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氯吡格雷治疗下CYP2C19与P2Y热点突变致血小板高反应性的效应研究
目的 研究氯吡格雷治疗患者CYP2C19和P2Y热点突变导致血小板因药物耐受而出现高反应性的效应关系,探索检出突变相关功能改变的临床适用方法.方法 病例对照研究.选取104例接受抗血小板治疗且冠状动脉介入术前服用负荷剂量(300 mg/d)氯吡格雷的冠状动脉粥样硬化性心脏病(冠心病)患者,在术后12 ～24 h内测定血小板功能,通过血栓弹力图(TEG)检测血小板抑制率,通过流式细胞术检测CD62p和血管扩张刺激磷蛋白(VASP);焦磷酸测序法测定中国人群药物代谢酶热点突变CYP2C19*2(681G＞ A)、CYP2C19*3 (636G＞ A)和血小板膜糖蛋白受体基因P2Y1 (893C ＞T)、P2Y12 (52G＞ T)4个位点基因多态性.以CYP2C19分型结果为依据分为野生组(*1/* 1)、杂合突变组(*2/*1)、纯合突变组(*2/*2),结合其他3个位点突变情况,分析各组氯吡格雷作用下的血小板功能差异.应用单因素方差分析进行不同基因型组间比较,两组间比较选用t检验及非参数检验进行统计学分析.结果 野生组血小板反应指数(PRI)为(35.75±23.11)％,杂合突变组为(48.77 ±24.22)％,纯合突变组为(66.73±15.74)％,差异有统计学意义(F=9.170,P＜0.05);野生组CD62p水平为(9.38±11.16)％,杂合组为(9.45±8.91)％,纯合突变组为(10.87±8.31)％,差异无统计学意义(F=0.087,P＞0.05);37例受试个体中未检出P2Y1(893C＞ T)位点突变,检出1例P2Y12(52G＞ T)位点突变.结论 CYP2C19*2突变与氯吡格雷疗效降低密切相关,VASP检测的血小板反应指数可有效反映其改变.
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siRNA沉默P2Y12受体基因对肝细胞癌血管生成能力的影响
目的：研究siRNA沉默P2Y12嘌呤受体基因对肝细胞癌（肝癌）血管生成能力的影响。方法 P2Y12-siRNA慢病毒表达载体及空载体对照质粒感染人肝癌细胞株MHCC97H，建立siRNA组和control组。采用Western blot检测P2Y12蛋白表达，体外血管生成实验检测肝癌细胞促血管生成能力，观察裸鼠皮下肝癌成瘤微血管密度(MVD)。两组实验数据比较采用t检验。结果 siRNA组和control组人肝癌细胞MHCC97H的P2Y12蛋白平均相对表达量分别为0.07±0.01、0.26±0.02，siRNA组明显少于control组（t=-35.64，P<0.05）。经siRNA组细胞上清刺激的人脐静脉血管内皮细胞（HUVEC）未形成连续的封闭小管状结构，经control组细胞上清刺激的HUVEC细胞形成大量封闭小管。siRNA组裸鼠皮下成瘤的微血管较少，MVD为5±1，明显低于control组的23±6（t=-17.01，P<0.05）。结论 siRNA沉默P2Y12受体基因可抑制肝癌血管生成。
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替格瑞洛致呼吸困难机制研究进展
替格瑞洛是可逆性P2Y12受体抑制剂,通过抑制二磷酸腺苷介导的血小板聚集发挥抗血小板作用.呼吸困难是替格瑞洛的常见不良反应,其可能的机制包括腺苷堆积理论、抑制神经元P2Y12受体和类输血相关急性肺损伤(TRALI).替格瑞洛可通过抑制红细胞对腺苷再摄取、诱导ATP从红细胞内释放、蓄积并降解为腺苷或直接代谢为腺苷类似物致呼吸困难;可通过抑制P2Y12受体而增加环磷酸腺苷的生成,增强前列腺素E2活性,致迷走神经C纤维兴奋性提高,诱发呼吸困难;替格瑞洛与P2Y12受体的可逆性结合可导致肺循环中衰老、耗竭和被破坏的血小板聚积并启动凋亡程序,导致类TRALI反应,引起呼吸困难.减少替格瑞洛用药剂量或静脉注射茶碱(5 mg/kg)可有效缓解替格瑞洛导致的呼吸困难.
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P2 Y12受体对骨癌痛大鼠及其脊髓炎症因子表达的调节
目的：观察鞘内注射P2Y12受体抑制剂MRS2395对骨癌痛大鼠痛阈及其脊髓炎症因子表达的影响，探讨P2 Y12受体与炎症因子在骨癌痛发病机制中的可能作用。方法雌性SD大鼠32只，随机数字表法随机分为4组：假手术组（ S组）、MRS2395组（ M组）、胫骨癌痛组（ A组）、胫骨癌痛MRS2395组（ MA组）。 S组、M组左胫骨上端骨髓腔各注入Hank′s液10μl，A组、MA组左胫骨上端骨髓腔各注入Walker256癌细胞悬液10μl。骨癌痛造模同时均进行L3-4间隙鞘内置管，模型制备成功后第9～12天， S 组、A 组鞘内注射0.9％生理盐水15μl/d， M 组、MA 组鞘内注射 MRS2395（400 pmol/μl）15μl/d。术后第9～12天鞘内注药前、后每10分钟测试1次大鼠左后足机械痛阈值，术后第12天鞘内注药测定机械痛阈值后，取L4-L6左侧脊髓背角，采用酶联免疫吸附测定法测脊髓炎症因子IL-1β、IL-6的表达情况。结果建模后第9天，S组、M组、A组、MA组给药后20 min机械痛阈值分别为（34.2±5.8）g、（34.4±5.7）g、（21.0±2.0）g、（25.4±2.3）g，差异有统计学意义（F＝18.679，P＜0.01）；与S组、M组比较，A组机械痛阈值下降；与A组比较，MA组机械痛阈值增高。建模后第12天，S组、M组、A组、MA组大鼠脊髓IL-1β含量分别为（74.0±18.6）pg/ml、（98.4±17.3） pg/ml、（253.5±66.4）pg/ml、（146.3±22.3） pg/ml，差异有统计学意义（F＝18.221，P＜0.01）；与S组、M组比较，A组大鼠脊髓IL-1β含量明显升高；S组、M组、A组、MA组大鼠脊髓IL-6含量分别为（377.4±65.8）pg/ml、（331.6±67.9） pg/ml、（856.1±53.4） pg/ml、（596.1±34.9） pg/ml，差异有统计学意义（F＝70.880，P＜0.01）；与S组、M组比较，A组大鼠脊髓IL-6含量明显升高；与A组比较， MA组大鼠鞘内注射MRS2395后IL-1β和IL-6含量均明显降低。结论鞘内注射MRS2395可缓解骨癌痛大鼠的痛觉过敏，抑制骨癌痛大鼠脊髓内炎症因子表达上调，P2Y12受体可能通过调节IL-1β、IL-6的表达参与骨癌痛的发生。
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氯吡格雷抵抗与基因多态性
氯吡格雷是目前广泛应用于临床的一种抗血小板药,已作为心肌梗死、缺血性卒中和周围血管病的二级预防用药.然而,氯吡格雷的抗血小板聚集效果存在显著的个体差异,很大一部分患者存在抵抗现象.氯吡格雷抵抗的机制尚不完全清楚,基因多态性是氯吡格雷抵抗的一个重要原因,包括ABCB1、CYP2C19、CYP3 A4、CYP3A5、P2Y12和ITGB3等.
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P2Y12基因多态性与急性缺血性卒中患者氯吡格雷抵抗和远期转归的相关性
目的 探讨P2Y12基因多态性与急性缺血性卒中患者氯吡格雷抵抗和远期转归的相关性.方法 连续纳入2015年6月至2017年6月在南京江北人民医院神经内科住院的急性缺缺血性卒中患者.采用血栓弹力图仪测定血小板抑制率并评定氯吡格雷抵抗,采用聚合酶链反应测定P2Y12基因C34T 和G52T 多态性.在患者出院后12个月进行随访,主要终点为卒中复发、心肌梗死和因心脑血管事件死亡构成的联合终点.结果 共纳入214例患者,51例(23.8%)存在氯吡格雷抵抗,29例(13.4%)发生主要终点事件. C34T CC 基因型患者128例(59.8%),CT+TT 基因型86例(40.2%),CT+TT 基因型患者氯吡格雷抵抗的比例显著高于CC基因型患者(76.5%对28.8%;χ2=25.672,P=0.001). G52T GG基因型患者131例(61.2%),GT+TT基因型83例(38.8%),GT+TT基因型患者氯吡格雷抵抗的比例与GG基因型患者无差异统计学意义(43.1%对37.4%;χ2=0.534,P=0.465).多变量logistic回归分析显示,年龄[优势比(odds ratio, OR)1.064,95%可信区间(confidence interval, CI)1.009~1.115;P=0.021]、糖尿病(OR 3.773,95% CI 1.672~8.475;P=0.004)和C34T CT+TT基因型(OR 9.087,95% CI 4.416~22.665;P=0.002)是氯吡格雷抵抗的独立危险因素. Cox比例风险模型分析显示,年龄[风险比(hazard ratio, HR)1.058,95% CI 1.001~1.121;P=0.049]、高血压(HR 3.105,95% CI 1.149~9.523;P=0.028)、高半胱氨酸(HR 1.101, 95% CI 1.020~1.190;P=0.014)和C34T CT+TT基因型(HR 2.588,95% CI 1.121~5.967;P=0.026)是联合终点的独立危险因素.结论 急性缺血性卒中患者P2Y12基因C34T 多态性可能是氯吡格雷抵抗的危险因素,且与远期血管性事件复发风险独立相关.
