中华血液学杂志
Chinese Journal of Hematology 중화혈액학잡지
- 主管单位: 中国科学技术协会
- 主办单位: 中华医学会
- 影响因子: 1.17
- 审稿时间: 1-3个月
- 国际刊号: 0253-2727
- 国内刊号: 12-1090/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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聚酰胺-胺型树枝状聚合物介导人凝血因子Ⅷ的体外高效稳定表达
目的应用纳米材料聚酰胺-胺型(PAMAM)树枝状聚合物/逆病毒基础的质粒载体复合体,在表达水平、持续时间和细胞毒性三方面进行血友病A基因治疗的体外研究.方法 PAMAM树枝状聚合物与含B区缺失(760 aa~1 639 aa)人FⅧ cDNA(FⅧBD cDNA)的以逆病毒为框架的重组表达质粒载体pLNC-FⅧBD形成复合体后,转染NIH3T3细胞系,于转染后第2,5,10,15,30 d留取细胞培养上清,分别采用一期法和ELISA法检测其中人FⅧ的凝血活性(FⅧ∶C)和抗原含量(FⅧ∶Ag),并应用RT-PCR方法检测细胞中FⅧBD cDNA的转录,以细胞生长抑制率来表示PAMAM的细胞毒性.结果 PAMAM载体介导的人FⅧ的体外表达可持续30 d,24 h内每ml细胞上清中106细胞表达FⅧ∶C平均为0.929 U,FⅧ∶Ag平均为0.188 μg,期间FⅧ表达未见降低;PAMAM的细胞生长抑制率为5.32%.结论 PAMAM能够有效介导逆病毒基础的质粒载体pLNC-FⅧBD转染靶细胞,并维持高效稳定表达,且PAMAM的细胞毒性较低.
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巨血小板综合征糖蛋白Ⅸ基因异常的分子生物学研究
目的探讨糖蛋白(GP)Ⅸ基因点突变G2113→A在导致巨血小板综合征(BSS)中的意义.方法用限制性内切酶分析患者和其直系亲属以及40名正常人等位基因;采用定点诱变技术构建含有GPⅨ点突变G2113→A的质粒PD-ⅨG2113A;用含有GPⅠbα,GPⅠbβ和GPⅨ或GPⅨ突变型全长编码序列的质粒对中国仓鼠卵巢(CHO)细胞共转染;流式细胞仪检测转染后的CHO细胞表面GP的表达;免疫染色和免疫印迹分析转染后的CHO细胞胞浆中GPⅠbα和GPⅨ的表达.结果先证者为纯合子,母亲和兄长均为杂合子;突变型CHO 细胞膜上GPⅨ和GPⅠbα的表达显著减少,但大量存在于细胞胞浆中.结论本例BSS患者的发病机制为GPⅨAla139(GCC)→Thr(ACC)突变.该突变不影响GPⅠb/Ⅸ在细胞内的合成与组装,但影响其在细胞膜表面的锚定与表达.
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人脐血单个核细胞体外分化为神经细胞
目的探讨核转录因子(NF)-κB配体受体激动因子(receptor activator of NF-Kappa B ligand,RANKL)和脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)体外诱导人脐血细胞(human umbilical cord blood cells, HUCBC)分化为神经元和神经胶质细胞的可行性.方法采集足月妊娠、正常分娩的新鲜脐血,取单个核细胞(MNC),利用人可溶性NF-κB配体受体激动因子(sRANKL)、BDNF作为分化诱导因子进行体外诱导,维甲酸(RA)诱导分化作为对照,倒置显微镜动态观察细胞生长、分化情况;培养10 d后,应用免疫细胞化学染色法检测培养细胞的胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和神经元特异核蛋白(NeuN)表达情况,进行细胞性质鉴定.结果诱导分化10*!d后,RANKL、BDNF和BDNF+RANKL组的NeuN阳性细胞数分别为(97.0±13.5)个,(85.0±5.6)个,(167.0±19.7)个,分别是对照组[(55.7±8.5)个]的1.7, 1.5, 3.0倍,GFAP阳性细胞数分别为114.7±18.0,233.3±21.7, 289.0±24.9,分别是对照组的1.4,2.9,3.6倍.RANKL向神经元方向诱导分化的作用与BDNF相当,向神经胶质细胞分化的作用不及BDNF.RANKL和BDNF对HUCBC向神经细胞分化具有协同作用,二者联合应用明显促进HUCBC向神经元和神经胶质细胞分化.RANKL和BDNF联合应用诱导形成的神经细胞形态较单独应用更为典型,轴树突更长、数量更多.结论 RANKL和BDNF可在体外诱导脐血单个核细胞分化为神经元和神经胶质细胞,二者具有协同作用.
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血栓疾病患者血浆肝素辅因子Ⅱ活性和抗原水平检测及意义
目的了解肝素辅因子Ⅱ(HCⅡ)活性及抗原水平在动、静脉血栓性疾病中的变化及其与动、静脉血栓性疾病之间的关系.方法用发色底物法测定50名正常人,75例脑梗死、50例心肌梗死及36例深静脉血栓患者血浆HCⅡ活性;发色底物法检测深静脉血栓患者中HCⅡ缺乏者血浆抗凝血酶(AT)活性;Western blot检测部分样品(每组36例)血浆HCⅡ抗原含量.结果血浆HCⅡ活性与其抗原呈平行变化;正常对照组血浆HCⅡ活性及抗原水平分别为(96.80±20.11)%,0.93±0.19与脑梗死组[(99.97±21.14)%,0.96±0.24]、心肌梗死组[(98.18±29.35)%,0.95±0.20]及深静脉血栓形成组[(89.57±17.12)%,0.87±0.18]比较,差异无显著性,但深静脉血栓形成组HCⅡ活性和抗原均呈降低趋势;HCⅡ明显减低者在正常人及患者之间的分布频度无显著差异;深静脉血栓中HCⅡ缺乏者血浆抗凝血酶活性及纤维蛋白原浓度正常.结论血浆HCⅡ变化可能不是中国湖南汉族人心、脑血栓病的危险因子;是否与静脉血栓形成相关有待进一步证实.
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特发性血小板减少性紫癜患者外周血淋巴细胞协同刺激分子的表达
目的探讨T、B淋巴细胞表面协同刺激分子在特发性血小板减少性紫癜(ITP)的变化.方法用流式细胞术检测21例ITP患者和9名正常人外周血淋巴细胞协同刺激分子B7-CD28和CD40表达率,用ELISA方法检测ITP患者外周血PAIgG的含量.结果 ITP患者外周血CD4+CD28+细胞率明显低于正常对照,CD86+、CD19+CD86+/CD19+细胞率明显高于对照组(P<0.05),而CD28+、CD40+、CD80+、CD19+CD80+、CD19+CD86+、CD19+CD40+、CD4+CD28+/CD4+、CD19+CD80+/CD19+、CD19+CD40+/CD19+细胞率与对照组相比差异无显著性.21例ITP患者中16例PAIgG的含量高于正常,平均值为(184.62±38.00) ng/107血小板,且PAIgG的含量与CD19+CD86+/CD19+细胞率呈正相关.结论 ITP患者CD4+T淋巴细胞表面的协同刺激分子CD28表达无缺陷.PAIgG与B淋巴细胞表面的协同刺激分子CD86的改变明显相关,因此CD86的改变可能参与ITP自身免疫的病理机制,并为ITP患者单克隆抗体治疗提供理论指导.
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血管紧张素Ⅱ对单核细胞组织因子表达的影响及调控机制
目的观察血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对人单核细胞组织因子(TF)表达的影响及机制.方法人外周血单核细胞的分离采用淋巴细胞分离液及Percoll.细胞促凝活性(PCA)的检测采用一期凝固法.细胞TF抗原测定采用ELISA法; TF mRNA检测采用RT-PCR的方法;IκBα水平分析采用Western blot方法;NF-κB的变化分析用凝胶电泳迁移率实验.结果 AngⅡ(10-9~10-7mol/L) 可剂量依赖性诱导单核细胞PCA、 TF抗原及mRNA的增加,并有明显的时效关系.洛沙坦(losartan)浓度在10-6~10-5 mol/L可不同程度地阻断AngⅡ的作用.Staurosporine(2.5×10-7 mol/L)以及金雀异黄素(4×10-5 mol/L)可显著抑制AngⅡ(10-7 mol/L)诱导的单核细胞PCA、TF抗原增加及 TF mRNA的表达; AngⅡ(10-7 mol/L)作用15 min可引起单核细胞IκBα水平下降(P<0.05),60 min时IκBα水平降至低水平,180 min时恢复至正常水平;凝胶电泳迁移率显示AngⅡ(10-7 mol/L)诱导单核细胞NF-κB的作用在15 min 起效,60 min时核内NF-κB的水平高,180 min恢复正常;洛沙坦(10-5 mol/L)或PDTC(10-4mol/L)均可抑制NF-κB的活化.结论 AngⅡ可诱导单核细胞TF的表达, 该作用是通过AngⅡ1型受体实现的.胞内PKC发挥较强的作用.NF-κB的活化在 AngⅡ诱导单核细胞TF表达中起重要作用.
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血小板第4因子对脐血CD34+细胞黏附功能的影响
目的研究血小板第4因子(PF4)对新鲜脐血CD34+细胞及扩增后脐血CD34+细胞黏附功能的影响;PF4对脐血CD34+细胞上的黏附分子CD49d及基质细胞趋化因子(SDF-1)受体CXCR4的作用.方法采用免疫磁珠法(MACS)分选CD34+细胞,结晶紫染色测定细胞总黏附性,免疫荧光标记流式细胞仪测定CD49d及CXCR4的表达.结果①PF4 可使新鲜脐血CD34+细胞总黏附性提高,且与剂量相关.②SDF-1 100 ng/ml可使脐血CD34+细胞总黏附性提高.③脐血CD34+细胞扩增10 d后未加PF4刺激的自发以及经SDF-1诱导的黏附功能开始下降,在扩增脐血CD34+细胞不同时间段加入100ng/ml PF4,脐血CD34+细胞对基质层的黏附能力始终保持较高水平,以0天时脐血CD34+细胞黏附性为100%,扩增14 d时脐血CD34+细胞黏附性PF4组为(262.04±64.81)%,同期对照组为(64.35±8.29)%,经SDF-1诱导下扩增14 d的CD34+细胞的总黏附性PF4组为(138.31±32.39)%,同期对照组为(67.66±12.44)%.④PF4 100 ng/ml作用于CD34+细胞时,CD49d表达增长13.02%,CXCR4表达增长17.33%.结论 PF4可使新鲜及扩增后的脐血CD34+细胞黏附功能增强,并促进CD49d及CXCR4的表达,提示PF4可能有助于脐血干细胞的归巢.
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一种新的突变引起遗传性凝血因子Ⅴ缺乏症
目的研究一个遗传性凝血因子Ⅴ(FⅤ)缺乏症家系的基因缺陷.方法采用比浊法测定凝血酶原时间、凝血酶时间、活化的部分凝血活酶时间;采用凝血因子活性测定法(一步法)和BA-ELISA法对先证者及其家系成员血浆FⅤ活性和抗原进行测定;采用PCR 及DNA 序列测定技术,对FⅤ基因组DNA中25个外显子和5′非翻译端的序列进行了PCR扩增,PCR产物回收纯化后直接测序,并经T/A克隆测序对所发现突变进行证实.结果先证者血浆FⅤ严重缺乏,FⅤ活性为1%, FⅤ抗原为1.54%.基因研究显示为复合杂合子,其基因组DNA第4外显子675位核苷酸发生单个碱基A缺失,呈杂合状态,该致病基因来自先证者母亲,与来自父方的另外一条等位基因的未知缺陷,共同导致先证者血浆FⅤ严重缺乏.结论发现一种新的突变675delA,该缺失引起移码,导致转录提前终止,引起遗传性FⅤ缺乏症.
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自体纯化CD34+细胞移植治疗严重自身免疫性疾病的初步研究
目的探讨自体外周血CD34+细胞移植治疗严重自身免疫性疾病的干细胞动员、细胞采集和分选、预处理和并发症处理等问题.方法 10例重度自身免疫性疾病患者接受自体外周血CD34+细胞移植治疗.采用环磷酰胺(CTX)+rhG-CSF方案动员外周血干细胞,并以CliniMACS细胞分选仪分选CD34+细胞,适时用CTX+抗胸腺细胞球蛋白(7例)或CTX+全身照射(3例)两种预处理方案后,进行CD34+细胞回输的方法治疗.结果经CTX+rhG-CSF方案动员并以CliniMACS细胞分选仪分选后,可获得(1.98±0.95)×108的CD34+细胞,其纯度为(91.4±10.6)%,回收率为(60.5±19.8)%.在回输(2.14±1.05)×106/kg的CD34+细胞后,ANC ≥0.5×109/L的时间为(8.6±2.5)d,血小板升至20×109/L的时间为(9.0±5.2)d.在造血恢复后,所有CD3+细胞、CD19+细胞和CD16+CD56+细胞均未恢复至移植前状态.在造血和免疫抑制时,巨细胞病毒感染的发生率较高.2例患者死于移植相关并发症.所有患者近期疗效满意,6例系统性红斑狼疮患者DAI评分由移植前的平均17分降为移植后的4分;类风湿关节炎患者DAS28评分由6.4分降至1.8分;干燥综合征患者的症状和体征均明显缓解.结论对常规治疗无效的严重自身免疫性疾病,自体外周血CD34+细胞移植是可选择的治疗方法之一.
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自身免疫性血小板减少性紫癜相关抗体的研究
目的探索对自身免疫性血小板减少性紫癜(AITP)诊断特异和敏感的实验方法.方法采用单克隆抗体特异性俘获血小板抗原技术(MAIPA技术)并加以改进,对比检测血小板洗脱液和血浆中血小板膜糖蛋白特异性抗体.结果 AITP患者血浆游离抗血小板膜糖蛋白(GPⅡb/Ⅲa、GPⅠb/Ⅸ)抗体总阳性率为38.89%(54例中21例),洗脱血小板表面抗血小板膜糖蛋白(GPⅡb/Ⅲa、GPⅠb/Ⅸ)抗体总阳性率为68.52%(54例中37例),两者差异有显著性(校正χ2=19.39,P<0.005).原发AITP组血浆游离及洗脱血小板表面抗血小板糖蛋白(GPⅡb/Ⅲa、GPⅠb/Ⅸ)特异性抗体总阳性率与继发性AITP组比较差异无显著性.AITP患者血小板数量与自身抗体滴度呈明显负相关.结论 MAIPA法检测血小板洗脱液中抗血小板糖蛋白抗体在AITP的诊断和治疗中具有高度特异性,且敏感性较血浆抗体检测显著提高.
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重症恶性疟疾伴白细胞和血小板显著减少一例
患者,女,17岁.因反复寒战、高热,于2002年8月21日来我院就诊.患者1周前突发寒战、高热.发热时口渴、气短、头痛、全身肌肉酸痛.高热反复发作,每次持续3~4 h后出汗退热.
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特发性血小板减少性紫癜的细胞免疫机制
特发性血小板减少性紫癜(idiopathic thrombocytopenic purpura, ITP)是一种自身免疫性疾病,其特征是未成熟的血小板在单核巨噬系统被吞噬细胞破坏引起血小板减少症.越来越多的资料显示,除体液免疫机制外,在ITP尤其是慢性ITP(CITP)的发病中,细胞免疫起了非常重要的作用.
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腹腔镜脾切除治疗特发性血小板减少性紫癜
腹腔镜脾切除治疗特发性血小板减少性紫癜(ITP),国外已较普遍应用,我国仅见喻强[1]7例报道,现将我院2001年7月~2002年10月开展的腹腔镜脾切除治疗ITP18例报告如下.
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凝血因子Ⅷ活性升高与缺血性脑卒中
国外研究报道认为,血浆凝血因子Ⅷ活性(FⅧ∶C)升高是血栓性疾病的一个危险因子.但国内未见报道.为此,我们对323例缺血性脑卒中(IS)患者进行了FⅧ∶C测定,分析FⅧ∶C升高在天津地区IS发病中的临床意义.
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冠心病TM1418位单核苷酸多态性研究
我们在少量正常标本的测序中发现在上海汉族人群中凝血酶调节蛋白(thrombomodulin,TM)基因1418位存在C/T多态性,且基因型频率与文献报道的白种人和黑种人基因型分布存在差异[1].我们旨在通过较大样本的测定来证实这一发现,并探讨其与冠心病(CHD)的关系.
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原发性高血压患者外周血单核细胞组织因子的活性表达
我们的研究旨在观察原发性高血压患者外周血单核细胞组织因子(TF)的活性、表达及依那普利干预后的变化,以进一步从细胞水平了解高血压患者单核细胞的促凝活性及依那普利抗血栓的机制.
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恶性血液病患者血浆血管内皮生长因子检测及其临床意义
内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)是主要的促血管新生因子,国内有关恶性血液病VEGF表达的研究尚少.我们对恶性血液病患者及正常人血浆VEGF进行了观察,以期探讨其在恶性血液病中的表达情况及意义.
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霉酚酸酯治疗激素耐药特发性血小板减少性紫癜的疗效和机制研究
特发性血小板减少性紫癜(chronic idiopathic thrombocytopenic purpura, CITP)属自身免疫性疾病,常规治疗主要是用糖皮质激素抑制脾脏对血小板的破坏,糖皮质激素治疗无效者常作脾切除治疗.20%~30%的患者对糖皮质激素和脾切除仍无效,对静注免疫球蛋白、长春新碱、达那唑、硫唑嘌呤等药物亦不敏感.
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脑梗死患者纤维蛋白原Bβ基因启动区单核苷酸多态性研究
为探讨纤维蛋白原(Fg) Bβ启动区单核苷酸多肽性(SNP)变化与脑梗死的关系,我们在广东汉族人群中选择了Fg Bβ启动区三个SNP位点-148C/T、-455G/A、-854G/A,观察了这些基因位点之间相互关系及与脑梗死发生的相关性.
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大部分脾栓塞联合羟基脲治疗地中海贫血
从1999年开始开展大部分脾栓塞(PSE)治疗地中海贫血(地贫),对β地贫加用羟基脲(HU)治疗,取得一定疗效,现报告如下.
年 | 期数 |
2019 | 02 |
2018 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2017 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2016 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2015 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2014 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2013 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2012 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2011 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2010 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2009 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2008 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 z1 |
2007 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2006 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2005 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2004 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2003 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2002 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2001 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2000 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
1999 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
1998 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
1997 | 02 |