终末期肾病患者血浆同型半胱氨酸及其他氨基硫醇物水平变化

目的 观察终末期肾病(end-stage renal disease,ESRD)患者血液透析前后血浆同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)及其他氨基硫醇物的水平变化.方法 选择慢性维持血液透析患者26例,健康对照组54名.用HPLC-荧光检测法测定血浆总Hey(tHcy)、总半胱氨酸(total cysteine,tCys)、总半胱氨酰甘氨酸(total cysteinylglycine,tCysGly)、总谷胱甘肽(total Glutathione,tGSH)浓度.同时测定受检者的血脂水平和肾功能.结果 ESRD患者血液透析前血浆tHcy、tCys、tCysGly浓度分别为(16.70±3.51)μmol/L、(341.87±70.65)μmol/L和(41.33±32.95)μmol/L,明显高于健康对照组的(10.95±3.07)μmol/L、(249.76±13.18)μmol/L和(31.3±11.78)μmol/L,差异有统计学意义(t值分别为3.625、6.219和3.530,P均<0.01);ESRD患者血液透析前血浆tGSH浓度为(5.91±0.08)μmol/L,低于健康对照组的(9.33 ±2.62)μmol/L,差异有统计学意义(t=-5.404,P<0.01);血液透析后,tHcy、tCys浓度分别为(11.74±3.42)μmol/L、(272.67±64.18)μmol/L,较透析前显著降低,但不能恢复至正常水平;血液透析前后tCysGly浓度分别为(41.33±32.95)μmol/L与(44.93±13.88)μmol/L,差异无统计学意义(t=-0.758,P>0.05);tGSH浓度分别为(5.91±0.08)μmol/L与(5.93±0.38)μmol/L,差异无统计学意义(t=-0.068,P>0.05).患者血浆tHcy与tCys和Cr呈正相关(r值分别为0.753 6、0.458 2,P均<0.01),与tGSH呈负相关(r值为-0.6099,P=0.000 9),与tCysGly和血脂参数无关.结论 ESRD患者普遍存在氨基硫醇物代谢紊乱.

流式细胞术定量检测血小板膜糖蛋白及其在急性冠状动脉综合征中的应用

急性冠状动脉综合征(ACS)是指临床上包括急性心肌梗死(AMI)、不稳定型心绞痛(UAP)和心源性猝死(SD)的一组危重心血管疾病,其发病机制是冠状动脉粥样斑块破裂后继发血栓形成,与血小板的活化和内皮细胞的功能密切相关.血小板的活化与其膜糖蛋白(GP)有着密切的关系,用流式细胞术(FCM)检测血小板GP可评价血小板功能,判断其活化状态 11-3].参照国际相关标准 [4-5],我们用FCM定量检测UAP和AMI患者及健康对照者血小板膜表面GPⅠ b、GPⅢa、GPⅡb/Ⅲa及颗粒膜堡白(GMP-140)表达数量的变化,以探讨其在ACS中的临床意义.

运用内标校准法提高表面增强激光解吸电离飞行时间质谱检测中的重复性

表面增强激光解吸电离飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)具有高灵敏度、高通量、高效率等优点,是近年来疾病蛋白组学研究的先进技术 [1],但该技术检测结果 的重复性较差.因此,建立SELDI-TOF-MS检测流程的标准化至关重要 [2].我们将色谱分析常用的内标法 [3-4]引入SELDI-TOF-MS技术,采用合成多肽分子作为内标物,建立内标校准法以校准SELDI-TOF-MS质谱图的横坐标和纵坐标,以提高该方法 检测蛋白质分子和丰度的重复性.现报告如下.

CD+4 Foxp3+调节性T淋巴细胞在儿童急性白血病中的表达及其与微小残留病的关系

目的 研究调节性T淋巴细胞(regulatory T cell,Treg)在白血病患者体内的表达情况,探讨Treg的增高与白血病疗效监测与白血病微小残留病(minimal residual disease,MRD)预后指标之间的关系.方法 建立Foxp3-FITC/CD-25PE/CD4-PerCP/CD3-APC四色流式细胞术检测Treg的方法 ;比较10例正常骨髓标本以及33例白血病初发患者[急性B淋巴细胞白血病(B-ALL)17例,急性T淋巴细胞白血病(T-ALL)9例,急性髓细胞白血病(AML)7例]骨髓标本中Treg的数量;结合56例临床缓解患者MRD监测结果 ,评估Treg作为白血病患者预后判断评价指标的价值.结果 正常骨髓组Treg占CD+4T淋巴细胞的比例中位数(M)为8.09%,初发自血病组M为12.77%,两者差异有统计学意义(U=3.41,P<0.01);而在B-ALL、T-ALL和AML组的差异无统计学意义(H=1.22,P>0.05).Treg数量与临床病理学参数无显著相关性.此外,Treg数量在MRD阳性组(M=14.74%)与MRD持续阴性组(M=11.3%)中的差异有统计学意义(t=252.5,P<0.05).结论 白血病初发患儿体内的Treg数量显著增高,且患儿中Treg表达水平与MRD有关联.高水平Treg预示白血病患儿预后较差,存在复发的可能.

透射电子显微镜和激光散射对尿液中纳米微晶的研究

现有的尿石症诊断方法 包括腹部平片(KUB)诊断、静脉尿路造影(IVP)和超声诊断等,但上述方法 均存在一定缺陷,即只有当结石直径达到一定的尺寸(如0.5 cm)时,才有可能被检测出来.因此,研究简单、快速、有效、对人体尢损害的诊断方法 将具有重要的临床价值.

冠心病患者高敏C反应蛋白和NT-proBNP水平的变化

目的 观察冠心病(CHD)患者高敏C反应蛋白(hs-CRP)含量变化并探讨其与CHD不同类型及心功能的关系.方法 选择经冠状动脉造影确诊的CHD患者894例,健康对照者141名,用微粒子增强透射免疫分析法测定其血清hs-CRP水平,并进行对比分析.结果 CHD患者组血清hs-CRP水平中位数为1.70(0.13～19.53)mg/L,异常率为37.6%(336/894),均显著高于健康对照组的0.99(0.13～19.53)mg/L和7.1%(10/141),差异有统计学意义(Z=-6.476,X<'2>=50.882,P均<0.01);且急性心肌梗死组血清ha-CRP水平中位数为5.35(0.18～19.10)mg/L、异常率为63.9%(92/144),高于陈旧性心肌梗死组的2.27(0.13～19.19)mg/L和43.7%(129/295),差异有统计学意义(Z=-3.353,X<'2>=15.732,P均<0.01);不稳定型心绞痛组血清hs-CRP水平中位数为1.45(0.19～19.53)ms/L、异常率为29.1%(73/251),高于稳定型心绞痛组的1.04(0.13～16.31)mg/L和20.6%(42/204),差异有统计学意义(Z=-2.981,P=0.003;X<'2>=4.30,P=0.038).Kruskal-Wallis检验显示CHD患者hs-CRP和NT-proBNP浓度都随着心功能障碍程度加重(NYHA心功能分级升高)而渐增,组间差异均有统计学意义(X<'2>=120.185、424.945,P均<0.01);多因素相关分析表明血清hs-CRP水平与NT-proBNP浓度(r=0.413,P<0.01)和美国纽约心脏病协会(NYHA)心功能分级(r=0.328,P<0.01)之间具有正相关性.结论 血清hs-CliP水平随CHD类型和心功能障碍程度的不同而变化,说明hs-CRP可能在CHD的发生发展中起一定作用.

正常孕妇中期产前筛查指标中位数数据库的建立

目的 评价我国常用的3种国外产前筛查风险计算软件内嵌AFP、游离β-人绒毛膜促性腺激素(free-β-HCG)指标中位数数据库的差异,选择合适的产前筛查指标中位数计算模莲型,建立温州地区正常孕妇群产前筛查AFP、free-β-HCG指标中位数数据库.方法 应用时间分辨荧光检测技术检测20 054名正常孕妇群AFP、free-β-HCG含量,应用双因素方差分析比较本组数据与目前常用2T-risk(2T)、Lifecycle-2.2(LC2.2)和Lifecycle-3.0(LC3.0)3种风险软件中数据的差异,分析本组数据与国内沈阳、宁波区域数据是否存在莘异,应用模型校正拟合度、模型拟合对数分布均数和标准差等指标,评价3个软件中配给的非线性回归模型的稳定性,选择适合本组数据的回归模型,建立温州地区孕妇群筛查指标中位数数据库.结果 本组数据AFP、free-β-HCG测定值比2T软件内嵌中位浓度分别高10%和16%;比LC-2.2分别高15%和20%;比LC-3.0分别高6%和17%,差异有统计学意义(FAFP=161.757,P<0.01;Ffree-β-HCG=58.261,P<0.01).本组温州地区数据AFP、free-β-HCG浓度比我国沈阳地区高2%和低3%、比宁波高1%和2%,温州、沈阳、宁波3个区域数据之间AFP指标差异无统计学意义(FAFP=0.174,P=0.840),free-β-HCG指标3个地区间差异有统计学意义(Ffree-β-HCG=13.303,P<0.01).2T、LC-2.2、LC-3.0风险软件中用于中位值计算的二次方程回归模型、指数二次函数回归模型、指数四次函数叫门模型差别不大,以指数四次函数回门模型为佳.结论 我国温州、沈阳、宁波3个区域筛查指标的数据与国外2TC、LC-2.2、LC-3.0 3个版本软件内嵌数据均存在显著差异,人种的不同和回归模型参数小同是造成差异的原因,我国需建立自己的模型参数和中位数数据库.我国温州、沈阳、宁波3个区域之间大样本的数据AFP指标差异无显著性,free-β-HCG指标稳定性较差,3个区域之间有些差异,温州、宁波数据较接近.提示我国小样本的实验室在相同实验条件情况下,可参考国内大样本数据建立自己实验室参数.3个软件内公认的回归计算模型稳定性差别不大,本组数据以指数四次函数回归模型为佳,可适用于同本组数据分布相似的我国其他筛查中心筛查指标中位数数据库的建立.

中性粒细胞体积与浆核复杂性在感染和应激性疾病中的变化及意义

目的 探讨急性细菌感染性疾病、心脑血管意外及大手术后等常见应激性疾病患者中性粒细胞体积、浆核复杂性的变化及临床意义.方法 利用自动血细胞分析仪的VCS技术,测定125例血培养阳性的细菌感染性疾病患者、64例急发性心脑疾病患者、66例大手术后患者及69名健康对照者的WBC计数、中性粒细胞(NE)值和NE的体积(NEV)、电导率(NEC)、光散射性(NES),及各自的平均分布宽度(NEVSD、NECSD、NESSD),并采用ROC曲线分别评价各参数的敏感度和特异度.结果 急性细菌感染组NEV、NES、NEVSD分别为154.3±15.2、135.7±9.9、26.8±4.2,大手术后组分别为147.2±8.9、141.5±7.7、23.0±2.8,急发性心脑疾病组分别为144.9±5.2、146.0±5.0、19.6±1.6,健康对照组分别为139.7±4.6、145.0±3.8、18.2±1.3,差异有统计学意义(F值分别为17.650、38.122、54.604,P均<0. 05),以急性细菌感染组的上述各参数变化为显著.应激性疾病组(合并急发性心脑疾病组和大手术后组)的NEV、NES、NEVSD分别为146.5±9.5、144.3±9.4、21.3±3.3,与急性细菌感染组比较,差异有统计学意义(t值分别为-2.840、7.533、-8.999,P均<0.01).ROC曲线分析NEVSD、NEC、NES、NECSD的曲线下面积分别为0.893、0.845、0.833、0.849,其中NEVSD的临界值(cut-off值)≥24.0时,其敏感度和特异度达83.3%和82.0%.结论 细菌感染性疾病和常见应激性疾病可使中性粒细胞体积、胞核大小及胞浆颗粒等发生明显变化,以细菌感染性疾病变化明显;中性粒细胞VCS参数在预测细菌感染时的敏感度和特异度高于WBC计数和NE值,以NEVSD为显著.

不同孕期凝血指标变化的临床意义

由于妊娠和分娩生理学需要,孕妇凝血指标将随孕周有较大变化.国外已有大量关于正常妊娠妇女常规凝血指标的研究,但有些是横断面研究 [1],有些例数少 [2].还没有循证的、孕周相关的常规凝血指标参考值范围可被应用.参考值范围是否与循证和孕周相关,将直接影响到产科医生临床决策可靠性.所以,研究孕周相关常规凝血指标的变化及建立其参考值范围具有重要临床意义.

CD+4CD+25CDlow/-127细胞体外抑制效应T淋巴细胞增殖的影响

1995年,Sakaguchi等 [1]率先在小鼠外周血中分离获得发挥免疫抑制功能的CD+4CD+25T淋巴细胞,被称为调节性T淋巴细胞(Regulatory T cells,Treg).Treg细胞不仅具有抑制自体反应性T淋巴细胞的功能,还能阻止效应性T淋巴细胞的过度增殖和活化,甚至能影响B淋巴细胞产生免疫球蛋白 [2].因此,对Treg细胞的功能研究正成为当今国内外的研究热点.本研究以CD+4CD+25CDlow-127为膜表面标志分选Treg细胞,利用羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂(carboxyfluorescein diaeetate,succinimidyl ester,CFSE)方法 体外检测其对效应T淋巴细胞增殖的影响,从而为Treg细胞的功能研究奠定实验基础.

健康人群胰岛素参考范围及测定稳定性的调查

目的 建立本实验室人血清胰岛素(insulin)水平的参考范围并且调杳其测定稳定性.方法 采用Architect i2000化学发光免疫分析仪和相应的检测试剂、校准品和质控品检测血清胰岛素值并评价检测方法 .测定413名健康成年人血清胰岛素水平,分析各项生理和实验室指标对胰岛素的影响,建立本实验室的胰岛素参考范围,并对胰岛素在不同温度下的稳定性进行探讨.结果 胰岛素的批内和天间不精密度分别为1.67%和2.60%,检测精密性良好,符合临床使用要求.按照每10岁1个年龄间隔分为4个年龄组,组间胰岛素水平(中位数分别为5.6、5.2、5.3、5.7 mU/L)差异无统计学意义(X<'2>=1.929,P>0.05).女件胰岛素水平(中位数为5.7 mU/L)明显高于男性(中位数为5.0mU/L)(Z=3.696,P<0.01).以第97.5%位数为参考值上限,第2.5%位数为参考值下限,建立不同性别的胰岛素参考范围.女性胰岛素的参考范围为2.6～11.8 mU/L,男性胰岛素的参考范围为2.3～11.6 mU/L,不同于胰岛素其他检测方法 的参考范围.胰岛素与体重指数和三酰甘油旱明显正相关(r值分别为0.115、0.143,P值分别为0.019、0.004),与高密度脂蛋白呈明显负相关(r=-0.179,P=0.000).25℃胰岛素活性可稳定4 h,4 ℃可稳定24 h,-20℃胰岛素至少可以稳定7 d.结论 性别是影响人血清胰岛素水平的重要生理因素,应根据不同性别设立胰岛素的参考范围.胰岛素免疫学活性在各种温度条件下并非很稳定.

血清肝癌特异性γ-谷氨酰转移酶ELISA检验方法的建立及临床应用

目的 应用抗人肝癌组织中蔓陀罗凝集素(DSA)强结合的γ-谷氨酰转移酶(GGT)单克隆抗体(MeAb),建立其血清DSA-GGT生物素-链霉亲和素ELISA检测方法 ,并探讨其在原发性肝癌(PHC)诊断的应用价值.方法 通过McAb技术制备的抗DSA-GGT的McAb,采用蛋白G亲和层析柱色谱纯化;纯化的McAb经生物素标记后,构建血清DSA-GGT生物素-链霉亲和素ELISA检测方法 .用建立的方法 对39例PHC患者和122例非PHC患者进行初步临床应用研究,用P-P概率图检验119例健康对照血清DSA-GGT分布状态,依据受试者工作曲线(ROC)确定DSA-GGT诊断PHC的cut-off值.结果 获取5株分泌McAb杂交瘤细胞制备的腹腔积液,经纯化后McAb蛋白总量在2.12～6.70 mg之间;McAb的生物素标记率为48.6%～72.2%.所构建的血清DSA-GGT生物素-链霉亲和素ELISA检测方法 的低检出限为2μg/L;平均批内、批间变异分别为8.9%和11.5%.119份健康对照血清DSA-GGT水平呈正态分布,x±s为(1.50±0.51)μg/L;经ROC分析确定其诊断PHC的临界值为3.25μg/L.39例PHC患者26例DSA-GGT阳性,其诊断PHC敏感度为66.7%;122例非PHC患者10例DSA-GGT阳性,其诊断特异度为91.8%.结论 所建立的血清DSA-GGT生物素-链霉亲和素ELISA检测方法 具有良好的重复性和可靠性.临床初步应用表明其诊断PHC的敏感度、特异度良好,且方法 操作简便,便于临床推广应用,为PHC实验室诊断提供了新方法 .

潘顿-瓦伦丁杀白细胞毒素lukF-PV基因的克隆及原核表达

潘顿-瓦伦丁杀白细胞毒素(PVL)是金黄色葡萄球菌所产生的一种毒素蛋白,由lukF-PV和lukS-PV蛋白组成,编码基因分别为lukF-PV和lukS-PV,双组分在PML形成聚合体,通过细胞打孔机制引发白细胞裂解和凋亡 [1].PVL近年来在世界范围内呈上升趋势,1999年美国CDC报道4例儿童患者死于PVL阳性的金黄色葡萄球菌引起的脓毒症,其中3例合并坏死性肺炎和(或)脓胸,由此引起临床高度重视 [2].有报道提示,PVL阳性金黄色葡萄球菌肺炎患者在住院48 h内死亡率为37%,终死亡率高达75% [3].目前检测PVL主要依靠分子生物学方法 [4-5],但此类方法 程序繁琐,且成本较高,故探讨建立操作简单易行的免疫学方法 显得尤为重要.本研究旨在通过分子生物技术,克隆并表达lukF-PV蛋白,为建立PVL的免疫检测方法 奠定基础.

微生物室与临床密切配合提高肺部感染的病原学诊断水平

病原学诊断不明是造成抗菌药物不合理使用的一个重要原因.微生物室应当与临床密切配合,评估呼吸道标本的质量.微生物枪验人员应当加强直接涂片和各种染色等基本功的训练,并开展快速检测手段,提高肺部感染的病原菌诊断水平.

规范抗菌药药敏试验合理向临床报告检测结果

本文介绍美国临床和实验室标准协会(CLSI)抗菌药药敏试验的规范操作及向临床报告注意事项.共分9部分:(1)常规工作中药敏试验应注意要点;(2)葡萄球菌;(3)肠球菌;(4)肺炎链球菌;(5)肺炎链球菌以外的其他链球菌;(6)不常见的临床分离株及苛养菌;(7)肠杆菌科菌;(8)非肠杆菌科菌菌群;(9)流感嗜血杆菌.笔者还介绍了CLSI M100-S19,2009的文件中的部分新的内容.

流式细胞术的研究进展及临床应用前景

自从商品化的流式细胞仪在20世纪70年代进入市场以来,流式细胞术(flow cytometry,FCM)检测的项目不断地由科研转向临床应用领域,并在临床免疫学、血液肿瘤学及微生物学等疾病诊断和治疗等方面起到不可或缺的作用.现对该技术的进展概述如下.

临床细菌和真菌快速诊断技术

随着越来越多介入性医疗技术的使用,以及细菌对抗菌药物耐药性的发展,微生物感染给临床治疗提出了越来越多的挑战,及时开始正确的抗菌药物治疗,对挽救患者的生命至关重要.因此,临床越来越迫切需要微生物实验室能快速检测感染病原菌.本文拟提醒临床微生物实验室重视病原菌的快速诊断技术.

从患者血液培养中分离出肠沙门菌维尔肖血清型一例

患者女,16岁,学生.2008年7月12日因"发热5 d"入院.患者入院前5 d,洗澡后出现发热,体温38.5℃,自觉头痛,无明显畏寒,无咽痛、咳嗽、咳痰,无胸闷、心悸、恶心、呕吐、腹泻,无尿频、尿急、尿痛.用克林霉素后未见明显好转.2 d后出现乏力,食欲下降,纳差,呕吐胃内容物1次,头痛加重,体温39.8 ℃.入院体检:体温39.2 ℃,心率88次/min,呼吸16次/min.血压110/70 mm Hg(1 mm Hg=0.133kPa).神志清楚,无贫血貌,无出血点;浅表淋巴结无肿大,副鼻窦区无压痛;咽部充血,双侧扁桃体近Ⅱ°肿大,充血明显;双肺呼吸音清,心肺无异常;腹软,剑下轻压痛,无反跳痛;肝脾肋下未及.

抗生素与药物敏感试验

细菌耐药件的出现和蔓延是抗感染治疗面临的大挑战,为此,检测病原菌的耐药性已成为临床微生物技术人员的重要工作.因而了解抗生素的抗菌特性、阐明药敏试验中的常见问题,对于保证检验结果 的准确性、合理使用抗生素至关重要.

血清葡萄糖参考方法的复现及与临床常用检测方法的比对研究

目的 复现血清葡萄糖测定己糖激酶的参考方法 (紫外分光光度法),对此方法 进行性能验证,并评价5种临床常用检测方法 .方法 按照美国CDC推荐的血清葡萄糖测定己糖激酶参考方法 的要求,建立参考方法 ;通过测定标准参考物质(SRM),以及参加国际临床化学与检验医学联合会(IFCC)主办的参考实验窒间的国际环形比对试验(ring-trial),来验证参考方法 的准确性;按照美国临床和实验室标准委员会(CLSI)EP9-A2试验方案,己糖激酶参考方法 作为比对方法 ,5种临床常用检测方法 作为待评方法 ,同时测定40份血清样品.结果 用己糖激酶参考方法 测定SRM965a,水平2和水平3与靶值的偏倚分别为0.93%、-0.23%;参加参考实验室国际比对,血清葡萄糖检测结果 在可接受范围内;5种常用检测方法 在医学决定点(Xc=6.11 mmol/L)预期偏差的95%可信区间在实验窜定义的可接受偏差(10%)范围内,也在生物学变异的可接受偏差(6.9%)范围内.结论 本室已复现并验证了血清葡萄糖测定己糖激酶参考方法 ;5种常用血清葡萄糖检测方法 的测定结果 与参考方法 的测定结果 有差异,但误差在临床可接受范围,不会影响临床检测结果 .

本刊工作人员联系方式

介绍沙门菌的新命名系统

DNA分子生物学技术,特别是各种实时PCR技术、现代DNA测序的发展和应用,豁然明白了沙门菌属(Salmonella)的各个种、亚种、型的精确关系,例如过去认为是种的伤寒沙门菌、鼠伤寒沙门菌、副伤寒A和B沙门氏菌、肠炎沙门菌在保守区某片段处只有几个核苷酸差别,即它们不是种、也不是亚种的关系,而属于型的差异 [1].故需要更改沙门菌属的分类和命名.

本刊可直接使用的医学缩略语

白细胞增高伴乏力及发热

病历摘要患者男,63岁.因反复发热1个月余,于2008年5月收治入院.患者1个月前无明显诱因出现乏力,伴发热,体温波动于37.4～3 8.7℃,无关节疼痛、皮肤红斑,无咳嗽、咯血、体重下降,无尿频、尿急、尿痛.血液检查发现WBC增高.

真菌性角膜炎致病菌种的变迁及体外药物敏感试验研究

目的 回顾分析2000-2006年山东省真菌性角膜炎致病菌菌种的分布、变迁及部分常见致病菌时抗真菌药物的敏感性.方法 对真菌性角膜炎患者的溃疡组织刮片和角膜移植术中取下的病变角膜片标本进行真菌培养及菌种鉴定,分析致病菌的构成及其随年份的变化和山东省眼科研究所开展真菌体外药敏试验以来的试验结果 .结果 2000-2006年间,共有898例患者诊断为真菌性角膜炎,770例(85.7%)真菌培养阳性.其中首位的致病菌属为镰刀菌属(547例,71.0%),历年百分比分别为75.5%、72.8%、71.5%、75.2%、76%、68.8%和56.4%;曲霉菌属(84例,10.9%)是第2位的致病菌,历年所占百分比为15.1%、15.2%、13.1%、10.2%、10.4%、8.0%和6.9%;链格孢属(74例,9.6%)位居第3位,历年所占百分比分别为1.9%、3.3%、3.7%、6.6%、8.8%、12.0%和29.7%.镰刀菌属主要菌种为茄病镰刀菌(33.8%)、尖孢镰刀菌(28.2%)与串珠镰刀菌(27.4%);曲霉菌属主要菌种为黄曲霉(53.6%)与烟曲霉菌(39.3%).常见真菌对两性霉素B、特比萘芬、伊曲康唑、5-氟胞嘧啶和氟康唑MIC值的几何均数分别为0.647、0.714、1.624、15.108和27.070 μg/ml.镰刀菌属5种抗真菌药物MIC的几何均数分别为0.899、0.893、3.077、37.124和21.687 μg/ml;曲霉菌属分别为0.794、0.591、0.416、23.973和7.127 μg/ml;链格孢属分别为0.409、0.479、0.433、11.655和7.104 μg/ml.结论 镰刀菌属、曲霉菌属和链格孢属是山东省真菌性角膜炎前3位的致病菌属.2000至2006年间,镰刀菌属始终居于真菌性角膜炎致病菌的首位;其次为曲霉菌属,比例呈下降趋势;链格孢属居于第3位,比例呈逐年升高趋势.镰刀菌属对两性霉素B和特比萘芬MIC值的几何均数低,对伊曲康唑、5-氟胞嘧啶和氟康唑MIC值的几何均数高.曲霉菌属和链格孢属对5种抗真菌药物MIC值的几何均数较镰刀菌都低.

抗真菌药物对丝状真菌的体外抗菌活性研究

目的 了解两性霉素B(AMB)、伊曲康唑(ICZ)、伏立康唑(VRC)和卡泊芬净(CBF)对72株丝状真菌的体外抗菌活性,指导临床合理应用抗真菌药物.方法 MIC检测采用美国临床和实验室标准协会(CLSI)制订的用于产丝孢状真菌的体外药敏方案(M38-P)和(M38-A).AMB、VRC、ICZ在单独用药时分别取100%、100%、≥80%的生长抑制为MIC值,CBF在单独用药时取明确改变真菌菌丝形态的低浓度作为小有效浓度.分数抑菌浓度(FIC)评价体外联合效果,FIC=MIC<,联合>/MICA单独+MIC联合/MICB单独.结果 AMB、ICZ、CBF、VRC对72株丝状真菌的MIC90分别为8、4、2、8 μg/ml,AMB+ICZ、AMB+VRC、ICZ+VRC联合用药MIC的范围分别为0.125～16.97、0.245 2～1.25、0.062 5～8.25μg/ml.AMB+VRC对丝状真菌产生协同作用为20.0%～88.9%,优于AMB+ICZ的10.0%～62.5%和ICZ+VRC的20.0%～44.4%(P=0.007<0.05).结论 72株丝状真菌对4种常用抗真菌药物的体外抗菌活性有差异,AMB+VRC优于AMB+ICZ与ICZ+VRC,同样可作为直症感染治疗的联合用药.

高分辨熔解方法的建立及在真菌感染患者CYP2C19遗传多态性检测中的应用

目的 探讨高分辨熔解方法 (high resolution melting,HRM)检测真菌感染患者CYP2C19遗传多态性的可行性.方法 建立HRM方法 检测CYP2C19 * 2和CYP2C19 * 3两个多态性位点的基因型,并与传统方法 PCR-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)及序列分析结果 相比较,进一步应用于47例真菌感染患者基因型的检测与分析.结果 2种方法 检测CYP2C19 * 2和CYP2C19* 3基因型结果 完全一致,与DNA序列分析结果 也相吻合,而HRM方法 操作更为简便,耗时更短.47份临床标本检测结果 显示,CYP2C19的2个多态性位点存在不同基因型,CYP2C19 * 1/ * 1所占比例为48.9%(23/47),CYP2C19 * 1/ * 2为25.5%(12/47),CYP2C19 * 1/ * 3为6.4%(3/47),CYP2C19 * 2/ * 2为12.8%(6/47),CYP2C19 * 2/ * 3为6.4%(3/47).结论 HRM方法 能有效检测CYP2C19基因多态性,且较PCR-RFLP方法 更为简便、快速.此外,CYP2C19基因在真菌感染患者中存在明显的遗传多态性.

TaqMan荧光定量PCR检测流感嗜血杆菌和肺炎链球菌方法的建立及应用

目的 建立TaqMan荧光定量PCR检测方法 ,用于流感嗜血杆菌和肺炎链球菌的检测和鉴别诊断.方法 针对流感嗜血杆菌种属特异性基因bexA和肺炎链球菌种属特异性基因lytA,设计合成引物和TaqMan探针,研究不同引物和探针荧光定量PCR检测的特异性和灵敏度,确定标本检测中循环阈值(Ct)的临界值(cut-off值).将荧光定量PCR、乳胶凝集和细菌培养3种检测方法 同时应用于278份细菌性脑膜炎患者脑脊髓液标本的检测.结果 bexA基因引物和探针能特异性检测流感嗜血杆菌a、b、c、d血清型的菌株,检测灵敏度为每个反应10个基因组DNA拷贝;lytA基因引物和探针能特异性检测肺炎链球菌常见致病的血清型肺炎链球菌菌株,检测灵敏度为每个反应90个基因组DNA拷贝.通过荧光定量PCR方法 ,278份脑脊髓液标本中共检测出 4份流感嗜血杆菌阳性和7份肺炎链球菌阳性,其中各有2份培养出相应的病原菌,另有1份流感嗜血杆菌和2份肺炎链球菌乳胶凝集结果 阳性.结论 TaqMan荧光定苗PCR方法 能特异地检测和鉴定流感嗜血杆菌和肺炎链球菌,具有较高的灵敏度和快速检测的特点,能提高临床流感嗜血杆菌和肺炎链球菌感染患者标本的阳性检出率.

肺炎克雷伯菌中质粒介导喹诺酮耐药基因qnr的检测及其耐药特征

自1998年Martínez-Martínez等 [1]发现第一个质粒介导的喹诺酮类耐药基因qur(现名为qnrA1)以来,有关qnr基因的研究日益成为细菌耐药领域的热点.由qnr基因编码的qnr蛋白可保护细菌DNA螺旋酶和拓扑异构酶Ⅳ免受喹诺酮类抗菌药的攻击,从而增强细菌的耐药性.近年来,qnrB [2]、qnrS [3]等新型质粒介导的喹诺酮类耐药基因陆续被报道,其相应的基因型别亦不断增加.以往研究显示 [4-5],细菌对喹诺酮类的耐药主要由靶位改变及主动外排2个机制所致,2者均由染色体基因突变所介导,该基因突变引起的耐药被认为不具有水平传播性.qnr基因的发现进一步丰富了对细菌耐喹诺酮类药物的研究认识 [6-9].

颗粒链球菌引起感染性心内膜炎的微生物学诊断与临床治疗分析

颗粒链球菌属(Granulicatella species,G)为兼性厌氧、触酶阴性的革兰阳性球菌,是人类口腔、泌尿生殖道和肠道的正常菌群,宿主抵抗力低下时可引起各种机会感染.国外对于由颗粒链菌属引起的各种疾病有多例报道 [1-3].主要病例是引起感染性心内膜炎.国内仅有2篇相关的介绍 [4-5].

质粒介导16S rRNA甲基化酶肺炎克雷伯菌临床分离株的检测及分子流行病学研究

目的 调查165 rRNA甲基化酶在肺炎克雷伯菌临床分离株中的流行情况.方法 收集我院2006年1月至2007年9月从临床标本中分离的肺炎克雷伯菌337株,所有菌株均为非重复株.菌种鉴定采用全自动微生物分析仪,庆大霉素、阿米卡星和妥布霉素的药敏试验采用琼脂稀释法.超广谱B内酰胺酶(ESBLs)检测采用美国临床和实验窒标准协会(CLSI)规定的纸片确证法.使用PCR检测16S rRNA甲基化酶基因、整合酶基因和ESBL基因.接合试验检测质粒的可转移性;脉冲场电泳分析菌株的同源性.结果 337株肺炎克雷伯菌对庆大霉素、妥布霉素和阿米卡星的耐药率分别为19.0%(64/337)、8.3%(28/337)和16.3%(55/337).21株16S rRNA甲基化酶基因阳性,阳性率为6.2%(21/337),其中13株rmtB阳性、3株armA阳性、5株rmtB和atmA同时阳性.所有16S rRNA甲基化酶基因阳性株对庆大霉素、妥布霉素和阿米卡星同时耐药且都为高度耐药(MICs≥256μL),21株甲基化酶基因阳性株有19株产ESBLs,ESBL基因主要为CTX-M-14-like、CTX-M-15-like和SHV-12-like.21株均为Ⅰ类整合酶基因阳性.13株通过接合试验把质粒传递给受体菌E. coliJ53.所有接合子Ⅰ类整合酶基因阳性、blaTEM-1基因阳性、产ESBLs及对庆大霉素、妥布霉素、阿米卡星和复方磺胺甲噁唑耐药,对其他抗菌药物敏感.接合子ESBL基因型与供菌一致.21株16S rRNA甲基化酶基因阳性株经脉冲场凝胶电泳(PFGE)分成14个基因型,主要为A型和Ⅰ型.结论 armA和rmtB型16S rRNA甲基化酶基因已经在肺炎克雷伯菌中播散,既可通过克隆株播散也可通过接合性质粒在不同菌株间播散.

天津地区耐亚胺培南铜绿假单胞菌blaIMP-1及相关整合子分析

铜绿假单胞菌是一种医院感染常见的条件致病菌,耐药机制复杂,易造成多重耐药,给临床抗感染治疗造成很大困难.碳青霉烯类抗生素是临床治疗铜绿假单胞菌感染有效的一类药物,然而随着碳青霉烯类抗生素在临床的广泛应用,铜绿假单胞菌对其的耐药率也逐渐升高.细菌获得并表达金属β内酰胺酶(metallo-β-lactamase,MBL)是主要耐药机制之一.整合子在金属酶基因的快速播散中意义重大.本研究对天津地区分离的60株耐亚胺培南铜绿假单胞菌(IRPA)金属酶基因及相关整合子进行了分析,现报道如下.

云南HIV感染者口腔都柏林念珠菌的分离

近年来,由于临床免疫抑制剂、广谱抗生素、皮质类固醇激素的大量使用,以及艾滋病患者的增多,念珠菌感染呈明显上升趋势,且感染的菌种存在着变迁,不断有新的菌种被发现.都柏林念珠菌(Candida dubliniensis)就是1995年从白色念珠菌(Candida albicans)菌种中分离出来的独立菌种 [1].自该菌种被确定以来,研究者们已经从健康人群、临床标本中分离到此菌种 [2-3],国外已有从HIV感染者和AIDS患者中分离到此菌种的报道 [4].但国内对此方面研究相对滞后,HIV感染人群至今未见有都柏林念珠菌分离的报道.我们对来源于云南地区HIV感染者口腔念珠菌进行了研究,结果 从中分离出都柏林念珠菌.现报告如下.

运用压电石英晶体免疫传感器快速同步定量四种尿微量蛋白的研究

第三军医大学西南医院罗阳等设计了一种无需标记的基于压电石英晶体传感器的免疫学检测技术,以同步、快速定量4种尿微昔蛋白.

慢性乙型病毒性肝炎患者浆细胞样树突状细胞在体外诱导的CD+4CD+25Treg明显高于健康人

武汉大学人民医院检验科的洪俊博士等在对慢性乙型病毒性肝炎的细胞免疫机制的研究中发现慢性乙肝患者的浆细胞样树突状细胞(PDCs)能够比乙肝恢复者和健康正常人的PDCs诱导出更多的CD+4CD+25Treg细胞.

Kir6.2基因E23K多态性与冠心病的相关研究

武汉大学中南医院检验科郑芳教授等在中国汉族人群Kir6.2基因E23K多态性与冠心病的相关性研究中发现Kit6.2基因的变异与冠心病之间存在一定的相关性,影响冠心病的早期诊断和治疗.

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