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RNA干扰对转染Livin基因的膀胱癌细胞凋亡诱导的影响
我们采用RNA干扰(RNAi)技术阻抑Livin基因表达[1],观察其对丝裂霉素(MMC)诱导细胞凋亡的影响.材料与方法选用人膀胱癌T24细胞株;siRNA由上海吉玛公司合成,正义链:5′-GGGACCACGUGGAUGGGC-AdTdT-3′,反义链:5′-UGCCCAUCCACGUGGUCCCdAdG-3′.
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As2O3/TRAIL诱导的骨髓增生异常综合征原始细胞系MDS-L的生物学变化
目的观察骨髓增生异常综合征(MDS)髓系原始细胞系MDS-L经不同剂量和不同时间的三氧化二砷(As2O3)和肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)处理后的生物学变化.方法体外培养的MDS-L细胞经9种不同浓度的药物及药物组合(As2O3:1,2,5 mmol/L;TRAIL:100,300,500μg/L,As2O3l mmol/L+TRAIL 100μg/L;As2O3 2 mmol/L+TRAIL 300μg/L;As2O3 5 mmol/L+TRAIL 500μg/L)处理,在24,48和72 h后收获细胞.对未经药物处理的细胞和药物处理后收获的细胞均进行流式细胞仪检测细胞凋亡;药物处理24 h后的细胞再经体外培养18 d后作形态学观察,同时以流式细胞仪检测CD34+细胞变化,检测药物的促分化作用;RT-PCR检测p15ink4b mRNA表达;甲基化特异性PCR(Methylation specific PCR,Msp)检测P15ink4bDNA甲基化状态;DAB免疫酶标检测P15ink4b蛋白水平表达.结果不同的药物组合均可诱导细胞发生凋亡,药物处理48 h凋亡达高峰(约25%),72 h时仍有约9%的细胞凋亡.药物处理(尤其是As2O3+TRAIL)导致细胞明显的形态学分化,而TRAIL能显著降低CD34+细胞比率.未经处理的MDS-L细胞基本不表达P15ink4b,并伴有明显的DNA甲基化.药物处理后P15ink4b表达增强,并伴有DNA去甲基化;但免疫酶标未显示蛋白水平P15ink4b表达的变化.结论As2O3和(或)TRAIL处理能促进MDS恶性细胞凋亡,诱导细胞分化,并能通过DNA去甲基化增强原本几乎消失的抑癌基因P15ink4b表达,有进一步进行基础研究的价值和临床应用前景.
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干扰素对真性红细胞增多症外周血单个核细胞表达TRAIL等凋亡诱导基因的影响
目的研究干扰素(IFN)对真性红细胞增多症(PV)患者外周血单个核细胞(PBMNC)的自然杀伤(NK)细胞活性及肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)等凋亡诱导基因表达的调节作用.方法取12例PV患者PBMNC,用乳酸脱氢酶释放法检测NK细胞活性并计算裂解单位(LU),用RNA酶保护分析法检测TRAIL及其他凋亡诱导基因的表达.结果PV患者PBMNC的NK细胞活性在未经处理组为(152.0±146.6)LU,IFNα1b及IFNα2b处理组分别为(250.9±197.4)LU和(355.9±249.9)LU,与未处理组相比均显著升高(P＜0.05和P＜0.01).而PV患者的PBMNC经过IFNα1b及IFNα2b刺激后,TRAIL mRNA的表达明显增加,且IFNα上调FLICE,DR3,DR4和TNFRp55基因表达,诱导FasL,Fas,TRADD和RIP基因的表达.为了确定TRAIL在IFNα诱导的NK细胞活性中所起的作用,应用中和实验表明TRAIL受体DR4-Fc及DR5-Fc多肽能够部分阻断IFNα2b提高的NK细胞活性.结论IFNα诱导/上调TRAIL及其他凋亡诱导基因在PV患者PBMNC的表达,并介导IFNα提高的NK细胞活性,这可能是IFNα治疗PV的机制之一.
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海洋真菌KLEB-07培养条件的研究
一株海洋来源的真菌KLEB-07发酵物对小鼠乳腺癌温敏型tsFT210细胞具有细胞凋亡诱导活性.为得到该菌株产生抗肿瘤活性物质的佳培养条件,对其发酵培养基进行了优化.并比较了不同培养基、不同发酵条件下KLEB-07发酵物的活性强弱,考察了发酵物中活性成分对温度、酸碱的稳定性及其所在的活性部位.结果表明KLEB-07在28℃,130r·min-1发酵7d产生抗肿瘤活性物质的活性强,发酵物对高温、酸碱稳定,其活性部位在醋酸乙酯萃取液中,为研究该菌株的抗肿瘤活性成分提供了依据.
