中华大蟾蜍mcl-1基因克隆及其重组蛋白在原核体系中的诱导表达

Mcl-1基因与肿瘤的靶向治疗

髓细胞白血病基因-1 (Mcl-1)基因是Bcl-2基因家族成员之一,在细胞的生长和分化过程中有重要作用.Mcl-1蛋白是通过线粒体途径参与细胞凋亡过程的重要分子,半衰期很短,其表达受多种信号转导通路调控.Mcl-1基因在人类多种肿瘤细胞中高表达,并且与肿瘤的耐药关系密切.近年来的研究显示,通过应用药物抑制Mcl-1基因的表达,可促进肿瘤细胞凋亡,为肿瘤的治疗提供了新的靶点.本文就Mcl-1基因的功能以及靶向Mcl-1基因的药物在肿瘤化疗中的研究作一综述.

阿斯匹林诱导神经母细胞瘤细胞凋亡的研究

目的 探讨阿斯匹林诱导神经母细胞瘤细胞凋亡的作用及其机制.方法 体外培养SH-SY5Y和CHLA-119神经母细胞瘤细胞株细胞,不同浓度的阿斯匹林(0 ～ 10 mmol/L)处理细胞,噻唑蓝(MTT)检测细胞增殖抑制作用,锥虫蓝拒染法检测细胞的死亡率,流式细胞学检测细胞凋亡率,蛋白印记检测阿斯匹林诱导半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Caspase)-9/-3活化,聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)裂解,以及对B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)、bcl-xL、髓细胞白血病基因-1(Mcl-1)表达的影响.结果 不同浓度的阿斯匹林处理神经母细胞瘤细胞株SH-SY5Y和CHLA-119细胞72 h,50％增殖抑制率(IC50)分别为4.8mmol/L和4.6mmol/L.阿斯匹林(5mmol/L)处理SH-SYSY和CHLA-119细胞48 h,在两株细胞中可分别诱导45％和46％的髓细胞白血病基因-1(Mcl-1)细胞死亡.流式细胞仪检测结果显示,阿斯匹林(5 mmol/L)处理SH-SY5Y和CHLA-119细胞24 h,细胞的凋亡率分别为46％和42％.Western blot检测结果显示,阿斯匹林(5 mmol/L)处理SH-SYSY和CHLA-119细胞24 h,可诱导Caspase-9、-3活化,PARP裂解,以及诱导bcl-2抗凋亡家族蛋白Mcl-1、bcl-xL表达的下调.结论 阿斯匹林能够诱导神经母细胞瘤细胞Mcl-1和bcl-xL表达下调,疏通凋亡信号传导,到达强效的凋亡诱导作用.

髓细胞白血病基因-1在胆管癌组织的表达及其临床意义

目的 探讨髓细胞白血病基因-1(MCL-1)在胆管癌组织中的表达及对预后的意义.方法 采用免疫组织化学技术检测MCL-1在70例胆管癌组织和15例非肿瘤胆道上皮组织中的表达.结果 免疫组织化学结果显示70例胆管癌、15例非肿瘤胆道上皮组织中MCL-1阳性表达率分别为72.9％、26.7％.MCL-1蛋白在胆管癌中的表达明显高于非肿瘤胆道上皮组织(x2=11.541,P =0.001).MCL-1蛋白表达与胆管癌的临床分期、淋巴结转移和组织学分级明显相关(x2=4.048,P =0.044;x2 =6.369,P=0.012;x2=6.466,P=0.039).MCL-1蛋白阴性表达组生存时间明显长于阳性表达组(x2 =5.980,P=0.015).结论 检测MCL-1有助于反映胆管癌发生发展及预后.

靶向Mcl-1的shRNA重组质粒的构建及其对HepG2细胞增殖和凋亡的影响

目的 设计以髓细胞白血病基因-1(Mcl-1)为靶点的短发夹状RNA(shRNA).构建携带此shRNA的重组质粒,探讨脂质体转染该重组质粒对肝癌细胞HepG2增殖及凋亡的影响.方法 设计3对针对Mcl-1基因不同位点的shRNA片段的真核表达载体psiRNA-hHlneo-Mcl,用阳离子脂质体法将重组质粒转染至人肝癌细胞株HepG2中,通过RT-PeR及Western blot方法检测转染前后Mcl-1 mRNA及蛋白表达情况,筛选能高效抑制Mcl-1基因表达的shRNA重组质粒并应用MTT和流式细胞仪分析转染后细胞增殖和凋亡变化的情况.结果 成功构建含shRNA片段的重组质粒,依次命名为pMclsi-1、pMclsi-2、pMclsi-3.经测序证实.插入的DNA片段的序列与设计序列完全一致.重组质粒转染HepG2细胞后,Mcl-1基因的mRNA水平及蛋白水平明显下调,其中以pMclsi-1重组质粒下调效应强.MTT检测显示pMclsi-1可明显抑制HepG2细胞增殖,流式细胞仪测定转染后24 h细胞凋亡率为6.5%,48 h细胞凋亡率为15.6%,显著高于对照组(3.9%,P<0.05).结论 采用RNAi技术可特异阻断Mcl-1基因的表达,Mcl-1基因有促进细胞增生及抑制凋亡的作用.