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自体盆神经节海绵体内移植对大鼠阴茎nNOS的影响
双侧海绵体神经离断后几乎无一例外发生勃起功能障碍(ED),原因主要是阴茎海绵体内含神经性一氧化氮合酶(nNOS)神经纤维明显减少[1].我们通过动物实验研究一侧盆神经节的海绵体内移植对阴茎去神经支配后海绵体内nNOS的变化,探讨神经元移植治疗神经性ED的可能性.
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裸鼠肾被膜下阴茎海绵体组织和盆神经节移植的可行性
目的：基于组织异体移植技术，研究将正常 SD（Sprague-Dawley）大鼠阴茎海绵体组织和盆神经节移植到Nu／Nu 裸鼠肾被膜下的可行性。方法：无菌条件下获取 SD 大鼠阴茎组织和盆神经节，在手术显微镜下将上述组织移植到 Nu／Nu 裸鼠肾被膜下，分别于移植后1周和4周检测移植物的组织病理学变化及移植物内部细胞增殖情况。结果：移植1周后，移植到 Nu／Nu 裸鼠肾被膜下的阴茎海绵体组织与正常阴茎海绵体组织形态一致，在阴茎海绵体窦内充满血液；移植4周后，靠近肾的阴茎海绵体组织接近正常组织形态，而远离肾的阴茎海绵体组织表现为纤维化，仍可在阴茎海绵体窦观察到血液。盆神经节移植后1周，移植物内部组织结构与正常盆神经节相近，可见多个“细胞团”样结构存在，在靠近肾的部位有新生血管样结构形成；移植后4周，在远离肾的盆神经节组织内观察到血管存在，“细胞团”样结构仍较明显。此外，移植后4周，移植到 Nu／Nu 裸鼠肾被膜下的海绵体组织和盆神经节中可见 ki67阳性的细胞存在，提示移植物内部分细胞仍存在增殖活性。结论：将正常 SD 大鼠阴茎海绵体组织和盆神经节移植到裸鼠肾被膜下后，至少可以存活4周，移植物内部组织结构与正常 SD 大鼠阴茎海绵体和盆神经节组织结构基本一致，可能与肾被膜下提供了移植物所需的局部微环境及移植物内部逐渐形成血液循环有关。
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糖尿病大鼠盆神经节nNOS表达和阴茎海绵体NOS活性的实验研究
阴茎勃起功能障碍(ED)是糖尿病(DM)常见的并发症之一,国外报道DM性ED发病率为50%～75%,其发病机制尚不清楚.勃起是一种神经控制的血流动力学变化过程,盆神经节控制进入阴茎的血流[1].本研究通过建立DM大鼠模型,检测盆神经节神经元型一氧化氮合酶(nNOS)的表达和海绵体NOS的活性,以进一步探讨DM性ED的发病机制.
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大鼠脊髓前角与盆神经节之间植块联合培养的实验研究
目的:联合培养大鼠脊髓前角与盆神经节(major pelvic ganglia,MPG)植块并初步探讨两者相互作用的可能性.方法:建立大鼠脊髓前角与盆神经节之间植块的联合培养体系,观察神经元的生长变化.结果:神经组织在体外联合培养时均生长良好,脊髓前角植块生长出的运动神经元(spinal motor neurons,SMNs)发出突起与盆神经节的神经元形成明显形态上的接触.结论:联合培养的不同系统的神经元能彼此形成明显接触,初步提示运动神经元与盆神经节神经元之间可能形成功能性的相互作用.
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大鼠盆神经节NOS和VIP阳性神经元对阴茎海绵体的支配
目的:研究大鼠盆神经节(MPG)中一氧化氮合酶(NOS)、血管活性肠肽(VIP)阳性神经元对阴茎海绵体的支配.方法:应用辣根过氧化物酶(HRP)逆行示踪技术结合免疫组织化学和酶组织化学双标技术,观察大鼠MPG中还原型辅酶Ⅱ(NADPH,NOS标志物)阳性和VIP阳性神经元对阴茎海绵体的支配.结果:HRP阳性标记神经元主要分布于MPG内靠近阴茎神经的区域.HRP阳性标记神经元中72%(210/292)为VIP免疫阳性,83%(268/323)为NADPH组化反应阳性.结论:大鼠盆神经节中NOS、VIP阳性神经元对阴茎海绵体有直接支配,NO和VIP作为神经递质或调质参与了阴茎勃起.
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人工体神经-内脏神经反射弧建立后大鼠盆神经节-膀胱神经通路和递质研究
目的 观察人丁体神经-内脏神经反射弧建立后大鼠膀胱和盆神经节(MPG)之间的神经通路及神经递质性质.方法 8只成年wistar大鼠在体建立人工体神经-内脏神经反射弧.将辣根过氧化物酶(HRP)注射至实验大鼠的膀胱壁肌层,逆行神经追踪,通过免疫组织化学或组织化学方法显示HRP阳性标记细胞中的胆碱已酰转移酶(ChAT)、酪氨酸羟化酶(TH)、血管活性肠肽(VIP)、P物质(SP)和还原型辅酶Ⅱ(NADPH,NOS标志物).结果 支配膀胱的神经元多位于MPG主体部,呈圆形或椭圆形,无明显突起,多数为ChAT(40.1%,112/279)和TH(20.4%,50/245)免疫阳性,少数为VIP(10.7%,25/233)、NOS(6.5%,15/230)、SP(3.3%,8/242)反应阳性.结论 人工体神经-内脏神经反射弧建立后MPG中支配膀胱的神经元以胆碱能和肾上腺素能为主,VIP、SP和一氧化氮(NO)可能发挥神经调质作用.
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大鼠盆神经节胆碱乙酰转移酶和一氧化氮合酶阳性神经元对尿道外括约肌的支配
目的 观察大鼠盆神经节(MPG)中胆碱乙酰转移酶(ChAT)、一氧化氮合酶(NOS)阳性神经元对尿道外括约肌(EUS)的支配.方法 24只成年SD大鼠随机分为A组(n=12)和B组(n=12).应用辣根过氧化物酶(HRP)逆行示踪技术结合免疫组织化学和酶组织化学双标技术,观察A组大鼠MPG中ChAT阳性神经元和还原型辅酶Ⅱ(NADPH,NOS标志物)阳性神经元对EUS的支配.B组大鼠MPG内注射麦芽凝集素-辣根过氧化物酶(WGA-HRP)进行顺行神经追踪.结果 A组大鼠HRP标记神经元散在分布于MPG内.HRP标记神经元中43.3%(155/358)为ChAT免疫反应阳性,14.5%(49/339)为NADPH组化反应阳性.B组大鼠EUS内有HRP阳性神经末梢.结论 大鼠盆神经节中的神经元对EUS有直接支配,其神经递质有乙酰胆碱和一氧化氮.
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大鼠盆神经节-膀胱神经通路的研究
目的探讨大鼠膀胱和盆神经节之间的神经通路及盆神经节内投射至膀胱的神经元的化学性质.方法正常雄性SD大鼠(250～300 g),辣根过氧化物酶(HRP)注射至膀胱,逆行神经追踪,经钨酸钠-四甲基联苯胺(TMB)-HRP法显色反应后再行免疫组织化学(胆碱乙酰转移酶ChAT、血管活性肠肽VIP、P物质SP、酪氨酸羟化酶TH)和辅酶Ⅱ(NADPH-d)酶组织化学法.结果支配膀胱的神经元多位于盆神经节主体部,大多数为ChAT(52.6%)和TH(23.3%),少数为VIP(5.7%),偶见一氧化氮合成酶NOS(5.6%)及SP(4.1%).结论在盆神经节中支配膀胱的神经细胞中存在ChAT、TH、VIP、SP和一氧化氮(NO)多种神经递质.膀胱功能多因素调节,乙酰胆碱(Ach)和TH为其经典递质,神经肽(VIP,SP)和NO在其中起重要作用,盆神经节是排尿反射的各级中枢的后通路.
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大鼠下尿路、腰骶髓脊髓排尿中枢逆行神经追踪研究
目的应用荧光金(FG)、快蓝(FB)、辣根过氧化物酶(HRP)逆行神经追踪技术研究盆神经节(MPG)、尿道外括约肌(EUS)与骶髓排尿中枢之间的神经通路.方法选用正常雄性SD大鼠,盆神经节、尿道外括约肌、尿道黏膜下、膀胱逼尿肌内注射神经追踪剂组织化学反应及荧光显微镜.结果标记神经元在脊髓L6部至S1侧角(以L6多见)可见FB阳性神经元,L6脊髓前角的腹外侧部,即Onuf's核,同时中间外侧柱(IML)、中央管周围出现FG阳性神经元.盆神经节在荧光显微镜下可发现HRP暗黑色阳性神经细胞和呈蓝色的荧光阳性神经细胞;脊髓L6部至S1灰质后联合核、中央管周围、IML区同时出现FG、FB细胞,但未发现FG、FB的双标细胞.结论大鼠脊髓内排尿中枢主要位于脊髓L6-S1节段,主要包括支配盆神经节的PGN和支配EUS的前角神经元.灰质后联合核、中央管周围、IML区内的亦可见少许神经元.盆神经节支配膀胱逼尿肌,是排尿反射的后一级神经元.
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成年大鼠盆神经节神经元的体外培养与鉴定
目的:探索成年大鼠盆神经节(MPG)神经元的体外培养、鉴定的实用方法.方法:分别利用植块培养法、分离细胞培养法对成年大鼠MPG神经元进行体外培养,应用免疫组化以神经微丝单克隆抗体(NF-200)对MPG神经元进行鉴定.结果:通过上述两种方法均能成功培养出生长状态良好的MPG神经元,细胞呈NF-200反应阳性.结论:本实验成功建立了成年大鼠MPG神经元的体外培养方法,可作为神经科学研究的重要手段.
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大鼠盆神经节内投射至膀胱VIP、SP及NOS阳性神经元的研究
用辣根过氧化物酶(HRP)逆行追踪法与免疫组织化学、NADPH-d酶组织化学结合法,对大鼠盆神经节中支配膀胱的神经元进行了研究.结果显示:在盆神经节中支配膀胱的神经细胞中存在HRP-VIP,HRP-SP及HRP-NOS双标细胞.提示膀胱功能的调节是多因素的,神经肽(VIP,SP)和NO在其中起重要作用.
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大鼠盆神经节支配膀胱的ChAT与NOS阳性神经元的分布
目的研究观察大鼠盆神经节内支配膀胱的神经元的化学性质.方法用辣根过氧化物酶逆行追踪与免疫组织化学、NADPH-d酶组织化学方法结合法.结果在大鼠神经节内支配膀胱的神经元中存在ChAT免疫阳性神经元、NOS阳性神经元以及ChAT与NOS双标记细胞.结论结果表明膀胱功能的调节是复杂的、多因素的,乙酰胆碱和NO均起重要作用.
