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中华检验医学

中华检验医学杂志

Chinese Journal of Laboratory Medicine 중화검험의학잡지

北大核心期刊
  • 主管单位: 中华医学检验杂志
  • 主办单位: 中国科学技术协会
  • 影响因子: 1.40
  • 审稿时间: 1-3个月
  • 国际刊号: 11-4452/R
  • 国内刊号: 韩锟
  • 发行周期: 月刊
  • 邮发: cjlm@cmaph.org
  • 曾用名: 中华医学检验杂志
  • 创刊时间: 1978
  • 语言: 英文
  • 编辑单位: 中华医学会
  • 出版地区: 北京
  • 主编: 中华检验医学杂志编辑委员会
  • 类 别: 临床医学
期刊荣誉:
  • 革兰阴性杆菌碳青霉烯酶产生与细菌耐药性关系的研究

    作者:沈继录;朱德妹;吴卫红;徐晓刚;王明贵

    目的 研究耐亚胺培南革兰阴性杆菌碳青霉烯酶产生及流行情况.方法 采用琼脂稀释法测定亚胺培南和美罗培南对199株革兰阴性杆菌的MIC,采用乙二胺四乙酸(EDTA)协同实验筛选金属β内酰胺酶表型.PCR扩增耐药菌株碳青霉烯酶基因,并测序分析.脉冲场凝胶电泳(PFGE)分析产酶菌株同源性.结果 141株耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌对亚胺培南和美罗培南药敏试验结果显示具有3种模式,以亚胺培南和美罗培南同时耐药为主94株(66.7%)、亚胺培南耐药和美罗培南敏感46株(32.6%)、亚胺培南敏感和美罗培南耐药仅1株(0.7%).但其他耐碳青霉烯类的鲍曼小动杆菌、洛菲不动杆菌、弗劳地柠檬酸杆菌、肺炎克雷伯菌和黏质沙雷菌均对亚胺培南和美罗培南同时耐药.EDTA协同试验结果显示,仅4株耐亚胺培南铜绿假单胞菌为EDTA协同试验阳性(2.8%),其余菌株均为EDTA协同试验阴性.PCR扩增碳青霉烯酶基因结果显示,4株EDTA协同试验阳性的铜绿假单胞菌产VIM-2型金属酶;34株鲍曼不动杆菌菌株中30株(88.2%)产OXA型碳青霉烯酶,其中OXA23型27株(79.4%),OXA24型13株(38.2%),OXA66型23株(67.6%).并且22株(64.7%)细菌同时产生一种以上的OXA型碳青霉烯酶.7株洛菲不动杆菌全部产OXA-23型碳青霉烯酶;11株弗劳地柠檬酸杆菌、5株肺炎克雷伯菌和1株黏质沙雷菌均产KPC-2型碳青霉烯酶,其中6株弗劳地柠檬酸杆菌同时具有IMP-8新亚型金属酶.PFGE结果显示,34株鲍曼不动杆菌中PFGE谱型共有15种,其中有14株属于A型,7株属于B型;7株洛菲不动杆菌不属于同一克隆;4株产VIM-2型金属酶铜绿假单胞菌不属于同一PFGE谱型;11株柠檬酸杆菌属于同一PFGE谱型;5株肺炎克雷伯菌属于同一PFGE谱型.结论 耐碳青霉烯类革兰阴性杆菌对12种抗生素的耐药率均高于碳青霉烯类敏感革兰阴性杆菌的耐药率,而且产生多种碳青霉烯酶,并在弗劳地柠檬酸杆菌、鲍曼不动杆菌和肺炎克雷伯菌中有产酶克隆株的流行.

  • 色素上皮细胞衍生因子对脑胶质瘤细胞凋亡的影响

    作者:张弢;关明;吕元

    目的 本研究试图通过检测人脑胶质瘤U87细胞中色素上皮细胞衍生因子(PEDF)以及凋亡相关蛋白的表达,探讨其表达在胶质瘤的增殖和细胞凋亡调控中的作用.方法 将100μg/ml的PEDF加入U87细胞中(PEDF处理组),同时以未加PEDF蛋白的胶质瘤细胞作对照组(U87con),采用四甲基偶氮唑蓝法榆测PEDF对胶质瘤细胞U87增殖率的影响;流式细胞术检测胶质瘤细胞是否凋亡;Western-blot(免疫印迹)检测PEDF处理组凋亡相关蛋白p16的变化.结果 实验数据显示:与对照组相比,当PEDF浓度为100μg/ml时,对U87的抑制率为(54.29±0.62)%,PEDF处理组胶质瘤细胞的增殖明显减慢(t=2.63,P<0.05);PEDF处理过的凋亡细胞产生明显增多,annexin V+和PI-的细胞为(21.84±0.36)%,提示胶质瘤细胞处于凋亡早期(t=2.86,P<0.05);PEDF诱导的发生凋亡的胶质瘤细胞中,p16蛋白的表达量明显增加(0.82±0.09),与对照组相比(0.43±0.03),差异具有统计学意义.结论 PEDF与p16协同作用,可能在胶质瘤细胞凋亡的调控中起着重要的作用,从而抑制胶质瘤细胞增殖.

  • 弥散性血管内凝血患者血浆中游离组织因子途径抑制物的测定及临床意义

    作者:钟洪明;叶倩

    组织因子途径抑制物(tissue factor pathway inhibitor,TFPI)是组织因子(tissue factor,TF)诱导的外源性凝血过程的负性调节物之一.弥散性血管内凝血(disseminated intravascular coagulation,DIC)是指在原发病基础上伴以继发性纤溶亢进为特征的获得性血栓-出血综合征,其发生发展与血管内皮损伤有关,尤其在败血症、内毒素、大面积创伤引起的DIC,其所释放的大量组织因子启动凝血过程,而内皮细胞产生的TFPI起调节作用.有文献报道[1],血浆TFPI对检测DIC很有价值,外源性凝血途径在DIC中起关键作用.本研究应用双抗体夹心法检测血浆中游离的,TFPI抗原的变化,并探索其在DIC诊断中的临床意义.

  • 实时荧光PCR分子信标检测耐利福平结核分枝杆菌印rpoB基因

    作者:孙桂芝;高铁杰;钟镐镐;康丽军;张治国;衡万杰;吴秉铨;刘威

    目的 应用实时荧光PCR分子信标技术,建立快速检测临床标本中结核分枝杆菌利福平rpoB相关耐药突变点方法,探讨其缩短耐药实验报告时间的临床应用价值.方法 以分枝杆菌药物敏感性实验绝对浓度法为标准,12株非结核分枝杆菌、4株非分枝杆菌作对照,对174例结核患者临床分离株应用实时荧光PCR分子信标方法,检测利福平rpoB核心区域的耐药突变点并将结果与直接测序进行比较.结果 (1)实时荧光PCR分子信标方法:82例结核分枝杆菌利福平敏感菌株中,3例发生rpoB基因突变,特异度为96.3%;92例结核分枝杆菌利福平耐药菌株中,82例检出耐药突变,敏感度为89.1%;准确性为92.5%.(2)DNA直接测序分析:82例结核分枝杆菌利福平敏感株中,1例发生rpoB基因突变,特异度为98.8%;92例结核分枝杆菌利福平耐药菌株中,83例发生:rpoB基因突变,敏感度为90.2%;准确性为94.2%.检测174株结核分枝杆菌临床分离菌株,与实时荧光PCR分子信标方法检测一致性为98.3%(171/174).结论 实时荧光PCR分子信标方法检测耐利福平结核分枝杆菌rpoB基因突变点可作为结核患者快速耐药检测的初筛方法之一.

  • Bel亚型与α1,3半乳糖基转移酶基因G952A多态性关系的研究

    作者:邓志辉;喻琼;梁延连;苏宇清;王大明;魏天莉;李茜

    目的 研究红细胞ABO血型系统中B放散型的ABO基因分子遗传基础.方法 通过标准血型血清学试验鉴定了3例Bel亚型及15例对照B型样本,采用ABO基因分型PCR序列特异性引物、ABO基因第6及第7外显子PCR产物直接测序及克隆测序等方法进行ABO基因及亚型的定型.结果 在1例血型血清学检测为Bel亚型标本中,发现一个新的B等位基因.该等位基因与B101标准等位基因相比,差异仅在于ABO基因的第7外显子上nt952位G>A突变,导致多肽链Val318Met,定为B放散型(Bel)新基因,GenBank注册号为EF117687.而其余2例Bel型样本及15例对照B型样本含正常标准B基因.结论 首次在ABO基因编码区核苷酸930位后的错义突变中发现并报道了新B等位基因,表明1,3半乳糖基转移酶基因G952A多态性可能是Bel分子遗传机制之一.

  • 高效液相色谱测定血清高密度脂蛋白胆固醇分数和摩尔酯化速率

    作者:彭涛;董军;李红霞;国汉邦;满永;王抒;陈文祥

    目的 建立一种高效液相色谱(HPLC)测定血清高密度脂蛋白胆固醇分数和摩尔酯化速率(FERHDL和MERHDDL)的方法.方法 用5,5'二硫代-2-硝基苯甲酸(DTNB)抑制全血中的卵磷脂胆固醇酰基转移酶(LCAT)活性,分离血清,制备HDL;HDL分别在含和不含2-巯基乙醇(ME)的条件下37℃温育1 h,HPLC法测定HDL游离胆固醇,计算FERHDL和MERHDL.结果 DTNB可以有效抑制全血中的LCAT活性,使游离胆固醇稳定在初始水平;ME可有效解除DTNB对LCAT的抑制作用;测定血清FERHDL和MERHDL的总变异系数分别为1.59%~3.74%和1.64%~2.88%;70名健康志愿者FERHDL.均值为18.7%/h(标准差7.2%/h),中位数16.1%/h;MERHDL均值42.7 μmol·L-1·h-1(标准差11.8 μmol·L-1·h-1),中位数41.6 μmol·L-1·h-1;FERHDL和MERHDL与多种心血管病危险因素显著相关.结论 本研究建立了血清FERHDL和MERHDL准确测定的方法,方法安全、简便、精密,将为进一步研究和应用FERHDL和MERHDL打下基础.

  • 耐万古霉素肠球菌二株的耐药基因及传播机制研究

    作者:王杰;瞿婷婷;俞云松;周建英;陈亚岗

    肠球菌是重要的条件致病菌之一,不仅可引起尿路感染、皮肤软组织感染,还可引起危及生命的腹腔感染、败血症、心内膜炎和脑膜炎等.近年来抗菌药物的广泛应用,使肠球菌对多种抗菌药物产生耐药,并成为导致医院感染的重要致病菌.由于肠球菌对抗生素的耐药性增加,特别是近年出现的万古霉素耐药肠球菌(VRE)给临床治疗造成困难.本研究分析了杭州市分离到的两株VRE菌株的克隆相关性、耐药性及耐药传播机制,为VRE感染的防治提供基础.

  • 铜绿假单胞菌产TEM-147型ESBL基因的克隆及原核表达

    作者:赵廷坤;周岐新

    到2006年为止,伞球范围内发现的超广谱β内酰胺酶(ESBIs)已有200多种,其中TEM型有百余种.世界各地TEM型β内酰胺酶的流行状况各不相同.在我国,已相继报道了TEM-10、TEM-104、TEM-105、TEM-128、TEM-129、TEM-28、TEM-29、TEM-19和TEM-116型β内酰胺酶[1-8].近我们在研究川北医学院附属医院铜绿假单胞菌耐药机制时发现了TEM-147,这是一种新的TEM基因亚型(GenBank注册号:DQ279850).为了解TEM-147的特性,本研究对TEM-147编码基因进行克隆、测序、基因型鉴定和原核表达,现将结果报道如下.

  • 应用噬菌体展示技术筛选血型A抗原表位的模拟多肽

    作者:汤兆明;胡丽华;李一荣;崔天盆;熊娟

    目的 筛选血型A抗原表位的模拟多肽,探讨其在血型A抗体检测中的应用价值.方法 用血型A抗原特异性单克隆抗体NaM87-1F6从噬菌体随机12肽库中筛选能与之结合的噬菌体展示肽.采用噬菌体ELISA、噬菌体微筛选试验鉴定噬菌体与抗体的结合力.DNA测定并推断特异性噬菌俸克隆展示的多肽序列.凝集抑制试验检测单克隆噬菌体对抗体凝集红细胞的抑制作用,ABO-ELISA初步分析噬菌体展示多肽检测血型抗体的效能.结果 经筛选和鉴定后得到7个阳性克隆,其中6个展示多肽序列为EYWYCGMNRTGC(C5),1个为QIWYERTLPFTF(C17).凝集抑制试验提示2个噬菌体展示多肽可以特异性抑制NaM87-1F6对A型红细胞的凝集作用.基于噬菌体多肽C5、C17的ABO-ELISA检测血浆抗A抗体试验的受试者操作特性曲线下面积分别为0.889(P=0.000)和O.751(P=0.000),ABO-ELISA值与凝集试验抗体滴度间的Spearman相关系数分别为0.743(P<0.01)和0.664(P<0.01).基于C5的ABO-ELISA在临界值为0.300时其敏感度、特异度分别为82.2%和83.3%;基于C17的ABO-ELISA在临界值为0.250时其敏感度、特异度分别为68.9%和63.3%.结论 多肽EYWYCGMNRTGC,QIWYERTLPFTF可以模拟血型A抗原的表位.基于这些多肽的ABO-ELISA方法具有检测血型A抗原特异性抗体的潜能.

  • X染色体Amelogenin等位基因缺失的研究

    作者:陈勇;孙宏钰;陈爱萍;陈维红;何树文

    目的 探讨采用Amelogenin基因常规Sullivan106/112 bp体系进行性别鉴定时X染色体Amelogenin等位基因片段(Amel-X)缺失的原因以及缺失后对法医物证性别鉴定和临床疾病诊断的影响.方法 采用Sullivan212/218 bp和Haas-Rochholz80/83 bp引物体系对Amel-X缺失的样本进行验证,并对缺失的Amel-X进行序列分析.结果 采用Sullivan212/218 bp和Haas-Rochholz80/83 bp引物体系分型时均可重获缺失的等位基因.测序分析在Sullivan106/112 bp体系的正向引物结合区检出3种点突变,包括分别位于3'端第2位、第13位的单点突变以及第2位和第13位同时发生的杂合多点突变.结论 引物结合区点突变导致的无效扩增是Amel-X等位基因缺失的原因,这在实践中会干扰性别鉴定,需引起重视.

  • 肿瘤表观遗传学的研究进展

    作者:刘湘帆;樊绮诗

    表观遗传学(epigenetics)是研究不涉及DNA序列改变的基因表达和基因调控的可遗传因素,探索从基因到表型变化的一门新学科.它将传统的遗传学和环境因素相结合,也将遗传信息和复杂的生命活动相关联,使人们从一个全新的角度研究生命现象.

  • 疾病蛋白质组技术进展和发展趋势及其在肝癌研究中的应用

    作者:刘银坤;康晓楠;孙璐

    目前医学研究的重点已经移向疾病的预防和早期预测、诊断,疾病转归和预后预测,故需要筛选疾病发生和进程中的重要分子标志物,并了解其动态变化规律和作为预测、早期诊断、转归和个体化治疗靶标的可能性.蛋白质是生命体各种代谢和调控途径的主要执行者,其翻译后修饰使蛋白质功能更完善、调节更精细、作用更专一.

  • 血清铁蛋白检测结果差异原因分析

    作者:张曼;尹利民

    1943年Granick分离出铁蛋白(Ferritin).铁蛋白是一种高分子铁结合蛋白,其外壳为蛋白质,核心部分为含量不等的铁.铁蛋白分子共有24个亚基,由H亚基与L亚基以不同比例组成.

  • 阿司匹林抵抗的研究现状及展望

    作者:王淑娟

    阿司匹林(Aspirin)是一种有效的抗血小板聚集药,在防治血栓栓塞性疾病方面有着广泛的应用.

  • 革兰阴性杆菌对喹诺酮类抗生素耐药机制的研究

    作者:何菡;王清涛

    喹诺酮类抗生素是临床应用的重要抗生素之一,随着其广泛应用,细菌耐药率逐年上升.我国部分地区大肠埃希菌对环丙沙星的耐药率已经达到77.6%5[1].细菌对喹诺酮类抗生素的耐药机制主要包括喹诺酮类抗生素作用靶位的改变、外膜通透性降低和细菌外排泵系统过度表达,以上机制均可使进入细菌的药物减少(图1[2]),导致细菌产生耐药性.1998年Martinez-Martinez等[3]发现了质粒介导喹诺酮耐药机制,引起了世界各地研究者对该耐药机制的关注.本文将就革兰阴性杆菌对喹诺酮类抗生素的耐药机制作一综述,重点介绍质粒介导喹诺酮类抗生素耐药机制.

  • 鼻疽伯克霍尔德菌致左颌感染一例

    作者:郭良;陈琼

    患者男,72岁,因左颌部不明原因肿物到福建省福安市闽东医院口腔科门诊检查.

  • 猪链球菌致脑膜炎一例

    作者:刘晓一;刘文恩;李宪;郭思建;张晋湘;邹明祥

    猪链球菌病(infectious disease or infection caused by Streptococcus suis)是由猪链球菌(Streptococcus suis,S.suis)侵入机体引起的人畜共患的急性感染性疾病,人感染表现为脑膜炎[1]、败血征[2]、感染性综合征[3]等.近,我们从1例脑膜炎患者脑脊髓液中分离到1株猪链球菌Ⅱ型(streptococcus suis Ⅱ),报道如下.

  • 非脱羧勒克菌九株的分离鉴定及药敏结果分析

    作者:张勇昌;赵桂兰;陈月新;赖伟忠;周淑珍

    非脱羧勒克菌是非脱羧勒克菌属惟一的1个菌种,临床标本少见,随着检验技术的不断提高,临床标本分离出病原菌的种类及少见菌株的不断增加,现将9株非脱羧勒克菌的鉴定及药敏结果报告如下.

  • SPSS统计软件在临床检验定性测定室内质控中的应用

    作者:谭春艳;覃桂芳;莫志江;杨霞芳

    有关临床检验的定性数据(如HBsAg、HIV等项目)目前国内尚无合适的质控图制备方法.Levey-Jennings质控图虽然在定量数据中有广泛应用,但在处理定性数据中受到极大的限制.SPSS是世界公认的三大权威统计软件之一,其新版本内置的质控程序(Quality Control)具有强大的质控分析功能,含有p、np、u和c 4种质控图用于分析各种定性质控数据.本文结合文献报道的监控每日阳性率的方法[1]制备p质控图,并探讨这个方法对每日阳性样本数量低值的要求,提出使用移动累积数据法制备移动平均阳性率质控图以解决一些检验项目每日阳性样本数量不足的问题.

  • 血清甘油三酯测定的方法学沿革和标准化

    作者:陈文祥

    甘油三酯(TG)是脂肪的主要化学成分,是生物体的重要能源.TG是一种非水溶性化合物,在血中以脂蛋白形式存在.血清TG水平反映机体脂代谢情况,也与许多其他生理病理情况有关,是开展早的临床检验项目之一.

  • 对肖国辉同志来信的答复

    作者:陈宏础;罗春丽

    编辑同志:受王鸿利教授委托,对肖国辉读者的来信提出我们的看法和意见如下.

    关键词: 读者
  • 对采用新的血小板参考区间的一点建议

    作者:肖国辉

    编辑同志:新出版的<全国临床检验操作规程>(第3版)由卫生部医政司组织国内知名专家编写,对临床实验室工作的标准化、规范化有着重要的意义,深受广大检验工作者的喜爱.但对于该书中成人男性健康人群血小板的新参考区间[1]的采用,笔者存在不同意见,愿与广大同仁共同探讨.

  • 《中华检验医学杂志》编审专家介绍

    作者:《中华检验医学杂志》编辑部

    郭健 <中华检验医学杂志>第六、七届编辑委员会副总编辑.研究员、硕士研究生导师.

  • 肺出血肾炎综合征一例诊断与治疗评析

    作者:张源潮;侯岩峰;付敏;宗梅

    患者男,20岁.农民,因"反复咯血4个月,少尿1周",于2007年6月20日住入本院风湿免疫科.

  • 卵巢癌患者RUNX3基因启动子区甲基化状态分析

    作者:张师前;位玲霞

    目的 探讨人RUNX3(runt-related transcription factor 3 gene)基因在上皮性卵巢癌组织中的甲基化状态及其在卵巢癌发生发展中的作用.方法 用甲基化特异性PCR(MSP)检测32份卵巢癌组织、32份癌旁组织、36份卵巢良性上皮性肿瘤组织及10份正常卵巢组织中RUNX3基因启动子CpG岛的甲基化频率.培养2种卵巢癌细胞系(3AO,SKOV3),MSP法检测加入5-氮-2'-脱氧胞苷(5-aza-2'-deoxycytidine)前后RUNX3基因在卵巢癌细胞系中的甲基化水平.逆转录(RT)-PCR检测加入5-aza-2'-deoxycytidine前后卵巢癌细胞株中RUNX3 mRNA的表达改变,及上述各卵巢组织中RUNX3基因mRNA的表达情况.结果 卵巢癌标本中53.1%(17/32)发生了RUNX3基因启动子甲基化;癌旁组织RUNX3基因甲基化率为37.5%(12/32);良性卵巢肿瘤组织中RUNX3基因甲基化率为16.7%5(6/36);10份正常卵巢组织均未检测到RUNX3基因甲基化.卵巢癌组织中甲基化率与临床分期、细胞分化程度无相关性.卵巢癌与良性卵巢肿瘤和正常组织间的甲基化率的差异有统计学意义(分别x2=10.060,x2=8.925,均P<0.05).2株卵巢癌细胞系中均发生了RUNX3启动子甲基化,经5-aza-2'deoxycytidine处理细胞株后,可部分或完全逆转RUNX3基因启动子甲基化.RUNX3基因mRNA的表达在卵巢癌中为16.7%(6/32);癌旁组织为28%(9/32),良性肿瘤中为72%(26/36),正常组织中为80%(8/10),其表达在卵巢癌与良性肿瘤和正常卵巢组织中的差异有统计学意义(分别x2=19.443,x2=12.862,均P<0.05).经5-aza-2'deoxycytidine处理细胞株后,各细胞株RUNX3基因mRNA较加药前均有不同程度的表达增加.结论 卵巢癌组织中RUNX3基因启动子有较高的甲基化率,且在卵巢癌的发生发展中起重要作用;有可能成为卵巢癌早期诊断的分子生物学指标.RUNX3基因甲基化与其mRNA表达密切相关,是基因表达调节的重要方式之一,这种改变可被甲基化酶抑制剂所逆转.

  • 鼻咽癌成纤维细胞分泌性蛋白质的变化分析

    作者:葛圣雷;易彦;陈主初;谢鼎华;肖志强;陈勇

    目的 建立细胞分泌性蛋白质组学研究方法,分析鼻咽癌形成过程中成纤维细胞分泌蛋白的变化特征.方法 分别收集5份鼻咽癌和正常鼻咽组织标本,无血清培养成纤维细胞,收集细胞上清液,超滤法脱盐并浓缩上清液中分泌性蛋白,运用双向凝胶电泳(2-DE)技术建立分泌性蛋白表达图谱;并用比较蛋白质组学方法分析2组成纤维细胞分泌蛋白的差异,基质辅助激光解析飞行时间质谱分析鉴定差异蛋白;ELISA分析2组细胞上清液中半乳糖凝集素1的表达.结果 用自建细胞分泌性蛋白2-DE图谱,从2组细胞上清液中筛查出表达差异大于2倍的蛋白质点18个,质谱分析鉴定出11个分泌性蛋白;其中半胱氨酸蛋白酶抑制剂C、补体组分Cls前体、不均一性核糖核蛋白Al在鼻咽癌间质成纤维细胞(CAFs)上清液中表达下调,而其余8个包括半乳糖凝集素1、14-3-3sigma蛋白、组织蛋白酶L等分泌性蛋白在CAFs上清液中表达上调;2组细胞上清液中半乳糖凝集索1分别为(4.95±0.76)ng/ml、(9.90±0.36)ng//ml(CAFs组),二者差异有统计学意义(P<0.05).结论 鼻咽癌形成过程中成纤维细胞分泌性蛋白的变化涉及细胞信号转导、蛋白合成与降解等途径,CAFs可能通过上述途径调控肿瘤微环境,影响鼻咽癌的发生、发展、侵袭转移;这为今后分泌组学研究奠定了实验基础.

  • 胃癌CD4+CD25highFoxp3+调节性T淋巴细胞数量和分布及Foxp3基因表达与肿瘤分期的相关性

    作者:袁向亮;沈定丰;卢剑;董平;王剑;李美星;沈立松

    目的 研究胃癌患者CD4+CD25highFoxp3+调节性T淋巴细胞(Treg)的存在数量、分布情况,及其功能基因Foxp3的表达变化与胃癌临床国际肿瘤淋巴转移分类(TNM)分期的关系.方法 用四色流式细胞术以Foxp3-FITC/CD25-PE/CD4-PerCP/CD3-PC7抗体组合分析20名健康对照者及47例胃癌患者(临床TNM分期Ⅰ期11例、Ⅱ期18例、Ⅲ期10例、Ⅳ期8例)外周血、腹腔积液、肿瘤组织浸润淋巴细胞(TIL)及癌旁淋巴结中CD4+CD25highFoxp3+Treg的数量及分布情况.实时荧光定量PCR技术检测Treg Foxp3 mRNA表达水平.结果 胃癌患者外周血CD4+CD25highFoxp3+Treg占CD4+T淋巴细胞的百分比为(8.03±3.47)%,高于正常健康对照组(5.83±2.93)%,差异具有统计学意义(P<0.05).胃癌患者腹腔积液、肿瘤浸润淋巴细胞、癌旁淋巴结中Treg占CD4+T淋巴细胞比例均高于外周血,差异有统计学意义(分别为P<0.05、P<0.01、P<0.01).胃癌组织局部TIL和癌旁淋巴结中Treg的Foxp3平均荧光强度显著高于外周血和腹腔积液(P<0.05).Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期胃癌患者Treg比例分别为(5.72±1.95)%、(6.45±2.23)%、(9.58±3.13)%、(11.70±2.30)%,这提示Treg与肿瘤TNM分期显著相关(r=0.784,P<0.01).胃癌患者外周血单个核细胞Foxp3基因mRNA表达水平明显高于健康对照组(P<0.01).Foxp3基因表达水平与胃癌TNM各分期呈显著相关性(r=0.623,P<0.05).结论 胃癌患者CD4+CD25highFoxp3+Treg的比例升高,其增高程度与肿瘤临床分期呈显著正相关.胃癌患者外周血和癌组织局部Treg的数量、分布情况及特异性转录因子Foxp3的表达强度均有所不同,提示肿瘤局部免疫抑制功能增强,这可能是产生肿瘤免疫抑制的重要机制,CD4+CD25highFoxp3+Treg将来可作为胃癌患者病情进展的重要判断指标之一.

  • DNA甲基转移酶抑制剂5-杂氮-2'-脱氧胞苷对人食管癌细胞株Eca109的影响

    作者:杨婷;阿尔孜古丽·吐尔逊;马磊;徐淑永;刘赞;卢晓梅

    目的 探讨DNA甲基转移酶抑制剂5-杂氮-2'-脱氧胞苷(5-aza-CdR)对人食管癌细胞株Eca109生长的影响.方法 用不同浓度的(10-7、10-6、10-5、10-4 mol/L)特异性DNA甲基转移酶抑制剂5-aza-CdR于不同作用时间(24c168 h)处理人食管鳞癌细胞株Eca109,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定5-aza-CdR对Eca109细胞生长的影响,借助倒置显微镜观察细胞的形态变化,结合流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡及细胞周期.结果 5-aza-CdR不同药物浓度组(10-7~10-4 mol/L)对细胞生长抑制率的差异有统计学意义(F=60.95,P=0.000);不同作用时间下(24~96 h)细胞生长抑制率差异也有统计学意义(F=160.06,P=0.000),且10-4 mol/L 5-aga-CdR干预96 h对Eca109细胞的生长抑制率达(15.70±0.75)%,作用明显;形态学观察显示:癌细胞体积缩小,核固缩,染色质凝聚成块;同时FCM分析结果显示,在二倍体峰前出现凋亡峰,G0/G1,期细胞随着药物浓度增大而增多,经10-4 mol/L 5-aza-CdR处理96 h时,G0/G1,期细胞高达(89.70±0.91)%,而S期细胞随着药物浓度增大而减少,经10-4 mol/L 5-aza-CdR处理96 h时,S期细胞仅为(9.10±0.48)%.不同浓度药物作用下,G0/G1期细胞比率的差异有统计学意义(F=6479.46,P=0.000),S期细胞比率差异也有统计学意义(F=4222.26,P=0.000).结论 5-aza-CdR可通过调控细胞周期和促进细胞凋亡的途径抑制Eca109细胞的生长.

  • 肝细胞生长因子mRNA实时荧光定量PCR检测体系的建立及其在淋巴瘤诊断中的价值

    作者:岑东;吕建新;裴仁治;涂植光;余晓林;文阳安

    目的 构建肝细胞生长因子(HGF)mRNA定量标准,建立实时荧光定量(FQ)-PCR检测体系,探讨其检测淋巴瘤的应用价值.方法 提取总RNA,行逆转录(RT)-PCR,获HGF cDNA目标片段并构建重组质粒,作为定量标准.设计第二引物对和探针,确定扩增条件,优化组分浓度,建立HGF mRNA实时FQ-PCR检测体系,并定量检测47例淋巴瘤患者[霍奇金病(HD)11例,非霍奇金淋巴瘤(NHL)36例;治疗后,获缓解34例,未缓解13例]和19例非肿瘤患者的淋巴组织标本中HGFmRNA表达.同时,用受试者工作特征(ROC)曲线法,评价其在淋巴瘤诊断中的敏感度和特异度.结果 本研究构建的HGF mRNA定量标准和实时FQ-PCR检测体系的标准曲线斜率为-3.513,相关系数为0.999,扩增效率达92.6%;批内、日内和日间变异系数分别为2.1%、4.0%和6.8%;灵敏性达2拷贝/μ1.HGF mRNA在淋巴瘤组的表达(6.425 4-2.172)显著高于非肿瘤对照组(0.317±0.192,t=15.883,P<0.001),缓解组的表达(6.157±1.712)显著低于未缓解组(7.591±1.184,t=2.768,P<0.05),但在HD组和NHL组的表达差异无统计学意义(P<0.05).ROC曲线提示,当临床诊断临界值为3.316时,HGF mRNA对淋巴瘤诊断的敏感度和特异度分别为93.6%和100%.结论 本研究成功构建了HGF mRNA的定量标准和实时FQ-PCR检测体系,并可用于淋巴瘤的HGF mRNA定量检测.

  • 儿童急性淋巴细胞白血病患者肝癌缺失基因1启动子的异常甲基化

    作者:关明;徐翀;刘维薇;陈波斌

    目的 分别采用甲基化特异性PCR(MSP)检测儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)患者肝癌缺失基因1(deleted in liver cancer-1,DLC-1)启动子的甲基化水平,探讨DLC-1启动子甲基化用于判断儿童ALL预后的临床价值.方法 选择34例ALL患者骨髓,5例正常骨髓和T淋巴细胞白血病细胞系6T-CEM,分别采用MSP和焦磷酸测序法检测DLC-1启动子甲基化,并采用荧光定量PCR检测5-aza-2'-deoxycytidine处理6T-CEM细胞前后DLC-1的表达.结果 经MSP检测,21例ALL患者骨髓中存在DLC-1甲基化,而在正常骨髓中未发现该基因甲基化.采用焦磷酸测序法检测的结果与MSP法完全一致,而焦磷酸测序法能对DLC-1启动子上的CG位点甲基化进行定量,DLC-1基因的甲基化与年龄、性别、WBC计数、FAB分类、免疫学分型、临床分型等临床病理学参数无显著相关性(P>0.05).DLC-1基因甲基化阳性的18例获得完全缓解的ALL患者中有14例在12个月内复发,而甲基化阴性的12例获得完全缓解的ALL患者仅4例复发.采用5-aza-2'-deoxycytidine在体外处理DLC-1甲基化细胞6T-CET后,可使DLC-1恢复表达,且呈剂量依赖性.结论 从儿童ALL患者中检测到DLC-1启动子存在高频率的异常甲基化,DLC-1甲基化对预测儿童ALL复发具有一定意义.同时证明焦磷酸测序法是一种敏感、简单,并能对DLC-1启动子甲基化进行定量检测的新方法.

  • 外周血淋巴细胞升高及血清蛋白减低

    作者:陈佳宁;刘锦丽;张永宏;赵淑芳;王静;殷春香;王建中;葛昌文;崔巍;王银平;刘贵建

    病历摘要患者男,79岁.2007年10月13日主因"咯血3 d"入院.患者10月10日受凉后咯血,暗红色,有血块,约10 ml,伴乏力、胸部不适,无发热、盗汗、胸痛等症状.诊断为左下叶支气管扩张,肺炎;给予止血、抗炎药物对症治疗后,患者病情好转.但血常规示白细胞增高、淋巴细胞增高、血小板减少、贫血,疑为慢性淋巴细胞白血病,为明确诊断行骨髓细胞学、骨髓病理学、外周血免疫分型检查.

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