树突细胞介导的独特型瘤苗的体外抗骨髓瘤作用

目的研究树突细胞(DC)介导的独特型瘤苗诱导骨髓瘤抗原特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的抗肿瘤免疫反应.方法从多发性骨髓瘤(MM)患者外周血中分离获取DC前体细胞,使用GM-CSF、IL-4与TNF-α诱导分化促成熟.加入MM患者的M蛋白F(ab′)2片段(Id),诱导MM肿瘤特异性CTL.光学显微镜下观察其培养过程中形态特征变化,电镜观察其超微结构,间接免疫荧光观察其表型特征,采用MTT法检测致敏DC促自体T淋巴细胞增殖的能力以及患者CTL对自体骨髓瘤细胞的特异性细胞毒杀伤作用.结果GM-CSF、IL-4和TNF-α配伍可有效地从MM患者外周血单核细胞中诱导出大量成熟的功能性DC.MM患者自体血清Id冲击致敏的成熟DC能够显著地提高T细胞的增殖能力,并且使幼稚T细胞活化成为肿瘤独特型CTL,各个剂量的CTLs均能够产生针对自体MM细胞的抑制性杀伤反应.结论在MM患者外周血中可获得典型的DC,使用负载了Id的DC疫苗能够诱导出有效的抗肿瘤免疫应答反应,以DC为基础的疫苗可能在MM免疫治疗中发挥重要的作用.

含吡柔比星联合化疗方案治疗392例非霍奇金淋巴瘤患者长期随访结果分析

目的分析含吡柔比星(THP)方案治疗非霍奇金淋巴瘤(NHL)患者的疗效和不良反应.方法回顾性分析392例NHL患者临床特征及用含THP方案化疗加或不加放疗的近期疗效、不良反应和远期生存率.结果392例NHL患者中,T/NK细胞NHL占23.2%,B细胞NHL占68.4%,常见的病理类型为弥漫性大B细胞NHL(56.9%)和外周T细胞性NHL(12.5%);中位年龄47(5～87)岁,大于60岁者占26.0%;男性多见(61.0%);一般状况较好(活动状态＜1级占92.6%);有B症状者占25.0%;临床分期Ⅰ～Ⅱ期占63.2%;国际预后指数评分0～2分占84.7%.392例NHL患者接受化疗为主的治疗方法,绝大多数为CTOP方案(占93.9%),化疗后局部放疗占112例(28.5%).在可评价疗效的385例NHL患者中,总有效率88.5%,完全缓解率63.6%.368例患者共接受含THP的CTOP方案化疗1598个疗程,不良反应主要为骨髓抑制,其中Ⅲ～Ⅳ度粒细胞减少占12.8%,553个疗程(34.6%)必须用G-CSF支持或预防,Ⅲ～Ⅳ度血小板减少占1.0%,Ⅲ～Ⅳ度贫血占1.5%;脱发仅占19.8%;心脏毒性轻微,仅占5.8%;化疗相关死亡6例.中位随访24个月,预计1年、3年和5年生存率分别为86.4%、66.5%和59.2%,中位生存期尚未达到.结论采用含THP联合化疗方案治疗NHL疗效好、毒性较低,值得作进一步研究.

多发性骨髓瘤细胞脑源性神经营养因子对血管新生作用的研究

目的研究多发性骨髓瘤(MM)细胞脑源性神经营养因子(BDNF)的表达水平及其与MM细胞诱导的血管新生的关系.方法采用RT-PCR法、Western blot法及ELISA法检测MM细胞系KM3、RPMI 8226细胞BDNF的表达及分泌.采用MTY法观察MM细胞培养上清液对脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖的作用;用改良的Boyden小室法观察MM细胞培养上清液对HUVEC迁移的影响;采用体外小管形成实验,观察MM细胞培养上清液对HUVEC分化的影响.结果KM3、RPMI 8226细胞不仅表达BDNF mRNA,也表达和分泌BDNF蛋白,BDNF的基础分泌水平在其生物学作用范围内.KM3、RPMI 8226细胞培养上清液均可明显促进HUVEC增殖,含50.0%KM3细胞培养上清液组和完全KM3细胞培养上清液组HUVEC数分别为对照组的(1.85±0.23)倍和(2.16±0.29)倍(P＜0.05),抗人类BDNF中和抗体可部分抑制其促增殖活性;含50.0%KM3细胞培养上清液组HUVEC迁移指数为1.85 ±0.23,完全KM3细胞培养上清液组HUVEC迁移指数为2.16±0.29,与对照组比较,差异有统计学意义(P值均＜0.05),并可明显促进基质胶中网状毛细血管形成(P＜0.01),抗BDNF中和抗体可明显抑制其作用.结论MM细胞表达和分泌BDNF,BDNF可能参与MM细胞诱导的血管新生.

T淋巴母细胞淋巴瘤石蜡包埋组织中HOX11L2基因的表达及其临床意义

目的探讨在石蜡包埋T淋巴母细胞淋巴瘤(T-lymphoblastic lymphoma,T-LBL)组织中检测目的基因HOX11L2表达的可行性及其意义.方法采用RT-PCR及实时荧光定量PCR(RQPCR)方法,对54例T-LBL石蜡包埋标本进行HOX11L2mRNA检测.结果54例中有7例(13.0%)检测到HOX11L2mRNA表达.被检出的7例均为儿童青少年,中位年龄9(5～15)岁,均有前纵隔占位病变,其中5例Ki67增值指数(PI)≥80%,2例病变累及中枢神经系统.HOX11L2表达组与未表达组在发病年龄、Ki67 PI及有无纵隔肿块的差异具有统计学意义(P值均＜0.05);与未表达组相比,HOX11L2表达组的生存期较短(中位生存时间分别为11.5和7.0个月),两组差异具有统计学意义(P＜0.05);两组性别、初诊时临床分期、中枢神经系统以及骨髓受累与否差异无统计学意义.结论应用RT-PCR或RQ-PCR方法在石蜡包埋组织中检测目的基因的表达是可行的.HOX11L2mRNA表达高发于儿童,可能与部分儿童T-LBL的发生以及预后不良有关.

福建畲族葡萄糖-6-磷酸脱氢酶基因突变型

目的研究福建畲族葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)基因突变型特点,调查其G6PD缺乏症发生率及基因频率.方法用硝基四氮唑蓝(NBT)纸片法进行G6PD缺乏症定性筛查,用突变特异性扩增系统、错配碱基PCR介导酶切位点/限制性内切酶图谱分析、聚合酶链反应-单链构象多态性分析(PCR-SSCP)和DNA测序进行基因突变型鉴定.结果在1820名青水畲族和764名穆云畲族人中,分别发现101例和104例酶活性异常,两地的致病基因频率分别为0.0607和0.1706.在穆云乡54例纯畲族血缘的样本中,共检出nt1376G→T突变38例、nt1388G→A突变12例、nt95A→G突变6例,三种基因突变型分别占70.3%,18.5%和11.1%;并发现1例nt1376G→T复合nt95A→G突变、1例nt1376G→T复合nt1388G→A突变.在青水畲族中发现6例nt1024C→T突变,占8.6%;发现1例392G→T突变.结论①nt1376G→T、nt1388G→A是福建畲族中主要的基因突变型,中华民族具有共同的G6PD基因突变型,因而可能源于共同的祖先.②在畲族人群中发现nt1376G→T、nt1388G→A、nt95A→G、nt1024C→T和nt392G→T 5种基因突变型.③发现nt1376G→T复合nt95A→G突变、nt1376G→T复合nt1388G→A突变.④nt95A→G是穆云畲族中另一种常见的基因突变型;1024C→T是青水畲族中常见的一种G6PD基因突变型.⑤明确青水畲族中G6PD基因频率为0.0607,穆云畲族中为0.1706,为上述地区G6PD缺乏症的防治提供决策参考.

半巢式聚合酶链反应方法检测弥漫性大B细胞淋巴瘤bcl-2/IgH基因重排

目的寻找一种敏感、特异的方法检测弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)bcl-2/IgH基因重排,并通过测定产物的序列,以了解所建方法的可靠性.方法运用专业引物设计软件设计bcl-2/IgH基因重排半巢式PCR引物,对52例经临床病理确诊的DLBCL石蜡包埋组织及10例慢性扁桃体炎患者的新鲜扁桃体组织通过半巢式递降温度梯度PCR(touch down PCR)扩增,检测bcl-2/IgH基因重排,并对其产物进行克隆和序列分析.结果通过一步法检测到bcl-2/IgH基因重排8例,其中DLBCL 6例,新鲜扁桃体组织2例;进行第2次半巢式PCR时仅在DLBCL中发现5例阳性,新鲜扁桃体组织均阴性.将阳性产物在网上序列分析显示:一步法检测到的8例中有3例为假阳性,而半巢式PCR扩增出的5例均为bcl-2/IgH基因重排片段.3例假阳性的片段分别与人类第19号染色体BAC331191,LLNLR-245D11基因片段及1号染色体RP11-498P10基因片段同源.结论常用的检测bcl-2/IgH基因重排引物扩增结果存在一定假阳性,其机制可能是因为人类基因组中存在与常用引物同源性较高的序列.为研究设计的引物与传统的引物结合,进行半巢式PCR可以排除这种假阳性扩增,提高诊断的准确性.

变性高效液相联合测序及酶切检测广西葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症的基因型

目的探索广西地区葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)缺乏症新的基因型.方法对广西30例G6PD缺乏症的基因型使用变性高效液相(DHPLC)筛选,然后使用直接测序或限制性内切酶进行再检测.结果在我国大陆第一次确定G6PD Viangchan(871G→A,1311C→T)的存在,共3例,占10.0%;首次发现1例G6PD Union(1360C→T),占3.3%;其余为G6PD Ganton(1376G→T)占30.0%,G6PD Kaiping(1388G→A)占26.7%和G6PD Gaohe(95A→G)占23.3%.结论除G6PD Ganton、Kaiping和Gaohe三种中国常见的变异型之外,广西尚有G6PD Viangchan和G6PD Union.G6PD Viangchan和G6PD Union在我国大陆均为首次报道.

范可尼贫血患者FANCA基因突变研究

目的研究范可尼贫血(FA)患者致病基因的突变类型及其蛋白质的表达和功能.方法以3例来自FA-A型患者的原始淋巴细胞系为研究对象,用Western blot和免疫沉淀法分析FANCA、FANCD2蛋白的表达以及FANCA与FANCF蛋白的相互作用,RT-PCR方法检测FANCA基因的转录,多重性连接依赖的探针扩增(MLPA)法以及DNA序列测定确定FANCA基因的突变类型.结果3例FA-A型患者均未检测到FANCA蛋白的表达,FANCD2蛋白不能发生单泛素化(monoubiqitination)修饰,并发现其FANCA基因均存在双等位基因的病理性突变.结论3例FA-A型患者均无功能性FANCA蛋白表达;基因缺失、移码突变和剪切位点突变是FANCA基因的主要失活方式.

弥漫性大B细胞淋巴瘤CD10、bcl-6、MUM1蛋白表达与分子分型

2000年以来,经免疫组化和DNA微阵列研究,发现依据免疫表型和基因表达谱可初步将弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)分为生发中心样B细胞(germinal center B-cell-like,GCB)和非生发中心样B细胞(non-GCB)两大类型[1-5].应用CHOP(环磷酰胺,阿霉素,长春新碱,泼尼松)方案治疗这两类基因表达不同的DLBCL,5年生存率分别为70%和12%,GCB的预后明显好于non-GCB类型.国内尚未见相关的研究报道.

高原红细胞增多症与高原病关系的临床回顾

高原红细胞增多症(HAPC)是高原上常见的慢性高原病之一.以往的研究多局限于其单一疾病的研究,鲜有探讨HAPC与其它高原病(HAD)的相互关系.现对我院(海拔3658 m)1956年1月至1995年12月收治的HAD患者随访资料进行回顾性总结,旨在探讨HAPC与HAD的关系.

三氧化二砷联合抗坏血酸对骨髓瘤细胞增殖与凋亡的作用

近年国内外学者开始将三氧化二砷(As2O3)试用于难治性、复发性多发性骨髓瘤(MM)的治疗,已取得一定疗效.为了探讨其作用机制,并寻找低毒有效的联合治疗方案,我们观察As2O3及As2O3联合抗坏血酸(AA)对RPMI 8226细胞的增殖、杀伤与促凋亡效应的影响,进而探讨上述效应过程与死亡受体DR4、DR5的信号转导关系.

三例Hb Westmead复合东南亚缺失型α地中海贫血1的分析

我们报道广西地区3例Hb Westmead基因突变复合东南亚缺失型α地中海贫血1(SEA-α地贫1)的病例,依据突变特异性扩增系统(ARMS)原理[1],建立了ARMS快速检测Hb Westmead基因突变的方法.

骨髓纤维化颅内髓外造血一例

患者,女,38岁.因头昏14年,视力减退2月余,于2004年11月26日收住我院血液科.患者14年前出现头昏、乏力,多次查血常规示"贫血",曾11次做骨髓穿刺检查,均"干抽".7年前因"脾大,脾功能亢进"在当地医院行脾脏切除术.2001年5月6日到苏州大学第一附属医院血液科就诊,入院后骨髓穿刺示骨髓增生活跃,以晚幼红为主,粒系增生低下,未见骨髓小粒和非造血细胞.

Kimura病演变为非霍奇金淋巴瘤一例

Kimura病临床少见,其演变为恶性淋巴瘤更是罕见,现将我院收治1例报道如下.

供者淋巴细胞输注的免疫基础与临床应用

异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)是治疗恶性血液系统疾病的有效方法,随着人们对干细胞移植免疫理论的深入研究,为了能够在移植后更有效地预防或治疗白血病的复发,近年来供者淋巴细胞输注(donor lymphocyte infusion,DLI)引起了人们的关注.DLI是一种过继性细胞免疫治疗,其作用是进一步清除宿主体内残留的白血病细胞,也是allo-HSCT后移植物抗白血病(GVL)作用的进一步延伸.我们将对DLI的免疫基础及临床应用进行归纳,并对DLI的发展前景进行初步探讨.

B细胞非霍奇金淋巴瘤的放射免疫治疗进展

随着单克隆抗体(单抗)及杂交瘤技术的发展,肿瘤免疫导向治疗逐渐受到人们的重视.过去的十余年中,单抗免疫治疗的研究取得了可喜的进步,尤其是基因工程制备的人鼠嵌合抗CD20抗体(Rituximab,美罗华)经Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期临床研究证明疗效显著.与传统的化学药物治疗和放射治疗相比,单抗与肿瘤细胞结合更具选择性,可以相对地保护正常组织,从而针对肿瘤细胞进行靶向治疗,减少其不良反应.尽管如此,仍有半数的惰性非霍奇金淋巴瘤(NHL)和2/3的复发侵袭性NHL患者应用美罗华无效,为了增强抗体的治疗作用,研究人员尝试将具有细胞毒作用的放射性核素标记到抗体上,利用抗体的导向作用,引导放射性核素达到靶位点杀伤肿瘤细胞,即放射免疫治疗(radioimmunotherapy,RIT).现就RIT在B细胞NHL中的研究进展作一综述.

一例脾脏戈谢细胞的超微结构、免疫表型及细胞化学

为提高戈谢病的诊断水平,我们对1例戈谢病患者的脾脏戈谢细胞进行了超微结构、免疫表型及细胞化学研究,现报道如下.

一种改良的骨髓染色体制备与G显带方法

目前制备骨髓染色体方法主要有直接法、短期培养法和同步化法.同步化法操作技术要求高、分裂指数低,不易推广[1].随着间期荧光原位杂交技术及比较基因组杂交技术应用于白血病的研究,拓展了染色体分析的范围,提高了识别异常的能力,但因荧光试剂和检测设备昂贵,尚难广泛应用于临床.我们介绍一种改良的骨髓染色体制备与G显带方法.我们应用该方法对150例恶性血液病患者进行骨髓染色体检查,获得了满意效果.现将具体方法介绍如下.

应用变性高效液相色谱法检测葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症的三种常见基因突变

葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)缺乏症呈X连锁不完全显性遗传.G6PD具有遗传多态性,其基因定位在染色体Xq28[1],现已鉴定的G6PD基因突变型有131种,在我国已报道的有20种[2],其中多为点突变.G6PD缺乏症呈全球性、多种族、多民族分布,其基因突变型具有民族和种族异质性,我国是一个多民族国家,在G6PD基因上一定存在着多种类型的突变,研究这些突变型对我国群体遗传学、人类学、民族渊源和变迁至关重要,也可填补我国"人类基因组多样性计划"G6PD座位的空白.变性高效液相色谱法(DHPLC)是近年发展起来的检测突变的新技术,我们初步探索了DHPLC在中国人G6PD基因突变检测中的应用.

欢迎订阅2006年《中华血液学杂志》