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膝关节腔注射透明质酸钠对成人大骨节病血清透明质酸、CD44、硫酸角质素含量的影响
目的 探讨透明质酸钠治疗对大骨节病(KBD)患者血清中透明质酸(HA)、CD44、硫酸角质素(KS)含量的影响.方法 分别检测关节腔注射透明质酸钠的成人KBD患者治疗前、治疗4周后,以及健康成人血清中的HA、CD44、KS含量.结果 KBD患者血清HA、CD44、KS含量明显高于健康成人,且不同性别HA、CD44、KS含量无差异.在经过关节腔注射透明质酸钠治疗后,血清中三指标含量均明显下降,其中HA含量男性高于女性.结论 膝关节腔注射透明质酸钠可明显降低KBD患者血清中的HA、CD44、KS含量.血清HA、CD44、KS含量可作为KBD疗效评价指标之一.
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人Lumican基因转基因鼠模型的建立
目的 建立携带突变位点(cDNA 596T＞ C)的人Lumican(LUM)基因的转基因鼠模型.方法 实验研究.利用基因重组技术,将人工合成的LUM基因第二外显子596位碱基T替换为C,再克隆到质粒pRP.Des3d的多克隆位点,构建pRP.EX3d-EFlA＞ LUM/flag＞ IRES/hrGFP质粒载体;然后用显微注射法将其转至BDF1小鼠受精卵雄原核中,存活的受精卵再移入美国癌症研究所(ICR)假孕雌鼠输卵管内,得到可表达LUM基因的F0代转基因小鼠C57-TgN(LUM) CCMU.经PCR、免疫印迹杂交法分析子代鼠中基因整合及表达的情况.结果 得到31只新生仔鼠,PCR检测有6只LUM阳性转基因鼠,免疫印迹杂交法证明转基因阳性鼠转入的目的基因片段确实合成了相应蛋白质.稳定遗传3代,共获得128只仔鼠,经PCR检测其中有68只为LUM阳性,阳性率达53.13％.结论 携带突变位点(cDNA 596T＞C)的LUM基因的转基因鼠模型构建成功,为进一步探索LUM基因突变对病理性近视眼的发生发展及细胞外基质成分的影响提供了重要的研究平台.
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人突变Lumican基因转基因小鼠屈光变化特点
目的：探讨人突变Lumican基因转基因小鼠生后不同时间屈光状态及其变化特征。方法实验研究。54只（雄性27只，雌性27只）人突变Lumican基因（cDNA 596T>C）转基因小鼠，于生后3、4、5、6、8、10、12、16、20周共9个时间点分别通过随机数字表法随机选取6只（雄性3只，雌性3只）转基因小鼠，快速散大瞳孔后检影验光测量屈光度数。对比相同时间点转基因小鼠双眼间及雌雄性别间的屈光度数，采用配对t检验；不同时间点转基因小鼠屈光度数的比较采用非参数多个独立样本Kruskal?Wallis H检验，两两组间屈光度数比较采用非参数两个独立样本Mann?Whitney U检验。结果同周龄组转基因小鼠双眼间比较屈光度数差异无统计学意义：第20周转基因小鼠右左眼屈光度均值分别是（1.50±0.45）和（1.25±0.42）D，（t=-0.889，P>0.05），第3周转基因小鼠右左眼屈光度均值分别是（-2.50±2.59）和（-2.50±4.32）D，（t=0.000，P>0.05）；同周龄组不同性别转基因小鼠眼间比较屈光度数差异无统计学意义：第3周转基因小鼠雌雄性别眼屈光度均值分别是（-0.5±3.83）和（-4.17±1.94）D，（t=2.079，P>0.05），第12周转基因小鼠雌雄性别眼屈光度均值分别是（1.50±0.84）和（1.50±1.87）D（t=0.000，P>0.05）；不同周龄组转基因小鼠屈光度数差异有统计学意义（H=20.910，P<0.05）；两两组间比较显示转基因小鼠第3周与第6周屈光度数差异有统计学意义（Z=-3.259，P<0.001），其余各周之间比较屈光度数差异均无统计学意义（P>0.001）。结论人突变Lumican基因转基因小鼠出生后3周时为近视，随时间增加向远视发展，第6周远视屈光度数达到大，8～20周时远视屈光度数逐渐减小并趋于稳定。（中华眼科杂志，2015，51：527-531）
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Lumican转基因小鼠形觉剥夺性近视眼模型眼球生物学参数变化
目的 探讨人突变Lumican基因转基因小鼠形觉剥夺性近视模型的眼球生物学参数的变化,比较人Lumican基因突变与形觉剥夺对小鼠眼轴、屈光度数及巩膜发育的影响.方法 实验研究.由50只人突变Lumican基因转基因鼠(10日龄)中随机选取34只,以及46只同日龄野生C57BL/6J小鼠中随机选取32只,以眼睑缝合法建立单眼形觉剥夺模型,其余转基因小鼠(16只)及野生鼠(14只)不作处理.依据眼别将其分为6组:转基因小鼠未处理组(A组,16只,32只眼);转基因小鼠形觉剥夺眼组(B组,34只,34只眼);转基因小鼠形觉剥夺对侧眼组(C组,34只,34只眼);野生小鼠未处理组(D组,14只,28只眼);野生小鼠形觉剥夺眼组(E组,32只,32只眼);野生小鼠形觉剥夺对侧眼组(F组,32只,32只眼).各组小鼠8周龄(56日龄)时经复方托吡卡胺散瞳后行检影验光,测量双眼屈光度数,并以等效球镜度数表示.脱颈法处死小鼠后摘取眼球组织,行离体眼轴测量,后分离巩膜组织,实时荧光定量PCR(qPCR)技术于RNA水平上检测各组样本巩膜组织中Lumican基因表达情况.采用单因素方差分析联合LSD检验比较转基因小鼠与野生小鼠中形觉剥夺眼、对侧眼和未处理眼的基因水平表达量、屈光度及眼轴结果,转基因小鼠与野生小鼠间比较采用两独立样本t检验进行统计学分析.结果 巩膜组织中Lumican基因表达量在转基因小鼠形觉剥夺眼中表达增加,较对侧眼及未处理眼差异具有统计学意义(F=6.262;P＜0.05);转基因小鼠形觉剥夺眼、对侧眼较野生小鼠相应眼表达也明显增加,差异具有统计学意义(t=4.772,2.218;P＜0.05).形觉剥夺46 d后,转基因小鼠和野生小鼠形觉剥夺眼屈光度分别为(-0.38±1.10)和(0.14±1.26)D,相对于对侧眼及未处理眼差异有统计学意义(F=9.525,10.067;P＜0.01);平均眼轴长度分别为(3.28±0.07)和(3.24±0.09) mm,和自身对照眼及正常对照眼相比差异有统计学意义(F=7.183,6.671;P＜0.05).结论 人突变Lumican基因转基因小鼠形觉剥夺眼屈光度向近视方向漂移,眼轴增长,巩膜组织中Lumican基因表达较野生鼠明显升高,较对侧眼也有所升高.Lumican基因可能参与了病理性近视的形成机制,提示“基因+环境”双重因素对近视发生发展过程中可能造成交互影响.
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灌胃给予六味地黄丸后椎间盘退变组织蛋白多糖成分的变化
背景：蛋白多糖、硫酸软骨素、硫酸角质素、透明质酸均是维持椎间盘正常结构的重要物质，影响整个椎间盘的生理功能。
目的：观察六味地黄丸对兔椎间盘退变模型椎间盘蛋白多糖成分的影响，探讨六味地黄丸防治椎间盘退变的疗效。
方法：将80只新西兰兔随机分为六味地黄丸组、模型组、假手术组、空白对照组，每组20只。模型组、六味地黄丸组予建立椎间盘退变动物模型；假手术组行相同手术入路进入腰椎，再依次缝合组织；六味地黄丸组给予六味地黄胶囊混悬液10 mg/kg灌胃，1次/d；模型组、假手术组、空白对照组灌予等量生理盐水，1次/d，自然喂养。于2，4，6，8周后每个时间点处死动物，每次每组处死5只。留取椎间盘标本，测量椎间盘细胞蛋白多糖成分。
结果与结论：随着给药时间的延长，六味地黄丸能上调椎间盘退变模型中糖胺多糖含量、硫酸软骨素/硫酸角质素比值及透明质酸含量，从而稳定蛋白多糖含量，在一定程度上延缓椎间盘的退变。 -
六味地黄丸对椎间盘体外退变模型椎间盘细胞外基质组分的影响
背景:六味地黄丸作为补益肝肾名方,临床应用其治疗腰痛已取得良好的效果,而有关六味地黄丸治疗肾虚型腰痛的作用机制尚不明确.目的:观察六味地黄丸对兔椎间盘体外退变模型细胞外基质组分的影响,探讨六味地黄丸防治椎间盘退变的疗效.方法:将20只新西兰兔带终板的L1-L6椎间盘100个随机分为空白对照组、肿瘤坏死因子 α 组、p38-JNK/SAPK阻断组、六味地黄丸组、肿瘤坏死因子α+六味地黄丸组,每组20个.肿瘤坏死因子α组培养液中含10 mg/L肿瘤坏死因子α2μL,p38-JNK/SAPK阻断组培养液中含p38MAPK特异性阻断剂SB203580,JNK特异性阻断剂SP600125各20μmol/L 10μL,六味地黄丸组培养液中含体积分数为10%六味地黄丸血清,肿瘤坏死因子α+六味地黄丸组含10 mg/L肿瘤坏死因子α2μL和体积分数为10%六味地黄丸血清,分别于培养的第2,4,8,14天收集标本待测.结果与结论:在培养基中加入肿瘤坏死因子α能明显上调Ⅰ型胶原mRNA和蛋白的表达,下调糖胺多糖含量、硫酸软骨素/硫酸角质素比值、透明质酸含量,蛋白多糖mRNA和蛋白的表达、Ⅱ型胶原mRNA和蛋白的表达(P<0.05),六味地黄丸含药血清可部分对抗肿瘤坏死因子α所导致的改变,提示六味地黄丸可在一定程度上延缓了椎间盘退变.
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湿注骨节膝骨关节炎关节液CS和KS分析及临床意义
目的:探讨湿注骨节膝骨关节炎关节液中硫酸软骨素(CS)和硫酸角质素(KS)含量与关节软骨损伤程度的关系.方法:2011年5月-2012年12月收集膝骨关节炎病例63例(67膝),Kellgren和Lawrecne分级,采用ELISA法用酶标仪测定CS和KS含量,与健康对照组比较,分析KOA软骨损伤KeUgren和Lawrecne分级与CS和KS含量的相关性.结果:Kellgren和Lawrecne分级0级与1级CS含量分别显著高于2、3、4级(P＜0.05),1级与0级KS含量分别显著高于3级和4级(P＜0.05),4级KS/CS显著高于0、1、2、3级(P＜0.05).结论:湿注骨节KOA关节液KS和CS含量的变化可应用于关节软骨明显损伤与否的评估,CS/KS增高能够提示关节软骨的损伤严重,已经波及软骨下骨质.
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大鼠骨骼双染标本制作方法及要点
茜素红对已骨化骨骼的染色有较强的特异性,很容易将其显示成红色或紫红色,自1897年Schultze[1]采用茜素红对骨骼进行单染以来,该方法已成为研究骨骼畸形的常用方法.根据阿利新蓝可使软骨中硫酸软骨素、硫酸角质素等主要成分呈现蓝色的特点,Dawson等[2-3]改进了单染法,采用茜素红和阿利新蓝对骨骼标本进行双重染色,使之成为研究骨和软骨发育较为直观的方法.
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恶性肿瘤与Lumican的关系研究进展
基膜聚糖(Lumican)是一种蛋白聚糖,隶属于富含亮氨酸低分子蛋白聚糖(SLRP)家族[1],早在牛角膜基质中发现[2].和其他SLRP蛋白一样,Lumican在结构上主要由4个结构域组成:(1)16个氨基酸残基构成的信号肽;(2)N端结构域,包含硫化酪氨酸及二硫键;(3)用于蛋白质相互作用的亮氨酸高度重复的分子结构;(4)羧基端结构域,包含两个保守半胱氨酸残基.根据其聚糖修饰形式的不同,Lumican以核心蛋白共价连接未硫酸化的聚乙酰氨基乳糖的糖蛋白形式和核心蛋白共价连接硫酸化的硫酸角质素侧链的蛋白聚糖形式存在[3].
