中华检验医学杂志
Chinese Journal of Laboratory Medicine 중화검험의학잡지
- 主管单位： 中华医学检验杂志
- 主办单位： 中国科学技术协会
- 影响因子： 1.40
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 11-4452/R
- 国内刊号： 韩锟
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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新的微生物诊断技术对呼吸道感染诊治的影响:现状与展望
呼吸道感染是危害人类健康的重大疾病,病原学诊断的滞后使临床医生不得不求助于广谱抗感染药物的经验性治疗,细菌耐药问题越来越严重.明确呼吸道感染的病原学诊断、谨慎选择窄谱抗菌药物才是科学的应对之道.微生物学家和临床医生密切配合,善用痰涂片等传统微生物学方法;临床应用新的床旁病原学诊断技术(point-of-care test,POCT);采用高通量、标准化和自动化的分子诊断新技术,将使呼吸道感染的目标性治疗逐渐成为可能.
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乙型肝炎病毒前S1抗原与抗体的研究进展及临床应用
1965年Blumberg发现了"澳大利亚抗原",随后确定是HBV标志物.1970年英国的Dane等人在电镜下鉴定了HBV颗粒,并阐明了颗粒的表面成分HBsAg、核壳成分HBcAg和HBeAg,从此检测HBV感染的方法学迅速建立.
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荚膜组织胞浆菌感染一例
荚膜组织胞浆菌(histoplasma capsulatum)[1]是一种能在自然界或室温下培养生长的霉菌,但在37℃或侵犯宿主细胞时,则转变成小的酵母菌细胞(直径1～5 μm).人类常因吸入被鸟或蝙蝠粪便污染的泥土或尘埃中的真菌孢子而感染HP.HP呈全球分布[1],临床症状与肺结核、黑热病相似.
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痰液中检出肺吸虫卵致肺吸虫感染一例
肺吸虫病是由卫氏并殖吸虫感染而引起的慢性肺部疾患,人和动物是其终宿主.卫氏并殖吸虫的成虫主要寄生在宿主的肺部,因此也称肺吸虫.`患者男,44岁,河南泌阳县农民,从事食用菌栽培工作13年.
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真空泵法与离心法提取病毒RNA的效果比较
在应对某些重大传染病如SARS、手足口病、甲型H1N1流感时,由于实时荧光RT-PCR法具有快速、灵敏的特点,在中国CDC系统内被广泛运用,为及时检测诊断提供了帮助[1-2].
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糖尿病
糖尿病是由于胰岛素相对或绝对缺乏以及不同程度的胰岛素抵抗,引起碳水化合物、脂肪及蛋白质代谢紊乱的综合征.持续高血糖是其基本生化特征.起病后若未得到有效控制可出现广泛的微血管及大血管病变,导致双目失明、肾功能衰竭、肢端坏疽、心血管病变及脑血管病变等.
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新型二聚体突变荧光引物定量PCR方法的建立及其在检测HCV中的应用
目的 开发新型二聚体突变荧光引物技术,建立一种能广泛应用于临床检测HCv的实时PCR方法.方法 构建重组质粒pMD18-T-HCV 5′NCR作为标准品,设计二聚体突变荧光引物,优化定量PCR体系,并进行方法学评价.将本法应用于临床确诊的30份HCV阳性患者、30份其他病毒性肝炎患者和30份健康志愿者血清标本的检测,定量结果与商品化TaqMan HCv定量试剂盒的定量结果进行比较.结果 建立了利用二聚体突变荧光引物的实时PCR方法,检测的线性范围为20～109IU/ml;批内CV在1.37%～4.59%之间,批间CV在1.58%～4.81%之间;对所有其他病毒性肝炎患者和健康志愿者血清HCV的检测结果均阴性,检测特异性为100%(60/60);对临床确诊的HCV感染患者血清标本全部检出HCV阳性,定量结果与商品化TaqMan HCV定量试剂盒的定量结果具有很好的相关性,相关系数R2=0.9501.结论 建立的以二聚体突变荧光引物为平台的HCV实时PCR检测方法,具有快速、价廉、准确、结果可靠等特点,可为HCV感染的诊断、治疗监测和流行病学调查提供较好的技术支持.
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PCR-焦磷酸测序法快速鉴定菌血症病原菌
世界范围内成人和儿童菌血症都是高发病率和高死亡率的疾病,每年世界范围内菌血症患者有2 000万例.因病原菌不能鉴定而应用广谱抗生素或不适当抗生素治疗所导致的死亡率非常高,但欧洲每年仍有135 000例患者死于菌血症,在美国更是高达215 000例[1].
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谈谈表面针状突起红细胞的命名问题
外周血涂片中,表面有针状或指状突起的红细胞属于异常形态的红细胞,根据其表面突起物的大小、长短和分布情况可归纳为两类:(1)A类:红细胞表面的突起呈针尖状或指状,其长度和宽度不一,分布不规则,突起物之间的间隔不均一(图1a),常见于脂蛋白缺乏症、重度肝脏疾病、脾切除后等疾病;(2)B类:突起物的长短一致、大小相等、排列均匀,突起物之间的间隔也一致(图1b),常见于尿毒症、高渗状态以及血涂片干燥太慢等情况.
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手足口病患者体内肠道病毒71型和柯萨奇病毒A组16型与常见呼吸道病毒的检测及临床分析
目的 调查手足口病患者中EV71和CA16的感染现状,分析呼吸道病毒合并感染对患者的影响.方法 收集2010年6-10月在北京佑安医院就诊的手足口病患者348例,包括门诊轻症患者100例,住院患者248例.采集患者咽拭子标本提取病毒RNA,用随机引物将标本中的RNA逆转录成cDNA,荧光PCR法检测EV71和CA16.以呼吸道病毒多重PCR引物扩增12种呼吸道病毒的基因片段,通过电泳分析判断结果.比较EV71(+)或CA16(+)组与EV71(-)CA16(-)组合并呼吸道病毒感染阳性率和重症患者比例,住院与门诊手足口病患者中合并感染呼吸道病毒的阳性率.结果 348例手足口病患者,共检测出呼吸道病毒感染36例.在248例住院手足口病患者中,111例EV71(+)或CA16(+)组患者呼吸道病毒感染率7.2%,相比137例EV71(-)CA16(-)组患者呼吸道病毒感染率7.4%,差异无统计学意义(x2=0.059,P＞0.05).在100例门诊轻症手足口病患者中,有17例(17%)合并呼吸道病毒感染,高于111例EV71(+)或CA16(+)组患者呼吸道病毒感染率,差异有统计学意义(x2=4.830,P＜0.05).在111例EV71(+)或CA16(+)组中,重症患者为101例(91.0%);在137例EV71(-)CA16(-)组中,重症患者为132例(96.4%),两组重症患者率差异无统计学意义(x2=3.099,P＞0.05).在348份标本中检出占前3位的呼吸道病毒分别是人鼻病毒A/B(HRV A/B)、人副流感病毒3(PIV3)、甲型流感病毒(FLU A).结论 手足口病患者中存在呼吸道病毒合并感染,但合并感染对手足口病病情未见明显影响.
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上海地区肺结核病患者氧氟沙星耐药情况分析
目的 了解上海地区肺结核病患者氧氟沙星耐药的分布情况及可能的危险因素.方法 收集2009-2010年上海市各结核病定点医院的447株对任意一种一线抗结核药物(异烟肼、利福平、链霉素和乙胺丁醇)耐药的菌株,同期随机选取151株对上述4种一线抗结核药物全敏感菌株,对这598株结核分枝杆菌菌株进行氧氟沙星敏感性检测,分析氧氟沙星耐药的分布情况.收集肺结核患者的年龄、性别、抗结核治疗史和户籍资料,采用多因素分析研究氧氟沙星耐药可能的危险因素.用DNA测序分析氧氟沙星耐药菌株gyrA、gyrB基因耐药突变的特征.结果 447株耐药菌株中,72株(16.1%)对氧氟沙星耐药,MDR(至少同时对异烟肼、利福平耐药)结核分枝杆菌中氧氟沙星耐药44株(39.6%).在151株一线抗结核药物全敏感菌株中,4株(2.6%)耐氧氟沙星.多因素分析结果显示MDR和多耐药(对一种以上抗结核药物耐药,但不对异烟肼和利福平同时耐药)等与氧氟沙星耐药有关(OR分别为19.5、5.6,95% CI 分别为6.4～59.4、1.7～18.1,P均＜0.05).患者为复治病例与氧氟沙星耐药相关(OR=2.3,95%CI:1.2～4.0,P＜0.05).氧氟沙星耐药与年龄偏大有关(OR=1.03,95%CI:1.01～1.05,P＜0.05).76株氧氟沙星耐药菌株的gyrA、gyrB基因序列分析显示62株(81.6%)发生耐药突变.结论 上海地区MDR结核病患者中氧氟沙星耐药率高于对一线抗结核药物全敏感的肺结核病患者.MDR、多耐药、复治、年龄为氧氟沙星耐药可能的危险因素,其中以MDR与氧氟沙星耐药的关联强度大.
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六年间血流感染的金黄色葡萄球菌的分子特征分析
目的 分析上海三级甲等医院2004-2010年血流感染的金黄色葡萄球菌克隆分型特点以及随时间的变化趋势,检测不同克隆株耐药和毒力基因携带情况.方法 收集上海华山医院2004-2010年从不同患者血液样本中分离鉴定的金黄色葡萄球菌103株,通过苯唑西林MIC测定和SCCrnec基因分型等方法对MRSA进行检测;按照国际通用的多位点保守基因测序(MLST)以及葡萄球菌A蛋白序列分析(spa typing)方法进行克隆株的鉴定分析,采用PCR方法对103株细菌的耐药以及毒力基因携带情况进行分析.结果 103株金黄色葡萄球菌共检出MRSA66株(64.1%),其中SCCmecⅡ型35株,SCCmecⅢ型29株,SCCmecⅣ型2株,MSSA 37株(35.9%).66株MRSA的克隆分型以ST5(33株)和ST239(29株)为主,另外还包括2株ST59.1株ST641,1株ST6;其他克隆型均为MSSA.从2009年开始ST5和ST239克隆株在血流感染中的分离率明显下降(ST5从52.9%降至15.4%;ST239从61.1%降至15.4%),而其他类型以及新出现的MSSA克隆株分离率明显增加(如2009年ST7分离率为41.7%;2010年新出现ST188及ST15等),2010年血流感染的MSSA为84.6%.103株金黄色葡萄球菌mupA耐药基因阳性19株(18.4%),qacA/B耐药基因阳性41株(39.8%),70.6%的ST239杀菌剂耐药基因qacA/B阳性.在这103株血流感染的金黄色葡萄球菌中发现5株动物来源的克隆株,分别为4株ST398以及1株ST9.22个毒力基因除了sasX、lukSF以及arcA外,同一克隆株无论MRSA还是MSSA其毒力基因携带情况无明显差异,但是不同克隆株携带毒力基因有明显的差异.结论 以ST5和ST239为主的MRSA在血流感染中的分离率明显下降,新的MSSA克隆株分离率明显增加,不同的克隆株耐药以及毒力基因的携带情况存在明显差别.
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不同分子生物学方法快速鉴别非结核分枝杆菌的应用评价
目的 评价3种分子生物学方法快速鉴定非结核分枝杆菌的优缺点.方法 收集41株临床分离的非结核分枝杆菌,以16S rRNA基因测序方法为标准,同时以hsp65基因测序方法及PCR-RFLP方法鉴定菌株,与16S rRNA基因测序结果进行比较.结果 41株非结核分枝杆菌16SrRNA基因测序结果:9株龟分枝杆菌复合群,7株偶发分枝杆菌,7株胞内分枝杆菌,3株鸟分枝杆菌,3株堪萨斯分枝杆菌复合群,3株耻垢分枝杆菌,3株土分枝杆菌,2株草分枝杆菌,2株无色分枝杆菌,1株瘰疬分枝杆菌,1株M.arupense.与16S rRNA基因测序相比较,hs65 PCR-RFLP能鉴定9株龟分枝杆菌复合群至亚种脓肿分枝杆菌,3株堪萨斯分枝杆菌复合群鉴定至亚种堪萨斯分枝杆菌;1株偶发分枝杆菌及1株无色分枝杆菌与其不符;其余菌株鉴定结果一致,符合率为95.1%(39/41).hsp65基因测序结果显示,1株爱尔兰分枝杆菌与16S rRNA测序结果不符,其余菌株鉴定结果与其一致,符合率为97.6%(40/41),并且能进一步将9株龟分枝杆菌复合群鉴定至亚种脓肿分枝杆菌,3株堪萨斯分枝杆菌复合群鉴定至亚种堪萨斯分枝杆菌.结论 3种方法均能快速鉴定非结核分枝杆菌.与16S rRNA基因测序相比,hsp65基因测序及hsp65 PCR-RFLP更容易鉴定临床常见非结核分枝杆菌(如堪萨斯分枝杆菌和脓肿分枝杆菌),可在临床推广使用.
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实时荧光定量PCR法检测MTX对映体耐药A549细胞株及白血病患者骨髓细胞中FPGS mRNA的表达
目的 建立实时荧光定量PCR检测肿瘤细胞中FPGS mRNA表达的方法,研究MTX对映体[L-(+)-MTX和D-(-)-MTX]耐药细胞株中FPGS的基因表达差异,并用于观察白血病患者MTX治疗耐药前后FPGS mRNA表达水平的变化.方法 用SYBR Green Ⅰ为荧光染料,以β-actin作参照,建立检测FPGS mRNA的实时荧光定量PCR方法.根据Ct值、标准曲线相关系数、斜率、重复性曲线、熔解曲线、扩增效率曲线等进行方法学评价.并用该方法检测MTX对映体耐药细胞株及应用MTX耐药的14例白血病患者骨髓细胞中FPGS mRNA的表达.结果 建立的标准曲线Ct值与模板浓度有良好的线性关系,FPGS和β-actin标准曲线相关系数分别为0.996 8和0.998 7,斜率分别为-3.595和-3.740,批内CV为1.27%～2.95%,批间CV为3.82%;熔解曲线均呈单个特异峰,扩增效率相似(斜率为0.021 7);L-(+)-MTX耐药细胞和D-(-)-MTX耐药细胞中FPGS mRNA相对含量分别为(3.51±0.66)和(0.16±0.01),A549亲本细胞(S)中FPGS mRNA相对含量为(1.00±0.31),差异有统计学意义(F=64.45,P＜0.01);L-(+)-MTX耐药细胞和D-(-)-MTX耐药细胞间FPGS mRNA相对含量差异有统计学意义(q=9.29,P＜0.01).白血病患者应用MTX治疗耐药后,FPGS mRNA表达水平为(0.35±0.04),用药前为(1.00±0.44),差异有统计学意义(t=8.83,P＜0.01).结论 建立的实时荧光定量PCR检测FPGS mRNA的方法重复性好、特异度高,可用于FPGSmRNA含量分析.MTX诱导耐药后细胞株及白血病患者骨髓细胞中FPGS mRNA表达发生了变化,MTX 2种对映体形式在细胞耐药机制中可能发挥了不同的作用.
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Janus激酶246/1单倍型与中国上海地区汉族PV和ET患者的相关性
目的 研究中国汉族人群中JAK2 46/1单倍型的tSNP rs12343867基因型与PV和ET患病易感性以及与JAK2 V617F突变的关系.方法 收集125例PV患者和87例ET患者及213名健康人全血DNA,用PCR结合高分辨熔解曲线法检测JAK2 rs12343867位点的基因型,并用简单随机抽样法从425份经熔解曲线法分析的标本中选取20份标本进行基因测序验证,x2分析PV和ET患者JAK2 46/1单倍型与MPNs患病风险的关系.结果 125例PV患者中C等位基因占62.8%,T等位基因占37.2%;87例ET患者C等位基因占45.4%,T等位基因占54.6%.20例随机选取的标本经基因测序法验证与高分辨熔解曲线法分析结果一致.JAK2 rs12343867 3种基因型分布差异有统计学意义(x2=78.69,P＜0.01).CC和CT基因型携带者均较TT型携带者发生MPNs的风险显著增加[比值比(OR)分别为18.56、3.60,95%可信限(CI)分别为8.70～39.58、2.28～5.69,P均＜0.01).PV组的等位基因频率在V617F阳性与阴性组之间的分布差异无统计学意义(x2=2.47,P=0.12);而在ET组中V617F阳性患者的等位基因C的检出率与V617F阴性组之间的分布差异有统计学意义(x2=7.75,P＜0.01).结论 JAK2 46/1单倍型是中国汉族PV和ET患者的易感基因.在ET患者中,个体携带的JAK2 46/1单倍型与后天获得JAK2 V617F突变相关.
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慢性丙型肝炎患者血清基因型与HCV RNA的相关性研究
目的 研究丙型肝炎患者HCV基因型的分布,探讨基因型在性别上的分布以及基因型与HCV RNA病毒载量的相关性.方法 收集2010年5-12月来自40家医院的206例丙型肝炎患者的血清标本,采用瑞士罗氏公司生产的定量PCR试剂(罗氏试剂)对进行HCV RNA检测,应用雅培公司生产的Abbott RealTime HCV GenotypeⅡ试剂(雅培试剂)对206例丙型肝炎患者的血清标本进行基因分型,分析基因型在性别上的分布以及HCV基因型与HCV RNA病毒载量的相关性.结果 206份HCV RNA阳性血清标本中HCV1型(未具体分1a和1b型)占3.4%(7/206)、1a型占1.0%(2/206)、1b型占59.7%(123/206)、2型占15.5%(32/206)、3型占13.1%(27/206)、6型占2.9%(6/206)、1/6混合型占2.4%(5/206)、2/4混合型占0.5%(1/206),未分型占1.5%(3/206).132例基因1型和65例非基因1型(2型、3型和6型)患者HCV基因型在性别上的分布差异无统计学意义(x2=0.000,P＞0.05).188例患者不同基因型之间血清HCV RNA病毒载量差异有统计学意义(F=3.371,P＜0.05).将197例HCV单基因型患者按地区分为东、南、西、北、中5组,基因型1型与非基因1型在地区分布上差异无统计学意义(x2=5.840,P＞0.05).结论 丙型肝炎病毒感染以1b型为主,其次为基因2型.基因型在性别上的分布没有差异.基因1b型HCV RNA病毒载量高于基因3型,基因2型HCV RNA病毒载量高于基因3型,基因6型HCV RNA病毒载量高于基因3型.
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新疆汉族与哈萨克族慢性乙型肝炎患者HBV基因型分布比较
自1988年Okamoto等[1]对HBV进行基因分型以来,各国学者对不同地区和民族的HBV基因型分布进行了大量研究.现有研究认为HBV可分为A～H 8种基因型,且各基因型的分布具有明显的地域性和民族分布特征,与慢性肝病的严重程度、抗病毒疗效、病毒变异等也存在一定相关性[2].
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双重TaqMan实时荧光嵌套PCR快速检测α地中海贫血SEA缺失方法的建立与应用
目的 建立一种快速检测α地中海贫血(α地贫)SEA缺失的双重TaqMan实时荧光嵌套PCR方法.方法 收集2010年5-7月在广州市天河区妇幼保健院进行地贫筛查的外周血标本100份,2010年12月至2011年2月东莞东华医院进行产前诊断的胎儿标本7份(绒毛2份、羊水5份).从本实验室样本资源库中选取α地贫SEA缺失已知基因型标本50份.采用双重TaqMan实时荧光嵌套PCR技术,于同一检测体系同时检测各标本d地贫SEA缺失截短序列及缺失范围内正常序列,根据荧光PCR阳性扩增结果结合其Ct值差异诊断受检个体的α地贫SEA缺失基因型.同时采用检测α地贫SEA缺失的常规gap-PCR法,以PCR扩增结合产物凝胶电泳分析各标本α地贫SEA缺失基因型,以验证及对比分析新方法的准确性与实用性.结果 所建立的双重TaqMan实时荧光嵌套PCR优化体系中2个PCR的扩增效率分析曲线的斜率分别为-3.153(SEA缺失截短目的 片段)和-3.182(正常内参序列),扩增效率均接近100%.应用此方法检测50份α地贫SEA缺失已知基因型标本,结果显示该方法不但能实现其快速分子诊断,而且能准确判断受检标本中的外源性污染,从而有效避免假阴性或假阳性误诊.100份外周血标本中,两种方法分别检出SEA缺失标本11份,对比分析两方法的诊断符合率为100%.7份胎儿标本中,gap-PCR法检出SEA缺失3份,而本方法则检出SEA缺失标本2份、受-SEA/αα母源性污染的基因型为αα/αα的绒毛标本1份.结论 本研究建立的双重TaqMan实时荧光嵌套PCR可以快速准确检测α地贫SEA缺失,操作简单实用,适合大规模人群筛查和常规分子诊断.
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急性髓系白血病CD44v6的表达和ERK磷酸化水平的关系
目的 探讨CD44v6和p-ERK1/2在AML中的表达及临床意义.方法 应用流式细胞仪检测22名健康对照者及152例AML患者骨髓原始细胞上CD44v6及p-ERK1/2的表达.对其中129例AML患者进行了跟踪随访,分析CD+44v6和CD-44v6对AML患者的复发率以及生存时间是否存在影响.结果 22名健康对照者中,各有1例(4.5%)CD44v6和p-ERK1/2阳性.152例AML患者中,55例(36.2%)CD44v6阳性,97例(64.5%)p-ERK1/2阳性.AML患者组骨髓原始细胞p-ERK1/2的MFI为14(7～58),高于健康对照组的8(6～10),差异有统计学意义(U=4.2,P＜0.01).CD+44v6 AML患者p-ERK1/2的MFI为28(15～61),高于CD-44v6 AML患者的18(6～37),差异有统计学意义(U=6.7,P＜0.01).CD44v6的MFI与p-ERK1/2的MFI呈显著性正相关(ra=0.7,P＜0.01).对129例AML患者进行了4～65个月的随访,其中CD-44v6患者的复发率为32.1%(26/81),低于CD+44v6患者的复发率81.3%(39/48),差异有统计学意义(x2=29.1,P＜0.01).生存分析表明,CD+44v6AML患者平均生存时间为(28.5±1.8)个月,CD-44v6AML患者平均生存时间为(51.2±2.0)个月,差异有统计学意义(x2=48.2,P＜0.01).结论 CD44v6阳性的AML患者生存时间明显缩短、预后差.CD44v6可能通过上调p-ERK1/2水平促进白血病细胞增殖.
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广西横县育龄夫妇地中海贫血干预结果分析
地中海贫血(简称地贫)好发于地中海沿岸国家、美国黑人人群和印度次大陆等地,在我国南方发病率也很高[1].有资料显示[2],国内地贫分布以广西、广东及海南发生率高,其中广西地贫基因携带率达20%.广西和广东人群中α地贫基因携带率分别达14.95%和8.30%[3].广西地贫基因携带者主要分布于广西的西南部,南宁市农村人群地贫基因携带率达26.0%～31.5%[4],重症地贫儿的出生已严重影响本地区出生人口素质,是本地区一个严重的公共卫生问题.
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中国HIV早期感染者CD+4CD+25Foxp3+调节性T淋巴细胞变化研究
目的 研究1年以内感染HIV的感染者(早期感染者,EHI)体内CD+4 CD+25 Foxp3+调节性T淋巴细胞水平及其与疾病进展相关性.方法 随机选取51例HIV感染者,依据感染时间及CD+4 T淋巴细胞水平分为3组:EHI组30例、HIV组15例、AIDS组6例,20名健康人作为对照组,各组对象的年龄、性别具有可比性.用EDTA抗凝管采集全血,应用FACSAria流式细胞仪及Foxp3染色试剂盒,检测外周血单个核细胞CD+4CD+25Foxp3+调节性T淋巴细胞表达水平,分析EHI者及全部HIV感染者CD+4 CD+25Foxp3+调节性T淋巴细胞表达水平与CD+4T淋巴细胞数量、病毒调定点、病毒载量及淋巴细胞活化水平间的相关性.结果 健康对照组、EHI组、HIV组及AIDS组CD+4C+25Foxp3+T淋巴细胞百分率逐级上升,其中EHI组CD+4CD+25Foxp3+T淋巴细胞百分率[3.79(2.11～5.43)%]低于AIDS组[8.09(4.90～8.90)%],差异有统计学意义(Z=-2.29,P=0.022);EHI组CD+4 CD+25Foxp3+T淋巴细胞百分率与病毒调定点正相关(r=0.479,P=0.038),与CD4T淋巴细胞计数呈负相关(r=-0.455,P=0.011),与CD+3 HLA+T淋巴细胞呈正相关(r=0.533,P=0.002).结论 中国EHI者CD+4 CD+25Foxp3+调节性T淋巴细胞百分率高与高病毒调定点及低CD+4 T淋巴细胞数量相关,提示CD+4 CD+25Fox3+调节性T淋巴细胞是加速HIV感染早期疾病进展的因素之一.
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ROX参比荧光在实时荧光定量RT-PCR检测Nrf2mRNA中的应用
目的 建立大鼠Nrf2 mRNA实时荧光定量RT-PCR检测方法,评价ROX参比荧光在其分析中的归一化校正作用.方法 采用Taq Man探针法构建大鼠Nrf2 mRNA实时荧光定量RT-PCR检测方法;取大鼠混合cDNA的Nrf2 PCR产物,经凝胶电泳和测序鉴定反应特异性;取PCR标准品10个浓度梯度(2.0×109～2.0×100)各1份进行实时荧光定量RT-PCR检测,分析ROX参比荧光校正与否的标准曲线的线性范围的变化;取高、中、低值重组质粒样本各1份进行批内重复20次和批间连续20次实时荧光定量RT-PCR检测,分析ROX参比荧光校正与否的批内、批间重复性差异.结果 成功建立大鼠Nrf2 mRNA实时荧光定量RT-PCR检测方法;大鼠混合cDNA的Nrf2 PCR扩增片段与预期122 bp相符,测序结果扩增片段序列正确,PCR特异性好;标准品PCR扩增结果的标准曲线线性范围未经ROX参比荧光校正为2.0×109～2.0×102拷贝/μl(R2＞0.99),校正后为2.0×109～2.0×100拷贝/μl(R2＞0.99),校正后线性范围变宽100倍.高、中、低值样本重复性分析结果显示未经ROX参比荧光校正批内Ct变异系数(CV)为4.1%、2.7%、2.1%,批间CV为4.3%、3.0%、2.4%,校正后批内CV为0.7%、0.5%、0.4%,批间CV为1.0%、0.8%、0.7%,ROX参比荧光校正后样本Ct离散程度均低于未校正组,批内、批间的高值、中值浓度样本(高值组批内和批间t值分别为4.843、2.566,中值组批内和批间t值分别为4.293、4.423,P均＜0.05),但低浓度组的Ct离散度的差异无统计学意义(低值组批内和批间t值分别为0.753、1.279,P均＞0.05).结论 在构建大鼠Nrf2实时荧光定量RT-PCR检测方法中,加入ROX参比荧光,可加宽PCR标准曲线的线性范围,提高检测重复性,为准确分析大鼠模型Nrf2 mRNA表达水平奠定了基础.
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头晕乏力白细胞明显升高
病历摘要患者男,78岁.12年前因"头昏、乏力5个月"就诊于丽水市人民医院,查血常规:WBC 14.0×109/L,Hb 220g/L,PLT426×109/L.体检:面色红紫,血氧饱和度95%,肝肋下未及,脾肋下4 cm.肝功能、肾功能、心肌酶、胸片、心电图、心脏彩超、腹部B超、肺功能检查等均未见明显异常.无慢性支气管炎、肺气肿、心脏病、肾病等病史.
| 年 | 期数 |
| 2019 | 02 |
| 2018 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2017 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2016 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2015 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2014 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2013 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2012 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2011 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2010 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2009 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2008 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2007 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2006 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2005 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2004 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2003 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2002 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2001 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2000 | 01 02 03 04 05 06 |
| 1999 | 01 02 03 04 05 06 |
| 1998 | 01 02 03 04 05 06 |
