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脑内GABA参与针刺镇痛吗?
我们曾观察到微电泳导入γ-氨基丁酸(GABA)抑制脊髓背角神经元伤害性反应,导入荷包牡丹碱(Bicuculline,Bic)明显阻断导入GABA和电针穴位抑制脊髓背角的伤害性反应,说明GABA参与针刺镇痛中的脊髓节段性抑制,后又证明GABA参与针刺镇痛中的突触前、突触后抑制.但也有不少报道说明脑内GABA含量增加拮抗针刺镇痛效应.本文进一步在大鼠比较观察了脑室注射(icv)和蛛网膜下腔注射(ith)Bic对针刺镇痛效应的影响.
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脑内GABA参与针刺镇痛的受体机制
脑室注射γ-氨基丁酸(GABA)A受体的拮抗剂荷包牡丹碱(Bicuculline,Bic)未能阻断针刺镇痛效应,说明脑内GABA不参与或不通过激活A受体参与针刺镇痛效应.为阐明脑内GABA在针刺镇痛中的作用及其受体机制,本文比较观察了脑室注射(icv)和蛛网膜下腔注射(ith)GABA B受体的拮抗剂CGP 55845对针刺镇痛效应的影响.以辐射热照射大鼠尾部引起甩尾反射潜伏期作为痛阈的指标,以脑室注射5μL、蛛网膜下腔注射10μL药液加5 μL生理盐水后、或电针"次 "穴后痛阈变化百分率的大值判断镇痛效应,每组6～8例.所获结果如下:
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中枢内存在谷氨酸型神经元
谷氨酸是哺乳动物中枢神经系统中重要的兴奋性神经递质，然而 对其转运蛋白的研究至今还不十分清楚。Reinhard Jahn等在纯化谷氨酸转运蛋白BNPI(依赖 Na＋的磷酸转运囊泡结合蛋白)后，发现它的底物选择性和能量依赖性与突触囊泡对谷氨 酸的摄取非 常相似。他们首先确定BNPI定位于脑中含有谷氨酸的囊泡中，并且，在非洲蟾蜍的卵母细胞 中，BNPI的确是作为一种囊泡谷氨酸转运物而发挥其功能的。在表达BNPI的神经细胞内，谷 氨酸的释放是量子式的，其能量来源为质子型ATP酶产生的电化学质子浓度梯度。 另外，一些含有GABA的神经元也表达BNPI。当刺激这些神经元时，可导致突触后电流的出现 。当加入AMPA受体(谷氨酸受体亚型之一)拮抗剂NBQX时，这种突触后电流被大幅度地抑制； 而加入GABAA受体拮 抗剂荷包牡丹碱时，则不会改变这种电流。由此说明，这种突触后电流是由谷氨酸介导的。 当刺激外源性表达BNPI的GABA神经元时，可导致兴奋性神经递质谷氨酸和抑制性神经递质GA BA的同时释放。 以上结果提示，BNPI是作为囊泡谷氨酸转运物而存在的，它的表达足以表明该神经元为谷氨 酸型神经元。而且，BNPI代表了一类有功能的囊泡谷氨酸转运蛋白家族。
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伏核注射γ-氨基丁酸对大鼠伏核痛反应神经元放电的影响
目的:观察伏核(NAc)注射γ-氨基丁酸(GABA)后,NAc中痛反应神经元的放电变化以及荷包牡丹碱(Bic)对GABA的阻断效应,研究GABA与NAc在痛觉信息通路中的作用.方法:在60只成年Wistar大鼠上采用NAc内注药,以串脉冲刺激坐骨神经作为伤害性刺激,玻璃微电极细胞外记录痛反应神经元的放电变化.结果:(1)NAc内分别注射GABA 25、50、75μg/μl能够使正常大鼠NAc中痛兴奋神经元(Pain excitation neurons,PEN)的痛诱发放电频率减少,潜伏期延长;痛抑制神经元(Pain inhibition neurons,PIN)的痛诱发放电频率增加,诱发放电完全抑制时程缩短.PEN与PIN的反应与GABA剂量间呈量效关系;(2)侧脑室注入GABAA受体拮抗剂Bic能够阻断其上述效应.结论:GABA可通过同时影响NAc中PEN和PIN的放电活动而产生镇痛效应.
关键词： γ-氨基丁酸(GABA) 伏隔核 痛反应神经元 荷包牡丹碱 -
荷包牡丹碱对人胃癌 SGC-7901细胞生长的作用及机制初探
目的探讨荷包牡丹碱对人胃癌SGC-7901细胞生长的抑制作用及其可能的机制。方法体外培养人胃癌SGC-7901细胞，MTT法测定细胞增殖情况；Hoechst33258染色观察细胞凋亡形态学变化；West-ern blot法检测Bax、Bcl-2和Caspase-3的表达。结果 MTT法显示：不同浓度的荷包牡丹碱作用于胃癌SGC-7901细胞不同的时间之后，SGC-7901细胞呈现时间及浓度依赖性的生长抑制；流式细胞仪方法显示：荷包牡丹碱可以促进胃癌SGC-7901细胞的凋亡；行Hoechest33258染色可见细胞核出现固缩、边集，形成凋亡小体等凋亡现象；Western blot法检测显示：与对照组相比，药物作用后Bcl-2表达降低，Bax、Caspase-3表达升高， Bcl-2/Bax比例失调。结论荷包牡丹碱在体外对胃癌细胞的增殖与生长具有抑制作用，可促进其凋亡，其作用可能与Bcl-2/Bax降低导致Caspase-3活化有关。
关键词： 荷包牡丹碱 细胞凋亡 人胃癌SGC-7901细胞 -
荷包牡丹碱对人肺癌A549细胞生长及端粒酶活性的抑制作用
目的 探讨荷包牡丹碱对人肺癌A549细胞生长的抑制作用及其作用机制.方法 A549细胞加入荷包牡丹碱0～200 μmol·L -分别作用24,48和72 h,MTT法测定A549细胞的生长抑制作用.荷包牡丹碱0 ～ 20 μmol·L-1作用72 h,端粒重复序列扩增(TRAP)法测定端粒酶活性.变温紫外法检测荷包牡丹碱9 μmol· L-1对端粒酶G-四链体的稳定作用.结果 荷包牡丹碱25,50,100和200 μmol·L-1作用细胞72 h后的抑制率分别为33.4％,88.2％,88.6％和89.4％,明显高于正常对照组细胞(P＜0.05),并具有量效(r =0.906,P＜0.05)和时效(r=0.949,P＜0.05)性.与正常对照组相比,荷包牡丹碱5,10,15和25μmol·L-1可有效抑制A549细胞端粒酶的活性(P＜0.05),相对TRAP端粒酶活性从正常对照组的1.471±0.102分别降低为1.093±0.054,1.013±0.016,0.554±0.034,0.365±0.081 (P ＜0.05).荷包牡丹碱9μmol·L -使G-四链体的熔点值从正常对照组的48℃提高到54℃.结论 荷包牡丹碱可以通过稳定G-四链体结构,抑制端粒酶活性,有效抑制人肺腺癌细胞A549的生长.
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异丙酚抗惊厥作用的实验研究
目的:比较异丙酚和硫喷妥钠对印防己毒素和荷包牡丹碱诱发的惊厥的影响.方法:NIH小鼠,随机分为对照组,腹腔注射生理盐水0.1 ml/10 g;异丙酚组,腹腔注射异丙酚25mg/kg、50和 100 mg/kg;硫喷妥钠组,腹腔注射硫喷妥钠12.5 mg/kg、25和50 mg/kg.尾静脉持续输注印防己毒素和荷包牡丹碱诱发小鼠惊厥,测定各组小鼠的惊厥阈值.结果:异丙酚及硫喷妥钠各剂量组均使小鼠印防己毒素和荷包牡丹碱惊厥阈值升高(P＜0.01),且呈剂量相关.相同镇静剂量的异丙酚与硫喷妥钠比较,异丙酚升高小鼠荷包牡丹碱惊厥阈值的作用强于硫喷妥钠(P＜0.05),而异丙酚对小鼠印防己毒素惊厥阈值的作用弱于硫喷妥钠(P＜0.05).结论:异丙酚对小鼠印防己毒素和荷包牡丹碱诱发的惊厥具有和硫喷妥钠相似的抗惊厥作用.
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我校新开教学实验"荷包牡丹碱的分离纯化"的设计
天然药物化学是药学专业的重要的专业必修课程,其配套实验课程设计对于该课程的教学非常重要. 云南大学化学科学与工程学院新开了一个天然药物化学教学实验——荷包牡丹碱的分离纯化.本实验通过甲醇超声提取、硅胶柱层析划段和甲醇重结晶三个步骤,即可从云南传统中药地不容中获得纯度较高的荷包牡丹碱.本实验简便、高效且易于操作,适合用于制药工程专业本科生的实验教学.
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高速离心分配色谱法去除夏天无总生物碱中荷包牡丹碱的工艺研究
目的 采用高速离心分配色谱(FCPC)方法去除夏天无总生物碱中的毒性成分荷包牡丹碱(BI).方法 以体积流量、转速、样品浓度为考察因素,通过正交试验优化各工艺参数,同时对优化后的工艺结果与溶剂萃取法比较,并对优工艺进行线性放大实验.结果 佳工艺为样品质量浓度80 mg/mL,转速1 200 r/min,体积流量4 mL/min.通过放大实验制得相应去除BI的夏天无总生物碱部位,BI去除率＞94.0％,其余生物碱回收率＞85.0％,优于传统溶剂萃取法.该工艺分离时间短,重现性好,操作简便.结论 该工艺操作简单、快速、环保,不仅为提高夏天无总生物碱的安全性提供思路,而且为去除毒性成分的夏天无总生物碱产业化道路提供了方法.
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褪黑素受体与GABAA受体在褪黑素延长小鼠睡眠时间中的作用
目的:研究褪黑素受体和GABAA受体在褪黑素延长小鼠睡眠时间中的作用.方法:以翻正反射消失为睡眠开始的指标,至翻正反射恢复作为睡眠时间.观察不同受体激动剂或拮抗剂对褪黑素催眠作用的影响.结果:褪黑素3型受体拮抗剂盐酸哌唑嗪对褪黑素延长小鼠睡眠时间的作用无明显影响.GABA受体内源性激动剂GABA能明显增强褪黑素延长小鼠睡眠时间的作用,而GABAA受体上的印防己毒素结合位点的配基,即氯离子通道阻断剂印防己毒素能明显拮抗褪黑素的催眠作用,GABAA受体上的GABA结合位点的拮抗剂荷包牡丹碱则对褪黑素延长小鼠睡眠作用无明显影响.结论:褪黑素延长小鼠睡眠时间的作用与褪黑素3型受体无关,而与GABAA受体关系密切,其作用主要由印防己毒素结合位点介导.
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蝇蕈醇和荷苞牡丹碱对大鼠吸入异氟醚时脑环腺苷酸含量变化的影响
目的观察GABAA受体激动剂蝇蕈醇和GABAA受体拮抗剂荷苞牡丹碱对大鼠吸入异氟醚时脑cAMP含量变化的影响.方法SD大鼠48只,随机分为对照组,异氟醚组,蝇蕈醇+异氟醚组,荷苞牡丹碱+异氟醚组,蝇蕈醇组和荷苞牡丹碱组.采用cAMP竞争蛋白结合分析法测定大鼠不同脑区cAMP含量.结果与异氟醚组比较,蝇蕈醇+异氟醚组的翻正反射消失时间明显缩短(P＜0.05),而荷苞牡丹碱+异氟醚组却明显延长(P＜0.01).异氟醚组的大脑皮层、脑干的cAMP含量较对照组明显升高(P＜0.01).蝇蕈醇+异氟醚组的大脑皮层、脑干的cAMP含量分别较对照组和异氟醚组升高131%、34%和83%、22%(P＜0.05或0.01).荷苞牡丹碱+异氟醚组的大脑皮层、脑干cAMP含量明显高于对照组,分别较对照组升高41%和60%(P＜0.01),其两脑区的cAMP含量与异氟醚组比较却无明显不同.结论大鼠吸入异氟醚的中枢抑制作用至少部分与GABA能神经元有关.
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鞘内预先注射荷包牡丹碱、烯丙基甘氨酸对氯胺酮抗伤害作用的影响
氯胺酮( Ket)是目前常用的静肪全麻药.
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荷包牡丹碱对抗γ-氨基丁酸对伏核痛反应神经元电活动的影响
目的:探讨γ-氨基丁酸、荷包牡丹碱对正常大鼠伏核内痛反应神经元电活动的影响.方法:实验于2004-05/2005-05在哈尔滨医科大学神经痛觉电生理研究室完成.选用健康、成年Wistar系大鼠50只.随机分γ-氨基丁酸组(20只)和生理盐水对照组(5只);γ-氨基丁酸+荷包牡丹碱组(20只)和生理盐水对照组(5只).大鼠麻醉后,实施常规手术.将不锈钢套管插入侧脑室供注药用.①γ-氨基丁酸组内匀速注入γ-氨基丁酸(50g/L,10 tμL);②γ-氨基丁酸+荷包牡丹碱组在注入γ-氨基丁酸后2 min,向侧脑室内再注入荷包牡丹碱(1g/L,10μL),用等体积生理盐水作为对照实验.实验采用电生理学的方法,以电脉冲刺激坐骨神经作为伤害性痛刺激.用玻璃微电极记录痛反应神经元放电的变化,并连续观察和记录痛反应神经元的电变化30 min.结果:Wistar大鼠50只在实验过程中无脱失值,全部进入结果分析.侧脑室注入γ-氨基丁酸能使正常大鼠伏核中痛兴奋神经元痛诱发放电频率的净增值由注药前的(8.59±1.17)Hz减少至(-1.38±0.51)Hz、潜伏期由(0.17±0.04)s延长至(0.69±0.08)s,而痛抑制神经元的净增值由注药前的(-4.34±0.37)Hz增加至(5.12±1.58)Hz、完全抑制时程由(0.72±0.08)s缩短至(0.27±0.03)s.②侧脑室注入γ-氨基丁酸A受体拮抗剂荷包牡丹碱可对抗γ-氨基丁酸的作用,即痛兴奋神经元的净增值增加到(6.61±1.23)Hz,潜伏期缩短至(0.18±0.08)s;痛抑制神经元的净增值减少为(-1.33±0.21)Hz,抑制时程延长至(0.69±0.06)s.痛兴奋神经元和痛抑制神经元两者相互配合活动.结论:①外源性γ-氨基丁酸可使正常大鼠伏核中痛兴奋神经元和痛抑制神经元对伤害性刺激的反应均减弱,表现出镇痛效应.②γ-氨基丁酸的镇痛作用主要是通过γ-氨基丁酸A受体介导的.γ-氨基丁酸和伏核在痛觉凋制中具有重要的作用.③荷包牡丹碱可对抗γ-氨基丁酸的作用.
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γ-氨基丁酸在中枢神经系统痛觉调制中的作用
目的:观察大鼠脑室或伏隔核加入外源性γ-氨基丁酸后,伏隔核痛反应神经元的电变化,以及γ-氨基丁酸A受体拮抗剂荷包牡丹碱的阻断效应,进一步研究γ-氨基丁酸在痛觉信息通路中的作用.方法:实验于2004-07/12在哈尔滨医科大学电神经生理学实验室进行.①取30只成年Wistar大鼠随机分为γ-氨基丁酸组和对照组两组各15只,侧脑室注射γ-氨基丁酸(50 g/L)10μL或等量的生理盐水.②取26只大鼠随机分为γ-氨基丁酸组和对照组两组各13只,伏隔核内注射γ-氨基丁酸(50 g/L)10μL或等量的生理盐水.③取24只大鼠随机分为γ-氨基丁酸组和对照组两组各12只,伏隔核内注射γ-氨基丁酸(50 g/L)10μL后2 min,侧脑室注荷包牡丹碱(1 g/L,Sigma)10μL对照组给予等量生理盐水.所有大鼠由脉冲强直刺激坐骨神经作为伤害性痛刺激,玻璃微电极细胞外记录注药前后痛反应神经元的电变化,以刺激坐骨神经引起的伏隔核中痛兴奋神经元诱发放电秒净增值、潜伏期和痛抑制神经元诱发放电秒净增值、抑制时程为主要指标.结果:80只大鼠进入结果分析.①侧脑室注射γ-氨基丁酸后,痛兴奋神经元诱发放电潜伏期延长,诱发放电秒净增值减少;痛抑制神经元诱发放电抑制时程缩短,诱发放电频率增加,而后逐渐恢复接近注药前水平.②伏隔核内注射γ-氨基丁酸使痛兴奋神经元诱发放电潜伏期延长,诱发放电秒净增值减少,而后逐渐恢复接近注药前水平;痛抑制神经元诱发放电抑制时程缩短,诱发放电频率增加,而后逐渐恢复接近注药前水平.③侧脑室注入荷包牡丹碱能够阻断γ-氨基丁酸的上述效应.结论:脑室和伏隔核外源性增加γ-氨基丁酸后均可提高伏隔核中痛兴奋神经元的兴奋性而抑制痛抑制神经元的电活动,证实γ-氨基丁酸在痛觉调制中起抑制性作用,介导中枢伤害性信息的传递,荷包牡丹碱能够阻断其效应.
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褪黑素对应激大鼠大脑核团c-fos表达的影响
目的 实验观察了褪黑素(MT)对应激性高血压大鼠大脑外侧缰核(LHb)、室旁核(PVN)和中央杏仁核(CeA)fos蛋白样免疫反应及γ-氨基丁酸A(GABA)受体阻断剂荷包牡丹碱(bicuculline,Bic)对褪黑素所引起的c-fos表达变化的影响.方法 SD大鼠30只,随机分为正常对照组,应激1 h组,应激1 h+MT组,应激1 h+Bic+MT组,应激1 h+Bic组.采用电击足底方法制备应激大鼠模型.结果 与对照组相比,应激1 h组大鼠大脑LHb、PVN和CeA的FLI神经元显著增加,如果在应激前腹腔注射 MT,可抑制上述反应,而腹腔注射Bic 5 min后注射MT并再应激1 h,可抑制MT减少FLI神经元数量的效应.结论 MT可抑制电击足底应激所导致的c-fos表达的增加,其作用机制可能是通过GABA受体发生作用.
关键词： 褪黑素 荷包牡丹碱 γ-氨基丁酸 应激 Fos蛋白样免疫反应 -
γ-氨基丁酸受体拮抗剂与海马齿状回颗粒细胞核转录因子κB的激活
目的:研究γ-氨基丁酸(GABA)受体拮抗剂荷包牡丹碱及木防己苦毒素对核转录因子κB(NF-κB)的激活和调控作用.方法:利用海马脑片培养技术和免疫荧光技术,对经GABA受体拮抗剂处理的NF-κB激活细胞进行了计数和统计学检验.结果:经GABA受体拮抗剂处理后,海马齿状回颗粒细胞NF-κB细胞激活率高于对照组.结论:GABA受体拮抗剂可能通过GABA受体参与对NF-κB信号转录途径激活和调控,终影响某些基因转录和表达.
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荷包牡丹碱对海马CA2区的神经毒性与P/Q型钙通道有关
目的: 探讨荷包牡丹碱(BiC)对海马CA2区的神经毒性作用以及电压依赖性钙通道(VDCC)对神经毒性作用的影响.方法:BiC 6μmol·L<'-1>刺激培养的大鼠海马组织72 h,同时用N,L以及P/Q型钙通道拮抗剂分别阻断相应的钙通道,测定神经细胞摄取的碘化丙啶(PI).结果: BiC刺激6 h后,神经细胞的PI摄取首先出现在CA2区.随着BiC刺激时间的延长,摄取PI的神经细胞的分布范围由CA2区扩散到其他区域.P/Q型VDCC拮抗剂抑制神经细胞的PI摄取,然而N和L型VDCC的拮抗剂无明显抑制效果.结论: 在大鼠海马的组织培养中CA2区的神经细胞对BiC的刺激易受损.CA2区神经细胞的损伤过程中P/Q型VDCC起重要作用.
关键词： 荷包牡丹碱 CA2区 海马组织培养 细胞死亡:P/Q型钙通道 -
邹冈教授生平简介
邹冈(Kang Tsou)教授,1932年1月27日出生于上海,1952年毕业于上海医学院,1961年在中国科学院上海药物研究所完成研究生工作.被许多朋友和学生们称为TK的邹冈教授,于1999年2月24日因中风并发症而去世.邹冈教授是一位衷心热爱工作的科学工作者,并喜欢亲自进行实验操作.他对于神经科学的贡献,包括证明阿片作用的主要部位在导水管周围灰质(PAG),以及与人共同发现GABAA受体拮抗剂荷包牡丹碱.近年来,他的工作主要是借助广泛的行为学、神经生理学及解剖学方法研究大麻素的作用.
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DHPG和BMI诱导的癫痫样放电模型的建立及比较
目的 在离体大鼠海马脑片上,通过激活Ⅰ型代谢型谷氨酸受体(mGluR)或阻断γ-氨基丁酸(GABA)受体,诱导癫痫样放电.方法 将离体大鼠海马脑片暴露于Ⅰ型mGluR特异性激动剂对羟基苯甘氨酸(DHPG)或GABAA受体阻断剂荷包牡丹碱(BMI),利用全细胞记录模式记录海马CA3区域单个锥体细胞的电活动.结果 暴露于DHPG或BMI中的海马脑片CA3区域的锥体细胞均产生癫痫样放电,且两者的放电频率比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 在离体情况下,破坏神经兴奋性和抑制性系统的平衡可以诱导产生癫痫样放电活动.
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5-HT对弓状核神经元的直接兴奋作用和通过GABA能局部神经元实现的抑制作用
用大鼠离体灌流脑片的细胞外单一神经元电生理记录技术, 观察了5-HT对弓状核神经元自发放电的影响.结果表明: (1) 在随机选取的149个神经元中, 有33个(22.2%)可被5 -HT兴奋, 82个(55.0%)被抑制,其余34个(22.8%)出现双相反应或不出现反应; (2) 用低 Ca2+-高Mg2+人工脑脊液替换正常人工脑脊液后, 5-HT引起的兴奋效应仍可出现, 但5-HT引起的抑制效应不再出现; 3)5-HT受体的非选择性拮抗剂cypr oheptadine对5-HT引起的兴奋或抑制都有阻断作用; (4)用GABA受体拮抗剂bicuculline (Bic)可以阻断5-HT引起的抑制作用.据此推测: (1) 5-HT的兴奋效应对低Ca 2+环境不敏感,因而是5-HT直接作用于所记录细胞的结果; (2) 5-HT的抑制效应对低Ca2+敏感, 并可被Bic所阻断,因而5-HT可能是先兴奋了局部GABA能中间神经元,后者再通过释放GABA抑制了所记录的神经元.
