HBV DNA PCR检测在HBsAg阴性献血人群中的应用

目的 探讨HBsAg阴性献血者HBV DNA榆测的应用价值,评估核酸检测的必要性.方法 采用PCR检测HBsAg阴性献血者HBV DNA.采用8人份混合血样测定,超离心浓缩病毒,磁珠法提取病毒核酸.如HBV DNA为阳性,则进一步检测乙型肝炎病毒血清标志物5项.结果 HBVDNA检测限量为25 U/ml,23 225份标本中有4份为HBV DNA阳性,检出率为0.17‰.进一步检测其他HBV感染的血清学指标,发现这4份标本中有2份为抗HBe和抗HBc阳性,1份为抗HBc阳性,1份为抗HBs、抗HBc阳性.对HBV DNA的定量测定表明,其含量在50～200 U/ml.结论 现行的2次酶联免疫技术的血液筛查存在HBV漏检,有必要在现有的血液筛查模式中增加抗HBc检测,或增加病毒核酸筛查.

北京市职业人群血脂紊乱和高血糖与高血压及代谢综合征患病率的调查

目的 调查北京市职业人群血脂异常、高血糖、高血压及代谢综合征(MS)的患病率及其特点,同时了解各种血脂异常的患病率在20年前后的变化.方法 调查对象为16 344名在北京大学第一医院进行体检的职业人员,对其进行问卷调查,测量身高、体重和血压,并采集空腹静脉血检测血糖、血脂.采用中华医学会糖尿病学分会(CDS)诊断标准确定MS患者.结果 调查人群中血脂紊乱的患病率为36.9%(6 034例),符合高血糖诊断标准的共有948例,患病率为5.8%,高血压的患病率为17.1%(2 801例),超重(肥胖)(OB/OW)共检出5 252例,总患病率达32.1%.采用CDS诊断标准,MS的患病率为12.2%(2 004例),男性的患病率高于女性(14.2%比10.0%),在不同性别组MS患病率均随年龄的增长而上升.调查人群中MS的4个组分中至少有1项阳性的比例高达65.5%(10 709例).各年龄段高TG血症、高胆固醇(TC)血症和低高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)血症的患病率均明显高于1984-1986年的报道.结论 北京市职业人群中MS的患病率较高,高脂血症的患病率也较20年前明显升高,因此,在人们生活水平提高的同时,应加强膳食平衡的营养教育,使居民的饮食更加合理.

金黄色葡萄球菌临床分离株生物膜及ica操纵子检测

近年来,随着多种插管、透析技术及生物材料的广泛应用,以及人口老龄化及免疫力低下人群增加,形成生物膜的细菌感染迅速增加.金黄色葡萄球菌是临床上分离的常见细菌,可造成多种感染,既可引起社区感染又可造成医院感染,是医院感染的主要病原菌.

尿液基细胞学在诊断尿路上皮癌中的临床应用价值

目的 评估尿液基细胞学(LBC)对尿路上皮癌(UV)诊断的准确性.方法 对2005年1月至2007年7月在本院细胞学室做尿LBC检查的603例患者标本和组织学诊断标本进行对照.以细胞学诊断的可疑癌(SUCA)为切入点,组织学诊断为金标准,计算尿液基细胞学的诊断效能.结果 在有组织学随访结果的436例患者中,274例为UC、其他恶性肿瘤61例.尿LBC诊断恶件肿瘤的敏感度、特异度和准确性分别为61.5%、86.5%和67.1%.阳性预测值和阴性预测值分别为94.1%和39.2%.对UC和非尿路上皮恶性肿瘤的诊断敏感度分别为68.6%和29.5%,前者显著高于后者.尿LBC诊断敏感度在UC G1和G1-2、G2和G2-3以及G3病理分级巾分别为53.3%、74.5%和90.6%,且随UC组织学分级升高而增高.结论 尿LBC对病理组织学高级别UC的诊断敏感度高,有很好的临床应用价值,但对低级别UC的诊断敏感度低,需借助细胞学辅助诊断技术予以提高.

B型钠脲肽与冠心病危险因素的相关性研究

目前心脑血管疾病仍是一主要的、突出影响人类健康的问题.随着物质文明的提高,人们对健康的意识越来越强,希望能早期发现、早期预防及早期治疗.临床需要一种标志物能够早期判断心脏功能的改变或者预测将来发生心力衰竭可能性.

肿瘤坏死因子受体2基因多态性与汉族人群冠心病的相关性研究

目的 探讨肿瘤坏死因子受体2(tumor necrosis factor receptor 2,TNFR2)第6外显子196位点基因多态性与冠心病的相关性.方法 采用病例对照研究的方法,用ShineRoar探针技术检测142例冠心病患者、215例冠状动脉粥样硬化患者和631名健康体检者的TNFR2第6外显子196位点的基因型.结果 TNFR2第6外显子196位点GG型基因携带者发牛冠心病的风险(OR=2.556,95%CI:1.051～6.218,χ2=4.57,P=0.033)及冠状动脉粥样硬化的风险(OR=2.547,95%CI:1.162～5.579,χ2=5.81,P=0.016)明显高于TT型基因携带者;但两分类Logistic回归分析结果显示,在控制性别和年龄不变的情况下,TNFR2第6外显子GG型基因与冠心病(OR=0.614,95%CI:0.166～2.279,χ2=0.53,P=0.466)及冠状动脉粥样硬化(OR=0.644,95%CI:0.200～2.069,χ2=0.55,P=0.459)的关联无统计学意义.结论 汉族人群TNFR2第6外显子196位点基因多态性不是汉族人发生冠心病及冠状动脉粥样硬化的独立风险因素.

载脂蛋白E基因型与冠心病和2型糖尿病的易感性研究

目的 探讨载脂蛋白E基因型与冠心病(CHD)和2型糖尿病(T2DM)的易感性.方法 应用PCR-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)法、多重特异性扩增突变系统(multi-ARMS)快速分型法和PCR-单链构象多态性(PCR-SSCP)法,对238例CHD、316例T2DM、1 892名健康对照的apoE基因第4外显子112位Cys/Arg和158位Arg/Cys进行检测;随机抽取前2种方法分型标本进行DNA测序法验证,并对所有异常带型标本进行DNA测序,确认是否存在基因变异;同时测定空腹血糖和血浆脂质水平.结果 CHD组血浆HDL-C(t=2.66)和apoA I(t=2.30)水平显著低于健康对照组(P＜0.05),收缩压(t=8.48)、舒张压(t=5.66)、TG(t=3.38)、LDL-C(t=2.48)、apoB(t=1.67)、Lp(a)(t=4.16)和FBG(t=7.04)水平均显著高于健康对照组(P＜0.05),TC水平在两组间差异无统计学意义(t=0.94,P＞0.05);T2DM组收缩压(t=5.74)、舒张压(t=3.35)、血浆TG(t=4.56)、TC(t=5.22)、LDL-C(t:7.00)、apoB(t=2.24)、Lp(a)(t=4.15)和FBG(t=16.93)水平亦均显著高于健康对照组(P＜0.05),HDL-C(t=0.74)和apoA I(t=0.41)水平在两组问差异无统计学意义(P＞0.05).ε2/2、ε2/3、ε3/3、ε4/2、ε4/3、ε4/4基因型在3组中的频率分布为:0.4%,13.4%,58.0%,1.3%,26.5%,0.4%(CHD组);0.6%,5.7%,72.8%,1.9%,14.9%,4.1%(T2DM);0.5%,10.5%,69.6%,1.6%,16.8%,1.1%(健康对照组).CHD组和T2DM组基因型频率分布与健康对照组差异均有统计学意义(χ2:14.90,P=0.00;χ2=7.08,P=0.03),CHD组ε3/4基因型频率明显高于健康对照组(26.5%对16.8%),而ε3/3基因型频率显著低于健康对照组(58.0%对69.6%);T2DM组ε4/4基因型频率明显高于健康对照组(4.1%对1.1%),并首次在国内报道T2DM患者apoE基因第4外显子Arg 150 His突变2例,而在CHD组和健康对照组均未检出.结论 apoE ε3/4基因型频率与CHD有一定的关联;apoE ε4/4基因型频率与T2DM存在一定的关联;血压和部分血脂等指标可作为诊断CHD和T2DM参考指标.

甘肃省高原裕固族健康人群血清酶学水平初步调查

甘肃省肃南裕固族自治县境内居住的裕固族,由于所居地理位置及使用语言的不同,分东、西部裕固族,东部裕固族主要居住在皇城、康乐湿润山地草原(海拔2 500～4 500 In),平均气温1～2℃年降雨量320～400 mm;西部裕固族主要居住在明花、大河大陆性沙漠气候(海拔1 300～1 500 m),平均气温7～8℃,年降雨量80～90 mm[1].

日本血吸虫29000膜外蛋白的表达和纯化及功能初步鉴定

随着血吸虫病防治工作的不断深入及血防形势的改变,血吸虫病流行的特点对本病的诊断提出了更高的要求.因表膜蛋白更易接触机体的免疫系统,刺激机体产生相对应的抗体,大多研究都支持虫体的表膜蛋白较其他蛋白有较好的诊断价值.本课题组将日本血吸虫(Schistosoma japouicam,Sj)中国大陆株29 000表膜蛋白的膜外区基因体外重组并表达,纯化后初步鉴定其免疫原性和免疫反应性,希望可用于日本血吸虫病的免疫诊断和疗效考核.

抗菌药耐药性监测的前景

建立耐药监测的目的 是了解所在医院甚至全国、全球耐药发生、发展,控制感染暴发流行,积极帮助临床用药,深挖耐药机制.本文简要介绍了作者所在医院从1983年至今抗菌药耐药监测的开始及效果,强调人类与微生物的抗争是长期的、困难的,耐药监测是第一步;介绍了要监测的主要目标菌、目标耐药性及耐药机制;区分社区获得的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(CA-MRSA)及医院获得的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(HA-MRSA)、耐万古霉素的金黄色葡萄球菌(VRSA)、万古霉素不敏感的金黄色葡萄球菌(VISA)及异质性万古不敏感的金黄色葡萄球菌(hVISA),以及超广谱β内酰胺酶(ESBLs)、产AmpC及碳氢霉烯酶的必要性和可能性;应该发展药效学/药代学(PK/PD)折点来替代陈旧的折点;强调下呼吸道疾病中的苛氧菌检出率不高,影响了耐药监测;要注意肺炎链球菌的耐药发展趋势及血清型与耐药关系;要重视新药,如利奈唑酮、替吉环素、达托霉素及头孢拜普等的耐药性监测.重视氟喹诺酮类的耐药性发展.建议大家多宣传介绍当前国内外耐药情况,多研究PK/PD折点的可改良性,将高尖端技术,如数据挖掘人工智能信息系统、地理定位信息系统、新出现的多重实时PCR技术加上先进的PCR产物识别技术引进到常规细荫鉴定和耐药监测中来.

分子生物学技术在细菌耐药性研究中的应用

随着抗菌药物的广泛应用,细菌耐药情况越来越严重,受到临床医生、实验室工作人员及流行病学专家等各界的重视.对细菌耐药现状和耐药机制的研究,可为临床治疗、院感控制、新药研发等提供重要的依据.在细菌耐药性的研究中,分子生物学技术发挥了至关重要的作用.我们从流行病学调查和耐药机制研究两大方面,介绍分子生物学技术在细菌耐药性研究中的应用.

凝血检查在肝病中的临床应用进展

肝脏合成几乎所有的凝血因子、抗凝因子及与纤溶系统有关的蛋白酶类,此外,它还通过清除已激活的凝血因子和纤溶激活物以及灭活肝素等方式调节体内凝血系统的平衡.目前越来越多的凝血检查指标被用于临床,对肝病的诊断、治疗和预后具有重要的临床价值.本文就肝病时伴有的PLT异常、凝血-抗凝系统障碍、纤溶系统亢进等几个方面凝血检查的临床应用进展作一综述.

血管性血友病因子裂解酶的研究进展

大量研究表明,在生理条件下,血浆中血管性血友病因子(von Willebrand factor,VWF)主要受金属蛋白酶,即血管性血友病因子裂解酶(von Willebrand factor-cleaving protease,VWF-cp)的调节,VWF-cp活性异常致血浆中超大VWF多聚体(UL-VWF)无法降解并蓄积,是导致血栓性血小板减少性紫癜(thrombotic thrombocytopenic purpura,TTP)发病的重要机制.

遗传性May-Hegglin异常的实验室检查

May-Hegglin异常(May-Hegglin anomaly,MHA)是一种少见的常染色体显性遗传性疾病.由May于1909年首次报道,1945年Hegglin较为伞面地描述了该病的特征.MHA表现为PLT减少、巨大PLT和粒细胞包涵体三联征.由于该病患者PLT减少,并表现有不同程度的出血(如鼻出血、紫癜、淤斑、月经量过多等),临床上常易误诊为原发性PLT减少性紫癜(ITP).

May-Hegglin异常误诊为特发性血小板减少性紫癜一例

May-Hegglin异常(MHA)是一种罕见的常染色体显性遗传病.笔者曾发现1例被当地医院误诊为特发性血小板减少性紫癜的病例,现报告如下.

尿素测定的方法学进展和临床应用

尿素(Urea)是人体蛋白质代谢的终产物,体内的氨基酸经脱氨基作用分解为α-酮酸及氨,在正常情况下,体内的氨主要在肝脏通过尿素循环与二氧化碳生成尿素.尿素的生成量取决于饮食中蛋白质摄入量、组织蛋白质的分解代谢和肝功能状况,健康成人每天约产生16 g尿素.

危急值项目的应用评估

目的 对危急值项目的 历史数据进行分析,为持续改进危急值报告制度提供科学依据.方法 从实验室信息系统中筛选出2006年的危急值项目数据11项,经数据预处理、变换后,计算出危急值项目的 发生率、天内分布、周内分布、部门分布,评估危急值范围和周转时间.结果 危急值的发生率是1.67%,主要集中在8:00～13:00,周一、四危急值的数量比平时多,部门分布以血液科、移植病房为主.评估危急值项目的 高低值分布图后,血钾的危急值低限从3.0 mmol/L调整为2.8mmol/L,血液病病房的PLT、WBC的危急值低限分别从20×109/L,1.5×109/L调整为10×109/L、1.0×109/L.76.2%的危急值结果的实验室周转时间小于1 h.结论 定期回顾分析危急值项目的 数据,可以提高实验室及临床的工作效率和质量,满足患者的安全要求.

一种改进的荧光定量PCR标准曲线法的建立

目的 对常规实时荧光定量PCR(RT-PCR)的标准曲线法进行改进,以建立一种更为准确的RT-PCR的标准曲线定量法.方法 通过构建β-actin、KLK11的质粒DNA标准品,以β-actin质粒DNA为正常对照,制作内参基因和目的 基因的标准曲线,获得各自的扩增曲线.RT-PCR检测两种基因在恶性前列腺组织细胞LNCAP中的表达,并将改进的标准曲线法与常规的标准曲线法分别对β-actin/KLK11实时定量PCR的结果进行分析,分析两种方法的差异,以衡量新方法的准确性.结果 所得β-actin和KLK11的标准曲线线性相关性良好(β-actin R2=0.991,KLK11R2=0.992),但两种基因的扩增效率有差异(β-actin 123%,KLK11 99%).两种不同的标准曲线法处理后得到不同的结果:常用标准曲线法结果显示KLK11在LNCAP中有表达下调,而改进的标准曲线法得出KLK11在LNCAP中上调4.46倍.目的 基因与内参基因的扩增效率差异有统计学意义(t=4.829,P＜0.05).结论 与常规的绝对定量法比较,改进的标准曲线法避免了因默认目的 基因与内参基因有相同的扩增效率而导致的错误,是一种更为准确的荧光定量PCR分析方法.

百日咳杆菌荧光定量PCR检测方法的建立和应用

目的 建立快速、准确、特异的定量检测百日咳杆菌的方法,并进行临床应用研究.方法 根据百日咳杆菌IS481基因序列,设计并合成引物和荧光探针,建立百日咳杆菌荧光定量PCR检测方法,并对方法的特异度、重复性和灵敏度进行评价,检测百日咳疑似患者咽拭子225份和健康者咽拭子30份.结果 该方法的标准曲线显示模板浓度在102～108拷贝/μl线性范围与其循环阈值(Ct)具有较好的线性关系,相关系数(r)为0.998,小检出量为102拷贝.特异度较好,灵敏度较高,重复性实验结果显示在同一时间检测高低浓度阳性克隆质粒(2×107与3×103拷贝/μ1)10次,连续检测5次,变异系数(CV)为5.78%～16.7%.在不同时间检测高低浓度阳性克隆质粒(2×107与3×103拷贝/μl),连续7次,CV为8.25%～14.9%.经检测,疑似患者的咽拭子有41份样本为阳性,30份健康人咽拭子均为阴性.结论 由于本实验建立的荧光定量PCR方法快速、灵敏度高、特异度好,适合临床实验室进行临床标本的百日咳杆菌的定量检测,有较大的应用前景.

《中华检验医学杂志》编审专家介绍

乳糜泻二例诊断与治疗评析

病例1:患者男,38岁,白种人,外籍.因多年不明原因的反复腹泻、腹痛、腹胀近期加重伴体重明显减轻和无力就诊.患者自幼年起经常感觉腹部不适,同时有轻重不同的腹泻.多次到医院就诊检查,均无明确诊断,也未发现胃肠道细菌感染证据.

临床分离铜绿假单胞菌和鲍曼不动杆菌中Ⅰ类整合子流行性调查与分析

南京医科大学第一附属医院检验科的顾兵硕士、童明庆教授和潘世扬教授等调查了中国南京地区临床分离的铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,PA)和鲍曼不动杆菌(Acinetobacter baumannii,AB)中整合子的流行情况,并发现了5种新型的整合子(integron)可变区耐药基因组合形式.

湖北地区肺炎克雷伯菌中产CTX-M型超广谱β内酰胺酶的流行基因型和耐药特征调

2006年中国十家教学医院革兰阴性杆菌的耐药状况

目的 监测2006年我国革兰阴性杆菌的耐药性.方法 收集2006年9-12月10家教学医院987株非重复的革兰阴性杆菌.菌株经中心实验室复核后,采用琼脂稀释法测定美罗培南等广谱抗菌药物的低抑菌浓度(MICs).结果 10种抗菌药物对于629株肠杆菌科细菌的抗菌活性的敏感率由大至小依次为:美罗培南(敏感率99.8%)、业胺培南(敏感率99.5%)、哌拉西林/三唑巴坦(91.3%)、阿米卡星(89.3%)、头孢吡肟(83.8%)、头孢哌酮/舒巴坦(79.7%)、头孢他啶(74.7%)、头孢噻肟(57.7%)、头孢曲松(56.6%)、环丙沙星(53.6%).大肠埃希菌中超广谱β内酰胺酶(ESBL)的发生率为59.0%,高于肺炎克雷伯菌(33.0%)和奇异变形杆菌(8.0%).对于大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌,抗菌活性高的依次是美罗培南、业胺培南(99.2%～100%)、哌拉西林/三唑巴坦(90.8%～97.0%)、阿米卡星(83.8%～92.4%).头孢吡肟对肺炎克雷伯菌的活性高于其对大肠埃希菌的活性(85.4%vs.65.2%).对于阴沟肠杆菌、产气肠杆菌、弗劳地柠檬酸菌,活性高的依次为美罗培南、亚胺培南(99.2%～100%)、阿米卡星(85.2%～92.6%)、头孢吡肟(81.5%～85.9%)、哌拉西林/三唑巴坦(73.4%～87.2%)、头孢哌酮/舒巴坦(65.6%～77.7%)和环丙沙星(53.1%～72.3%).对于铜绿假单胞菌,活性高的药物依次为阿米卡星(83.5%)、美罗培南(79.1%)、哌拉西林/三唑巴坦(74.1%)和亚胺培南(70.9%).鲍曼不动杆菌对于亚胺培南、美罗培南、头孢哌酮/舒巴坦的敏感性高,敏感率分别为79.1%、73.4%、59.7%.多重耐药的鲍曼不动杆菌达到53.0%.对于洋葱伯克霍尔德菌,抗菌活性较高的依次是美罗培南(73.3%)、头孢他啶(73.3%)、哌拉西林/三唑巴坦(62.2%).结论 碳青霉烯类对肠杆菌科仍保持高活性,但鲍曼不动杆菌、铜绿假单胞菌的耐药件明显增加,值得关注.

2004-2005年住院患者细菌耐药监测研究

目的 监测和探讨我国不同地区的8所医院感染患者中分离细菌的耐药情况.方法 按照设计方案对7所医院从2004年9月1日至2005年8月31 日内分离的1 111株致病菌采用国际标准琼脂稀释法进行体外敏感试验,按照美国临床和实验室标准协会(CLSI)2007年的标准测定MIC,以MIC50和MIC90表示抗菌药物的抗菌活性,并计算出耐药率(R%)、中介率(I%)和敏感率(S%).结果 检测到的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)和耐甲氧西林表皮葡萄球菌(MRSE)分别为39.3%和74.0%.未发现MRSA或MRSE对万古霉素耐药菌株.耐青霉素肺炎链球菌的总耐药率为33.3%(R%5.6%,1%27.7%).肠球菌91株,耐青霉素粪肠球菌40.8%,而耐青霉素屎肠球菌为100%.尚未发现对万古霉素耐药的肠球菌.分离到644株革兰阴性菌.常见的细菌依次为;大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、不动杆菌、铜绿假单胞菌和阴沟肠杆菌.在大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中,产超广谱酶菌各占38.6%和26.7%.碳青霉烯类美罗培南、亚胺培南是所测定抗菌药物中对肠杆菌科细菌作用强的抗牛素.多数革兰阴性杆菌对头孢哌酮/舒巴坦和头孢吡肟有很高敏感率.三代头孢中的头孢他啶对多数革兰阴性杆菌仍有很高敏感率.新喹诺酮类的莫西沙星、左氧沙星对革兰阳性和阴性菌均有很强的广谱抗菌作用.结论 本次监测(2004-2005年)与2002-2003年度监测结果显示,在致病菌的耐药类型和某些菌耐药增长趋势方面基本相似.

2006年中国七家教学医院革兰阳性球菌耐药性研究

目的 调查2006年我国革兰阳性球菌的耐药性.方法 收集2006年6-12月全国7家教学医院分离的非重复革兰阳件菌674株,以琼脂稀释法测定抗菌药物的MIC.结果 100株肺炎链球菌中,青霉素耐药的肺炎链球菌(PRSP)和青霉素中介的肺炎链球菌(PISP)分别占1%和19%.所有肺炎链球菌均对万古霉素和替考拉宁高度敏感;对左氧氟沙星和莫西沙星的敏感率分别为97%和98%;对阿莫西林/克拉维酸、头孢曲松和氯霉素的敏感率依次为96%、87%和73%;青霉素敏感的肺炎链球菌(PSSP)全部对头孢丙烯和头孢克罗的敏感率分别为62.0%和55.7%,而PISP和PRSP对这2种抗菌药物均耐药;所有肺炎链球菌埘大环内酯类、甲氧苄啶/磺胺甲恶(噁)唑(TMPCo)和四环素的敏感率均小于35%.金黄色葡萄球菌和凝固酶阴性葡萄球菌(SCON)中耐甲氧西林菌株分别占48%(33%～84%)和81%(69%～94%).耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)对TMPCo、氯霉素和利福平敏感率分别为72%、66%和45%;对大环内脂类、氨基糖苷类、四环素和氟喹诺酮类的敏感率低于18%.粪肠球菌和屎肠球菌对高浓度庆大霉素耐药率分别为56%(30%～86%)和80%(50%～100%).未发现对万古霉素和替考拉宁耐药的葡萄球菌和粪肠球菌;但在杭州发现对该2种抗菌药物同时耐药的屎肠球菌.除氯霉素和四环素外,粪肠球菌对其他所测抗菌药物的敏感率均高于屎肠球菌.结论 各地区革兰阳件耐药性有所差异,且对大部分抗菌药物的耐药率较2005年本项目的 监测结果有所升高.替考拉宁和万古霉素对革兰阳性球菌仍保持很高的抗菌活性.

解脲脲原体23SrRNA位点突变与大环内酯类药物耐药的关系

目的 探讨解脲脲原体(Ureaplasma urealyticum,Uu)对大环内酯类药物的耐药机制.方法 临床分离的20株对大环内酯药物不同耐药表型的Uu,其中6株为敏感株,采用PCR、DNA测序方法检测其23SrRNA基因序列,与对大环内酯类药物敏感的标准菌株ATCC 27618及基因库中的标准菌株基因序列对比分析查找突变位点,并分析突变位点与耐药表型的关系.结果 Uu菌株23SrRNA突变位点与其对大环内酯药物耐药表型对照分析结果表明,5株耐药表型为岁红霉素(R)和阿奇霉素(R)的菌株中均存在C2243N(TorC)变异,其中1株伴有A2149C,A2181T;9株耐药表型为罗红霉素(R)和阿齐霉素(I)的Uu菌株和6株表型为罗红霉素(S)和阿奇霉素(S)的Uu菌株中均存在A2149C,A2181T的变异.结论 初步判断Uu 23SrRNA C2243N(T或C)变异可能导致其对罗红霉素、阿奇霉素产生耐药,具体的相关性尚需大样本深入研究.

杭州市五家医院万古霉素耐药肠球菌耐药转座子结构及分子分型

目的 明确万古霉素耐药肠球菌(VRE)耐药转座子结构及分子分型.方法 收集2006年4月至2007年4月杭州市5家医院21株VRE菌株,用Etest法进行抗菌药物的药敏试验,并通过PCR、接合试验、质粒提取、耐药转座子结构、脉冲凝胶电泳(PFGE)、多位点序列分型(MIST)及多位点串联重复序列分型(MLVA)进行研究.结果 21株VRE基因型及表型均符合vanA.属于10个不同的PFGE型,7个不同的MLST分型,4个不同的MLVA分型,其中18株属于克隆复合体CC17,另外3株为ST343与CC17接近.所有VRE菌株均对利奈唑胺及替加环素敏感.多对引物对转座子的不同区域的PCR扩增并进行序列拼接、比对,发现其中2株VRE菌株携带典型的耐药转座子Tn1546,其余19株VRE菌株均携带一种新的与Tn1546相似耐药转座子,均在vanXY之间反向插入IS1485.18株VRE菌株均可通过滤膜接合试验进行万古霉素耐药转移,接合菌均含有约54 000 bp大小的质粒.结论 杭州市5家医院21株VRE菌株均为vanA表型及基因型,发现了一种新的万古霉素耐药转座子结构.21株VRE菌株经MLST分型属于7个不同的序列分型,属于或接近易在医院环境里生存并在近年来迅速造成了全球播散的克隆复合体CC17.

广州地区泛耐药铜绿假单胞菌的分子流行病学调查

目的 调查广州地区4家医院2005年3月至2007年3月泛耐药铜绿假单胞菌株之间的同源性,了解是否有该耐药株暴发流行.方法 用脉冲场凝胶电泳(PFGE)对134株泛耐药铜绿假单胞菌株进行分型,明确其是否为同一菌株的克隆.结果 134株铜绿假单胞菌PFGE图谱分为56型,其中主要流行型A型有45株,主要在医院A的中心ICU传播流行.其余3家医院也存在各自的流行株,即B、C、D医院的流行株分别为B型、C型、D型,占各医院的总分离株数的22.6%(7/31)、33.3%(6/18)、31.6%(6/19).克隆株Q型同时存在于B医院与D医院,B医院和C医院分别有1株菌与A医院的A型同源性在80%以上,其余菌株在各医院问无同源性.对A医院ICU环境、纤维支气管镜、呼吸机管道采样,未发现A型克隆株存在;但有6例携带A型克隆株的患者在调查时间里多次入住ICU的情况.耐药机制分析,42株A克隆产IMP-9金属β内酰胺酶,B、C、D克隆不产金属酶.结论 在2年的调杏中,广州地区4家大型医院均存在不同规模的泛耐药铜绿假单胞菌株克隆株传播,虽然未发现优势克隆株在4家医院大规模传播,但部分医院间已有共同的克隆株存在.加强对铜绿假单胞菌定植患者的监控可能是控制克隆株继续传播的关键.

抑制法检测持续高产和质粒介导的AmpC β内酰胺酶

目的 探讨以苯基硼酸(Phenylboronic acid,PBA)和氟氯西林(Flucloxacillin,FCC)为抑制剂检测持续高产和质粒介导的AmpC β内酰胺酶(AmpC-BLA)的可靠性.方法 以PBA和FCC作为AmpC-BLA的抑制剂,采用双纸片增效试验、双纸片协同试验,分别检测阳性控制菌株阴沟肠杆菌(029M)、质粒介导的ACT-1型大肠埃希菌DHSa2919、MOX-1型肺炎克雷伯菌、LAT-2型大肠埃希菌,阴性控制菌株阴沟肠杆菌O29(野生型)、大肠埃希菌SHV-1、大肠埃希菌SHV-2、大肠埃希菌SHV-5、大肠埃希菌TEM-1、大肠埃希菌TEM-3、肺炎克雷伯菌SHV-18、大肠埃希菌ATCC25922和107株革兰阴性杆菌的AmpC-BLA,与头孢西丁三维试验(3-DT)进行比较,分析不同方法检测AmpC-BLA的准确度.结果 头孢西丁3-DT、PBA、FCC抑制试验检测4个阳性控制菌株和9个阴性控制菌株都获得了如期结果.检测107株肠杆菌科细菌的AmpC-BLA,3-DT阳性率24.3%(26/107),PBA、FCC双纸片增效试验阳性率分别为30.8%(33/107)、26.2%(28/107),PBA、FCC双纸片协同试验阳性率均为23.4%(25/107).接合试验有2株奇异变形杆菌和1株肺炎克雷伯菌阳性,为质粒型AmpCBLA.PBA和FCC双纸片增效试验检测诱导型AmpC-BLA有较高的假阳性,而双纸片协同试验的准确度高,与头孢西丁三维试验相比符合率均达99.1%.结论 PBA和FCC为抑制剂的双纸片协同试验,不管是检测持续高产型还是质粒介导的AmpC-BLA,均具有操作简单、实用、有效、准确等特点.

早期快速诊断肾综合征出血热胶体金试纸条的研制

目的 建立一种可早期、快速检测肾综合征出血热(HFRS)患者血清中抗汉坦病毒IgM抗体的胶体金试纸条方法.方法 用胶体金标记纯化的汉坦病毒重组核蛋白(rNP),将羊抗人μ链抗体固定于硝酸纤维素膜上作为检测区,以鼠抗汉坦病毒抗体作为质控区,组装成免疫层析试纸条检测HFRS确诊患者以及健康人血清,并与ELISA对照,评价其特异度和敏感度.结果 在试纸条加入待检血清后10～15 min内即可获得结果,经临床ELISA确诊的50份HFRS患者血清均呈阳性,健康人血清标本均为阴性.结论 该胶体金免疫层析快检纸条与ELISA法的检测结果具有很高符合率,可用于HFRS患者的早期诊断,该法操作简便、反应迅速、无需特殊仪器设备,适于在基层医疗单位推广使用.