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气道剪应力作用下黏蛋白5AC胞外极向分泌的主要介导分子
目的 探讨气道剪应力(SS)作用下黏蛋白(MUC)5 AC胞外极向分泌的主要介导分子.方法 常规培养16HBE细胞,使用Stata软件产生随机数字随机分为5组并分别进行如下处理:A组(对照组):10％胎牛血清(FBS)+DMEM高糖培养液继续培养,不再予任何刺激;B组(SS组):只给予节律性旋转装置产生的SS刺激;C组[SS+Rac-1特异性抑制剂(NSC23766)组]:给予SS刺激前30 min,加入NSC23766(10 μmol/L);D组(SS+微丝肌动蛋白解聚剂组):给予SS刺激前30 min,加入细胞松弛素D(100 μg/L);E组[SS+皮层肌动蛋白结合蛋白(Cortactin)小干扰RNA(siRNA)转染组]:用成功转染Cortactin-siRNA的细胞予以SS刺激.每个实验组设6个复孔,重复3次实验用于统计学分析.采用节律性旋转装置模拟呼吸时气流对气道产生的SS作用.用Cortactin-siRNA转染抑制Cortactin功能.酶联免疫吸附试验(ELISA)法测定细胞培养上清液中MUC5AC的胞外分泌量;Westem印迹法检测Cortactin及其磷酸化(p-Cortactin)水平和转染效果;激光共聚焦显微镜观察微丝肌动蛋白的聚合情况.结果 Cortactin-siRNA转染成功.A、B、C、D、E组MUC5AC相对含量分别为0.210 ±0.013、0.631±0.025、0.473±0.112、0.330±0.067、0.272±0.019,B组均显著高于其他各组(P=0.000、0.043、0.000、0.000);B组Cortactin相对表达水平为0.670±0.048,显著高于E组的0.132±0.014(P＜0.01),但与A、C、D组的0.641 ±0.016、0.622±0.012、0.653±0.027比较差异均无统计学意义(均P＞0.05);B组p-Cortactin相对表达水平为0.582±0.067,显著高于A、C、E组的0.131 ±0.011、0.393±0.045、0.170±0.016(P =0.000、0.021、0.000),而D组(0.511 ±0.029)与B组差异无统计学意义(P =0.246).结论 Rac-1、Cortactin和微丝肌动蛋白是气道SS作用下MUC5AC胞外极向分泌的主要介导分子.
