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去甲二氢愈创木酸对胶质瘤诱导的血管内皮细胞成型的作用
目的观察去甲二氢愈创木酸(NDGA)对胶质瘤细胞诱导的内皮细胞成型的影响并初步探讨其机理. 方法采用在Ⅰ型胶原凝胶上的细胞立体培养和内皮-胶质瘤细胞的联合培养法,观测人恶性胶质瘤细胞系SHG-44细胞或其条件培养基对人脐静脉内皮细胞系ECV-304细胞形成管腔样结构的影响,同时以免疫组织化学结合图像分析的方法检测SHG-44细胞VEGF、bFGF蛋白的表达. 结果 100μmol/L的NDGA作用1～3d后,SHG-44细胞VEGF、bFGF的表达明显降低.联合培养3d左右,胶质瘤SHG-44细胞及其条件培养基均能诱导内皮细胞在Ⅰ型胶原凝胶上拉长并形成管腔样结构;而100μmol/L的NDGA可明显抑制内皮细胞变长和管腔样结构的形成(P＜0.01). 结论 NDGA对胶质瘤细胞诱导的血管成型有抑制作用,此作用可能与瘤细胞VEGF、bFGF表达减低有关,提示NDGA具有抗血管生成的作用.
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细胞周期蛋白D1和细胞周期蛋白质依赖激酶4在去甲二氢愈创木酸抑制恶性胶质瘤细胞增殖中的作用
近年来发现去甲二氢愈创木酸(nordihydroguaiaretic acid, NDGA)能阻止多种肿瘤的发生和抑制其细胞的增殖[1-3],但机制不清.我们检测了NDGA对SHG-44细胞细胞周期蛋白D1(cyclin D1)基因的蛋白表达及细胞周期蛋白质依赖激酶4 (cyclin-dependent kinase 4,CDK4)活性的影响,旨在探讨NDGA抑制SHG-44细胞增殖的分子机制.
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诺帝对恶性胶质瘤细胞株U87MG生物学行为的影响及差异表达蛋白质组分析
目的 观察诺帝对人恶性胶质母细胞瘤细胞株U87MG及其移植瘤生物学行为的影响,分析和鉴定诺帝诱导U87MG细胞分化时高表达的差异蛋白质.方法 采用自行研制的化合物诺帝(纯度为99.87%)诱导U87MG细胞分化,再用U87MG细胞原位移植瘤模型裸鼠腹腔注射诺帝,观察肿瘤生长情况和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达改变.应用蛋白质双向电泳和PDQuest7.1软件对比分析诺帝诱导分化前后表达的差异蛋白质,采用基质辅助激光解析离子化飞行时间质谱进行鉴定并分析其功能.结果 诺帝能显著抑制U87MG细胞体外增殖和原位移植瘤的生长(P＜0.01)并诱导其分化,U87MG细胞体外分化后高表达的差异蛋白质包括增殖相关基因A、交替拼接因子3、真核转录启动因子5A、丝切蛋白1、β半乳糖苷酶结合凝集素、甘油醛-3-磷酸脱氢酶、α烯醇化酶和一种未知蛋白.结论 诺帝对人胶质母细胞瘤细胞株U87MG具有诱导分化的作用,其过程涉及多种蛋白质的表达改变,其中大部分蛋白质表达下调,这些蛋白质参与细胞增殖、代谢、分化、凋亡及基因转录的调控.
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去甲二氢愈创木酸交联猪去细胞脊髓支架及其相关特性研究
目的:观察去甲二氢愈创木酸(nordihydroguaiaretic acid,NDGA)交联猪去细胞脊髓支架的结构及性能.方法:取成年猪胸段脊髓,采用2次冻融化学萃取法对脊髓行去细胞处理,再用2.5g/L NDGA溶液进行交联处理.在体视显微镜及扫描电镜下分别观察猪去细胞脊髓支架及NDGA交联猪去细胞脊髓支架的结构.采用Instrong生物力学测试仪检测正常猪脊髓(正常组)、猪去细胞脊髓支架(未交联支架组)及NDGA交联猪去细胞脊髓支架(交联支架组)的极限抗拉强度和弹性模量.取第4代SD大鼠星形胶质细胞分别与未交联支架和NDGA交联支架联合培养,采用CCK8法检测细胞生长率,评价支架的细胞毒性.将未交联支架和交联支架分别包埋至SD大鼠背部皮下,在l、2、4周取出检测其包埋后的降解率,并取包埋4周的组织行HE染色,评价支架的生物相容性.结果:正常组脊髓组织为圆柱状,呈乳白色,横切面可见灰质与白质分界明显;未交联支架基本保持原组织外形,呈白色半透明状,白质与灰质无明显分界;交联支架质地稍变硬,呈棕黄色.扫描电镜显示未交联支架与交联支架内的基质纤维保存完好,相互交织成网状三维结构,内部孔洞连通.未交联支架的抗拉强度及弹性模量较正常组显著性下降(P＜0.05);交联支架抗拉强度和弹性模量较未交联支架显著性增强,两组比较有统计学差异(P＜0.05),但仍低于正常组(P＜0.05).星形胶质细胞在交联支架及未交联支架中均生长良好,共培养时间越久,OD值越大,两组相同时间点OD值比较无统计学差异(P＞0.05).相同时间点交联组在体内降解率明显低于未交联组(P＜0.05).包埋4周后未交联组支架HE染色可见炎症细胞及成纤维细胞浸润,并且有肉芽组织聚集在内部孔隙中;交联组支架炎症细胞明显减少,且可见新生血管状结构.结论:NDGA交联猪去细胞脊髓支架与未交联猪去细胞脊髓支架比较三维结构未见明显改变,但生物力学性能和体内抗降解能力显著性增强,生物相容性提高,且无明显细胞毒性,可作脊髓损伤修复的支架材料.
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去甲二氢愈创木酸对前列腺癌PC-3细胞作用机制的实验研究
目的 观察脂氧合酶抑制剂去甲二氢愈创木酸(NDGA)对前列腺癌PC-3细胞增殖及凋亡的影响并探讨其相关机制. 方法以不同浓度(0、20、40,80和160 μmol/L)的NDGA干预体外培养的前列腺癌PC-3细胞.通过细胞形态学观察、四甲基偶氮唑盐比色法及TUNEL法检测NDGA对PC-3细胞的增殖抑制及诱导凋亡作用,流式细胞术检测其活化Caspase-3的表达情况.结果 40、80、160μmol/L NDGA对PC-3细胞增殖有明显抑制作用,作用强度具有时间和剂量依赖性.0、20、40、80和160μmol/L NIX;A作用48 h后,PC-3细胞凋亡指数分别为(2.9±0.2)%、(3.2±0.3)%、(68.5±0.8)%、(86.2±0.3)%和(86.9±0.6)%,后3组与第1组比较差异有统计学意义(P<0.05).0、20,40、80和160/μmol/L NDGA作用PC-3细胞48 h后活化Caspase-3的阳性率分别为(3.9±0.0)%、(4.1±0.1)%、(55.5±0.8)%、(75.1±0.3)%和(76.3±0.7)%,后3组与第1组比较差异有统计学意义(P<0.05). 结论 NDGA能抑制前列腺癌PC-3细胞增殖、诱导其凋亡,作用呈剂量和时问依赖性,其机制可能与PC-3细胞Caspase-3活化有关.
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去甲二氢愈创木酸对成骨细胞MC3T3-E1增殖的影响
目的 探讨不同浓度去甲二氢愈创木酸(NGDA)对成骨细胞MC3T3-E1增殖的影响及其机制.方法 应用MTT法测定0,5,10,20,30 μmol/L NGDA培养后成骨细胞MC3T3-E1增殖情况,利用流式细胞技术检测O,5,10,20μmol/L NGDA培养后MC3T3-E1细胞周期,用Western blotting法检测0,10,20,30,60μmol/L NGDA培养后MC3T3-E1成骨细胞mTOR通路蛋白表达情况.结果 NGDA浓度从5μmol/L开始有促进成骨细胞MC3T3-E1增殖的作用,20 μmol/L时MC3T3-E1增殖活性强,而30 μmol/L时MC3T3-E1增殖活性明显低于20 μmol/L时(P＜0.05).0,5,10,20μmol/L浓度的NGDA刺激下,成骨细胞MC3T3-E1进入S期的比例分别为28.9％,38.3％,44.2％,58.2％.NDGA浓度在20μmol/L时mTOR信号通路下游底物p-4E-BP1、p-S6水平明显高于0μmol/L时(P＜0.05),但30 μmol/L时mTOR信号通路下游底物p-4E-BP1、p-S6水平开始明显下降.结论 低浓度NDGA可明显促进成骨细胞MC3T3-E1增殖,诱导细胞周期进入S期,且呈剂量依赖关系,这一作用可能是通过对mTOR信号通路的激活来完成的.
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15-羟廿碳四烯酸对脑动脉平滑肌细胞ERK信号传导通路影响
目的 探讨缺氧时15-羟廿碳四烯酸(15-HETE)对细胞外信号调节激酶(ERK)1/2及ERK5通路的影响以及ERK1/2及ERK5通路在缺血缺氧性脑动脉收缩中的作用.方法 将大鼠脑动脉平滑肌细胞随机分为正常对照组、缺氧组、缺氧+去甲二氢愈创木酸(NDGA)组、缺氧+NDGA+15-HETE组、缺氧+NDGA+15-HETE+ERK抑制剂组、缺氧+ERK抑制剂组.将细胞分别应用Western blot技术和Real-time PCR技术检测大鼠脑动脉平滑肌细胞中p-ERK、ERK、电压门控性钾离子通道(Kv)2.1蛋白及mRNA的表达.结果 随着15-HETE作用时间延长,正常对照组中15-HETE活化ERK1/2以及ERK5作用降低;随着15-HETE浓度的升高,正常对照组中ERK1/2和ERK5的活性增加,差异均有统计学意义(P<0.05).随着15-HETE增多,p-ERK1/2表达增多,Kv2.1通道表达受抑制;加入ERK1/2抑制剂后,缺氧+NDGA+15-HETE+ERK1/2抑制剂组与缺氧+NDGA+15-HETE组相比较、缺氧+ERK1/2抑制剂组与缺氧组相比较,ERK1/2活性减弱的同时,Kv2.1通道表达增强,差异均有统计学意义(P<0.05).随着15-HETE的产生增多,ERK5表达减少,Kv2.1通道表达降低.缺氧+NDGA+15-HETE+ERK5抑制剂组和缺氧+ERK5抑制剂组,分别与缺氧+NDGA+15-HETE组和缺氧组相比较,ERK5活性明显受抑制,Kv2.1通道表达增多,差异均有统计学意义(P<0.05).加入ERK抑制剂后,ERK mRNA表达明显被抑制,缺氧+NDGA+15-HETE+ERK抑制剂组与缺氧+NDGA+15-HETE组相比较、缺氧+ERK抑制剂组与缺氧组比较,Kv2.1 mR-NA均上调,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 在缺氧条件下,脑动脉平滑肌细胞中15-HETE可能是通过上调ERK1/2信号传导通路的表达而抑制Kv2.1通道的表达,终导致脑动脉收缩.
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15-HETE参与的脑缺血再灌注损伤中p-ERK1/2表达变化的研究
目的:通过应用15-脂氧化酶(15-Lipoxygenase,15-LOX)抑制剂去甲二氢愈创木酸(nordihydroguaiaretic acid,NDGA)抑制15-羟基-二十碳四烯酸(15-hydroxyeicosatetraenoic acid,15-HETE)的生成,观察缺血再灌注损伤中大鼠脑组织磷酸化细胞外信号调节酶(phosphor-extracellular signal-regulated kinase,p-ERK1/2)表达的变化,探讨p-ERK1/2在15-HETE参与的脑缺血再灌注损伤中的作用及其表达变化.方法:应用大脑中动脉线栓栓塞法(MCAO)制作大鼠脑梗死2小时再灌注模型.将大鼠随机分为三组:假手术组(sham组)、DMSO对照组、NDGA处理组.后两组再根据不同的灌注时间分为三个亚组:再灌注1小时组、再灌注6小时组、再灌注24小时组.采用TTC染色法检测再灌注24小时大鼠脑梗死体积;免疫印迹(Western blot)法测定梗死后再灌注不同时间点梗死核心区和梗死周围区的p-ERK1/2的表达.结果:假手术组仅有少量p-ERK1/2的表达.DMSO对照组梗死核心区p-ERK1/2的表达从梗死再灌注后1小时即开始逐渐升高(1.43± 0.06),6小时达高峰(2.02±0.14),24小时有所下降(1.16±0.21),与假手术组(0.62± 0.08)比较P值均＜0.01;梗死周围区p-ERK1/2表现出相同的变化趋势.与DMSO对照组比较,NDGA处理组大鼠脑梗死体积显著减小(20.10± 0.12％vs 17.24± 0.16％,P=0.009,P ＜0.05),各时间点p-ERK1/2的表达均下降.与梗死核心区相比较,梗死周围区24小时仍可检测到较高含量的p-ERK1/2(1.16± 0.21 vs 1.86±0.14),但梗死核心区表达相对较少.结论:脑缺血再灌注损伤中,p-ERK 1/2的表达增加,说明p-ERK1/2参与其中;应用NDGA后,p-ERK1/2的表达降低,脑梗死体积减小,证实p-ERK1/2参与了15-HETE介导的脑缺血再灌注损伤,并在此过程中可能参与了细胞的凋亡.
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NDGA 对脑缺血／再灌注损伤的脑保护作用
目的：探讨12／15－LOX抑制剂去甲二氢化愈创木酸（ nordihydroguaiaretic acid ，NDGA）是否具有对抗缺血／再灌注损伤的脑保护作用。方法体内实验部分：线栓法（ MCAO）制备大鼠脑缺血／再灌注损伤模型，随机分为NDGA处理组、溶剂对照组（ DMSO）及假手术组。首先对各组大鼠进行神经功能评分，并进行组间比较；其次采用TTC法比较各组动物脑梗死体积的差异。体外实验部分：制备大鼠皮层神经元糖氧剥夺（ OGD）细胞模型，随机分为OGD＋NDGA组、OGD＋溶剂对照组及空白对照组。分别采MTT法和TUNEL 法检测各组神经元的细胞活力和凋亡情况，并进行组间比较。结果体内实验结果显示NDGA处理组与溶剂对照组相比，神经功能缺损显著改善（ P＜0．05），梗死体积百分比显著减小（ P＜0．05）。体外实验结果显示NDGA可显著提高OGD再合氧后的神经元存活率（ P＜0．05），同时NDGA处理组TUNEL阳性细胞比率亦明显降低（ P＜0．05）。结论12／15－LOX抑制剂NDGA能够改善缺血／再灌注损伤大鼠的神经功能缺损，减少梗死体积，提高缺血／再灌注损伤后神经元的存活率，抑制神经元细胞凋亡，因此具有对抗缺血／再灌注损伤的脑保护作用。
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脂氧合酶抑制剂对HepG2细胞增殖及凋亡的影响
目的探讨脂氧合酶抑制剂对HepG2细胞增殖及凋亡的影响及其相关机制.方法应用不同浓度脂氧合酶抑制剂去甲二氢愈创木酸(NDGA)处理HepG2细胞,利用MTT比色法、生长曲线、细胞克隆形成观察NDGA对HepG2细胞的增殖作用,H-E染色、流式细胞术观察细胞凋亡并行细胞周期分析,细胞免疫化学或Western印迹技术测定Caspase-3、增殖细胞核抗原(PCNA)、野生型(wt)P53、c-erbB-2蛋白表达水平变化.结果NDGA对HepG2细胞具有明显生长抑制作用,不同浓度NDGA(50、100、150、200μmol/L)处理HepG2细胞72 h的抑制率分别为27.34%、41.76%、57.08%和69.17%,其IC50值为109.13μmol/L;细胞克隆形成率分别为21.63%、17.33%、12.53%、7.97%,明显低于对照组的31.70%.同时NDGA可诱导HepG2细胞凋亡,与细胞周期被阻滞于G1/S期有关.细胞免疫化学、Western印迹分析显示NDGA对HepG2细胞的PCNA、c-erbB-2蛋白表达有抑制作用,并可促进Caspase-3、wtP53蛋白表达.结论NDGA对HepG2细胞有较强的细胞毒作用且以剂量、时间依赖方式抑制细胞增殖,并诱导凋亡,使细胞周期阻滞于G1/S期.此作用与改变某些原癌基因、抑癌基因的蛋白表达水平有关.
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诺帝对HPV16亚基因永生化人宫颈上皮细胞增殖、凋亡和分化的影响
目的:研究诺帝(Nordy)对HPV 16型亚基因(E6、E7)永生化人宫颈上皮细胞(H8细胞)增殖、分化和凋亡的影响.方法:MTT法检测诺帝对H8细胞增殖的抑制作用,SP法检测增殖细胞核抗原mcm 5的表达,FCM分析细胞周期和凋亡,光学显微镜、电子显微镜观察细胞形态变化,端粒重复序列扩增-酶联免疫吸附法(telomerase repeat amplification protocol-enzyme linked immunosorbent assay,TRAP-ELISA)法检测端粒酶活性变化.结果:10～100 μmol/L浓度的诺帝能够不同程度地抑制H8细胞的增殖,细胞核内mcm 5的表达明显下降,可阻滞细胞周期于G0/G1期、S期细胞减少,细胞凋亡率增多,细胞形态上出现向成熟分化的趋势,端粒酶活性明显降低.结论:诺帝具有抑制H8细胞增殖,促进凋亡,诱导其分化的作用,这种作用可能是通过阻滞细胞周期,降低端粒酶活性来实现的.
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人恶性胶质瘤细胞SHG-44经诺帝诱导分化后形态学改变及差异表达蛋白的质谱分析
目的:观察人恶性胶质瘤细胞SHG-44经去甲二氢愈创木酸类似物--诺帝诱导分化后形态学的改变,并分析差异表达蛋白.方法:分别用100、200 μmol/L诺帝诱导SHG-44细胞分化,观察处理后24、48、72 h细胞形态学的改变,并与未受刺激的空白对照组相比较;提取200μmol/L诺帝处理后的SHG 44细胞以及空白对照组细胞总蛋白进行双向电泳,用PDqest7.1软件比较两者间的差异表达蛋白,离子飞行时间质谱仪分析高丰度表达的差异蛋白.结果:200 μmol/L诺帝处理后SHG-44细胞的形态学改变较100 μmol/L更为明显;处理72 h时细胞分化为明显.与空白对照组SHG-44细胞相比,经200 μmol/L诺帝诱导后,双向电泳发现了23个差异蛋白点,其中21个蛋白点表达下调,2个蛋白点表达上调.质谱分析高丰度表达的差异蛋白分别为:未知蛋白、增殖相关基因A、解链蛋白Up1、交替拼接因子ASF-3、cofiln 1、真核转录启动因子5A、β半乳糖苷酶结合凝集素、Pi类谷光苷肽-S-转移酶.结论:诺帝能诱导人恶性胶质瘤细胞SHG-44分化,并呈一定的时效及量-效依赖性,分化后的差异蛋白涉及到细胞增殖、分化、凋亡及基因转录调控等多个方面.
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去甲二氢愈创木酸部分抑制大鼠局灶性脑缺血后炎症反应
本实验旨在观察去甲二氢愈创木酸(nordihydroguaiaretic acid,NDGA)对大鼠局灶性脑缺血后炎症细胞聚集的作用及其机制.在大鼠大脑中动脉阻塞30 min后进行再灌注72 h,在再灌注30 min,2、24、48 h时分别腹腔注射一次NDGA(5、10 mg/kg).再灌注72 h后检测脑损伤、内源性IgG渗出、中性粒细胞和巨噬细胞/小胶质细胞聚集、细胞间黏附分子-1(intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1)mRNA和蛋白表达,并在再灌注3 h后检测脑内5-脂氧酶(5-lipoxygenase,5LOX)的催化产物白烯B4(leukotriene B4,LTB4)和半胱氨酰白三烯(cysteinyl leukotrienes,CysLTs)含量.结果显示:NDGA能显著改善脑损伤,减少内源性IgG渗出、中性粒细胞浸润、ICAM-1 mRNA和蛋白表达,同时降低脑内LTB4和CysLTs含量,但对巨噬细胞/小胶质细胞聚集没有影响.上述结果提示,NDGA对脑缺血亚急性期炎症反应的抑制主要表现为减少中性粒细胞浸润,机制可能与抑制5-LOX激活有关.
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去甲二氢愈创木酸抑制骨肉瘤细胞黏附、迁移和侵袭
目的 研究去甲二氢愈创木酸(NDGA)对骨肉瘤MG63细胞株黏附、迁移和侵袭特性的影响,并初步探讨其相关机制.方法 不同浓度的NDGA处理MG63 细胞,用CCK-8法、细胞划痕试验和Transwell小室模型分别测定其黏附力、迁移力和侵袭力,Western blot法检测MG63细胞基质金属酶(MMPs)表达量的变化.结果 NDGA明显抑制骨肉瘤MG63细胞株黏附、迁移和侵袭力(P<0.05);NDGA抑制MG63细胞的黏附、迁移和侵袭力呈剂量依赖性;Western blot检测表明MG63细胞MMP-2和MMP-9 的表达明显下调.结论 NDGA可抑制骨肉瘤MG63细胞的体外黏附,迁移和侵袭,这种抑制效应可能是通过减少骨肿瘤细胞MMP-2和MMP-9的表达来实现.
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脂氧合酶抑制剂对乳腺癌细胞MCF-7增殖和凋亡的影响
目的探讨脂氧合酶抑制剂去甲二氢愈创木酸(NDGA)对乳腺癌细胞MCF-7增殖和凋亡的影响.方法噻唑蓝(MTT)法绘制细胞生长曲线及检测细胞存活率;流式细胞仪检测细胞周期和凋亡率;倒置相差显微镜和扫描电镜观察细胞凋亡.结果 MTT法显示NDGA对MCF-7细胞生长增殖有明显的抑制作用(P<0.05),呈剂量和时间依赖效应;流式细胞仪结果显示NDGA阻滞细胞周期于S期,诱导细胞凋亡;在光镜和扫描电镜下,NDGA诱导细胞发生凋亡形态学变化,导致细胞表面超微结构的改变和凋亡小体的形成.结论 NDGA能够抑制MCF-7细胞的增殖,诱导细胞凋亡,为脂氧合酶抑制剂临床应用于乳腺癌提供了科学依据.
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去甲二氢愈创木酸对恶性胶质瘤细胞增殖、分化和凋亡的影响
目的观察去甲二氢愈创木酸(NDGA)对人恶性胶质瘤细胞系SHG-44细胞增殖、分化和凋亡的影响.方法采用噻唑蓝(MTT)法、流式细胞仪法检测细胞增殖抑制的情况,利用光镜和电镜观察、免疫组织化学及原位末端标记法(TUNEL)法检测培养细胞分化和凋亡的情况.结果在200 μmol/L浓度范围内,NDGA可使SHG-44细胞增殖受阻于G1→S期,且NDGA液浓度越高,这种作用越明显,即呈明显的剂量依赖性;光镜和电镜观察、免疫组织化学结果显示,NDGA对SHG-44细胞有明显的诱导分化作用;TUNEL法检测结果显示,一定浓度的NDGA处理SHG-44细胞12～96 h,均可诱导SHG-44细胞发生凋亡,且随着作用时间的延长,凋亡细胞数增加越明显.结论 NDGA对SHG-44细胞有明显的增殖抑制、诱导分化和促进凋亡作用,但其确切机制有待进一步深入研究.
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5-氟尿嘧啶、长春新碱与去甲二氢愈创木酸配伍对人恶性胶质瘤细胞株的作用
目的观察体外应用去甲二氢愈创木酸(NDGA)、5-氟尿嘧啶(5-Fu)、长春新碱(VCR)三种药物单用或合用对人恶性胶质瘤细胞系SHG-44细胞的作用,并探讨其作用的可能机制.方法用MTT法检测药物作用效应,用免疫组化染色法检测细胞cyclin D1基因的蛋白表达情况.结果 (1)三种药物单用及两药合用时随着药物浓度的增加其抗肿瘤效应也增加,且两药合用时药物的效应增强; (2)先给NDGA 24h后再给5-Fu或 VCR,与同时给药对该细胞的抗肿瘤效应无显著差异(P>0.05),而先给5-Fu或VCR 24h后再给NDGA,与同时给药对细胞的抗肿瘤效应有显著差异(P<0.05); (3)免疫组化染色结果表明,与对照组相比,NDGA处理后该细胞cyclin D1基因的蛋白表达明显降低.结论 NDGA 与5-Fu或 VCR间有协同作用,且这种作用可能与NDGA降低细胞cyclin D1基因的蛋白表达有关.
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去甲二氢愈创木酸对恶性胶质瘤细胞周期的影响
目的 观察去甲二氢愈创木酸(NDGA)对人恶性胶质瘤细胞系SHG-44细胞周期的影响.方法 采用细胞培养、免疫组化、细胞计数及流式细胞仪检测等技术方法.结果 ①在200μM浓度范围内,NDGA对SHG-44细胞增殖有抑制作用,使细胞增殖受阻于G1→S期,且这种作用与浓度呈正相关;②在NDGA处理96小时内,NDGA对SHG-44细胞的增殖抑制作用以处理后24小时明显;③NDGA处理后,SHG-44细胞cyclin D1和CDK4蛋白表达减弱,p16蛋白表达增强.结论 NDGA对SHG-44细胞周期有明显的增殖抑制作用,且这种作用可能与CDK4蛋白激酶活性降低有关.
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去甲二氢愈创木酸诱导体外恶性胶质瘤细胞凋亡的研究
目的:观察去甲二氢愈创木酸(nordihydroguaiaretic acid,NDGA)对人恶性胶质瘤细胞系SHG-44细胞凋亡的影响,并探讨其发生的可能机理.方法:采用MTT(methy thiazolyl tetrazolium)法检测细胞增殖抑制的情况,利用光镜和电镜观察及TUNEL法检测体外培养细胞的凋亡情况,用免疫组织化学、原位杂交和图像分析等方法检测bcl-2基因mRNA和蛋白的表达水平.结果:①一定浓度(100μmol/L)的NDGA处理SHG-44细胞不同时间后,在NDGA抑制细胞增殖的同时,也可诱导此细胞发生凋亡,且随着作用时间的延长,凋亡细胞数增加越明显;②免疫组化染色结果表明,一定浓度的NDGA处理细胞不同时间后,出现SHG-44细胞bcl-2蛋白表达水平降低,且随着作用时间的延长,这种趋势更加明显,与细胞凋亡的发生呈负相关;③原位杂交结果显示,NDGA处理细胞不同时间后,出现SHG-44细胞bcl-2基因mRNA的表达水平降低,结果与免疫组化检测一致.结论:NDGA可诱导SHG-44细胞的凋亡,这种作用可能与其下调bcl-2基因的表达有关,确切机制有待进一步深入研究.
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去甲二氢愈创木酸抑制骨肉瘤Mg63细胞生长的研究
[目的]探讨去甲二氢愈创木酸对骨肉瘤细胞Mg63的生长抑制作用及其机制.[方法]应用四甲基偶氮唑蓝(MTT法)和克隆形成法测定去甲二氢愈创木酸对Mg63细胞的生长抑制作用,检测其抑制骨肉瘤细胞生长的时间效应和剂量效应；用流式细胞技术进行细胞周期分析；用Western blot法检测药物对Mg63细胞mTORC1信号通路活性的影响.[结果]去甲二氢愈创木酸对Mg63细胞具有明显的生长抑制作用,且呈时间依赖和剂量依赖关系,72h IC50值为(48±2)μmol/L.10、20、50μmol/L可显著抑制Mg63克隆形成数量,且随剂量增加抑制作用明显增强.细胞周期阻滞于G0/G1期,m TO RC1信号通路蛋白p-S6和p-4E-BP1与对照组相比明显下调.[结论]去甲二氢愈创木酸明显抑制骨肉瘤细胞mg63增殖,诱导细胞周期阻滞于G0/G1期,这一作用可能是通过对mTORC1信号通路的抑制完成.
