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氯吡格雷治疗下CYP2C19与P2Y热点突变致血小板高反应性的效应研究
目的 研究氯吡格雷治疗患者CYP2C19和P2Y热点突变导致血小板因药物耐受而出现高反应性的效应关系,探索检出突变相关功能改变的临床适用方法.方法 病例对照研究.选取104例接受抗血小板治疗且冠状动脉介入术前服用负荷剂量(300 mg/d)氯吡格雷的冠状动脉粥样硬化性心脏病(冠心病)患者,在术后12 ～24 h内测定血小板功能,通过血栓弹力图(TEG)检测血小板抑制率,通过流式细胞术检测CD62p和血管扩张刺激磷蛋白(VASP);焦磷酸测序法测定中国人群药物代谢酶热点突变CYP2C19*2(681G＞ A)、CYP2C19*3 (636G＞ A)和血小板膜糖蛋白受体基因P2Y1 (893C ＞T)、P2Y12 (52G＞ T)4个位点基因多态性.以CYP2C19分型结果为依据分为野生组(*1/* 1)、杂合突变组(*2/*1)、纯合突变组(*2/*2),结合其他3个位点突变情况,分析各组氯吡格雷作用下的血小板功能差异.应用单因素方差分析进行不同基因型组间比较,两组间比较选用t检验及非参数检验进行统计学分析.结果 野生组血小板反应指数(PRI)为(35.75±23.11)％,杂合突变组为(48.77 ±24.22)％,纯合突变组为(66.73±15.74)％,差异有统计学意义(F=9.170,P＜0.05);野生组CD62p水平为(9.38±11.16)％,杂合组为(9.45±8.91)％,纯合突变组为(10.87±8.31)％,差异无统计学意义(F=0.087,P＞0.05);37例受试个体中未检出P2Y1(893C＞ T)位点突变,检出1例P2Y12(52G＞ T)位点突变.结论 CYP2C19*2突变与氯吡格雷疗效降低密切相关,VASP检测的血小板反应指数可有效反映其改变.
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高分辨熔解方法的建立及在真菌感染患者CYP2C19遗传多态性检测中的应用
目的 探讨高分辨熔解方法 (high resolution melting,HRM)检测真菌感染患者CYP2C19遗传多态性的可行性.方法 建立HRM方法 检测CYP2C19 * 2和CYP2C19 * 3两个多态性位点的基因型,并与传统方法 PCR-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)及序列分析结果 相比较,进一步应用于47例真菌感染患者基因型的检测与分析.结果 2种方法 检测CYP2C19 * 2和CYP2C19* 3基因型结果 完全一致,与DNA序列分析结果 也相吻合,而HRM方法 操作更为简便,耗时更短.47份临床标本检测结果 显示,CYP2C19的2个多态性位点存在不同基因型,CYP2C19 * 1/ * 1所占比例为48.9%(23/47),CYP2C19 * 1/ * 2为25.5%(12/47),CYP2C19 * 1/ * 3为6.4%(3/47),CYP2C19 * 2/ * 2为12.8%(6/47),CYP2C19 * 2/ * 3为6.4%(3/47).结论 HRM方法 能有效检测CYP2C19基因多态性,且较PCR-RFLP方法 更为简便、快速.此外,CYP2C19基因在真菌感染患者中存在明显的遗传多态性.
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CYP2A6基因多态性对丙戊酸钠血药浓度的影响
目的 探讨细胞色素P450 2A6(CYP2A6)基因多态性对丙戊酸钠血药浓度的影响.方法 选择单药服用丙戊酸钠的癫NFDA1患者98例,应用巢式PCR(nested-primer polymerase chain reaction)方法分析其CYP2A6基因型,分析等位基因CYP2A6*1及CYP2A6*4;同时应用荧光偏振免疫法(FPIA)测定患者丙戊酸钠的血药浓度.结果 98例患者中CYP2A6基因型为*1/*1者73例(74.5%),*1/*4者24例(24.5%),*4/*4者1例(1.0%),根据基因型分为A组(CYP2A6*1/*1)和B组(CYP2A6*1/*4或CYP2A6*4/*4).B组患者丙戊酸钠的标准血药浓度平均值(4.1393±0.2793)较A组(3.3486±0.3919)高,差异有统计学意义(P＜0.05). 结论 CYP2A6基因多态性影响丙戊酸钠的血药浓度,含有CYP2A6*4等位基因的患者应用丙戊酸钠应较常规降低用量.
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细胞色素P450酶2A6、2B6、2C9及2C19基因多态性对丙戊酸钠血药浓度的影响
目的 探讨细胞色素P450酶2A6(CYP2A6)、2B6(CYP2B6)、2C9(CYP2C9)和2C19(CYP2C 19)基因多态性对丙戊酸钠血药浓度的影响.方法 选择单药服用丙戊酸钠的癫痫患儿131例,应用多重PCR方法对CYP2A6*4基因多态性进行检测,应用PCR-连接酶检测反应技术对CYP2 B6*6、CYP2C9*2、CYP2C9*3、CYP2C19*2和CYP2C19*3基因多态性进行检测,应用均相酶放大免疫分析法测定丙戊酸钠血药浓度,采用单因素方差分析方法或t检验进行统计学分析.结果 患儿根据CYP2C9、CYP2C19基因型分为4组:G1组(CYP2C9和CYP2C19均为强代谢者)、G2组(CYP2C19中间代谢者)、G3组(CYP2C19弱代谢者)和G4(CYP2C9弱代谢者)；G3(3.70±0.95)、G4组(4.35±1.48)标准化血药浓度显著高于G1组(2.57±1.30,t=3.056、4.490,均P＜0.01)和G2组(2.76±1.19,t=2.827、4.462,均P＜0.01)；G3(19.46±5.20)、G4组(19.30 ±7.67)丙戊酸钠剂量(mg/d)显著低于G1组(24.10±6.97,t=2.359、2.297,均P＜0.05).未发现突变型CYP2A6*4和CYP2B6*6对丙戊酸钠剂量和丙戊酸钠标准化血药浓度的影响.结论 CYP2C9和CYP2C19基因多态性会影响丙戊酸钠血药浓度,弱代谢(G3和G4组)的患儿服用丙戊酸钠应适当减少剂量.
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细胞色素P450酶2C19基因多态性与缺血性脑血管病患者介入术后服用氯吡格雷临床预后的相关分析
目的 探讨细胞色素P450酶2C19(CYP2C19)基因多态性与缺血性脑血管病患者介入术后长期服用氯吡格雷临床预后的相关性.方法 入选南京卒中注册系统中2009年4月至2010年12月行脑血管支架植入术并长期服用氯吡格雷的缺血性卒中患者194例.采用多重高温连接酶检测反应技术对人选病例的CYP2C19*2和CYP2C19 * 3位点进行分型,并对这些患者进行随访.主要终点事件包括缺血性脑血管事件和死亡；次要终点事件包括出血性血管事件和其他血管事件.结果 平均随访(19.4±9.9)个月,主要终点事件发生率为16.5％ (32/194).CYP2C19*2基因位点分型结果显示,194例患者中,CYP2C19*1*1型患者87例(44.8％),CYP2C19*1 * 2型患者88例(45.4％),CYP2C19 * 2*2型患者19例(9.8％).携带CYP2C19 * 2基因的患者随访期间主要终点事件的发生率明显高于非携带者[24/107(22.4％)与8/87(9.2％),HR =2.74,95％ CI 1.23 ～6.10,p=0.01].CYP2C19*3基因位点分型结果显示,CYP2C19 * 1 * 1基因型患者181例(93.3％),CYP2C19 * 1 * 3基因型患者13例(6.7％).CYP2C19 * 1*1和CYP2C19*1*3的两组患者之间主要终点事件发生率的差异无统计学意义.将年龄、性别、体重指数、高血压、糖尿病等危险因素纳入多因素COX回归模型分析显示,CYP2C19*2是主要终点事件的发生独立危险因素(HR=2.89,95％ Cl 1.10 ～7.60,P=0.03).结论 CYP2C19*2基因位点的多态性可能是影响脑血管支架术后服用氯吡格雷的患者临床预后的重要影响因素.
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CYP1B1基因缺失小鼠眼前房角组织结构的观察
目的 研究细胞色素P450 181(CYP1B1)基因对小鼠眼前房角组织结构的影响.方法 实验研究.采用成年CYP1B1基因缺失小鼠模型,以同龄C57BL/6J小鼠为对照.通过塑料包埋切片技术,用光学显微镜和透射电子显微镜观察两组小鼠眼前房角组织的形态和超微结构.结果 C57BL/6J小鼠眼前房角组织发育正常;CYP1B1因缺失小鼠存在不同程度的房水引流系统发育畸形,表现为小梁网发育不良,网眼狭窄,小梁细胞结构变异,有时可见小梁柱间有异常存在的均质膜,Schlemm管狭窄或缺失,虹膜突从虹膜根直达全部小梁网.这些异常改变在CYP1B1基因缺失小鼠眼前房角内呈局灶性分布.结论 CYP1B1基因在房角的发育过程中有重要作用,其缺失可导致小梁网、Schlemm管、虹膜突等房水滤过道的结构异常,可能影响房水引流系统的代谢和功能.
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原发性先天性青光眼CYP1B1基因新变异
目的 探讨CYP1B1基因变异在湖南地区原发性先天性青光眼患者中的分布.方法 病例对照研究.收集来自湖南地区的13例原发性先天性青光眼患者的临床资料进行分析,对13例患者的CYP1B1基因编码外显子进行直接测序和聚合酶链反应-限制性内切酶技术检测.结果 13例原发性先天性青光眼患者中,有1例发现一种基因新突变(c.C319G,L107V),是位于外显子2的错义突变.100例正常人中未见L107V突变.同时发现已报道的4种单核苷酸多态位点,分别为R48G、A119S、V432L、D449D.结论 CYP1B1基因L107V突变可能是导致湖南地区原发性先天性青光眼患者的致病原因之一.
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湖北地区原发性先天性青光眼患儿CYP1B1基因的新突变研究
目的 探讨湖北地区汉族原发性先天性青光眼(PCG)患儿的基因突变情况并为基因诊断奠定基础.方法 对47例无关个体PCG患儿及100例健康正常儿童进行基因分析.采取外周静脉血4 ml,制备外周白细胞基因组DNA,参照文献所报道的引物序列,聚合酶链反应(PCR)分别扩增CYP1B1基因的第2、3外显子,琼脂糖凝胶电泳鉴定产物后,应用单链构象多态性(SSCP)、变性高效液相色谱分析(DHPLC)及DNA序列分析技术对患儿和对照组进行基因分析.结果 7例PCG患儿呈现CYP1B1基因的第3外显子第385密码子的第1个碱基C→T碱基点突变,致对应的亮氨酸转变为苯丙氨酸(L385F).这一变异在正常对照组成员中未检出,且检索国内外文献尚未见报道.结论 湖北地区汉族PCG患者存在CYP1B1基因第3外显子突变,这一新突变位点位于P450蛋白的重要功能区,可能为病理性突变.在汉族PCG患者中进行CYP1B1基因突变的深入研究并寻找其他致病基因,对探讨PCG发病机制具有重要意义.(中华眼科杂志,2007,43:779-783)
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CYP2C19 G636A基因多态性与中国汉族人群缺血性卒中的相关性:病例对照研究
目的 探讨细胞色素P450(cytochrome P450,CYP)2C19基因常见多态性位点G636A多态性分布与中国汉族人群缺血性卒中的相关性.方法 提取154例缺血性卒中患者和193例对照者外周血DNA,采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性方法对CYP2C19 G636A进行基因型检测,抽样测序验证基因分型结果的正确性.对缺血性卒中患者和对照者基因型和等位基因分布进行比较.结果 两组基因型均以GG为主,缺血性卒中组AA(2.6％对0.5％,P=0.001)和AG(29.2％对14.5％,P=0.001)基因型以及A等位基因(17.2％对7.8％,P=0.000)频率均显著高于对照组.复发性卒中组AA(5.7％对1.0％,P =0.018)和AG(39.6％对23.8％,P=0.018)基因型以及A等位基因(25.5％对12.9％,P=0.005)频率均显著高于首次发病组.多变量logistic回归分析显示,AA基因型是缺血性卒中的独立危险因素(优势比14.279,95％可信区间1.053 ～ 193.698;P=0.046)),但与缺血性卒中复发风险无关.结论 CYP2C19基因636AA基因型和A等位基因可能与中国汉族人群缺血性卒中风险增高有关,但与缺血性卒中复发无关.
