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Girdin 蛋白在阿尔茨海默病患者脑组织中的表达
目的探讨 Girdin蛋白在阿尔茨海默病（ AD）患者脑组织中的表达及其意义。方法收集1988年1月至2013年12月卫生部北京医院病理科尸检病例59例，其中AD组35例，非AD组24例，采用免疫组织化学EnVision法检测AD组及非AD组Girdin蛋白、β-淀粉样蛋白（ Aβ）的表达情况，分析其相关性。结果 Girdin蛋白定位于细胞核和／或细胞质，AD组及非AD组中Girdin 蛋白高表达率分别为20.0％（7／35）、83.3％（20／24），两组间差异有统计学意义（校正χ2＝20.527，P＜0.05）。 AD组及非AD组中Girdin蛋白的表达与Aβ蛋白沉积明显相关（P＜0.05）。结论 Girdin蛋白在AD患者脑组织中低表达，与Aβ蛋白沉积呈负相关，提示Girdin蛋白可能在AD的发生、发展过程中起重要作用。
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氯吡格雷治疗下CYP2C19与P2Y热点突变致血小板高反应性的效应研究
目的 研究氯吡格雷治疗患者CYP2C19和P2Y热点突变导致血小板因药物耐受而出现高反应性的效应关系,探索检出突变相关功能改变的临床适用方法.方法 病例对照研究.选取104例接受抗血小板治疗且冠状动脉介入术前服用负荷剂量(300 mg/d)氯吡格雷的冠状动脉粥样硬化性心脏病(冠心病)患者,在术后12 ～24 h内测定血小板功能,通过血栓弹力图(TEG)检测血小板抑制率,通过流式细胞术检测CD62p和血管扩张刺激磷蛋白(VASP);焦磷酸测序法测定中国人群药物代谢酶热点突变CYP2C19*2(681G＞ A)、CYP2C19*3 (636G＞ A)和血小板膜糖蛋白受体基因P2Y1 (893C ＞T)、P2Y12 (52G＞ T)4个位点基因多态性.以CYP2C19分型结果为依据分为野生组(*1/* 1)、杂合突变组(*2/*1)、纯合突变组(*2/*2),结合其他3个位点突变情况,分析各组氯吡格雷作用下的血小板功能差异.应用单因素方差分析进行不同基因型组间比较,两组间比较选用t检验及非参数检验进行统计学分析.结果 野生组血小板反应指数(PRI)为(35.75±23.11)％,杂合突变组为(48.77 ±24.22)％,纯合突变组为(66.73±15.74)％,差异有统计学意义(F=9.170,P＜0.05);野生组CD62p水平为(9.38±11.16)％,杂合组为(9.45±8.91)％,纯合突变组为(10.87±8.31)％,差异无统计学意义(F=0.087,P＞0.05);37例受试个体中未检出P2Y1(893C＞ T)位点突变,检出1例P2Y12(52G＞ T)位点突变.结论 CYP2C19*2突变与氯吡格雷疗效降低密切相关,VASP检测的血小板反应指数可有效反映其改变.
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肌动蛋白结合蛋白transgelin-2在结直肠癌中的表达及其意义
目的 探讨结直肠癌组织中肌动蛋白结合蛋白transgelin-2的表达及其与临床病理因素的关系,评价transgelin-2在结直肠癌预后判断中的价值.方法 应用组织芯片结合免疫组化方法,检测2002年9月至2004年4月120例手术切除的结直肠癌患者组织中transgelin-2的表达情况,男性74例,女性46例,年龄26～89岁,中位年龄64.5岁.采用x2检验其与临床病理因素的关系,Log-rank检测生存率差别,Cox比例风险模型分析多个变量对生存时间的影响.结果 transgelin-2在结直肠癌组织中的阳性表达率为69.2％.transgelin-2的表达与分化程度(x2=5.420)、淋巴结转移(x2＝45.577)、远处转移(x2=12.009)及TNM分期(x2=47.577)相关(P＜0.05).transelin-2阳性表达者术后生存时间(39±5)个月,阴性表达者为( 59±3)个月,Kaplan-Meier生存分析显示,transgelin-2表达与生存时间密切相关(P =0.003).Cox分析显示,远处转移(RR=8.318,95％ CI:4.119～16.790)、淋巴结转移(RR=2.794,95％ CI:1.246～6.263)和transgelin-2表达(RR=1.834,95％ CI:1.118～2.793)是影响结直肠癌患者预后的独立因素(P＜0.05).结论 肌动蛋白结合蛋白transgelin-2的表达水平与结直肠癌临床病理因素及预后相关,可能成为判断结直肠癌转移和预后的潜在标志物.
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细丝蛋白C肌病基因存在新的插入缺失突变
目的 报道在1个细丝蛋白C(filamin C,FLNC)肌病家系中发现的新的插入缺失突变.方法 该家系连续5代共有19例患者,临床和病理资料在前期研究中已经作为肌原纤维肌病进行了报道.现对包括先证者在内的3例患者、5名无症状家系成员和50名健康人进行FLNC基因的测序,利用质粒将FLNC基因的第18号外显子扩增产物进行克隆分离,然后进行电泳鉴定和直接测序.结果 先证者的FLNC基因的第18号外显子存在18个正常碱基缺失,同时插入6个异常碱基,导致FLNC蛋白第7个免疫球蛋白样杆状重叠结构异常,继而致FLNC蛋白结构的失稳.家系中另2例患者存在同样的突变,而5名无症状家系成员和50名健康对照均正常.结论 FLNC肌病存在FLNC基因第18号外显子新的插入缺失突变,我们发现该病可以出现在德国之外的其他种族.
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细胞骨架分子与喉鳞状细胞癌患者复发及预后的关系
目的 观察细胞骨架分子Fascin-1,Ezrin及Paxillin在喉鳞状细胞癌(简称鳞癌)组织中的表达,并评价三者对喉鳞癌复发风险及预后的预测价值.方法 采用免疫组化Max Vision二步法观察三种蛋白在199例患者喉鳞癌组织中的表达情况,通过非条件Logistic回归及单因素、多因素生存分析,总结三者在喉鳞癌复发风险预测及预后评估中的价值.结果 三种蛋白分别在低分化、颈淋巴转移及临床晚期(Ⅲ+Ⅳ)喉鳞癌组织中表达增强趋势(P值均＜0.05),且三者表达呈正相关趋势(P值均＜0.001).三种蛋白分别在复发组中的表达强度高于未复发组(x2值分别为42.479,43.673和22.261,P＜0.05).三种蛋白联合高表达患者中复发病例构成比为69.1％,高于其他联合表达模式组中的构成比(P ＜0.001),且Fascin-1(比值比为7.89,95％可信区间为2.26～27.53,P=0.001)及Ezrin(比值比为2.51,95％可信区间为1.18 ～5.32,P＜0.001)为影响喉鳞癌复发的独立危险因素.三种蛋白分别高表达患者的5年无瘤生存率均降低(P＜0.05),而三者联合高表达患者5年无瘤生存率更低,为26.4％ (P＜0.05).三种蛋白均为影响患者预后独立危险因素(P＜0.05).结论 Fascin-1,Ezrin,Paxillin不仅与喉鳞癌的恶性进展相关,还与复发风险及预后不良相关.联合检测三者表达情况,有助于喉鳞癌复发风险预测及预后评估.
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埃兹蛋白和膜突蛋白及上皮型钙黏蛋白与甲状腺乳头状癌侵袭性的相关性研究
目的 探讨埃兹蛋白(Ezrin)、膜突蛋白(Moesin)和上皮型钙黏蛋白(E-Cadherin)在甲状腺乳头状癌侵袭和转移中的作用。方法 选取2005-2008年手术切除的81例甲状腺乳头状癌石蜡包埋标本，以癌旁组织为对照，采用免疫组织化学SP法，检测Ezrin、Moesin和E-Cadherin在甲状腺乳头状癌中的表达，并结合患者的临床资料进行分析。结果 甲状腺乳头状癌中的Ezrin、Moesin的阳性表达率均高于癌旁组织（x2值分别为61.691、57.949，P值均＜0.01）。甲状腺乳头状癌中E-Cadherin的阳性表达率低于癌旁组织(x2 =64.241，P＜0.01)。患者年龄≥45岁、肿瘤侵犯甲状腺被膜外、有颈淋巴转移、Ⅲ～Ⅳ期甲状腺乳头状癌，Ezrin、Moesin的阳性表达率增高，差异有统计学意义（P值均＜0.01）；而E-Cadherin的阳性表达率降低，差异有统计学意义（P值均＜0.01）。结论 甲状腺乳头状癌中Ezrin、Moesin的高表达和E-Cadherin的低表达与肿瘤的侵袭和转移有关，三者之间可能具有协同作用，联合检测Ezrin、Moesin和E-Cadherin可作为判断甲状腺乳头状癌侵袭、转移和预后的指标。
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马方综合征突变型微纤维蛋白-Ⅰ基因蛋白模型的计算机构建和分析
目的 运用计算机建模分析中国马方综合征单纯晶状体脱位患者突变型微纤维蛋白-Ⅰ(FBN1)物理结构的改变,以阐明其在晶状体脱位发病机制中的作用.方法 对照实验研究.运用SWISS-MODEL软件预测、SWISS-Pdb浏览器观察与分析野生型和R545C、R1530C突变型微纤维蛋白-Ⅰ的蛋白构型.结果 与野生型微纤维蛋白-Ⅰ比较,突变型微纤维蛋白-Ⅰ具有显著的二维结构的改变.R545C突变型微纤维蛋白-Ⅰ造成α螺旋结构缺失、氢键距离缩短、蛋白表面水溶性改变和分子负电荷势能下降.R1530C突变型微纤维蛋白-Ⅰ造成氢键缺失、蛋白表面水溶性改变和分子负电荷势能上升.结论 突变型微纤维蛋白-Ⅰ基因显著改变了该蛋白的二维结构,进一步支持了微纤维蛋白-Ⅰ在马方综合征晶状体脱位发病机制中具有一定作用的理论.
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晶状体脱位一家系FBN1基因N1173K突变研究
目的 对常染色体显性遗传晶状体脱位( EL)一家系进行致病基因研究.方法 通过询问病史及系谱分析确定遗传模式.对所有患者进行临床检杳,包括眼部、心脏以及骨骼确定临床表型.采集患者外周静脉血5 ml,提取基因组DNA.采用微卫星标记引物,通过连锁分析进行致病基因定位,两点法计算LOD值.采用直接测序法对致病基因全部外显子,以及外显子与内含子拼接部进行基因序列分析.结果 该家系为常染色体显性遗传模式.经连锁分析,将致病基因定位于常染色体15q21.1区间,并在微卫星位点D15S978获得大LOD值为3.01.基因序列分析发现候选基因FBN1 29外显子发生c.C3519G.(p.N1173K)杂合性基因突变,而家系正常人以及100名正常对照无此基因突变.结论 FBN1基因N1173K突变是导致该家系临床表型的主要原因.
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微丝相关蛋白hHBRK1突变体的构建、表达及纯化
目的:构建微丝相关蛋白hHBRK1截短体和突变体原核表达载体,并表达及纯化融合蛋白.方法:采用常规PCR并结合定点突变技术,对hHBrk1基因进行缺失和点突变;利用限制性内切酶将PCR产物克隆至原核表达载体pGEX-4T;IPTG诱导融合蛋白表达,通过谷胱甘肽-琼脂糖纯化技术分离纯化GST融合蛋白.结果与结论:构建了包括氨基端缺失截短体hHBRK1-ΔN、羧基端缺失截短体hHBRK1-ΔC和点突变蛋白hHBRK1-S56G57在内的原核表达质粒,分离获得较高纯度的重组hHBRK1突变体融合蛋白,Western杂交证实纯化蛋白为GST融合蛋白.本实验为进一步研究hHBRK1的相互作用蛋白及其可能的结合位点提供了基础.
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气道剪应力作用下黏蛋白5AC胞外极向分泌的主要介导分子
目的 探讨气道剪应力(SS)作用下黏蛋白(MUC)5 AC胞外极向分泌的主要介导分子.方法 常规培养16HBE细胞,使用Stata软件产生随机数字随机分为5组并分别进行如下处理:A组(对照组):10％胎牛血清(FBS)+DMEM高糖培养液继续培养,不再予任何刺激;B组(SS组):只给予节律性旋转装置产生的SS刺激;C组[SS+Rac-1特异性抑制剂(NSC23766)组]:给予SS刺激前30 min,加入NSC23766(10 μmol/L);D组(SS+微丝肌动蛋白解聚剂组):给予SS刺激前30 min,加入细胞松弛素D(100 μg/L);E组[SS+皮层肌动蛋白结合蛋白(Cortactin)小干扰RNA(siRNA)转染组]:用成功转染Cortactin-siRNA的细胞予以SS刺激.每个实验组设6个复孔,重复3次实验用于统计学分析.采用节律性旋转装置模拟呼吸时气流对气道产生的SS作用.用Cortactin-siRNA转染抑制Cortactin功能.酶联免疫吸附试验(ELISA)法测定细胞培养上清液中MUC5AC的胞外分泌量;Westem印迹法检测Cortactin及其磷酸化(p-Cortactin)水平和转染效果;激光共聚焦显微镜观察微丝肌动蛋白的聚合情况.结果 Cortactin-siRNA转染成功.A、B、C、D、E组MUC5AC相对含量分别为0.210 ±0.013、0.631±0.025、0.473±0.112、0.330±0.067、0.272±0.019,B组均显著高于其他各组(P=0.000、0.043、0.000、0.000);B组Cortactin相对表达水平为0.670±0.048,显著高于E组的0.132±0.014(P＜0.01),但与A、C、D组的0.641 ±0.016、0.622±0.012、0.653±0.027比较差异均无统计学意义(均P＞0.05);B组p-Cortactin相对表达水平为0.582±0.067,显著高于A、C、E组的0.131 ±0.011、0.393±0.045、0.170±0.016(P =0.000、0.021、0.000),而D组(0.511 ±0.029)与B组差异无统计学意义(P =0.246).结论 Rac-1、Cortactin和微丝肌动蛋白是气道SS作用下MUC5AC胞外极向分泌的主要介导分子.
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Transgelin在伴随糖尿病的胰腺癌中的表达及其对SW1990细胞运动侵袭的影响
目的 探讨骨架相关蛋白Transgelin在伴或不伴糖尿病的胰腺癌组织中的表达，及其对胰腺癌SW1990细胞运动侵袭的影响。方法 采用免疫组织化学法检测Transgelin在92例胰腺癌患者（其中伴糖尿病者45例）的癌组织、癌旁组织（距癌边缘＞5 cm）中的表达水平，分析其与临床病理特征的关系；设计并体外合成靶向Transgelin的小干扰RNA(siRNA)，将其转染到SW1990细胞中，采用Transwell小室检测转染前后细胞运动侵袭能力的改变。结果 Transgelin在胰腺癌 组织中的表达阳性率为68.5％(63/92),显著高于癌旁组织[33.7％(31/92)，P＜o.05]。伴随糖尿病的胰腺癌组织中Transgelin表达阳性率为84.4％(38/45)，显著高于无糖尿病的胰腺癌组[53.2％(25/47)，P＜0.05]。胰腺癌组织中Transgelin表达与胰腺癌的淋巴结转移及TNM分期密切相关(P＜0.05)，与性别、年龄、发生部位、分化程度、门静脉或神经受侵犯无关(P＞0.05)。Transgelin siRNA干扰后48 h，SW1990细胞迁移能力[穿膜细胞数为(49.2±9.5)个]明显低于阴性对照组和空白组[(61.9±7.5)和(65.3±10.6)个，P值均＜0.05];SW1990细胞的体外侵袭能力[穿膜细胞数为(48.0±8.6)个]也明显低于阴性对照组和空白组[（63.5±11.4）个和(67.5±9.6)个,P值均＜0.05]。结论 Transgelin可能通过促进胰腺癌细胞的运动侵袭能力，参与伴随糖尿病的胰腺癌的转移发生。
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细丝蛋白A在浸润性乳腺癌中的表达及意义
目的:探讨细丝蛋白 A(filamin A,FLNa)在浸润性乳腺癌组织中的表达及其与临床特征之间的关系.方法:采用免疫组织化学和FCM法检测46例浸润性乳腺癌标本中FLNa的表达情况,并统计分析FLNa表达与患者临床病理学特征的相互关系.结果:FLNa在浸润性乳腺癌组织中的表达水平随分化程度的降低而增高,中、高分化组与低分化组之间的差异有统计学意义(P<0.05);有淋巴结转移组的FLNa表达水平较无淋巴结转移组高(P<0.05).结论:FLNa表达水平与浸润性乳腺癌的侵袭和转移有关,可作为浸润性乳腺癌预后判断的辅助指标,也有望成为临床治疗的新靶点.
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TAGLN基因过表达对乳腺癌细胞迁移和侵袭能力的影响
目的 研究TAGLN基因过表达对人乳腺癌细胞MDA-MB-231迁移能力和侵袭能力的影响及其分子机制.方法 对MDA-MB-231细胞采用慢病毒表达系统构建TAGLN基因稳定过表达细胞株,将MDA-MB-231细胞正常培养设为空白对照组,空载体慢病毒包装感染MDA-MB-231细胞后获得的稳定转染细胞株设为空载体对照组.Real time PCR和Western blot检测TAGLN mRNA和蛋白表达,划痕实验和Transwell侵袭实验检测细胞迁移和侵袭能力,Western blot检测TAGLN基因过表达后基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)和MMP-9蛋白表达变化.结果 MDA-MB-231细胞感染TAGLN基因过表达慢病毒载体后,细胞中TAGLN mRNA表达和蛋白表达升高(均P＜0.01),成功构建TAGLN基因过表达稳定细胞株(231-TAGLN).231-TAGLN细胞的体外迁移能力和侵袭能力下降,与空载体对照组和空白对照组细胞比较,差异均具有统计学意义(均P＜0.01),同时伴有MMP-2和MMP-9表达水平降低(均P＜0.01).结论 TAGLN基因过表达可以抑制乳腺癌细胞的迁移和侵袭,MMP-2和MMP-9基因表达下降可能参与这一过程.
