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RhoE、p53和caspase-3在非小细胞肺癌中的表达及其临床意义
目的 探讨RhoE、p53和caspase-3蛋白在非小细胞肺癌(NSCLC)组织中的表达与不同临床病理特征的关系及三者在肺癌发生过程中可能存在的相关性.方法 采用SP法检测60例NSCLC组织和23例正常肺组织中RhoE、p53和caspase-3蛋白的表达情况.结果 非小细胞肺癌组织中RhoE、p53和caspase-3蛋白阳性表达率分别为8.33%、86.67%、68.33%.RhoE在NSCLC中的表达与TNM分期(P<0.01)和淋巴结转移有关(P<0.05).RhoE与p53和caspase-3蛋白的表达呈负相关(P<0.01,P<0.05).结论 RhoE在癌组织中表达下调,说明RhoE在肺癌的发生、发展中发挥重要作用;RhoE蛋白表达与肺癌的TNM分期密切相关,有可能作为判断病情和评价预后的新指标;RhoE与p53、caspase-3的表达均呈负相关,有望为肺癌基因治疗提供新的靶点.
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RhoE基因与肿瘤
RhoE又称为Rnd3.是Foster等[1]于1996年采用酵母双杂交方法鉴定并命名的,是Rho家族的主要成员之一.近来有研究揭示RhoE在多种肿瘤细胞中表达失调,参与调节肿瘤细胞形态及迁移能力,与肿瘤细胞的生长、增殖、转移及耐药等多种生物学行为密切相关.
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肝细胞癌中RhoE和基质金属蛋白酶-9的表达及意义
目的 探讨肝细胞癌中RhoE和基质金属蛋白酶(MMP)-9的表达及其临床意义.方法 57例肝细胞癌患者的临床资料及术后蜡块组织作为观察组,选择距肿物边缘>3 cm的正常肝组织32例作为对照组.应用免疫组化方法检测两组RhoE和MMP-9的表达.结果 两组RhoE和MMP-9的表达有统计学差异.观察组RhoE和MMP-9的表达与肿瘤的脉管累犯密切相关,RhoE的表达与肿瘤数量密切相关,MMP-9的表达与转移密切相关.相关分析显示观察组RhoE和MMP-9具有负相关性.结论 肝细胞癌中RhoE低表达、MMP-9高表达对肿瘤的形成和进展有一定作用.RhoE和MMP-9可能有一定的协同作用.
关键词： 肝细胞癌 RhoE 基质金属蛋白酶(MMP)-9 -
RhoE表达上调对U87细胞NF-κB活性的影响
目的 探讨RhoE对转录因子NF-κB活性水平的影响.方法 将包含RhoE基因的质粒转染胶质瘤U87细胞；免疫印迹实验分析NF-κB亚单位p65在胞浆和胞核中的蛋白表达水平；细胞免疫化学实验检测p65在细胞中的蛋白表达水平和亚细胞定位；免疫印迹实验检测Ikkβ和IκBα蛋白表达水平.结果 将pCMV-FlAG-RhoE质粒成功转染U87细胞后,免疫印迹实验显示,胞浆和胞核中p65的蛋白表达水平均较对照组下降；细胞免疫化学结果亦表明,p65在细胞核中的定位量明显减少.免疫印迹实验进一步分析显示,NF-κB上游调控分子IκBα表达增加,而Ikkβ表达减少.结论 上调RhoE表达水平能够抑制U87细胞转录因子NF-κB活性水平.NF-κB活性的降低可能与RhoE调控Ikk/IκBα.机制相关.
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RhoE在胶质瘤组织中的表达及意义
目的 探讨RhoE蛋白在胶质瘤恶性进展中的作用以及与临床预后的关系.方法 应用免疫组化法检测2例正常脑组织和37例不同病理级别人脑胶质瘤瘤组织中RhoE蛋白表达情况,评估RhoE蛋白表达与胶质瘤的病理分级及临床预后的关系.结果 RhoE蛋白在正常脑组织和胶质瘤中的免疫染色评分分别为7.00±1.00和3.32±0.372.RhoE蛋白表达与胶质瘤恶性程度呈负相关,相关系数r=-0.733.RhoE蛋白免疫染色评分小于4的胶质瘤患者生存期较短(P＜0.05).结论 RhoE在胶质瘤的发生进展中呈负调控作用,RhoE的低表达与胶质瘤临床预后较差相关,其表达情况对判断胶质瘤患者的预后有一定的参考价值.
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RhoE与E GFR在食管鳞癌中表达的研究
目的：探讨RhoE与EGFR在食管鳞状细胞癌中的表达及其关联性，并分析其临床意义。方法运用快捷免疫组化方法对我院2011年1月至2012年1月收集的食管鳞状细胞癌癌组织及相应的癌旁组织59例进行检测，测定RhoE与EGFR的表达情况，运用统计学方法结合患者其他指标进行分析。结果①食管鳞癌癌旁正常组织中RhoE蛋白的阳性表达灰度值是52．131±3．682，食管鳞癌组织中为37．115±4．314，二者差异有统计学意义（P＜0．001）。②食管鳞癌癌旁正常组织中EGFR蛋白的阳性表达灰度值是33．956±3．716，食管鳞癌组织中为48．168±2．945，二者差异有统计学意义（P＜0．05）。③二者表达水平情况与肿瘤的临床分期、分化程度、淋巴转移以及有无浸润都有密切关系（P＜0．001），与肿瘤的大体分型、大小和部位无关（P＞0．05）。④RhoE与EGFR在食管鳞癌组织中的表达呈负相关（P＜0．01）。结论 EGFR基因的表达水平在食管鳞癌中是增高的，而RhoE则是降低的；并且二者呈负相关，与肿瘤的分化程度、有无浸润、淋巴的转移以及临床分期等密切相关，这提示着EGFR的高表达或许参与了肿瘤的发生与发展，对二者的表达情况进行检测有助于我们了解食管癌的生物学行为以及评估预后。
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食管鳞状细胞癌中RhoE与表皮生长因子受体的表达及其临床意义
目的 探讨RhoE在人食管鳞状细胞癌中的表达及其与表皮生长因子受体(EGFR)表达的相关性,以及与患者的预后关系.方法 选取2015年5月10日至2016年7月10日我院收治的食管鳞状细胞癌患者30例为研究对象,利用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测RhoE和EGFR基因在配对食管癌组织和正常食管组织中的表达;利用采集的患者生存时间,分析RhoE基因表达与患者预后的关系.结果 与正常食管组织比较,食管癌组织中RhoE基因表达呈显著下降趋势,63.3％的组织呈RhoE表达下降大于2倍.EGFR表达在癌组织中上调,两者表达呈显著负相关(r=-0.550,P=0.032).Kaplan-Meier生存分析表明,RhoE阴性表达患者生存期显著短于阳性表达者[风险比(HR)=0.210,P=0.038].结论 食管鳞状细胞癌中异常低表达的RhoE基因与EGFR表达负相关,且与患者更差的预后相关,提示RhoE基因在食管鳞状细胞癌中可能的抑癌作用.
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窖蛋白-1和RhoE在肝癌癌变过程中表达及其临床意义
目的 探讨窖蛋白-1(Caveolin-1)和RhoE在原发性肝癌(PLC)癌变过程中表达及其临床意义.方法 采用免疫组织化学法检测20例正常肝组织、32例肝硬化组织和68例PLC组织中Caveolin-1和RhoE表达水平.结果 Caveolin-1在正常肝组织、肝硬化组织和PLC组织中的表达率分别为85.00％ (17/20)、56.25％ (18/32)和27.94％(19/68),两两比较差异有统计学意义(P＜0.05),Caveolin-1表达水平与PLC癌细胞分化程度、血管浸润明显相关(P＜0.05);RhoE蛋白在正常肝组织、肝硬化组织和PLC组织中的表达率分别为95.00％(19/20)、71.88％(23/32)和50.00％(34/68),两两比较差异有统计学意义(P ＜0.01);RhoE表达水平与PLC肿瘤大小、血管浸润、TNM分期明显相关(P＜0.05).结论 Caveolin-1和RhoE在肝癌病变发展过程中起重要作用.
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CD147和RhoE在乳腺癌组织中的表达及其生物学意义
目的 探讨CD147和RhoE在乳腺癌组织中的表达及其与乳腺癌临床生物学行为的关系.方法 应用免疫组织化学法检测71例乳腺癌患者手术切除的癌组织和癌旁组织中CD147和RhoE的表达水平.结果 CD147在乳腺癌组织中表达率为74.65％,在癌旁组织中表达率为19.72％,差异有统计学意义(P＜0.01),CD147表达水平与乳腺癌组织学分级、淋巴结转移有关(P ＜0.05);RhoE在乳腺癌组织中表达率为46.48％,在癌旁组织中表达率为84.51％,差异有统计学意义(P＜0.01),RhoE表达水平与乳腺癌TNM分期、淋巴结转移有关(P＜0.05).结论 联合检测CD147和RhoE有助于判断乳腺癌的发展趋势及评估预后.
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RhoE基因对胶质瘤细胞凋亡的影响及其机制
目的 探讨Ras鸟苷酸结合蛋白超家族的新成员E(RhoE)过表达对人脑胶质瘤细胞株U251凋亡的影响及其机制.方法 应用脂质体介导的基因转染技术将Myc-N1、Myc-RhoE质粒分别转染人人脑胶质瘤U251细胞株,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)与Western blot法测定对照组、N1-U251、RhoE-U251 3组细胞株中RhoE和细胞周期素(Cyclin) D1的mRNA与蛋白水平的变化,细胞计数试剂盒(CCK-8)法和流式细胞技术分析细胞的增殖与凋亡的变化.结果 RhoE-U251组中RhoE mRNA与蛋白表达水平较未转染组和转染空载体组明显升高,差异均有统计学意义(P＜0.05).同时,RhoE-U251组中Cyclin Dl mRNA与蛋白表达水平较未转染组和转染空载体组明显降低,差异均有统计学意义(P＜0.05).转染后胶质瘤细胞生长受到抑制,凋亡率也明显升高.结论 RhoE可能是一种抑癌基因,瞬时高表达可以抑制胶质瘤细胞株U251生长,其机制是通过下调细胞调控蛋白Cyclin D1促进细胞凋亡.
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miRNA-200c在胃癌中的表达及其靶基因RhoE的预测
目的 研究miRNA-200c在胃癌和对应癌旁正常组织中的差异表达情况,探讨miRNA-200c与胃癌临床病理参数之间的相关性以及miRNA-200c在胃癌中可能调控的靶基因.方法 应用荧光定量-聚合酶链反应技术检测miRNA-200c在胃癌和癌旁正常组织的表达情况,利用生物信息学技术预测miRNA-200c可能的靶基因.结果 miRNA-200c在癌组织中的表达显著低于癌旁正常组织(P＜0.05),miRNA-200c低表达与组织学分级呈显著相关,而与性别、年龄、肿瘤大小及TNM分期等无相关性.生物信息学预测RhoE可能是miRNA-200c的靶基因.结论 miRNA-200c在胃癌中低表达,与组织学分级呈相关性,miRNA-200c可能通过调控RhoE发挥生物学作用.
关键词： 胃癌 miRNA-200c 临床病理参数 RhoE -
RhoE在诱导人脑胶质细胞瘤凋亡中的作用
目的:研究和探讨RhoE在诱导胶质瘤细胞凋亡中的作用,为胶质瘤分子靶向治疗寻找新的靶点.方法:采用western blotting检测RhoE在人脑胶质瘤细胞系中的表达水平；构建重组pcDNA3.1-RhoE真核表达载体,将质粒快速转染U87细胞,采用四唑盐法检测细胞增殖能力的变化;Hoechst染色法观察细胞核的形态改变；流式细胞术检测细胞凋亡的情况；western blotting分析细胞Bcl-2、Bax表达变化,以及capase-3和NF-kB的活化水平.结果:RhoE蛋白在T98、A172和U87细胞系中表达明显低于正常人脑胶质细胞(P＜0.05)；上调RhoE表达后,U87细胞增殖能力明显下降(P＜0.05),并且发生了显著的细胞凋亡改变(P＜ 0.05)；western bolt检测显示裂解的caspase-3水平增加,Bcl-2表达水平下降,Bax的表达水平升高,另外,p65在细胞核中的表达降低.结论:RhoE可能通过抑制NF-kB的活性,下调Bcl-2/Bax的比例,从而促进caspase-3的活化,后诱导U87细胞发生凋亡.
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肺癌和乳腺癌组织中RhoE的表达及其临床意义
背景与目的 Rho家族蛋白与肿瘤细胞的生长、分化、转移有着密切的关系.本研究通过观察RhoE在肺癌、乳腺癌以及相应癌旁组织中的表达情况及其与临床病理分级的关系,为探索RhoE的生物学功能和临床意义提供依据.方法 运用免疫组化SABC法检测62例肺癌和34例乳腺癌及相应癌旁组织中RhoE的表达水平.结果 RhoE在乳腺和肺正常组织中普遍表达,但在肿瘤组织表达低下或缺失,而且这种差异在乳腺组织中要高于肺组织.RhoE在乳腺癌组织中的染色平均值为3.65±0.62,在相应癌旁组织中为10.53±0.44,明显高于肿瘤组织(t=12.402,P＜0.001);在肺癌组织中的染色平均值为2.19±0.19,在癌旁组织中为4.11±0.24,高于相应肿瘤组织(t=7.123,P＜0.005),并且随着肿瘤分化程度的降低染色强度有下降的趋势(X2=26536,P＜0.005).结论 RhoE在肿瘤组织中表达下降,结合前期实验结果及国外新近的研究成果,可以认为RhoE在肺癌和乳腺癌的发生发展中具有明显的负调控作用,因此对RhoE进行进一步研究将为肿瘤的分子靶向治疗提供新的靶点.
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RhoE对cd44基因启动子的转录活性及大肠癌细胞系恶性生物学行为的影响
目的 研究RhoE对cd44基因启动子的转录调控,并探讨RhoE对裸鼠体内成瘤性的影响.方法 采用PCR技术从人胚肾HEK293细胞中扩增出cd44启动子,并将其插入荧光素酶报告基因载体pGL3-Basic中,经测序确定所扩增的DNA序列,并将其转染入SW480及LoVo细胞中监测其活性.将pcDNA3.1-RhoE和pcDNA3.1分别与pGL3-CD44 promoter共转染大肠癌LoVo细胞和SW480细胞,双荧光素报告基因检测活性.另外将pcDNA3.1-RhoE和对照组分别稳定转染LoVo细胞和SW480细胞,并将筛选的稳定表达的细胞分别接种裸鼠,观察肿瘤的生长;用免疫组化的方法检测RhoE对肿瘤组织细胞形态及CD44分子表达的影响.结果 测序结果表明,扩增的cd44启动子序列正确,双报告基因实验检测荧光素酶活力表明构建的报告基因具有启动子活性.含cd44启动子序列的报告基因在pcDNA3.1-RhoE阳性的LoVo细胞中表达受到抑制;HE染色显示pcDNA3.1-RhoE转染组较对照组肿瘤细胞明显变小,且大小和形态呈现一致性,已没有瘤巨细胞,相应的肿瘤细胞核的体积也变小.结论 RhoE通过抑制cd44基因启动子的活性部分逆转肿瘤的恶性生物学行为.为研究RhoE表达与cd44基因的关系及CD44蛋白表达与结直肠癌发生、发展及浸润转移的关系提供了良好的实验基础.
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RhoE在胃肠道肿瘤组织中的表达及其临床意义
目的:探讨RhoE在胃癌、结肠癌以及相应癌旁组织中的表达情况及临床意义. 方法:采用免疫组化的方法检测74例胃癌,32例结肠癌及相应癌旁组织中RhoE的表达水平.结果:RhoE在胃肠道正常组织中普遍表达,在腺体中尤为明显,但在肿瘤组织表达低下或缺失. RhoE在胃癌组织中的染色平均值为1.99±0.28,在相应癌旁组织中为8.64±0.39,明显高于相应肿瘤组织(P<0.005),并且随着肿瘤分化程度的降低染色强度有下降的趋势(P<0.005).RhoE在32例结肠癌组织中的染色平均值为2.45±0.35,在相应癌旁组织中为6.55±0.63,明显高于相应肿瘤组织(P<0.005),同样有染色强度随着肿瘤分化程度的降低而降低的趋势(P<0.005). 结论:RhoE在肿瘤组织中表达明显下降,表明它在肿瘤的发生发展中起着重要的负性调控作用,结合新的研究成果我们推断RhoE很可能是一个重要的抑癌基因.
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RhoE表达上调抑制U87细胞增殖与侵袭
目的 探讨RhoE在胶质瘤发生发展过程中的作用.方法 将包含RhoE基因的质粒转染U87细胞后,采用四唑盐(MTT)法检测细胞增殖能力的变化；Transwell侵袭试验检测细胞侵袭能力的改变；Western blot分析细胞基质金属蛋白酶(MMP)-2和-9的表达变化.结果 RhoE蛋白在U87和U251细胞系中表达明显低于正常人脑胶质细胞；上调RhoE表达,U87细胞增殖和侵袭能力明显下降(P＜0.05)；Western bolt检测显示上调RhoE表达能够降低U87细胞MMP-2和MMP-9蛋白表达水平(P＜0.05).结论 上调RhoE的表达能够抑制胶质瘤U87细胞的增殖和侵袭能力.
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大肠癌组织RhoE、p53的表达及临床意义
目的 探讨凋亡抑制蛋白RhoE、p53蛋白在大肠癌组织中的表达与不同临床病理特征的关系,以及二者在大肠癌发生过程中的相关性.方法 采用免疫组织化学法检测48例大肠癌组织和30例正常肠组织中RhoE、053蛋白的表达.结果 肠癌组织中RhoE、p53蛋白阳性表达率分别为14.58%和62.5%,较正常组织差异非常显著(P<0.01);RhoE蛋白表达与Dukes分期明显相关(P<0.01)及淋巴结转移相关(P<0.05);肠癌组织中053与RhoE蛋白表达显著负相关(P<0.01).结论 RhoE在大肠癌组织中表达下调,并与大肠癌的Dukes分期密切相关,有可能作为判断病情和评价预后的新指标;RhoE蛋白的表达与p53蛋白的表达呈负相关,提示RhoE与p53蛋白可能存在相关信号通路,有望为大肠癌基因治疗提供新的靶点.
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p53蛋白及其突变体对RhoE基因转录调控的影响
目的:探索p53蛋白及其突变体对RhoE基因转录调控的影响.方法:构建pEGFP-wt-p53质粒,利用基因定点突变PCR技术构建p53单点和双点突变体质粒,构建pGL3-RhoE-promotor-Luc质粒.以P21基因的启动子序列(P21-promoter-luc)为阳性对照,EGFP-N1空载体为阴性对照,将野生型和突变型p53质粒瞬时转染PC3 (p53-null)细胞,利用双荧光素酶报告基因和Westernblot方法检测p53蛋白及其突变体蛋白在转录水平和蛋白水平对RhoE基因表达的影响.结果:电泳及测序表明以上质粒均构建成功.双荧光素酶报告基因检测显示野生型p53蛋白可调控RhoE基因转录,但其突变体丧失对RhoE的转录调控作用(P＜0.05),且不同位点的p53突变体蛋白之间对RhoE转录调控作用的差别无统计学意义(P＞0.05).Western blot结果与基因转录结果一致.结论:RhoE是受p53蛋白调控的基因之一,而p53突变体失去了在转录水平调控RhoE表达的作用.
