、Fas、半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-3的表达;检测食管-胃交界区血管平滑肌细胞的凋亡及H2S产生酶-胱硫醚γ裂解酶(CSE)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、血红素氧合酶-1(HO-1)蛋白的表达,图像分析计算单位面积细胞凋亡率.结果 与对照组比较,其他各组PVP均显著升高(P<0.05);血浆中H2S、NO、CO含量及CSE、iNOS、HO-1蛋白表达差异均有统计学意义(P<0.05).PH+ PPG组与PH组比较,H2S含量明显下降(16.9±6.6比23.6±5.5,P<0.05),食管-胃交界区血管组织内CSE转录水平明显增高[(5.3±0.5)比(3.8±0.7) μmol/L,P<0.05],血管平滑肌细胞单位面积凋亡指数显著降低(0.13 ±0.11比0.23±0.05,P<0.05),bcl-2、NF-κB表达均明显增高(0.69±0.25比0.49±0.30,P<0.05),Fas、Caspase-3蛋白表达明显降低(0.29±0.28比0.41±0.12,P<0.05).PH +S组与PH组比较,H2S含量明显升高[(32.1±7.5)比(23.6±5.5) μmol/L,P<0.05],CSE转录水平有显著下降(2.4±0.4比3.8±0.7,P<0.05),血管平滑肌细胞单位面积凋亡率明显增高(0.35±0.14比0.23±0.05、0.36±0.21比0.49±0.30、0.37±0.15比0.54±0.29,P< 0.05),Fas和Caspase-3蛋白表达则明显增高(0.52±0.18比0.41±0.12、0.38±0.23比0.29±0.14,P<0.05).结论 H2 S/CSE通过NO/NOS、CO/HO-1体系下调凋亡抑制因子bcl-2及NF-κB水平,激活Fas、Caspase-3表达,促进血管平滑肌细胞凋亡,抑制门脉系统高血压时食管-胃交界区血管结构的重建.
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骨髓间充质干细胞联合孕酮修复大鼠坐骨神经损伤的研究
目的 探讨骨髓间充质干细胞(BMSCs)与孕酮联合治疗大鼠坐骨神经损伤的疗效.方法 将健康成年清洁级雄性SD大鼠100只随机分为假手术组(对照组)和A、B、C、D5组,每组20只,建立大鼠右下肢坐骨神经损伤模型后,A组给予生理盐水,B、C、D组分别给予孕酮(8 mg/kg)、BMSCs移植、BMSCs移植联合应用孕酮(8 mg/kg)修复治疗.术后第12、24、48天采用Basso-Beattie-Bresnahan (BBB)评分法评估各组大鼠的右下肢运动功能恢复情况,术后48 d测定各组大鼠坐骨神经功能指数(SFI),模型建立后0h和48 d取损伤坐骨神经行Western blot分析,检测损伤处脑源性神经营养因子(BDNF)、髓磷脂碱性蛋白(MBP)和生长相关蛋白-43(GAP-43)的蛋白表达水平.结果 术后48 d坐骨神经损伤组SFI值均逐渐恢复,D组的SFI值(1.21 ±0.12)明显优于A(12.37±0.28)、B(10.56 ±0.42)、C(6.58 ±0.34)组(P<0.05).手术当天坐骨神经损伤组的右下肢运动功能完全丧失呈迟缓性瘫痪,D组术后第12、24、48天的运动功能评分(12.65 ±0.95、16.39±1.02、18.19 ±2.00)均明显高于A(8.62±0.77、10.27士0.53、12.58±0.96)、B(9.98±0.81、13.48 ±0.65、15.13±1.28)、C(10.87±0.54、14.06±0.75、16.48±1.96)组,差异有统计学意义(P<0.05).手术当天A、B、C、D组的BDNF、MBP和GAP-43的蛋白水平较对照组明显降低(P<0.05);手术后第48天坐骨神经损伤组的上述蛋白水平均明显升高(P<0.05),其中D组的上述蛋白水平明显高于A、B、C组(P<0.05).结论 BMSCs联合孕酮治疗能够促进大鼠坐骨神经损伤的神经再生,促进大鼠运动功能的恢复,其机制可能与增加相应的神经组织BDNF、MBP和GAP-43的表达有关.
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博莱霉素涂层支架对胆管良性狭窄的影响
目的 观察博莱霉素涂层支架对兔胆管良性狭窄的影响.方法 24只新西兰白兔行胆管损伤后平均分入A、B组,分别将博莱霉素涂层支架和普通支架植入两组兔的肝外胆管内.0d、4周后,取耳缘静脉血,检测总胆红素变化,随后处死兔,取植入支架行石蜡切片,行苏木素-伊红(HE)染色,并采用计算机图像检测系统检测两组胆管腔面积变化,同时各组切片行Fas、转化生长因子-β1(TGF-β1)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)抗体进行免疫标记,比较两组变化.结果 A组兔胆管组织中Fas基因表达水平明显高于B组(P<0.05):两组比较,TGF-β1、α-SMA的表达水平前者低于后者(P<0.05):A组肝外胆管管腔狭窄减轻程度及肝功能改善程度较B组明显(P<0.05).结论 博莱霉素通过增强兔平滑肌细胞Fas基因表达,促进凋亡,抑制成纤维细胞活性,减少胶原沉积,从而抑制兔肝外胆管狭窄,促进肝功能恢复.
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应用腺病毒载体系统构建1.3拷贝乙型肝炎病毒重组腺病毒载体
目的 应用腺病毒AdEasy系统构建含1.3拷贝乙型肝炎病毒(HBV)基因组的腺病毒载体,并鉴定目的蛋白的表达.方法 采用基因重组技术将4.1 kb的1.3拷贝HBV基因序列克隆在腺病毒穿梭质粒上,通过在大肠杆菌内与骨架质粒的同源重组,构建重组腺病毒质粒,经293T细胞包装后产生重组腺病毒,感染肝癌细胞后检测乙型肝炎表面抗原(HBsAg)、乙型肝炎病毒e抗原(HBeAg)、HBV DNA和乙型肝炎病毒X蛋白(HBX)蛋白的表达,以转HBV基因组的HepG2.2.15肝癌细胞株为对照,同时检测上述指标含量.结果 双酶切下的1.3拷贝HBV序列成功克隆在腺病毒穿梭质粒上,与骨架质粒同源重组后的腺病毒质粒转染293T包装细胞后产生了重组腺病毒,感染HepG2细胞后能在细胞培养上清中检测HBsAg和HBeAg的含量分别为70.70、5.50 IU/ml,HBV DNA含量为1.2×107 copies/ml.同期检测的HepG2.2.15细胞内HBsAg和HBeAg的含量分别为3.51、44.85 IU/ml,HBV DNA含量为7.4×104 copies/ml.Western blot检测可见被感染的HepG2细胞有HBX蛋白的表达.结论 应用AdEasy系统成功构建含1.3拷贝HBV基因组的重组腺病毒载体,经包装细胞产生的病毒感染靶细胞后能检测到HBV抗原的表达.
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骨桥蛋白在高钙促进大鼠肾上皮细胞与草酸钙晶体黏附中的作用
目的 探讨骨桥蛋白(OPN)在高钙尿致含钙肾结石形成中的作用及机制.方法 根据成人及大鼠高钙尿诊断标准,钙干预浓度分别为0.1、0.3、0.6 g/L,作用于大鼠肾上皮细胞(NRK),检测其对NRK细胞增殖、分泌OPN及OPN基因表达的影响;构建有效沉默OPN基因表达的慢病毒载体[OPN-RNA干扰(RNAi)],感染NRK细胞后应用高钙刺激,检测细胞黏附的一水草酸钙晶体量的变化.结果 0.3、0.6 g/L钙刺激NRK细胞6、24、48 h后,3个时间点检测NRK细胞增殖均较空白对照组明显减慢,差异有统计学意义(P<0.05);3个浓度钙刺激3、6、24h后OPN分泌量均较空白对照组显著增加,差异有统计学意义(P<0.05);3个浓度干预3h和6h两个时间点NRK细胞OPN基因mRNA和蛋白水平均明显升高,与空白对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05);成功构建OPN-RNAi慢病毒载体,病毒滴度为6×108 TU/ml.OPN-RNAi组、空病毒载体组和空白对照组分别用0.6 g/L钙干预24 h后细胞黏附的一水草酸钙含量(以钙浓度表示,mg/L)分别为19.25±3.71、27.22±3.82和31.91±1.15;OPN-RNAi组细胞晶体黏附量较空病毒载体组和空白对照组均显著减少,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 OPN可能介导高钙促进NRK细胞与一水草酸钙晶体的黏附.
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环六缩酚肽对人前列腺癌细胞的抑制作用及对婆罗双树样基因4的作用机制
目的 探讨环六缩酚肽对人前列腺癌细胞的抑制作用以及对婆罗双树样基因4(SALL4)的作用.方法 采用噻唑蓝(MTT)法检测不同药物组前列腺癌细胞的增殖,采用流式细胞仪检测前列腺癌细胞的凋亡率,应用Western blot法检测前列腺癌细胞中半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-3、B细胞淋巴瘤/白血病-2相关X蛋白(bax)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)蛋白水平,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测前列腺癌细胞中SALL4的表达.结果 环六缩酚肽干预24、48 h后前列腺癌细胞的生存率降低为(32.40±1.98)%和(38.20±2.13)%,凋亡率升高为(48.43 ±3.08)%和(50.08±4.14)%,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01);环六缩酚肽干预48 h后前列腺癌细胞中Caspase-3 (0.387 ±0.012)和bax蛋白(0.312±0.028)表达水平升高,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);而环六缩酚肽干预组bcl-2蛋白(0.487 ±0.018)水平降低(P<0.01),SALL4表达水平没有明显变化.结论 环六缩酚肽对前列腺癌细胞具有抑制作用且抑制作用可能是通过调控Caspase-3、bax和bcl-2水平的变化而实现的,而没有影响SALL4的水平.
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肝再生增强因子对肝硬化大鼠50%肝切除术后余肝再生的影响
目的 观察外源性肝再生增强因子(ALR)对肝硬化大鼠50%肝切除术后余肝再生能力的影响.方法 基因重组技术构建携带人ALR基因片段的慢病毒表达载体,转染大鼠正常肝细胞BLR 3A,验证其有效性与安全性;42只前期研究构建的肝硬化大鼠模型行50%肝切除,同时给予门静脉注射携带人ALR慢病毒表达载体,分别于术前、术后12、24、72 h、7、14、28 d检测各组大鼠余肝组织ALR mRNA与蛋白的表达、肝再生率及门静脉血液中丙氨酸转氨酶(ALT)与天冬氨酸转氨酶(AST)含量,并与前期研究结果行对比分析.结果 成功构建携带人ALR慢病毒表达载体,转染大鼠肝细胞BLR 3A,转染率为81.29%,可使细胞稳定表达ALR基因;构建的慢病毒载体可使大鼠模型余肝组织稳定表达ALR基因;ALR转染组大鼠术后72 h~28 d肝再生率分别为(51.14±6.63)%、(78.28±1.70)%、(81.71±3.24)%及(95.72±2.55)%,均高于空白对照组(P<0.05),且术后72 h及7d肝再生率高于血管内皮生长因子(VEGF)165转染组(P<0.05);术后72 h至28 d大鼠血清ALT含量分别(255.32 ±6.80)、(208.96±4.82)、(168.27±13.16)、(122.20±12.36) U/L,血清AST含量分别为(548.29±11.91)、(489.04±10.52)、(414.17 ±5.80)、(365.33±10.62) U/L均低于空白对照组(P<0.05),术后各时点血清ALT及AST含量与VEGF165转染组比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 外源性人ALR可促进肝硬化大鼠肝部分切除术后余肝的再生,且在促进肝脏质量恢复方面优于外源性VEGF165.
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卡托普利对大鼠肝星状细胞金属蛋白酶组织抑制因子-1基因表达的影响
目的 观察血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、卡托普利对体外培养的肝星状细胞金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)基因表达的影响.方法 采用肝星状细胞株HSC-T6作为活化的肝星状细胞的研究模型,将培养的肝星状细胞随机分为对照组、AngⅡ(1×10-5、1 ×10-7 mol/L)组和AngⅡ±卡托普利组(1×10-5、1×10-7 mol/L).逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测肝星状细胞中TIMP-1mRNA的表达.结果 TIMP-1基因表达水平在AngⅡ两组分别是1.145 ±0.219、0.860±0.115,而对照组为0.523±0.056,TIMP-1基因的表达水平在不同浓度的AngⅡ+卡托普利组(1×10-5 mol/L、1×10-7 mol/L)分别是0.740±0.089、0.590±0.073.结论 AngⅡ能够促进肝星状细胞TIMP-1 mRNA的表达,而卡托普利能够明显抑制这一作用.
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肝癌缺失基因-1在结直肠癌中的表达及启动子甲基化
肝癌缺失基因-1(DLC-1)是一种新的抑癌基因.本研究旨在探讨DLC-1基因表达与结直肠癌分期及其启动子甲基化之间的关系.一、材料与方法1.RNA、DNA提取:总RNA的提取及逆转录严格按照TaKaRa RNA Plus试剂盒说明书提取.基因组DNA采用Universal Genomic DNA Extraction 3.0纯化试剂盒.2.逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)两步法试剂盒:逆转录条件、荧光定量PCR反应条件按说明书进行;扩增完毕后进行熔解曲线分析.
关键词: -
负载去细胞基质的壳聚糖/纳米羟基磷灰石复合微球的制备及其性状
目的 制备负载猪膀胱黏膜下层去细胞基质的壳聚糖/纳米羟基磷灰石复合微球.方法 利用去污剂-酶法制备猪膀胱黏膜下层去细胞基质;乳化-交联法制备负载去细胞基质的壳聚糖/纳米羟基磷灰石复合微球;应用扫描电镜、X线衍射仪分析微球形态、成分;酶联免疫吸附法检测微球内转化生长因子β1(TGF-β1)、血管内皮生长因子(VEGF)含量及累积释放率;噻唑蓝(MTT)法在1、3、5、7d检测复合微球细胞毒性.结果 复合微球形态均匀、呈球形,粒径分布在(3.52 ~29.65) μm.X线衍射显示:微球包含上述3种成分.微球内TGF-β1和VEGF的含量分别为(98.32±25.40)和(7.910 ±0.001) pg/g;两种细胞因子的累积释放率为8~10d内能维持95%的浓度.微球浸提液表明材料无细胞毒性.结论 负载猪膀胱黏膜下层去细胞基质的壳聚糖/纳米羟基磷灰石复合微球,粒径较窄,8 ~10d内维持有效的生长因子浓度,材料无细胞毒性.
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肝癌细胞DNA甲基转移酶3b通过微小RNA-145调节细胞周期素D1基因表达的研究
目的 探讨DNA甲基转移酶3b(DNMT3b)在人肝癌细胞株(SMMC7721)中调节细胞周期素(Cyclin) D1基因表达的机制.方法 用DNMT3b的小干扰RNA(siRNA)表达载体转染SMMC7721细胞抑制DNMT3b的表达;采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测微小RNA(miR)-145、Cyclin D1 mRNA表达的变化;用甲基化特异性PCR (MSP)技术检测miR-145基因启动子区甲基化状态的变化.结果 siRNA转染肝癌细胞的效率可达90%以上,DNMT3b成功被抑制;两组中miR-145基因启动子区甲基化水平的差异无统计学意义(P>0.05);实验组miR-145表达水平明显高于对照组(P<0.01),但Cylin D1 mRNA表达水平的差异无统计学意义(P>0.05).结论 DNMT3b可以通过miR-145调节Cyclin D1的表达,从而影响细胞周期,进而引起肝癌细胞的大量凋亡.
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腰椎压缩性骨折后路椎弓根固定3种固定节段方式有限元分析
目的 通过有限元分析方法评估腰椎压缩性骨折后路短节段4钉固定、伤椎6钉固定及长节段6钉固定的生物力学.方法 选取1例男性腰2椎体压缩性骨折患者,进行CT扫描,数据输入Mimics软件,构建腰2椎体压缩性骨折的有限元模型,在此模型基础上模拟A组短节段4钉内固定、B组伤椎置6钉、C组长节段6钉固定,在有限元软件中对3组固定模式分别施加垂直压缩、前屈、后伸、侧屈载荷.结果 3组固定模式各种载荷下的应力均集中在螺钉根部,上位螺钉较下位螺钉应力大(P<0.05).在前屈负荷下B组[(0.89 ±0.08) mPa]、C组[(0.80±0.11) mPa]上位螺钉应力较A组[(1.12±0.13) mPa]小(P<0.05).在前屈负荷下腰2上终板上位移结果为0.000 1 mm A组87.00±3.06、B组41.00±5.33、C组13.80±8.20,B、C组较A组小(P<0.05),C组较B组小(P<0.05).结论 伤椎固定及长节段固定可以优化内固定的载荷,减少断钉率,伤椎固定及长节段固定可以减少伤椎的变形,有利于骨折愈合及矫正.
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钙敏感受体在糖尿病大鼠大血管病变中的表达
目的 探讨钙敏感受体(CaSR)在糖尿病大血管病变中的表达及其在发病机制中的意义.方法 SD大鼠随机分为正常对照组(Con,n=9)和糖尿病组(DM,n=9).采用高脂饮食+腹腔注射链脲佐菌素(STZ)的方法,建立大鼠糖尿病模型.采用ChoramnieT氧化比色法测定血管组织羟脯氨酸含量,实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测CaSR mRNA含量,Western blot法观察大鼠胸主动脉血管组织CaSR和B细胞淋巴瘤/白血病-2相关X蛋白(bax)的蛋白表达,原位缺口末端标记法(TUNEL)观察血管内皮细胞凋亡.结果 糖尿病组羟脯氨酸含量[(1.380 ±0.030) mg/L]、CaSRmRNA水平(3.960 ±0.110)、CaSR蛋白表达水平(2.600 ±0.170)、bax蛋白表达水平(3.201±0.177)均显著高于对照组[(1.053 ±0.041) mg/L、1.003 ±0.015、1.000±0.032、1.000±0.084,P<0.05];内皮细胞凋亡率增高30% (P <0.05).结论 CaSR在糖尿病大鼠模型大血管病变从mRNA到蛋白水平的表达均显著增加,提示CaSR可能通过激活bax相关凋亡通路促进血管内皮细胞凋亡,参与糖尿病大血管病变的发生和发展过程.
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胆管全横断损伤动物模型的建立
本研究旨在建立胆管全横断损伤动物模型,探讨胆管损伤愈合过程及胆管狭窄发生的病理机制.一、材料与方法1.动物与分组:55只雄性新西兰白兔,随机分为2组.实验组行胆总管全横断端端吻合术后按不同观测时间(术后2周、1、2、3、6个月)分为5个亚组(10只/组);手术对照组(5只).2.模型制作:麻醉采用兔耳缘静脉注射3%戊巴比妥钠(1 ml/kg).取上腹正中切口,沿胆囊管向下分离出胆总管,在距十二指肠上缘5 mm处完全横行切断胆总管.在手术显微镜下,以8-0聚丙烯缝线(Ethicon公司)行间断黏膜对黏膜外翻全层吻合,先吻合前壁,后吻合后壁,共吻合8针.手术对照组仅行入腹后游离胆总管.
关键词: -
ZO-1和Claudin-1在胆管癌中的表达及其意义
目的 探讨ZO-1及Claudin-1在胆管癌中的表达并分析其与胆管癌侵袭转移的关系.方法 应用免疫组织化学方法检测Claudin-1和ZO-1在胆管癌、肝转移灶和正常胆管组织中的表达;采用实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)方法检测胆管癌细胞株中Claudin-1及ZO-1基因表达水平.结果 Claudin-1与ZO-1在正常胆管组织中的表达量分别是胆管癌组织中的12.94倍和5.19倍(P<0.01),分别是胆管癌肝转移组织中的125.62倍和60.31倍(P<0.01);Claudin-1与ZO-1在胆管癌组织中的表达与胆管癌是否发生局部或者远处转移密切相关(P<0.05).在3种胆管癌细胞株中,Claudin-1和ZO-1在QBC939和RBE中高表达;在TFK-1中低表达.结论 Claudin-1与ZO-1在胆管癌中的表达与胆管癌的侵袭转移能力密切相关.
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晚期乙醇性股骨头坏死骨组织中相关基因的表达
目的 观察晚期乙醇性股骨头坏死(ONFH)坏死区骨组织细胞中相关基因的表达.方法 收集在全髋关节置换术中切除的20个股骨头,其中,10例世界骨循环研究学会(ARCO)分期Ⅲ-C、Ⅳ期乙醇性ONFH,作为实验组;10例GardenⅢ、Ⅳ型新鲜股骨颈骨折的股骨头,作为对照组.采用实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)分别测定两组坏死骨组织细胞中骨形态发生蛋白-2(BMP-2)、成骨转录因子-2(Runx-2)、过氧化物酶体增殖子活化受体-γ(PPAR-y)、护骨素(OPG)、破骨细胞分化因子(RANKL) mRNA的表达.结果 实验组细胞中BMP-2、Runx-2、PPAR-γ、OPG、RANKL mRNA表达水平均较对照组明显降低,2-△△Ct值分别为0.51 ±0.04、0.46 ±0.09、0.59±0.07、0.31 ±0.04、0.52±0.06,两组间差异均有统计学意义(P<0.01).结论 晚期(ARCOⅢ-C、Ⅳ期)乙醇性ONFH的骨组织坏死区很大,股骨头内残存的骨活性成分和细胞很少,其成骨与成脂基因表达均降低,股骨头已毁损,适于行人工髋关节置换术.
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可调控慢病毒介导白细胞介素-12治疗结肠癌的研究
目的 观察RU486可调控慢病毒介导的小鼠白细胞介素-12(mIL-12)基因对小鼠结肠癌C26细胞移植瘤生长和微血管形成的影响.方法 应用分子同源重组技术构建、包装能表达mIL-12的RU486可调控慢病毒LV-RUmIL-12.将LV-RUmIL-12重组慢病毒感染C26细胞,酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测不同浓度RU486调控下mIL-12在C26细胞中的表达.构建小鼠结肠癌C26细胞皮下移植瘤模型,将100只小鼠分为5组[磷酸盐缓冲液组(PBS组)、空白慢病毒组(LV组)、RU486组、LV-RUmIL-12组和LV-RUmIL-12-RU486组],观察小鼠肿瘤生长情况.21 d后处死小鼠,检测小鼠血清mIL-12水平,摘除瘤体,称瘤重,免疫组织化学方法检测肿瘤微血管密度(MVD)和淋巴细胞浸润情况.结果 成功构建、包装RU486可调控慢病毒LV-RUmIL-12.LV-RUmIL-12慢病毒感染C26细胞后,1×10-5 mol/L的RU486可诱导1×106个细胞产生(148±25) μg/L的mIL-12蛋白.LV-RUmIL-12-RU486、PBS、LV、RU486、LV-RUmIL-12组小鼠血清mIL-12水平分别为(3 572.60±245.60)、(145.43±13.53)、(134.53±12.86)、(147.32±15.56)和(139.67±14.84) μg/L,LV-RUmIL-12-RU486组mIL-12水平显著增高(P<0.05).RU486诱导下的LV-RUmIL-12慢病毒能够抑制小鼠C26细胞移植瘤的生长,抑瘤率达72.59%;LV-RUmIL-12-RU486组移植瘤组织MVD(12.5±4.3)少于PBS (45.5±5.7)、LV (39.5±3.7)、RU486(42.4±7.5)和LV-RUmIL-12组(47.2±2.6),差异有统计学意义(P<0.05);LV-RUmIL-12-RU486组肿瘤组织中CD4+和CD8+淋巴细胞浸润较对照组增多,差异有统计学意义(P<0.05).结论 携带mIL-12基因的RU486可诱导慢病毒能够有效抑制小鼠结肠癌皮下移植瘤微血管生成,对结肠癌的生长有明显的抑制作用.
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靶向人神经母细胞瘤MYCN基因慢病毒载体的构建及鉴定
目的 构建靶向人神经母细胞瘤MYCN基因慢病毒表达载体并检测其对目的基因MYCN的沉默效应.方法 根据MYCN基因信息设计并构建4个靶向MYCN基因的干扰质粒,鉴定后与pLenti6.3/V5 Dest载体重组,并包装成为慢病毒表达载体Lenti-EGFP-MYCN-1/2/3/4-miR,感染人神经母细胞瘤SK-N-BE(2)细胞株,并应用实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)和Western blot检测4个慢病毒表达载体对MYCN mRNA和蛋白表达的沉默效应,筛选出佳干扰靶序列慢病毒表达载体.结果 酶切和测序结果证实4个靶向MYCN基因的慢病毒载体构建成功,感染SK-N-BE(2)细胞后,应用FQ-PCR和Western blot检测MYCN mRNA和蛋白的表达水平分别为0.577±0.015、0.333 ±0.016、0.090±0.010、0.197 ±0.015和0.833±0.049、0.563±0.040、0.300±0.020、0.387±0.015,其中Lenti-EGFP-MYCN-3-miR对MYCN基因抑制作用为显著,为佳干扰靶序列慢病毒表达载体.结论 成功构建慢病毒表达载体可高效感染体外培养的人神经母细胞瘤SK-N-BE(2)细胞株,并可显著抑制靶基因MYCN mRNA和蛋白的表达.
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生物可降解雷帕霉素输尿管支架对输尿管损伤后瘢痕形成的抑制作用
目的 观察生物可降解雷帕霉素缓释输尿管支架对输尿管损伤后瘢痕形成的抑制作用.方法 原代培养尿路平滑肌细胞,噻唑蓝(MTT)法筛选雷帕霉素抑制尿路平滑肌细胞增殖的佳药物浓度.再将构建的生物可降解雷帕霉素缓释输尿管支架和双J管分别置入输尿管损伤动物模型,评估两种支架抑制输尿管损伤后瘢痕形成情况.结果 MTT法检测显示雷帕霉素呈现剂量依赖性抑制尿路平滑肌细胞增殖,半数致死量(IC50)为23.3 mg/L.所有支架均成功置入输尿管,18周时,Masson三色和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)免疫组织化学染色显示生物可降解雷帕霉素缓释输尿管支架侧胶原增生不明显,输尿管壁细胞排列有序,而双J管侧胶原纤维大量增生、层次紊乱.结论 生物可降解雷帕霉素缓释输尿管支架能有效抑制尿路平滑肌细胞的过度增殖和胶原沉积,从而预防输尿管瘢痕性狭窄的发生.
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白细胞介素-8对CD133+肝癌干细胞侵袭转移能力的影响
目的 观察白细胞介素(IL)-8对CD133+肝癌干细胞侵袭转移能力的影响并探讨其机制.方法 磁珠分选MHCC97-H细胞,检测上清液中IL-8表达,比较CD133+/CD133-细胞克隆形成、裸鼠成瘤、迁移侵袭能力.IL-8中和抗体处理细胞并分组,比较克隆形成、迁移侵袭能力.结果 CD133+细胞表达更高水平的IL-8[(85.76±2.55) ng/L比(13.40 ±2.19) ng/L],细胞浓度为1×106/L时即可成瘤;其克隆形成[(13.50±0.62)%比(4.43±0.31)%]、迁移[(39.3±3.2)个比(18.0±2.6)个]、侵袭[(37.5±3.0)个比(20.3±1.8)个]能力强于CD133-细胞.IL-8中和抗体处理后,CD133+/CD133-细胞的克隆形成率降低[(4.63±0.47)%比(12.93±0.55)%,(3.53±0.49)%比(6.67±0.15)%],CD133+细胞的迁移[(24.7±2.8)个比(37.7±2.8)个]、侵袭[(25.2±2.1)个比(40.2±3.6)个]能力降低,CD133-细胞无明显变化.结论 IL-8可特异性地参与调节CD133+肝癌干细胞的侵袭转移能力.
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特利加压素对大鼠70%肝切除后残肝再生的影响及其机制
目的 观察特利加压素对大鼠70%肝切除后残肝再生的影响及保护作用.方法 将健康雄性Wistar大鼠60只随机分为3组:A组(对照组1,n=20),行70%肝切除;B组(对照组2,n=20)行70%肝切除+脾切除;C组(实验组,n=20)行70%肝切除,并于术前10 min及术后3d给予特利加压素,比较各组术前、术后1、3、5、7d门静脉压力,比较各组术后血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、总胆红素(TBIL)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-6、肝组织增殖细胞核抗原(PCNA)及促肝细胞生长素肝细胞生长因子(HGF)水平;苏木素-伊红(HE)染色观察肝脏形态学改变.结果 各组大鼠均顺利完成手术,B组术后均发生脾静脉血栓,C组及A组未见脾静脉血栓,差异有统计学意义(P<0.01).各组门静脉压力术后1d明显升高,其后呈逐渐下降趋势.C组术后1、3d门静脉压力低于A组及B组[(13.81 ±0.24)、(12.38±0.37)cmH2O (1cmH2O=0.098 kPa),P<0.05],术后1、3d,B、C两组血清ALT、AST、TBIL水平明显低于A组(P<0.01),且B组低于C组(P<0.05);术后1d及3d,B、C两组PCNA指数明显高于A组(P<0.01),且B组高于C组(P<0.05);术后1、3d,C组血清TNF-α、IL-6水平高于于A组(P<0.05);术后1d及3d,B、C两组HGF水平明显高于A组(P<0.05),B组HGF水平高于C组(P<0.05).结论 特利加压素可降低肝切除术后门静脉压力,促进细胞因子TNF-α、IL-6及HGF表达,促进残肝再生并改善肝功能,避免脾切除形成门静脉系统血栓的风险.
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急性胰腺炎腹腔间隔室综合征炎性介质的测定及意义
腹腔间隔室综合征是急性胰腺炎的一种特殊并发症,炎性介质在急性胰腺炎的发病机制中起重要的作用.本研究旨在观察炎性介质在合并有腹腔间隔室综合征的急性胰腺炎患者体内的测定水平,探讨其在急性胰腺炎发生发展中的意义.一、资料与方法1.一般资料:实验组为2005年1月至2013年12月我院所收治33例急性胰腺炎合并腹腔间隔室综合征患者,其中男8例,女25例,年龄36 ~ 69岁.胆道疾病19例,高脂饮食、酗酒7例,原因不明7例,本组患者均采用膀胱测压法测定腹腔内压水平均≥20 mmHg(1 mmHg =0.133 kPa).对照组为未合并腹腔间隔室综合征的急性胰腺炎患者41例,其中男14例,女27例,年龄32~68岁,胆道疾病20例,高脂饮食、酗酒12例,原因不明9例,本组患者中29例腹腔内压力≤12 mmHg,12例腹腔内压力≥12 mmHg,且≤20 mmHg.正常对照组为健康体检者40例,男15例,女25例,年龄35 ~ 65岁,除外感染、风湿性疾病和肿瘤.3组间性别构成和年龄差异无统计学意义(P>0.05).
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平滑肌22α特异性启动子/增强子基因调控哺乳动物雷帕霉素靶蛋白信号通路对血管平滑细胞增殖和凋亡的影响
在静脉桥血管冠脉旁路移植术后,由于血管内皮损伤、管腔血流机械应力和氧气浓度增大等一系列因素的改变,导致局部损伤的血管分泌各种细胞因子作用于损伤或移植血管处,激活多种信号通路,使血管平滑肌细胞(VSMC)由分化状态(收缩型)转化为去分化状态(合成型)后反应性过度增殖、迁移,导致管腔重塑、狭窄[1].我们采用VSMC的特异性平滑肌22α(SM22α)启动子/增强子嵌合体,构建靶向大鼠VSMC哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)基因的干扰RNA真核表达载体,通过脂质体转染,观察其对VSMC增殖和凋亡的影响.
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脉冲电磁场对骨移植愈合的影响
同种异体骨因为来源广泛,目前已成为外科治疗大段骨缺损的重要手段,但其也有骨折与不愈合等并发症,因而促进移植后的早期成骨显得尤为重要.本研究旨在观察脉冲电磁场(PEMF)对移植后骨愈合的影响.一、材料与方法1.材料:骨形态发生蛋白(BMP-2)试剂购自北京博奥森公司,SD大鼠由哈尔滨医科大学动物中心提供,脉冲磁场系统哈尔滨工程大学提供.
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半胱氨酰白三烯受体1在肠缺血再灌注损伤中的意义
肠缺血再灌注损伤(L/R)发生机制较为复杂,半胱氨酰白三烯受体(CysLTsR1)参与了脑、肾I/R[1],本研究旨在探讨CysLTsR1在肠L/R中的作用.一、材料与方法1.分组与造模:将40只大鼠随机分为对照组、模型组、不同剂量孟鲁司特(Montelukast)组(0.2、2.0、20.0 mg/kg),每组8只.术前1h灌胃给药,术中游离肠系膜前动脉,对照组不夹闭血管,手术组用动脉夹夹闭,45 min后松开.术毕回笼饲养,再灌注90 min后处死.2.标本及检测:距盲肠10~20 cm处取末端回肠2 cm,参照文献[2]方法检测小肠含水量,显微镜下观察病理形态,免疫组织化学及实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测CysLTR1蛋白和mRNA表达.
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人斯钙素2蛋白在胃癌组织中表达及其临床意义
目的 探讨人斯钙素2蛋白(STC2)在胃癌组织中的表达及其临床意义.方法 应用免疫组织化学技术[链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶(SP)三步法]检测STC2在50例胃癌组织中的表达,并选取40例癌旁黏膜组织作为对照组.回顾性分析胃癌患者的临床病理特征与STC2表达的关系.结果 STC2在胃癌组织和癌旁黏膜组织中阳性表达率为分别为68.00%和35.00%,差异有统计学意义(P<0.01).胃癌组织中,侵犯黏膜层和肌层组STC2的阳性表达率为38.46%,明显低于侵及浆膜层及浆膜外组的78.38%,差异有统计学意义(P<0.01);淋巴结转移组的阳性表达率为80.65%,高于无转移组的42.11%,差异有统计学意义(P<0.05);而不同性别、年龄、肿瘤大小、组织分化、TNM分期和远处转移的STC2表达水平差异无统计学意义(P>0.05).STC2在不同浸润程度组和不同淋巴转移组中阳性表达强度均不同,差异有统计学意义(P< 0.05).结论 STC2的表达与胃癌的浸润、淋巴结转移密切相关,可能是胃癌侵袭转移的促进因素之一,使胃癌的恶性程度增加.
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POK红系髓性致癌因子与转移抑制因子在胃癌中的表达及临床意义
目的 观察POK红系髓性致癌因子(Pokemon)与转移抑制因子(MTSS1)在胃癌组织中的表达,探讨两者与胃癌临床病理特征的关系.方法 采用免疫组织化学法检测77例胃癌组织及相应癌旁组织中Pokemon和MTSS1表达水平.结果 Pokemon在胃癌组织中的表达率明显高于癌旁组织(63.64%比20.78%,P<0.01),Pokemon表达水平与胃癌组织学分化程度、TNM分期和淋巴结转移明显相关(P<0.05);MTSS1在胃癌组织中表达率明显低于癌旁组织(59.74%比84.42%,P<0.01),MTSS1表达水平与胃癌肿瘤大小、组织学分化程度、TNM分期、淋巴结转移明显相关(P<0.05).结论 Pokemon过度表达和MTSS1表达缺失在胃癌的发生、发展过程中发挥一定作用.
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胰腺癌组织中糖原合成激酶-3β的表达及其与上皮-间充质转化的相关性
目的 探讨糖原合成激酶-3β(GSK-3β)在胰腺癌组织中的表达及其与上皮-间充质转化的相关性.方法 选取胰腺癌病例标本60例,35例有配对的癌旁正常组织,行GSK-3β、丝氨酸-9、酪氨酸-216、Snail和E-钙黏蛋白(E-cadherin)免疫组织化学及Western blot检测,分析GSK-3β与胰腺癌临床病理特征和上皮-间充质转化相关分子之间的相关性.结果 GSK-3β在胰腺癌中阳性率为65.0%,显著高于癌旁组织(22.8%),GSK-3β表达与胰腺癌临床分期、分级、分化程度以及淋巴结转移呈正相关,而与患者年龄、性别和肿瘤大小无相关.丝氨酸-9在癌旁组织表达水平高于胰腺癌组织,而酪氨酸-216和Snail表达与之相反,E-cadherin在胰腺癌及癌旁组织表达水平均较低.Pearson相关分析发现,GSK-3β与上述指标均显著相关.结论 GSK-3β在胰腺癌组织中表达显著高于癌旁组织,与胰腺癌临床分期、肿瘤分期、分化程度及淋巴结转移之间呈正相关,而与患者年龄、性别及肿瘤大小无相关.此外,GSK-3β还与胰腺癌上皮-间充质转化具有密切关系.
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血管内皮生长因子、基质金属蛋白酶-2在胃癌中的表达及其与胃癌侵袭性的关系
目的 观察胃癌组织中血管内皮生长因子(VEGF)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)的表达,探讨两者与胃癌侵袭、转移的关系.方法 采用免疫组织化学链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶(SP)法检测30例胃癌癌前病变及42例胃癌组织中VEGF、MMP-2的表达.结果 VEGF在浅表性胃炎、慢性萎缩性胃炎伴肠化、不典型增生、早期胃癌和进展期胃癌中VEGF阳性表达率分别为25.0% (3/12)、36.3% (4/11)、42.8%(3/7)、57.1% (8/14)、78.5% (22/28);MMP-2在浅表性胃炎、慢性萎缩性胃炎伴肠化、不典型增生、早期胃癌和进展期胃癌中MMP-2阳性表达率分别16.7%(2/12)、27.2% (3/11)、28.6%(2/7)、42.8% (6/14)、76.2%(20/28).VEGF、MMP-2阳性表达率随着胃癌的发展逐渐升高.42例胃癌组织中,VEGF、MMP-2阳性率在侵及浆膜层组为73.1%和80.8%,显著高于未侵及浆膜层组(56.3%和62.5%,P< 0.05);在淋巴结转移组为79.2%和87.5%,显著高于无淋巴结转移组(33.3%和44.4%,P<0.05);胃癌组织中VEGF、MMP-2表达呈正相关(r =0.416,P<0.05).结论 VEGF、MMP-2高表达与胃癌侵袭密切相关.
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音猬因子、Smo、胶质母细胞瘤转录因子基因在胰腺癌中的表达及临床意义
目的 检测音猬因子(Shh)、Smoothened (Smo)、胶质母细胞瘤转录因子(Gli1)在胰腺癌组织和癌旁组织中表达的差异,探讨Shh、Smo、Gli1在胰腺癌中异常表达与肿瘤发生的关系.方法 选取50例手术切除的新鲜胰腺癌组织和癌旁组织,应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术和Western blot检测胰腺癌组织和癌旁组织中Shh、Smo、Gli1 mRNA和蛋白的表达,并分析其与胰腺癌临床病理特征之间的关系.结果 RT-PCR检测结果显示:Shh、Smo、Gli1 mRNA在胰腺癌组织中的相对表达量分别为0.309 ±0.162、0.327±0.264、0.341 ±0.132,在胰腺癌旁组织中为0.184±0.227、0.148 ±0.276、0.105±0.351(P<0.05).Western blot检测结果显示:Shh、Smo、Gli1蛋白在胰腺癌组织中的相对表达量分别为0.624 ±0.139、0.547 ±0.418、0.563 ±0.271,在胰腺癌旁组织中为0.388 ±0.294、0.294 ±0.152、0.328 ±0.129(P<0.05).胰腺癌组织中Shh、Smo、Gli1 mRNA与蛋白表达均高于癌旁组织.胰腺癌组织中Shh、Smo、Gli1 mRNA与蛋白表达均与胰腺癌的分化程度相关(P<0.05),与患者年龄、肿瘤直径、TNM分期、侵犯血管和神经、淋巴结转移、远处转移无相关(P>0.05).结论 Shh、Smo、Gli1信号分子在胰腺癌组织中表达增高,Hedgehog信号途径可能在胰腺癌发生发展过程中起重要作用.
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前列腺特异性抗原升高首次活检阴性行重复穿刺患者阳性预测因素研究
目的 探讨首次前列腺穿刺活检病理结果为阴性但仍高度怀疑为前列腺癌的前列腺特异性抗原(PSA)升高患者需行重复穿刺活检的预测因素.方法 112例重复穿刺患者根据第2次活检病理结果分为前列腺癌组33例和非癌组79例.比较两组患者的临床资料并确定重复穿刺活检的阳性预测因素.结果 两组间PSA密度(PSAD)、前列腺移行区体积(TZV)和首次穿刺结果为高级别上皮内瘤变(HGPIN)比较差异有统计学意义(P<0.05).回归分析显示,PSAD和TZV是前列腺重复穿刺结果为前列腺癌的高危因素.结论 对于首次穿刺活检病理结果为阴性但PSA升高患者,PSAD和TZV可作为其接受再活检的预测因素.
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大肠癌转移和复发与KRAS及磷脂酰肌醇-3-激酶催化亚单位α基因突变的关系
目的 检测大肠癌组织中KRAS与磷脂酰肌醇-3-激酶催化亚单位oα(PIK3CA)突变,探讨其与大肠癌转移、复发之间的关系.方法 收集大肠癌标本94例,提取DNA后行KRAS和PIK3CA基因测序,分析其临床病理特征,探讨两者之间的关系;并对患者进行为期3年的随访,分析基因突变与转移、复发的关系.结果 KRAS基因突变31例,远处转移率高于野生型(61.3%比34.9%);PIK3CA基因突变15例,远处转移率高于野生型(73.3%比38.0%);两者共同突变7例,均未突变55例,共同突变者转移率高于均未突变者(71.4%比29.1%);术后3年随访KRAS基因突变型转移率和复发率均高于野生型(93.1%比69.5%,65.5%比39.0%),PIK3CA基因突变型转移率和复发率亦均高于野生型(93.3%比74.0%,73.3%比42.5%);上述结果差异均有统计学意义(P<0.05).结论 大肠癌组织中KRAS和PIK3CA基因突变型远处转移率和复发率高,对大肠癌的远处转移和复发可能有一定的预测价值.
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环氧化物酶-2、血管内皮生长因子、拓扑异构酶Ⅱ在三阴性乳腺癌中的表达及临床意义
目的 探讨三阴性乳腺癌(TNBC)组织中环氧化物酶-2(COX-2)、血管内皮生长因子(VEGF)、拓扑异构酶Ⅱ(TopoⅡ)的表达及其相关性.方法 收集乳腺癌标本构建组织芯片,应用免疫组织化学检测COX-2、VEGF、TopoⅡ的表达,并结合临床病理特征进行相关性分析.结果 COX-2和VEGF在TNBC中的表达率(78.3%和87.0%)高于非TNBC(66.7%和84.5%),但差异均无统计学意义(P>0.05),TopoⅡ的表达率比较差异有统计学意义(91.3%和71.4%,P<0.05);TNBC中三者的表达与患者年龄、肿瘤大小、病理学类型及分级、脉管侵犯均无相关(P>0.05);VEGF与淋巴结转移相关(P<0.05),而COX-2、TopoⅡ却无相关(P>0.05);COX-2、VEGF和TopoⅡ相互之间均相关(P<0.05).结论 TNBC中TopoⅡ明显高表达;VEGF表达与淋巴结转移有关;COX-2、VEGF、TopoⅡ之间的表达呈明显相关,可能共同参与TNBC的发病过程和临床转归.
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微小RNA-30a在乳腺癌组织中的表达及其临床意义
目的 探讨微小RNA(miRNA,miR)-30a在乳腺癌组织中的表达及其临床意义.方法 搜集46例具有完整临床病理资料及5年以上随访资料的石蜡包埋乳腺癌组织及其配对癌旁组织的病例.抽提总RNA,采用实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)技术检测miR-30a在乳腺癌及其癌旁组织中的表达水平,并分析其与临床病理特征和患者预后的关系.结果 36例癌组织中miR-30 mRNA的相对表达水平为4.22±6.37,显著低于配对癌旁组织中miR-30a的表达(12.36±23.77,P<0.01).乳腺癌组织中的miR-30a表达水平下调与肿瘤大小、TNM分期、淋巴结转移、雌激素受体(ER)以及孕激素受体(PR)表达明显相关(P<0.05).Kaplan-Meier生存分析表明,miR-30a高表达组平均生存时间为92个月[95%可信区间(CI):87 ~ 109],低表达组平均生存时间为70个月(95% CI:57 ~ 83),两组差异有统计学意义(x2=8.092,P<0.01).Cox回归分析表明miR-30a低表达是乳腺癌预后不良的独立指标[风险比(HR)=4.07,95% CI:2.89~ 5.26,P<0.05].结论 miR-30a在乳腺癌组织中表达下调,与乳腺癌患者预后不良相关.
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结直肠癌易感性与p53和p73基因多态性的关系
癌基因和抑癌基因的突变被认为是肿瘤发生的原因之一.p53和p73具有细胞周期调控功能,是重要的抑癌基因[1].本研究旨在探讨其基因多态性和结直肠癌易感性的关系.一、材料与方法收集病理学诊断明确的结直肠癌患者为研究对象,并收集同期非肿瘤患者作为对照.吸烟者和饮酒者按照世界卫生组织(WHO)建议定义.酚-氯仿法提取静脉血DNA,应用TaqMan(R)RT-PCR进行p53 Arg72Pro和p73 4G14C→A4T14基因多态性检测,并应用SPSS 16.0进行统计分析.
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鞘氨醇激酶-1在急性胰腺炎中的变化
目的 观察人外周血白细胞中鞘氨醇激酶-1(SphK1)在急性胰腺炎(AP)的炎性反应中的作用.方法 选取30例AP患者,分为轻型急性胰腺炎(MAP)组17例和重型急性胰腺炎(SAP)组13例,另外纳入10例健康者作为健康对照组.在AP症状发生48、72 h 、5、7 d时分别检测血清肿瘤坏死因子(TNF)-α和白细胞介素(IL)-6、外周血白细胞中SphK1 mRNA水平及其活性.结果 在48、72 h、5 d时,外周血白细胞中SphK1 mRNA及其活性均呈健康对照组<MAP组<SAP组(3组SphK1 mRNA的相对表达量:48 h:0.888±0.724、2.807±1.542、6.433±1.955;72 h:0.842±0.434、2.523±1.460、4.857±1.870;5 d:0.751±0.329、2.335±1.469、3.791±1.851; SphK1的活性:48 h:0.051 ±0.024、0.132 ±0.070、0.303±0.102;72 h:0.049 ±0.023、0.112±0.061、0.223 ±0.092;5 d:0.050 ±0.019、0.115 ±0.072、0.191±0.106,P <0.05);而且在48、72 h、5 d时,血清TNF-α、IL-6含量均呈健康对照组< MAP组<SAP组[TNF-α(ng/L):48 h:4.72±1.69、17.48 ± 10.74、50.79±15.44;72 h:3.67 ±1.84、18.73 ±12.12、40.64±13.28;5 d:4.44 ±2.13、17.31±10.33、33.37±14.96;IL-6(ng/L):48 h:6.9±1.9、85.9±37.9、182.8±48.6;72 h:5.5 ±2.4、64.5 ±42.9、138.0±32.0;5 d:6.6±2.8、60.5 ±32.1、94.4 ±30.9,P<0.05],这与外周血白细胞中SphK1的表达有相同的变化趋势.结论 SphK1的激活可能与AP的炎性反应密切相关.
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穿支皮瓣游离移植术后静脉危象早期组织因子和组织因子途径抑制物的变化及其意义
我们通过检测穿支皮瓣游离移植术后发生静脉危象前后不同时段组织因子(TF)、组织因子途径抑制物(TFPI)浓度变化,旨在探讨TF、TFPI能否应用于穿支皮瓣移植术后静脉危象的早期诊断.一、材料与方法1.材料:4月龄新西兰大耳白兔30只,均由中南大学动物实验部提供.实验过程中对兔的处置严格按照动物医学伦理学标准.2.动物模型制备:所有兔随机分为实验组和对照组,每组15只,均构建腹壁浅动脉穿支皮瓣游离移植模型.其中实验组在腹壁浅动脉穿支皮瓣游离移植成功后予以结扎静脉以阻断皮瓣静脉回流造成静脉危象,对照组游离腹壁浅动脉穿支皮瓣移植术后不进行静脉结扎.术后观察兔的生命体征及皮瓣的变化.
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Kappa-肌动蛋白与细胞核增殖抗原在舌肿瘤组织中表达的相关性
目的 探讨Kappa-肌动蛋白(Kappa-actin)与细胞核增殖抗原(Ki-67)在舌肿瘤组织中表达的相关性及其意义.方法 应用免疫组织化学法分别检测80例舌癌组织中Kappa-actin与Ki-67的表达,探讨其表达的相关性,分析Kappa-actin表达与临床病理特征的关系.结果 Kappa-actin及Ki-67在舌癌组织中的高表达率分别为62.5%、78.8%,两者表达呈正相关(P<0.05).同时,Kappa-actin表达与肿瘤的分化程度、分期及淋巴结转移密切相关(P<0.05),而与年龄、性别及肿瘤大小无相关(P>0.05).结论 Kappa-actin参与舌癌进展过程,其表达与Ki-67表达呈正相关.
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应用微阵列比较基因组杂交技术分析罕见甲状腺弥漫硬化变异型乳头状癌与典型乳头状癌的染色体变异
目的 比较甲状腺弥漫硬化变异型乳头状癌与典型的甲状腺乳头状癌之间染色体水平的差异.方法 选取罕见甲状腺弥漫硬化变异型乳头状癌患者组织样本和典型甲状腺乳头状癌患者组织样本,应用微阵列比较基因组杂交技术观察其染色体异常.结果 甲状腺弥漫硬化变异型乳头状癌无染色体异常变化,而典型甲状腺乳头状癌检测发现1q21.1~q44存在重复变异,9q21.11 ~ q34.13和22q11.21 ~q13.33存在缺失变异.结论 甲状腺弥漫硬化变异型乳头状癌与甲状腺乳头状癌在染色体水平上存在着不同的改变.临床病理诊断结果为同种但不同类的甲状腺肿瘤疾病,在分子水平的检测结果不同.
关键词: 甲状腺乳头状癌 微阵列比较基因组杂交 -
椎间盘镜与开放手术治疗腰椎间盘突出症疗效Meta分析
目的 系统评价椎间盘镜与开放手术治疗腰椎间盘突出症的疗效与安全性.方法 对2004年1月至2014年1月中文科技期刊数据库(VIP)、万方数据库、中国知网、PubMed Central(PMC)数据库中相关文献进行电子检索以及手工检索,纳入椎间盘镜与开放手术治疗腰椎间盘突出症的随机对照试验,根据Jadad评分标准评价纳入研究项目的质量.采用RevMan 5.2统计软件进行Meta分析.结果 共纳入12个随机对照试验,合计1 338例患者,其中椎间盘镜组672例,开放手术组666例.Meta分析显示:椎间盘镜与开放手术比较,前者平均手术时间多于后者(P<0.01),术中出血量及平均住院天数少于后者(P<0.01),术后腰腿痛视觉模拟评分(VAS)明显优于后者(P<0.01),两组总有效率、术后肌酸磷酸激酶(CPK)水平、术后功能障碍指数(ODI)差异无统计学意义(P>0.05).结论 椎间盘镜与开放手术治疗腰椎间盘突出症都取得了良好疗效,在术中出血量、平均住院天数、术后腰腿痛改善方面椎间盘镜优于后者,但手术时间长于后者,总体疗效并无显著差异.
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基质金属蛋白酶-9在前列腺癌组织中的表达及其临床意义
目的 探讨基质金属蛋白酶(MMP)-9在前列腺癌(PCa)组织中的表达及其临床意义.方法 采用免疫组织化学方法检测60例前列腺疾病患者组织中MMP-9的表达,60例患者中PCa 30例:Ⅰ期4例,Ⅱ期13例,Ⅲ期10例,Ⅳ期3例,良性前列腺增生(BPH) 30例.对PCa组织切片进行TNM分期,观察.结果 MMP-9在PCa组中阳性率为63.3% (19/30),BPH组为13.3%(4/30),两者差异有统计学意义(P <0.05);MMP-9阳性表达与PCa临床分期明显相关.转移组(Ⅲ+Ⅳ期)MMP-9阳性率为76.9%(10/13),非转移组(Ⅰ+Ⅱ期)为52.9%(9/17),两者差异有统计学意义(P<0.01).MMP-9阳性表达与肿瘤转移有相关.结论 MMP-9阳性表达提示患者预后差,可作为判断PCa浸润转移的指标.
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降钙素原检测判断普通外科感染的临床研究
目的 观察普通外科感染、非感染性全身炎症反应综合征(SIRS)及手术病例血清降钙素原(PCT)的变化,探讨降钙素原在判断普通外科感染病例中的价值.方法 266例普通外科患者,分为3组:手术组、非感染性SIRS组、感染组.动态观察(入院日、治疗后第1、3、7天)血清PCT水平,比较3组PCT的动态变化和3组间的差异.结果 感染组入院日的PCT水平[(6.65±4.23) μg/L]明显升高,感染控制后恢复[(0.43 ±0.47) μg/L],非感染性SIRS组轻度升高[(0.76±0.49) μg/L],手术组入院时正常[(0.14±0.31)μg/L]仅在术后轻度升高[(1.87±0.45)μg/L],3d后恢复[(0.20 ±0.14)μg/L].入院日PCT 3组比较差异有统计学意义(P<0.01).结论 PCT可以作为判断普通外科感染性SIRS和非感染性SIRS的敏感且特异的指标.
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高迁移率族蛋白B1和p53在胆囊癌组织的表达及意义
目的 探讨高迁移率族蛋白B1(HMGB1)和p53在胆囊癌组织中的表达及意义.方法 应用免疫组织化学的方法测定HMGB1及p53在30例胆囊癌及30例胆囊良性病变组织中的表达,来探讨HMGB1及p53和胆囊癌生物学特性之间的关系.结果 HMGB1和p53在胆囊癌组中的阳性表达率分别为83.3%(25/30)和76.7%(23/30),显著高于其在胆囊良性病变的阳性表达率(分别为16.7%、13.3%,P<0.05).HMGB1和p53在胆囊癌组中的阳性表达与胆囊癌患者的性别、年龄及病理组织学类型无相关(P>0.05),而与胆囊癌的临床分期和分化程度明显相关(P<0.05).HMGB1和p53在胆囊癌组中的阳性表达明显相关(r=0.526,P<0.05).结论 HMGB1和p53在胆囊癌中呈高表达.HMGB1和p53在胆囊癌的发生、发展和侵袭中共同发挥作用.
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大鼠骨髓和脂肪来源间充质干细胞的生物活性比较
骨髓间质干细胞(MDSCs)、脂肪间质干细胞(ADSCs)是目前研究比较热门的间充质干细胞(MSCs).本研究旨在探讨此两种干细胞在生物学特性的差异.一、材料与方法1.材料:健康6周龄SD大鼠10只,供分离MDSCs、ADSCs;胎牛血清购自Gibco公司;Ⅳ型胶原酶购自Sigma公司.2.细胞分离:(1) MDSCs的分离、培养:骨髓与PBS缓冲液充分混匀,离心,沉积的细胞用含10%胎牛血清的培养液培养,每2~3d换液1次.(2) ADSCs的分离、培养:脂肪组织充分剪碎后;加入分离液,离心,沉积的细胞用含10%胎牛血清的培养液培养,每2~3d换液1次.3.细胞形态学观察:显微镜下观察MSCs的形态、生长情况.
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窖蛋白-1和RhoE在肝癌癌变过程中表达及其临床意义
目的 探讨窖蛋白-1(Caveolin-1)和RhoE在原发性肝癌(PLC)癌变过程中表达及其临床意义.方法 采用免疫组织化学法检测20例正常肝组织、32例肝硬化组织和68例PLC组织中Caveolin-1和RhoE表达水平.结果 Caveolin-1在正常肝组织、肝硬化组织和PLC组织中的表达率分别为85.00% (17/20)、56.25% (18/32)和27.94%(19/68),两两比较差异有统计学意义(P<0.05),Caveolin-1表达水平与PLC癌细胞分化程度、血管浸润明显相关(P<0.05);RhoE蛋白在正常肝组织、肝硬化组织和PLC组织中的表达率分别为95.00%(19/20)、71.88%(23/32)和50.00%(34/68),两两比较差异有统计学意义(P <0.01);RhoE表达水平与PLC肿瘤大小、血管浸润、TNM分期明显相关(P<0.05).结论 Caveolin-1和RhoE在肝癌病变发展过程中起重要作用.
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椎体压缩骨折术后椎体稳定性的影响因素
椎体骨折通常是由于老年人的骨质疏松而引起[1-13].骨质疏松型椎体压缩骨折在当今人口老龄化日益严重的年代越来越常见,伴随而来的是疼痛、活动受限、椎体的塌陷畸形以及一系列长期卧床引发的并发症[14-15,妥善地解决这一问题早已成为课题,其中椎体成形术(VP)及椎体后凸成形术(KP)作为治疗椎体压缩骨折的有效方法[1-7,[10-11,13-14,16-23],已被全世界广泛应用.为减少术后并发症,改善患者术后生活质量,各种关于手术操作、骨水泥材质及作用机制的研究正在进行中.
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E2F-1及其相关分子在食管癌中的作用
E2F家族由8个E2F基因(E2F-1 ~8)及3个DP基因(DP1、DP2/3、DP4)组成.E2Fs基因根据其保守序列和转录活性的不同分为不同亚组.E2Fs家族成员既是转录激活因子同时也可作为转录抑制因子,以往研究报道E2F-1~3可转录激活与细胞周期进程及核苷酸合成相关的基因,如细胞分裂周期蛋白6(CDC6)、细胞周期素(Cyclin)E和二氢叶酸还原酶;E2F-4 ~6可抑制其他E2F基因的表达.然而,近年来研究表明E2F基因究竟发挥转录激活还是转录抑制的作用,取决于细胞所处的环境以及下游靶基因.
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转化生长因子-β与调节性T细胞在肿瘤中的相互作用及意义
肿瘤的发生与机体免疫稳态密切相关,肿瘤免疫逃逸常通过参与肿瘤的发生、增殖与浸润而造成机体对恶性肿瘤无应答或低应答反应.肿瘤微环境中存在多种具有抑制免疫功能的细胞及细胞因子,抑制体内效应细胞的抗肿瘤活性[1].其中调节性T细胞(Treg)与转化生长因子(TGF-β)在肿瘤的发生、发展中起重要调节作用[2].控制Treg产生与其他肿瘤疗法相结合以提高抗肿瘤效应,研究Treg与TGF-β的关系将为肿瘤免疫治疗提供新策略.
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髓源性抑制细胞的基础研究及其意义
髓源性抑制细胞(MDSC)是在肿瘤、炎症和感染过程中存在的一群未成熟的异质性细胞群,可抑制T细胞应答并参与免疫逃逸和免疫耐受等过程[1].研究MDSC的起源、表型、生物学功能及机制对疾病的诊断与治疗有着重要的意义.一、髓源性抑制细胞的生物学功能MDSC是具有潜在免疫抑制活性的未成熟骨髓细胞(IMC),且还可分化为成熟的骨髓细胞,并在外围淋巴器官内聚积.MDSC可分为粒细胞样MDSC(G-MDSC)和单核细胞样MDSC(M-MDSC)两种类型.在小鼠中,G-MDSC的表型为CD11b+ Ly6G+ Ly6Clow,并与中性粒细胞一致,M-MDSC的表型为CD11b+ Ly6G-Ly6Clow,且与炎性单核细胞相同[2].
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腺苷-利多卡因停搏液对在体犬冠状动脉血管内皮细胞的保护作用
目的 观察一氧化氮(NO)、内皮素(ET)和循环内皮细胞(CEC)水平变化以及冠状动脉(简称冠脉)舒缩功能变化,探讨腺苷-利多卡因停搏液对在体犬冠脉血管内皮细胞的保护作用及其机制.方法 12条杂种犬随机分为实验组腺苷-利多卡因停搏液(AL组,n=6)和对照组-ST.thomasⅡ停搏液(K组,n=6).测定术前(T1)、心脏复跳后1 h(T2)和复跳后2h(T3)NO、ET和CEC水平变化,观察冠脉血管舒张功能变化,并进行电镜下超微结构分析.结果 两组术前基础值差异无统计学意义(P>0.05).T3时K组血浆中NO含量较AL组明显减少(P<0.05),ET水平明显升高(P<0.05),CEC数目明显增多(P<0.05).K组冠脉血管舒张大百分比为(29.13±8.24)%,低于AL组的(68.52±11.32)% (P <0.01).电镜结果提示,K组冠脉内皮细胞结构损伤较AL组更严重.结论 腺苷-利多卡因停搏液对犬冠脉血管内皮细胞保护效果优于ST.thomasⅡ停搏液.
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建立猪脑死亡后心脏死亡模型实验研究中的麻醉管理
目的 建立猪脑死亡后心脏死亡模型的麻醉相关技术及管理方法,为脑死亡后心脏死亡供体质量的研究提供实验基础.方法 巴马小型猪20头,基础麻醉后建立耳缘静脉通路,连接心电监护,氯胺酮和琥珀胆碱静脉诱导麻醉,面罩吸氧后气管内插管,机控呼吸,术中以七氟烷、芬太尼、维库溴铵维持麻醉.直视下经左颈总动脉、左颈内静脉及右侧颈外静脉穿刺置管,连续监测,建立脑死亡模型并证实脑死亡后建立心脏死亡模型.结果 成功建立猪脑死亡模型和心脏死亡模型,优化诱导插管方法,仅有1例气管插管失败改为气管切开.麻醉维持稳定,血流动力学平稳,肌肉松弛良好.结论 麻醉效果良好,麻醉方法可行性强,用药合理,保证脑死亡和心脏死亡模型的顺利建立.
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重组腺相关病毒对内皮细胞增殖和凋亡的影响
目的 通过重组9型腺相关病毒(rAAV9)载体介导R65核酶基因对体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs)进行转染,观察R65核酶基因表达对高脂血清刺激后HUVECs增殖和凋亡的影响.方法 体外培养HUVECs,高脂血清诱导建立动脉粥样硬化内皮损伤模型,重组rAAV9介导抗核因子(NF)-κB核酶基因(rAAV9-R65)腺相关病毒载体转染HUVECs.实验分为3组:(1)正常对照组;(2)高脂血清诱导组;(3)高脂血清诱导+病毒转染组.通过Western blot检测HUVECs细胞中p65核蛋白的表达;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测NF-κB信号通路下游肿瘤坏死因子(TNF)-α和白细胞介素(IL)-6的变化;Alamar Blue法检测rAAV9-R65转染后HUVECs的体外增殖;rAAV9-R65转染细胞96 h后流式细胞仪检测高脂血清刺激后HUVECs凋亡率的变化.结果 高脂血清诱导HUVECs 24 h后,细胞由卵圆形铺路石样逐渐变成类圆形,Western blot检测显示p65的表达水平分别为:空白组:0.0229 ±0.0024;高脂血清诱导组:0.224 3±0.008 6;rAAV9-R65转染+高脂血清诱导组:0.071 4 ±0.007 0.HUVECs细胞中高脂血清诱导后p65蛋白表达明显增高,而病毒转染后p65水平降低.ELISA检测结果显示HUVEC分泌的TNF-α水平3组分别为:15.98 ±0.43、27.94±0.83、19.73±0.43.而3组IL-6水平分别为:3.94 ±0.12、6.32 ±0.21、5.08 ±0.12.高脂血清诱导后TNF-α和IL-6的分泌显著高于空白组,而rAAV9-R65干预+高脂血清诱导后TNF-α和IL-6的浓度明显降低.Alamar blue法检测显示R65基因表达能明显减轻高脂血清刺激后HUVECs的增殖抑制.流式细胞术检测显示与空白组比较,高脂血清诱导后细胞早期凋亡比率为20.4%,晚期凋亡比率为4.7%;而rAAV9-R65转染+高脂血清诱导组早期凋亡比率降至7.2%,晚期凋亡比率降为2.9%,证明R65表达可明显减轻高脂血清刺激后HUVECs的凋亡.结论 R65基因表达能有效减轻高脂血清刺激后HUVECs的增殖抑制,并能抑制高脂血清诱导的HUVECs凋亡.
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黑皮质素受体4基因在肺癌中的表达及其临床意义
目的 观察人肺癌组织中黑皮素受体4(MC4R)基因的表达.方法 应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测15例肺癌及其癌旁组织中MC4R mRNA的相对表达量,并采用Western blot法检测上述组织中MC4R蛋白表达.结果 80.0% (12/15)的肺癌组织中MC4R mRNA和蛋白表达上调,而癌旁组织中26.7% (4/15)该基因表达上调和蛋白表达增加,两者差异有统计学意义(P<0.05).结论 肺癌组织中MC4R表达处于上调状态,可能在肺癌的发生、发展过程中发挥重要作用.
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精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸肽/肝素复合涂层在钛表面改性的研究
目的 利用层层自组装技术,在钛表面构建精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(RGD)肽/肝素复合涂层,提高其血液相容性,探讨该技术在人工材料表面改性领域的应用前景.方法 采用层层自组装技术,在预处理的钛试件表面构建RGD肽/肝素复合涂层;对钛表面涂层进行物理表征分析,评价其体内外血液相容性.结果 RGD肽/肝素复合涂层的体外溶血率为0.76%,该涂层可延长部分活化凝血酶原时间到(24.5±0.6)s,减少纤维蛋白原的吸附,减少血小板的黏附与激活,体内动物实验证实该涂层可减少表面血栓形成.结论 利用层层自组装技术形成的RGD肽/肝素复合涂层血液相容性高,有望成为一种新型的生物化钛表面.
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T1aN0M0期浸润性肺腺癌术后复发的危险因素分析
目的 探讨完整切除的病理分期为T1aN0M0的肺腺癌术后复发的危险因素.方法 分析177例接受肺叶切除的T1aN0M0浸润性肺腺癌病例,根据国际肺腺癌新病理分型系统(IASLC/ATS/ERS)进行重新分型.分析年龄、性别、吸烟史、淋巴血管浸润(LVI)、新病理分型与无复发生存(RFS)率的关系,统计学分析使用Log-rank检验和Cox回归.结果 总体5年无复发生存率为83.7%.LVI和新病理分型与5年无复发生存率有相关(P<0.05).低危组中的乳头状、鳞屑样、腺泡样为主型的预后显著优于高危组中的混合乳头状、实性和微乳头状为主型.男性患者中高危组的患者更多[校正比值比(OR):2.214,95%可信区间(CI):1.050 ~4.668,P<0.05],且LVI有相对更多的趋势(校正OR:2.091,95% CI:0.938 ~4.662,P>0.05).结论 IASLC/ATS/ERS新病理分型中的实性和微乳头状为主型是T1aN0M0期肺腺癌术后复发的唯一危险因素,提示这类肿瘤的生物学行为更具侵袭性.
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参麦注射液在心脏不停跳手术中的肺保护作用
目的 观察参麦注射液在心脏不停跳手术中的肺保护作用.方法 60例风湿性心脏病需行二尖瓣置换术患者随机分为对照组(A组)和参麦治疗组(B组)各30例.在预充液中,B组按0.6 ml/kg中加入参麦注射液,A组加入等量的生理盐水.分别在术前、转机30 min、停机、术毕、术后24、72 h共6个时间点测定血浆中白细胞介素(IL)-6和IL-8的含量;同时,在术前、停机、停机后1h、术毕共4个时点记录患者的气道峰压、潮气量,并做动脉血气分析,计算出动态肺顺应性、肺泡-动脉血氧分压差及氧合指数.结果 两组患者血浆中IL-6、IL-8含量均随手术及体外循环时间的延长而逐渐增高,均在手术完毕时达高峰,术后24 h开始下降,但升高的幅度B组低于A组.IL-6为(7.35±1.63)ng/L比(7.20±1.85) ng/L、(50.21±14.76) ng/L比(58.76±16.82) ng/L、(110.53 ±.15.74) ng/L比(145.71 ±18.52) ng/L、(175.94±24.51) ng/L比(228.51 ±27.85) ng/L、(30.68±4.59) ng/L比(55.92±7.42) ng/L、(9.13±1.83) ng/L比(8.79 ±2.64) ng/L(P <0.01);IL8为(6.52±0.98) ng/L比(5.43 ±0.75) ng/L、(78.38 ±12.57) ng/L比(80.25 ±18.46) ng/L、(121.84±25.43) ng/L比(158.79 ±30.62) ng/L、(249.25 ±41.92) ng/L比(351.83 ±34.51) ng/L、(40.25 ±8.79) ng/L比(72.35±10.58) ng/L、(6.02±1.76) ng/L比(5.83 ±2.53) ng/L(P<0.01).两组的气道峰压、肺泡-动脉血氧分压差从开始手术后均升高,动态肺顺应性、氧合指数从开始手术后均下降,但B组结果好于A组.气道峰压为(14.7 ±0.6)cmH2O(1 cmH2O =0.098 kPa)比(15.1±0.7)cmiH2O、(15.9±0.5)cmH2O比(18.2 ±0.8)cmH2O、(18.8±0.9)cmH2O比(20.9±1.3) cmH2O、(21.3±1.0) cmH2O比(24.7±1.1) cmH2O,(P<0.01);肺泡-动脉血氧分压差为(90.5±8.0) mmHg(1 mmHg =0.133 kPa)比(91.5±10.7)mmHg、(109.5±7.0)mmHg比(117.9±12.8)mmHg、(125.4±8.7)mmHg比(135.2±13.1) mmHg、(134.0±9.0)mmHg比(152.6±12.3)mmHg(P <0.01);动态肺顺应性为(35.3 ±5.0) ml/cmH2O比(35.1±6.0)ml/cmH2O、(33.6±4.3) ml/cmH2O比(29.5±4.2) ml/cmH2O、(28.8±4.6)ml/cmH2O比(23.7±3.7) ml/cmH2O、(23.4 ±4.1)ml/cmH2O比(20.3±3.1) ml/cmH2O,(P<0.01);氧合指数为509.4±15.9比507.5±14.8、502.3±12.6比479.5±19.3、471.5±13.7比451.1±17.2、445.9±15.4比429.4±15.7 (P<0.01).结论 参麦注射液具有清除体内过量氧自由基及减少炎性因子生成、减轻全身炎性反应及肺组织损伤的作用,从而在体外循环中起到肺保护作用.
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长链非编码RNA HOTAIR对食管鳞癌细胞EC9706恶性生物学行为的影响
目的 观察长链非编码RNA HOTAIR(LncRNA HOTAIR)对食管鳞癌细胞EC9706恶性生物学行为的影响.方法 应用小干扰RNA(siRNA)干扰LncRNA HOTAIR表达,分别以噻唑蓝(MTT)法、流式细胞术、Transwell侵袭实验检测LncRNA HOTAIR对EC9706细胞增殖、凋亡及侵袭的影响.结果 LncRNA HOTAIR转染72 h后,EC9706细胞生长抑制率为(45.35±3.25)%;转染24 h后,细胞凋亡率为(37.80±2.56)%;转染72 h后,侵袭抑制率为(51.6±4.8)%,与对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.01).结论 LncRNA HOTAIR可能与食管鳞癌细胞的增殖、凋亡及侵袭等生物学行为密切相关.
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微管不稳定蛋白和肽基脯氨酰顺反异构酶在非小细胞肺癌组织中的表达及临床意义
目的 探讨微管不稳定蛋白(Stathmin)和肽基脯氨酰顺反异构酶(Pin1)在非小细胞肺癌组织中的表达及其与临床病理特征的关系.方法 采用免疫组织化学法检测76例非小细胞肺癌组织和癌旁组织中Stathmin和Pin1的表达水平.结果 Stathmin在非小细胞肺癌组织中的表达率为65.79%(50/76),在癌旁组织中表达率为34.21% (26/76),两者比较差异有统计学意义(P<0.01),Stathmin表达水平与非小细胞肺癌组织学分化程度、TNM分期、淋巴结转移明显相关(P <0.05);Pin1在非小细胞肺癌组织中的表达率为84.21% (64/76),在癌旁组织中表达率为27.63%(21/76),两者差异有统计学意义(P<0.01),Pin1表达水平与非小细胞肺癌TNM分期、淋巴结转移明显相关(P<0.05).结论 Stathmin和Pin1的表达在非小细胞肺癌的发生、发展过程中起重要作用.
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体外双循环下缺氧预处理对犬心肌的保护作用
目的 观察在体全心脏实施缺氧预处理的心肌保护效果.方法 选用健康比格犬随机分为空白对照组(C组,n=8)与缺氧预处理组(HPC组,n=8),分别在全身麻醉下开胸建立双体外循环(体循环+冠脉循环)模型,HPC组通过冠脉体外循环对在体全心脏实施缺氧预处理(缺氧3 min,复氧5 min,重复3次),C组不实施缺氧预处理;两组均实施冷灌注使心脏停搏,体外循环60 min后观察犬复跳成功率、心律失常发生率以及除颤次数等临床表现;复跳后30 min结扎冠状动脉的左前降支主干中下1/3,60 min后观察心肌梗死的面积,并取标本做电镜分析;在T1(术前)、T2(体外循环开始前)、T3(复跳后即刻)、T4(缝扎冠状动脉的左前降支30 min后)分别检测肌钙蛋白水平和心肌酶谱;并观察两组间心脏舒缩功能和心肌超微结构的影响.结果 HPC组在T3时点心肌酶谱水平高于C组(P<0.05),但在T4时点HPC组的心肌酶谱和肌钙蛋白均显著低于C组(P<0.05);HPC组在一次性复跳率和除颤例数数上均有显著低于空白对照组(7/8比4/8、1/8比5/8,P<0.05),HPC组心梗面积显著低于C组[(15.37±1.64)%比(29.77±3.38)%,P<0.05],电镜显示HPC组线粒体结构的损害及心肌细胞水肿的程度轻于C组.结论 在体全心脏缺氧预处理对于心肌细胞有显著的保护作用,能够提高心肌细胞对缺氧的耐受能力.
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右美托咪定预处理对猪心肌缺血再灌注损伤的影响
目的 观察右美托咪定预处理对猪心肌缺血再灌注损伤的保护作用.方法 小型猪20头,体质量25 ~ 35 kg,雌雄不限.随机分为两组:右美托咪定预处理组(Dex组)、对照组(C组),每组10头.肌肉注射氯胺酮及咪达唑仑麻醉后,行气管切开,机械控制通气,七氟烷维持麻醉.Dex组同时静脉注射负荷量右美托咪定0.5μg/kg,随后持续泵入0.5μg/(kg·h)维持至冠状动脉阻断前,对照组注射等容量生理盐水.开胸暴露心脏后,于冠状动脉前降支中下1/3处阻断30 min,再灌注时间为60 min.阻断前后不同时间点记录平均动脉压(MAP)、心率(HR)、中心静脉压(CVP).分别于开胸前、阻断后30 min、再灌注后30、60 min抽取颈内静脉血4ml,酶联免疫吸附法测定猪血清心肌肌钙蛋白I (cTnI)、肌酸激酶心肌型同工酶(CK-MB)浓度.心肌缺血再灌注20 min进行心律失常评分.再灌注结束后,重新阻断冠状动脉前降支,伊文氏蓝染色,计算心肌梗死面积(IS%).结果 再灌注30 min和再灌注60 min时C组的CK-MB及cTnI高于D组(P<0.05).C组和D组再灌注20 min心律失常评分分别为(3.300 ±0.675)和(2.000 ±0.677)分,组间比较差异有统计学意义(P<0.05).C组的IS%(42.4%)高于D组(23.5%,P<0.05).结论 Dex预处理可减轻猪心肌缺血再灌注损伤,具有心肌保护作用.
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不同品系间小鼠腹部异位心脏移植模型的建立和比较
目的 建立小鼠腹部同种异体心脏移植模型,并且探讨不同品系小鼠间移植手术的难易程度以及存活时间的差异.方法 BALB/c和CBA雄性小鼠各40只,C57BL/6j雄性小鼠80只,分为同品系间(BALB/c→BALB/c;CBA→CBA;C57 BL/6j→C57 BL/6j)和不同品系间(BALB/c→C57BL/6j;C57BL/6j→BALB/c;C57BL/6j→CBA;CBA→C57 BL/6j)采用Ono术式进行小鼠腹部异位心脏移植,术后观察移植心存活时间并进行病理检查.结果 手术成功率达88.6%.平均取心时间4.8 min,同品系间血管吻合时间分别为(28.70±3.56) min(BALB/c→BALB/c)、(20.70±4.22) min(CBA→CBA)和(27.90±2.51) min(C57BL/6j→C57BL/6j).而不同品系间血管吻合时间分别为(28.00±2.71) min(BALB/c→C57BL/6j)、(22.10±4.33) min(C57BL/6j→CBA)、(29.90±3.14) min(C57 BL/6j→BALB/c)和(30.33 ± 23.00) min(CBA→C57BL/6j).同品系间移植心平均存活时间均超过100d,而不同品系间分别为(7.10±0.74) d(C57BL/6j→BALB/c)、(7.40±0.82) d(BALB/c→C57 BL/6j)、(8.90±1.10) d(C57BL/6j→CBA)和(8.50±0.85) d(CBA→C57BL/6j).同品系间移植心在术后7d的病理检查显示心肌结构良好.而不同品系间移植心在排异后发现大量淋巴细胞浸润,尤其在BALB/c和C57BL/6j互为移植中.结论 建立小鼠心脏移植模型需要掌握显微外科技巧.同品系间心移植中以CBA→CBA相对简单,可作为练习用.C57BL/6j→BALB/c的免疫反应强烈,而C57BL/6j→CBA免疫反应相对弱,因此可用于不同的免疫抑制药物研究.
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重组慢病毒介导RNA干扰抑制DNA依赖蛋白激酶催化亚基表达对肺癌细胞中C225诱导表皮生长因子受体核转位及敏感性的影响
目的 构建人DNA依赖蛋白激酶催化亚基(DNA-PKcs)基因RNA干扰慢病毒载体,观察在非小细胞肺癌细胞株中沉默DNA-PKcs对C225诱导的表皮生长因子受体(EGFR)核转位及C225抑制细胞增殖的影响.方法 构建慢病毒干扰载体(LV-si-DNA-PKcs)感染A549细胞.荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测DNA-PKcs mRNA表达;Western blot检测DNA-PKcs和细胞核EGFR蛋白的表达.细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测C225对细胞的增殖抑制作用.结果 LV-si-DNA-PKcs感染的A549细胞见绿色荧光,感染率达95%以上;LV-si-DNA-PKcs有效干扰DNA-PKcs蛋白及mRNA表达水平(P<0.05).加C225前未见细胞核EGFR表达.C225处理1h,LV-si-DNA-PKcs细胞株见细胞核EGFR表达,持续用药4、24 h细胞核EGFR表达无明显增加;在LV-si-control细胞株及空白组,C225处理1、4、24h后细胞核EGFR表达逐渐增多.C225处理48 h后,LV-si-DNA-PKcs细胞株的细胞存活率开始低于其他2组细胞,72 h细胞存活率明显降低[(40.04±2.89)%比(55.82±7.11)%、(52.67±1.43)%,F=9.392,P<0.01].结论 抑制A549细胞中DNA-PKcs表达,在一定程度上抑制了C225诱导的EGFR细胞核转位,增强C225对细胞的增殖抑制作用.
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磷酸果糖激酶4在肺癌组织中的表达及其临床意义
目的 探讨磷酸果糖激酶4(PFKFB4)在男性肺癌患者中的表达及预后意义.方法 免疫组织化学法检测90例男性肺癌组织及20例正常肺组织PFKFB4蛋白的表达,分析其表达与临床病理参数及患者预后的关系.结果 PFKFB4在肺癌组织中的阳性表达率明显高于正常肺组织(65.6%比0,P<0.05).PFKFB4在肺癌组织中的表达与吸烟史、淋巴结转移及TNM分期密切相关(P<0.05).Kaplan-Meier法显示PFKFB4高表达的中位生存期为24个月,明显低于低表达组(60个月),差异有统计学意义(P<0.05).多因素Cox回归分析显示PFKFB4表达可作为肺癌患者术后生存时间评估的独立因子(P<0.05).结论 PFKFB4在男性肺癌的发展中起重要作用,有助于肺癌患者的预后评估.
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利用脾细胞培养抗原特异性CD4+CD25+T细胞的研究
调节性T淋巴细胞(CD4+ CD25+Treg,Treg)对同种反应性T淋巴细胞具有强烈的抑制作用,抗原特异性Treg对特定抗原的免疫抑制作用明显加强.本研究旨在研究利用小鼠脾细胞培养抗原特异性Treg细胞.一、材料与方法1.抗原特异性Treg的培养与扩增:利用Milteny分选试剂盒及磁性分选器,无菌状态下取BALB/c小鼠的脾脏Treg.提取C57小鼠脾细胞,经丝裂霉素C灭活后与BALB/c小鼠Treg细胞(10∶1)于96孔培养板中混合培养,培养基选用RPMI 1640完全培养基,配以10%胎牛血清、白细胞介素(IL)-2 2000 U/ml、雷帕霉素100μmol/L,37℃、5% CO2、饱和湿度培养箱中培养14 d,第3、5、7、9、11天换液,第14天收集细胞.
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CD146对获得性Erlotinib耐药肺腺癌细胞上皮-间充质转化的影响
目的 探讨CD146对获得性Erlotinib耐药肺腺癌细胞上皮-间充质转化(EMT)的作用及机制.方法 采用不同浓度的Erlotinib作用于肺腺癌细胞株H1650,诱导其产生耐药(H1650ER);免疫荧光法及Western blot检测耐药前后上皮型钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、CD146的表达变化;小干扰RNA(siRNA)干扰H1650ER细胞中CD146的表达,利用Transwell侵袭小室及细胞计数试剂盒(CCK-8)实验分别评价肺腺癌细胞侵袭及增殖能力,Western blot 检测相关蛋白的表达变化.结果 获得性Erlotinib耐药肺腺癌细胞H1650ER中CD146及Vimentin 蛋白的表达量分别为0.474±0.013和0.465±0.012,显著高于耐药前(P<0.05);而E-cadherin蛋白的表达量为0.180±0.011,明显低于耐药前(P<0.05).CD146-siRNA干扰H1650ER细胞CD146的表达后可明显抑制其增殖能力,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);CD146-siRNA干扰后细胞侵袭力亦下降(P<0.05).结论 获得性Erlotinib耐药肺腺癌产生EMT并CD146表达显著上调;抑制CD146的表达可下降其侵袭及增殖能力.
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腺病毒介导S24F基因转染人脐静脉内皮细胞对调节活化正常T细胞表达和分泌因子趋化功能的影响
目的 观察腺病毒介导S24F基因转染人脐静脉内皮细胞(HUVECs)对调节活化正常T细胞表达和分泌因子(RANTES)趋化作用的影响.方法 构建pAV-MCMV/S24F-GFP-3 FLAG(Ad-S24F)腺病毒载体,将不含目的基因的病毒载体pAV-MCMV-GFP (Ad-Null)为阴性对照组.分离培养HUVECs后分别转染Ad-S24F和Ad-Null,另设不含腺病毒培养基为空白对照.转染后采用荧光显微镜及Western blot检测重组蛋白表达.采用Transwell小室法分析S24F对RANTES趋化作用的影响.结果 Ad-S24F及Ad-Null构建成功,转染HUVECs后荧光显微镜及Western blot能检测到重组蛋白表达,Ad-S24F转染后能够抑制RANTES诱导的外周血单个核细胞(PBMCs)穿透内皮[Ad-S24F:(9.20 ±0.02)%;Ad-Null:(17.70±0.02)%;空白对照组(15.10±0.01)%]的趋化作用.结论 腺病毒介导S24F基因转染HUVECs能够抑制RANTES的趋化作用.
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N2期肺癌术后早期复发与CXC趋化因子受体4表达的关系
目的 探讨CXC趋化因子受体4(CXCR4)的表达与N2期肺癌术后早期复发的关系.方法 采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测84例手术治疗的N2期非小细胞肺癌患者的癌组织中CXCR4mRNA的表达,应用x2检验比较CXCR4表达的差异.随访患者并分析N2期肺癌术后早期复发模式.应用Logistic回归分析判定N2期肺癌术后早期复发的独立相关因素.结果 CXCR4mRNA在60例(71.4%)肺癌组织中表达,与年龄、性别、肿瘤类型、分化程度、T分期均无相关(P>0.05).术后1年内39例(46.4%)患者肿瘤复发,以转移性复发为主(74.4%).CXCR4表达阳性患者复发率明显高于阴性患者(P<0.05).术后1年总体生存率为65.48%,CXCR4表达阳性患者无复发生存期显著低于阴性患者(P<0.05).Logistic回归分析结果显示,癌组织中CXCR4表达、未行术后辅助治疗是N2期肺癌术后早期复发的独立相关因素.结论 CXCR4在N2期肺癌组织中高表达,与术后早期复发密切相关;N2期肺癌患者术后早期复发模式主要为转移性复发.
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雷替曲塞对人胃癌细胞Livin基因表达的影响
我们应用雷替曲塞化疗药物作用于体外培养的人胃癌细胞SGC-7901,观察对增殖的抑制和对Livin基因表达的影响.一、材料与方法1.材料:胃腺癌细胞株SGC-7901购自上海艾研生物科技有限公司.雷替曲塞购自大连美仑生物技术有限公司;噻唑蓝(MTT)购自上海如吉生物科技有限公司;聚合酶链反应(PCR)引物由上海亚培生物科技公司合成;鼠抗人Livin单克隆抗体IMG347购自美国Imgenex公司;鼠抗人β-肌动蛋白(β-actin)单克隆抗体购自美国Sigma公司;PCR仪为美国MJ Research公司PTC-200型;蛋白电泳转印仪为美国Bio-Rad公司产品.
关键词: -
人核心结合因子基因P2启动子区报告基因载体的构建及鉴定
目的 构建含核心结合因子(RUNX2)基因P2启动子区的荧光素酶报告基因载体,在人主动脉瓣瓣膜间质细胞中检测其活性,并观察骨形态发生蛋白-7(BMP-7)对RUNX2启动子活性的影响.方法 以人基因组DNA为模板,利用聚合酶链反应(PCR)技术扩增人RUNX2基因P2启动子区域,扩增产物经Kpn Ⅰ和Nhe Ⅰ双酶切后插入到pGL3-Basic中,重组质粒pGL3-RUNX2-P2经测序正确后转染人主动脉瓣瓣膜间质细胞,并以BMP-7处理细胞,检测荧光素酶活性变化.结果 将RUNX2基因P2启动子区域1.5 kbp大小基因片段克隆入pGL3-Basic中,测序结果表明序列正确.转染pGL3-RUNX2-P2的瓣膜间质细胞中荧光素酶活性较转染空载体pGL3-Basic组明显增加(0.273±0.032比0.028±0.005,P<0.05).BMP-7可增强RUNX2启动活性(0.474±0.059比0.273±0.032,P<0.05).结论 成功构建含有人RUNX2基因P2启动子区的荧光素酶报告基因载体,BMP-7可通过增强RUNX2启动子活性调控其表达.
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博莱霉素诱导人肺泡上皮细胞过程中核转录因子-κB对核因子2相关因子2信号通路的调控机制
目的 观察人肺泡上皮细胞HPAEpiC中核转录因子-κB (NF-κB)基因沉默前后核因子2相关因子2(Nrf2)及其相关表达产物含量的变化,探讨博莱霉素诱导的过程中NF-κB对Nrf2信号通路的调控机制.方法 应用慢病毒技术沉默人肺泡上皮细胞HPAEpiC中的NF-κB基因,采用荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)技术检测博莱霉素诱导前后HPAEpiC细胞中的Nrf2、胞浆蛋白伴侣分子(Keap1)、Cullin3蛋白(Cul3)、Rbx1、蛋白激酶C(PKC)、磷酸肌醇3激酶(PI3K)、细胞外信号调节激酶(ERK)、NF-κB、κB抑制蛋白(IκB)的mRNA相对表达量,采用流式细胞术膜联蛋白V(Annexin V)-红色荧光蛋白(RFP)单染法检测各实验组的细胞凋亡率,采用Western blot检测NF-κB、Nrf2及其相关蛋白的表达量.结果 慢病毒感染HPAEpiC细胞后NF-κB基因表达下降90.6%,博莱霉素诱导后NF-κB沉默的人肺泡上皮细胞中Nrf2基因表达量上升142.6%,并与NF-κB、κB抑制蛋白(IκB)、Keap1、Cul3、Rbx1表达呈负相关,PI3K表达增加11.6倍而PKC、ERK无明显变化,其凋亡率与对照组比较增高.结论 在博莱霉素诱导的过程中,HPAEpiC细胞的NF-κB表达量增加可以抑制Nrf2的功能.在NF-κB被沉默的情况下,Nrf2通过PI3K途径并同时降低Keap1-Cu13-RBx1复合物表达实现活化,可能通过启动其下游的抗氧化反应,减少博莱霉素导致的氧自由基对细胞的损伤.
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叉状头/翅膀状螺旋转录因子在食管癌细胞中的表达及临床意义
目的 探讨叉状头/翅膀状螺旋转录因子(Foxp3)在食管癌细胞中的表达及临床意义.方法 采用免疫组织化学法检测103例食管癌患者肿瘤组织中Foxp3蛋白的表达,同时选用5例癌旁组织作为对照.通过对食管癌肿瘤细胞中Foxp3蛋白的表达水平进行H-score评分,并分析其临床意义.结果 免疫组织化学检测结果显示Foxp3蛋白在肿瘤浸润淋巴细胞及肿瘤细胞中主要表达在胞核,在癌旁组织中不表达;统计学分析显示,肿瘤细胞中Foxp3高表达(H-score≥70分)的患者中,肿瘤直径≥3.5 cm患者所占比率显著高于肿瘤细胞中Foxp3低表达(H-score< 70分)的患者,差异有统计学意义(x2 =4.267,P <0.05),而肿瘤细胞中Foxp3表达水平与患者其他临床参数无相关(P>0.05).结论 核转录因子Foxp3在食管癌组织中表达主要分布在浸润淋巴细胞及肿瘤细胞,肿瘤细胞表达Foxp3在肿瘤进展中有重要意义.
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维生素C-悬滴法诱导小鼠胚胎干细胞分化为心肌细胞
目的 利用维生素C作为诱导因子,采用悬滴法形成拟胚体,体外诱导小鼠胚胎干细胞分化为心肌细胞并检测其分化效率,同时确定这种诱导方法的佳维生素C浓度.方法 复苏小鼠胚胎干细胞,传代培养后,消化离心后重悬细胞,用悬滴法形成拟胚体,用含1×10-3、1×10-4、1×10-5、1×10-6 mol/L 4种不同浓度维生素C的分化培养基对其进行诱导分化,以不添加任何诱导剂作为对照组,观察各组小鼠出现跳动拟胚体的数量,并计算分化效率;免疫荧光染色检测心肌细胞特异标志物肌钙蛋白T(cTnT);膜片钳实验检测心肌细胞自发性动作电位.结果 大量的自发跳动心肌细胞在诱导分化后12d左右开始出现.维生素C诱导小鼠胚胎干细胞分化为心肌细胞的佳浓度为1×10-4 mol/L,其分化出现跳动拟胚体的百分比为81.25%,显著高于不加诱导剂的对照组(12.50%);跳动心肌细胞cTnT染色阳性;跳动心肌细胞检测到自发性动作电位.结论 佳的维生素C浓度(1×10-4mol/L)能够明显提高体外悬滴法诱导小鼠胚胎干细胞分化为心肌细胞的效率.
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音猬因子信号通路胶质母细胞瘤转录因子在肺腺癌组织的表达及其意义
目的 探讨胶质母细胞瘤转录因子(Gli1)在肺腺癌中的表达及其意义.方法 采用免疫组织化学链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶(SP)法检测40例肺腺癌组织及40例癌旁组织中的Gli1蛋白的表达,并对肺腺癌组中Gli1的表达与临床病理特征之间的关系进行分析.结果 40例肺腺癌组织中的Gli1阳性率为100%,40例癌旁组织中的Gli1阳性率为0,两组Gli1阳性表达率差异有统计学意义(P<0.01);肺腺癌组中Gli1阳性表达率与分化程度、淋巴结是否转移明显相关(P<0.05),而Gli1阳性表达率与年龄、性别、肿瘤大小及TNM分期无明显相关(P>0.05).结论 Gli1在肺腺癌进展中具有重要作用.
关键词: 肺腺癌 胶质母细胞瘤转录因子蛋白 -
B细胞淋巴瘤/白血病-2基因表达增高对神经酰胺诱导的膀胱癌细胞凋亡和凋亡诱导因子细胞内易位的影响
有研究结果显示,应用具有细胞膜通透性的神经酰胺可以直接诱导膀胱癌细胞凋亡[1].我们建立了稳定高表达B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)基因的膀胱癌细胞株,观察其对神经酰胺诱导的膀胱癌细胞凋亡的影响.一、材料与方法1.真核表达载体pcDNA3.1(+)由中国医科大学实验技术中心提供.人膀胱癌细胞株BIU-87购自中国典型培养物保藏中心.细胞核、线粒体分离试剂盒购自美国BioVision公司.鼠抗人凋亡诱导因子(AIF)单克隆抗体购自美国BDPharmingen公司.
关键词: -
老年特发性肺间质纤维化患者肺泡灌洗液游离囊泡中微小RNA表达差异的研究
目的 在老年特发性肺间质纤维化(IPF)患者肺泡灌洗液游离囊泡(Exosome)中筛选出表达差异的微小RNA(miRNA).方法 收集10例老年IPF患者及10例健康志愿者的肺泡灌洗液并分离Exosome.进行miRNA分离,分离后获得的miRNA采用高通量miRNA表达差异定量检测阵列进行检测,检测结果采用GeneCopoiea在线工具进行分析.结果 高通量miRNA表达差异定量检测阵列显示,与健康对照组比较,在肺泡灌洗液的Exosome中miR-125b、miR-128、miR-21、miR-100、miR-140-3p、miR-374b与健康对照组比较,表达呈上调趋势,分别增高了5.42、9.93、7.62、5.86、7.80、4.16倍,let-7d、miR-30a、miR-27b和miR-103呈下调趋势,分别下降了2.41、2.87、3.27、3.45倍,差异有统计学意义(P<0.05).结论 老年IPF患者肺泡灌洗液Exosome中存在miRNA表达差异.
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保留软骨的兔脱细胞气管支架的性能
目的 探讨高氯酸钠(NaClO4)处理制备兔气管支架的适宜浓度.方法 健康新西兰兔30只,随机分5组(n=6).以新鲜气管为对照A组,按NaClO4浓度分别为3%、5%、6%、7%为实验B、C、D、E组.各组气管基质经形态学观察和生物力学性能检测比较.结果 组织学染色显示A组气管有大量黏膜上皮细胞,C组气管黏膜上皮细胞去除;电镜扫描可见A组气管上皮细胞的纤毛,实验B组气管基质内表面毛糙欠光滑,C组气管基底膜完整无损坏,而D、E组气管则出现不同程度的裂痕;比较于原生对照组,C组的细胞核去除显著,DNA下降差异有统计学意义(P<0.05),而胶原蛋白、弹力纤维和网状纤维相对保留,基质内的软骨细胞活力良好,糖胺聚糖含量降低差异无统计学意义(P>0.05);生物力学分析:随着NaClO4浓度升高,大拉伸力、拉伸应变在断裂和弹性模量逐步降低(P<0.05).结论 5%浓度NaClO4处理的兔气管支架保留了较完整的细胞外基质(ECM)结构和理想的脱细胞效果,适合用于构建组织工程同种异体气管.
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胸外科实验研究之路与展望
从实验室到临床的成果转化正逐渐成为学科发展的主要模式,实验研究的重要性在国内胸外科界已被广泛接受.拓展学科前沿需要学科交叉,面对日新月异、纷繁复杂的生物医学领域,我们分析国际知名胸外科近10年的实验研究动向,有助于探讨国内临床成果转化开展的可行策略,试图寻找实验研究的切入点.一、借鉴搜索几家国际知名医院胸外科2004年4月1日至2014年3月31日期间发表的文献(PubMed),选择代表性文献,分析实验研究动向.
关键词:
年 | 期数 |
2019 | 01 02 |
2018 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2017 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2016 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2015 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2014 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2013 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2012 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2011 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 |
2010 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2009 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2008 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2007 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2006 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2005 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2004 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2003 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2002 | 01 02 03 04 05 06 |
2001 | 01 02 03 04 05 06 |
2000 | 01 02 03 04 05 06 |
1999 | 01 02 03 04 05 06 |
1998 | 01 02 |