中国生化药物杂志
Chinese Journal of Biochemical Pharmaceutics 중국생화약물잡지
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重组毕赤酵母胸腺肽α1-人血清白蛋白基因工程菌高密度发酵及分离纯化
目的 研究重组毕赤酵母胸腺肽α1-人血清白蛋白(Tα1-HSA)基因工程菌在30 L发酵罐中高密度发酵表达Tα1-HSA融合蛋白的发酵工艺及产物的分离纯化方法.方法 采用两步发酵法进行重组毕赤酵母Tα1-HSA基因工程菌的高密度发酵.发酵液经超滤浓缩,阴离子交换色谱,亲和色谱,凝胶过滤色谱等步骤进行分离纯化.结果 发酵结束后,菌体细胞湿重达到350 g/L,发酵液中蛋白产量达到2.0 g/L.发酵液经分离纯化后获得了纯度较高的重组Tα1-HSA融合蛋白,HPLC分析纯度达97.5％.结论 重组毕赤酵母Tα1-HSA基因工程菌高密度发酵的成功及分离纯化方法的建立为Tα1-HSA的进一步研究和开发奠定了基础.
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丹皮酚对急性哮喘模型小鼠胸腺基质淋巴细胞生成素表达的影响
目的 观察丹皮酚对急性哮喘小鼠模型气道炎症以及对胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)表达的影响.方法 BALB/c小鼠48只随机分成正常对照组、哮喘模型组、丹皮酚组、布地奈德组,每组12只.卵蛋白致敏,气道激发,丹皮酚组给予丹皮酚100 mg/kg灌胃,1次/d,末次激发24 h后,检测各组小鼠气道反应性.HE染色观察气道炎症变化;采用ELISA观察支气管肺泡灌洗液(BALF)中IL-4、IL-13和血清总IgE的表达,real-time PCR观察TSLP的表达,Western-blot观察TSLP蛋白表达.结果 哮喘组小鼠气道炎症和气道高反应性明显加重,丹皮酚能够显著抑制慢性哮喘小鼠模型的气道炎症和气道高反应性,哮喘BALF中Th2细胞因子IL-4、IL-13和血清总IgE含量显著降低.丹皮酚治疗后哮喘小鼠肺组织高表达的TSLP的mRNA和蛋白水平显著降低.结论 丹皮酚能够抑制哮喘小鼠模型的气道炎症和气道高反应性,其机制可能通过抑制TSLP的的表达而实现.
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免疫球蛋白IgG对H2O2所致内皮细胞损伤的抑制作用及其机制
目的 探讨免疫球蛋白IgG对H2O2诱导的内皮细胞的黏附分子和趋化因子的表达及作用机制.方法 IgG和H2O2加入内皮细胞中孵育2h,应用RT-PCR以及实时定量RT-PCR检测黏附因子(ICAM-1、VCAM-1、E-selectin)及趋化因子(MCP-1、CXCL-1、MIP-2)的mRNA及蛋白表达;进一步应用Western blot检测IgG对H2O2诱导的p38、ERK1/2和JNK1/2的磷酸化情况.结果 H2O2可显著诱导黏附分子(ICAM-1、VCAM-1和E-selectin)、趋化因子(MCP-1、CXCL-1、MIP-2)的表达,而IgG对H2O2诱导的这些因子的表达有抑制作用;且IgG可抑制H2O2诱导的p38、JNK1/2和ERK1/2的磷酸化.结论 IgG对H2O2诱导的内皮细胞黏附分子及趋化因子表达的抑制作用可能通过抑制p38、JNK1/2、ERK1/2的信号通路实现,这可能是IgG调节内皮细胞炎症的机制之一.
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生物信息资源在耻垢分枝杆菌EmbB多克隆抗体制备中的应用
目的 建立通过生物信息学手段制备耻垢分枝杆菌(M.smegamatis)EmbB (Sm EmbB)多克隆抗体的方法.方法 应用生物信息资源在Sm EmbB的N端寻找一段18个氨基酸的特异短肽,合成后将其与白喉类毒素分子相连,以所形成的复合物免疫动物制备抗Sm EmbB的多克隆抗体.结果 Western blot结果显示获得的抗体可特异地作用于Sm EmbB.结论 通过生物信息学手段制备多克隆抗体方法的建立解决了对蛋白质功能研究中缺乏抗体的困扰,为特殊蛋白质的抗体制备提供了借鉴.
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高效液相色谱法测定麝香风湿片中乌头碱的含量
目的 建立麝香风湿片中乌头碱含量的高效液相色谱测定方法.方法 采用Agilent C18柱(4.6 mm×150 mm,5μm);流动相:甲醇-0.05％磷酸溶液(含0.04％三乙胺)(68:32);流速0.8 mL/min;检测波长:235 nm;柱温:30℃;进样量:10 μL.结果 乌头碱在0.200 6 ～ 20.06 μg/mL浓度范围与峰面积呈良好线性关系,r=0.999 9,低检测限约为2 ng,平均回收率为97.7％.结论 此方法具有快速、简便、灵敏、准确等特点,适合于麝香风湿片中乌头碱的含量测定.
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大黄素对糖尿病大鼠肾组织单核细胞趋化蛋白-1表达的影响
目的 探讨大黄素对糖尿病大鼠肾组织单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)表达的影响.方法 将SD大鼠随机分为正常对照组、糖尿病对照组、糖尿病大黄素治疗组,经大黄素治疗糖尿病大鼠2,4和8周后,分别观察大鼠血肌酐及24 h尿蛋白定量,以及肾脏MCP-1表达的变化.结果 与正常对照组相比,糖尿病大鼠的24 h尿蛋白以及肾组织MCP-1表达显著增加,经大黄素治疗后上述指标在一定程度上有所减轻.结论 糖尿病时MCP-1表达增加,大黄素可能通过抑制糖尿病大鼠肾脏MCP-1表达而达到延缓糖尿病肾病的进展.
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Wnt通路对胰岛素样生长因子-1抑制小鼠毛细胞凋亡的作用
目的 探讨胰岛素样生长因子-1(IGF-1)抑制小鼠毛细胞凋亡作用的调控机制.方法 体外培养新生小鼠耳蜗基底膜.在分别含有正常对照培养波(A组)、0.5 mmol/L庆大霉素(GM)(B组)、0.5 mmol/L GM+1 ng/mL IGF (C组)、0.5 mmol/L GM+1 ng/mL IGF+5μg/mL wif(D组)、0.5 mmol/L GM+1 ng/mL IGF+ 10 μg/mLwif(E组)、0.5 mmol/L GM+1 ng/mL IGF+ 15μg/mL wif(F组)的成分中培养24 h后收集细胞及固定.应用TUNEL法观察各组耳蜗毛细胞的凋亡情况.应用Western blot及Real-time PCR法观察Caspase-3的表达情况.结果 B组耳蜗毛细胞经刺激后,细胞凋亡数量及Caspase-3 mRNA和蛋白表达较A组明显上升(P＜0.01),C组耳蜗毛细胞经IGF刺激后,细胞凋亡数量及Caspase-3mRNA和蛋白表达较B组明显下降(P＜0.01),应用Wnt阻断剂(wif)后D、E及F组细胞凋亡数量及Caspase-3 mRNA和蛋白表达较C组升高,其中F组升高显著(P＜0.01).结论 IGF可能通过激活Wnt通路抑制毛细胞凋亡.
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油酰乙醇胺对血管紧张素Ⅱ诱导的血管平滑肌细胞增殖的影响
目的 研究油酰乙醇胺(OEA)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)刺激大鼠主动脉血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖的抑制作用以及对p38信号通路的影响.方法 分离大鼠胸主动脉,组织贴块法培养VSMCs,AngⅡ刺激VSMCs 建立细胞增殖模型,不同浓度OEA(5,10,20 μmol/L)作用后,用溴脱氧核苷尿嘧啶(BrdU)掺入的方法检测细胞增殖活性;流式细胞术检测细胞周期变化;Western-bolt法检测对P-p38和p38蛋白表达的影响.结果 与AngⅡ组比较,随着OEA浓度升高,VSMCs的增殖受到抑制、G0/G1比例显著升高,G2/M比例显著降低,且P-p38和p38蛋白的表达量降低并呈浓度依赖关系.结论 OEA对VSMCs的增殖有抑制作用,其机制可能是抑制了p38MAPK信号通路.
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不同居群的新疆虫草发酵液体外抗氧化活性的研究
目的 对不同居群的8种新疆虫草发酵液进行体外抗氧化的研究.方法 采用还原能力测定法,Fenton反应法以及邻苯三酚自氧化法研究新疆虫草发酵液体外抗氧化活性.结果 DH001虫草发酵液的还原力强,吸光度值大,达1.216;BH001虫草发酵液和BE002虫草发酵液清除羟自由基能力大,清除率分别达98.7％和95.4％;8种虫草发酵液清除超氧阴离子自由基活性均较低.结论 新疆虫草发酵液具有一定的抗氧化活性.
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舟山眼镜蛇毒蕈碱样多肽MP的部分理化性质测定
目的 对舟山眼镜蛇毒蕈碱样多肽MP成分进行纯化及部分理化性质测定.方法 采用色谱技术纯化蛇毒MP成分,质谱仪测定其相对分子质量(Mr);Edman降解法分析部分氨基酸序列,与已知成分比对;以卵磷脂为底物测定MP组分的磷脂酶A2活性;采用Bliss法测定MP对小鼠的急性毒性.结果 MP的M,为13 260,其N端16位氨基酸序列为NLYQFKNMIQCTVPSR,与已知蛇毒磷脂酶A2基本一致,并具有较强的磷脂酶A2活性;腹腔注射MP对小鼠的LD50值为14.3 mg/kg.结论 MP为一种眼镜蛇毒磷脂酶A2.
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系列黄酮化合物与血清白蛋白结合及其结构相关性
目的 比较具有不同取代基基团的八种黄酮类化合物与牛血清白蛋白(BSA)的相互作用及与其结构的相关性.方法 基于黄酮化合物能够猝灭色氨酸残基的内源性荧光,采用荧光光谱法研究黄酮类化合物与BSA结合作用,根据荧光猝灭方程计算黄酮类化合物与BSA的表观结合常数(KA)和结合位点数.结果 八种黄酮类植物化学物与BSA的结合强弱依次为:橙皮素(5.59×105)＞槲皮素(4.94×105)＞柚皮素(3.04×105)＞异槲皮素(4.66×104)＞淫羊藿苷(3.60 ×104)＞芦丁(1.65×104)＞橙皮苷(2.50×103)＞柚皮苷(8.70×102).结论 糖苷基取代对黄酮类化合物与BSA的结合作用有很大影响,A环可能是黄酮类化合物插入BSA疏水区的关键部位,其C7位上的糖苷基取代是影响其与BSA结合的关键基团.此研究探讨了黄酮类化合物与BSA的作用及其与结构相关性规律,对了解黄酮类化合物在体内的运输、代谢和分布提供了一定实验依据.
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茶碱在正常及肝纤维化大鼠体内的药物动力学
目的 比较茶碱在正常及肝纤维化大鼠体内的药物动力学.方法 SD大鼠24只,分成4组:静脉给药正常组、静脉给药模型组、口服给药正常组和口服给药模型组,每组各6只,采用尾静脉注射或灌胃方式给予茶碱5mg/kg,用HPLC法测定茶碱血药浓度,运用DAS2.1.1拟合药动学参数,并采用SPSS13.0软件进行统计分析.结果 在口服和静脉给药条件下,茶碱的药动学参数AUC0-24h、AUC0-(∞)、CLz;(z或CLz /F)、MRT0-24h、MRT0-(∞)和t1/2z在正常鼠和肝纤维化鼠之间差异有统计学意义(P＜0.05),Cmax,tmax,Vz(或Vz/F)的差异则无统计学意义.结论 茶碱在大鼠体内的药动学会受肝纤维化显著影响.
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芥子碱对Aβ25-35诱导的认知功能障碍小鼠海马神经元再生的影响
目的 探讨芥子碱对Aβ25-35诱导的认知功能障碍小鼠海马神经元再生的影响.方法 采用侧脑室内注射Aβ25-35诱导认知功能障碍小鼠模型,并分为4组:假手术组、Aβ25-35组、假手术+芥子碱组和Aβ25-35+芥子碱组.采用Y型电迷宫法检测学习和记忆行为;TUNEL法检测海马CA1区的神经元凋亡情况;ELISA法检测海马的丙二醛(MDA)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平和超氧化物歧化酶(SOD)活性;Western blot法检测海马生长相关蛋白43(GAP-43)和突触素(P38)的蛋白水平.结果 相比于假手术组,Ap25-35组的学习次数、海马MDA和TNF-α的水平增加,记忆次数减少、海马CA1区神经元凋亡率升高、GAP-43和P38的蛋白水平降低(P＜0.05);而芥子碱处理可改善以上症状,但仍与假手术组有差异.结论 芥子碱可改善Aβ25-35诱导的认知功能障碍小鼠的学习和记忆功能障碍,降低海马神经元凋亡,并缓解海马区与神经再生相关蛋白及分子的水平.
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顶空气相色谱法测定弹性酶中有机溶剂残留量
目的 建立弹性酶原料中4种有机溶剂残留量的测定方法.方法 采用顶空气相色谱法,FID检测器,分别在系统一:FFAP毛细管柱(30 m×0.32 mm,1.8 μm),程序升温(80℃保持15 min,以30℃/min升至220℃,保持5 min);系统二:DB-624毛细管柱(30 m×0.32 mm,1.8 μm),程序升温(40℃保持8 min,以30℃/min升至220℃,保持5 min);项空条件均为85℃平衡30 min,进样口温度均为250℃,检测器温度均为250℃,载气为氮气,以水为溶剂配制对照品溶液及样品溶液,采用外标法定量.结果 4种残留溶剂在对应于限度的50％～150％浓度范围内有良好的线性关系(r=0.996 6～0.999 5),平均回收率为92.1％～103.3％.结论 该法简便快捷,能准确有效地控制产品的质量.
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水飞蓟宾对阿尔茨海默病模型大鼠学习记忆功能及对神经细胞内活性氧的影响
目的 探讨水飞蓟宾对阿尔茨海默病(AD)大鼠行为的改善作用及对神经细胞内自由基的清除情况.方法 大鼠60只,采用皮下注射东莨菪碱致AD模型,随机分为模型组、空白对照组、水飞蓟宾高中低剂量组及阳性对照多奈哌齐组,用Morris水迷宫法,检测大鼠的学习记忆能力.另外采用过氧化试剂诱导人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)过氧化损伤通过流式细胞仪检测水飞蓟宾对活性氧自由基的清除能力.结果 模型组与空白对照组比学习记忆能力显著下降,治疗组与模型组比学习记忆能力得到显著改善,同时体外实验证实水飞蓟宾能显著降低细胞内的自由基水平.结论 水飞蓟宾对AD有较好的改善作用,其机制可能与其抗自由基活性有关.
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五味子油对2型糖尿病胰岛素抵抗大鼠的作用及机制
目的 探讨五味子油对2型糖尿病大鼠胰岛素抵抗的作用及其机制.方法 高脂饲料联合小剂量链脲佐菌素(STZ)诱导建立2型糖尿病大鼠胰岛素抵抗模型.将SD大鼠随机分为正常组,模型组,五味子油高剂量(1mg/kg)、低剂量(0.5 mg/kg)组,罗格列酮组.连续灌胃6周,测定空腹血糖(FBG)、空腹胰岛素(FINS)、游离脂肪酸(FFA)、血清中瘦素的水平,并计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR).结果 五味子油可降低FBG、FINS、FFA的水平,抑制瘦素的表达,降低HOMA-IR.结论 五味子油改善2型糖尿病大鼠胰岛素抵抗的作用可能与瘦素有关.
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小鼠螺旋神经节发育过程中胰岛素样生长因子-1表达的变化
目的 观察胰岛素样生长因子-1(IGF-1)在小鼠螺旋神经节发育过程中的表达和分布特点,探讨其生物学特性及意义.方法 制作耳蜗组织切片,采用多重荧光免疫组织化学染色方法,激光共聚焦显微镜观察小鼠出生后12 d的IGF-1在耳蜗螺旋神经节的分布和定位.应用Western blot及Real-time PCR法检测新生小鼠螺旋神经节在出生后不同时期IGF-1蛋白及IGF-1 mRNA的表达水平.结果 IGF-1在小鼠耳蜗发育期中在螺旋神经节均有表达,表达在整个细胞体上.小鼠耳蜗螺旋神经节的IGF-1蛋白及IGF-1 mRNA表达水平随着出生年龄增加而逐渐减少.结论 IGF-1在小鼠耳蜗发育期中在耳蜗螺旋神经节均有表达.表达量随着出生年龄增加而逐渐减少.推测其可能通过旁分泌和自分泌方式在局部发挥其功能,在内耳细胞增殖中可能起重要信号转导作用.
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聚季铵盐-1的抑菌活性及其稳定性研究
目的 研究聚季铵盐-1的抑菌活性及其稳定性.方法 采用营养肉汤试管二倍稀释法测定聚季铵盐-1对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、白色念珠菌和黑曲霉的低抑菌浓度(MIC)和低杀菌浓度(MBC),并研究紫外光照射、温度、pH和.盐浓度对聚季铵盐-1稳定性的影响.结果 聚季铵盐-1对5种试验菌的MIC依次为16,4,16,8,64 μg/mL;对5种试验菌的MBC依次为16,8,32,8,128 μg/mL.聚季铵盐-1的抑菌活性不受紫外光和pH的影响,但会随温度和盐浓度的升高而降低.结论 聚季铵盐-1在较低浓度具有抑制微生物生长的活性,对紫外照射和pH较稳定,高温易使其分解,在高渗环境下,其抑菌活性也会显著降低.
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油酰乙醇胺在小鼠急性局灶性脑缺血再灌注损伤中的作用及机制
目的 研究油酰乙醇胺(OEA)在脑缺血再灌注损伤中的作用及机制.方法 线栓法制备小鼠大脑中动脉栓塞模型,缺血90 min后再灌注.应用HPLC-MS/MS方法测定脑组织内OEA的含量.给予OEA(5,10,40 mg/kg,ig)或OEA水解酶抑制剂URB597(1 mg/kg,ig),观察其对小鼠急性脑缺血再灌注损伤的影响.测定脑组织丙二醛(MDA)含量,超氧化物歧化酶(SOD)及过氧化氢酶(CAT)的活性.观察MK886对OEA抗脂质过氧化损伤的影响.结果 脑缺血再灌注后6h,损伤侧脑内OEA含量开始升高,再灌注后24 h升高明显.脑缺血再灌注后给予OEA(40 mg/kg)或URB597(1 mg/kg)可减少神经功能缺失评分,减小脑梗死体积,减轻脑水肿程度.OEA可减少脑内MDA含量,增加抗氧化酶SOD的活性.OEA这一抗氧化作用可被MK886所取消.结论 脑缺血再灌注可增加脑内OEA的含量,OEA通过激动PPARα,减轻脂质过氧化损伤发挥抗脑缺血再灌注损伤作用.
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乌苏里蝮蛇毒一种C-型凝集素相关蛋白的分离、纯化及活性测定
目的 从乌苏里蝮蛇蛇毒中分离纯化得到具有促凝血活性的C-型凝集素相关蛋白.方法 利用IDASepharose FF亲和色谱作为独立的蛋白分离纯化手段,并且结合Sephadex G-100,Sephadex G-50凝胶过滤色谱从乌苏里蝮蛇蛇毒中分离得到一个新的蛋白组分.结果 该组分经还原和非还原SDS-PAGE电泳鉴定结果显示为均一的单一条带,即C-型凝集素相关蛋白,相对分子质量约为15.7 kD.结论 经过一系列的分离和纯化,能够从乌苏里蝮蛇蛇毒中提取到C-型凝集素相关蛋白组分.
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吴茱萸次碱对实验动物急性心肌缺血损伤的保护作用
目的 探讨吴茱萸次碱(Rut)对实验动物急性心肌缺血损伤的保护作用.方法 采用垂体后叶素及异丙肾上腺素致小鼠急性心肌缺血模型,检测血清中乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)的活性.进一步采用大鼠冠状动脉结扎模型,检测血流动力学指标及血清LDH、CK、超氧化物歧化酶(SOD)的活性及丙二醛(MDA)的含量.结果 与模型组相比,Rut组能降低垂体后叶素及异丙肾上腺素所致小鼠血清LDH及CK的升高(P＜0.05).在大鼠冠状动脉结扎实验中,与模型组相比,Rut组能改善结扎大鼠血流动力学指标的变化,血清中LDH、CK的酶活力及MDA的含量下降,SOD活力升高(P＜0.05).结论 Rut对实验动物急性心肌缺血有一定的保护作用.
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注射用尖吻蝮蛇血凝酶含量测定方法研究
目的 建立能够准确反映注射用尖吻蝮蛇血凝酶蛋白质含量的测定方法.方法 采用Lowry法、Bradford法、RP-HPLC法及AQC柱前衍生HPLC法四种方法测定注射用尖吻蝮蛇血凝酶蛋白质含量并进行比较.结果 Lowry法的测定结果明显高于Bradford法,Bradford法测定结果与两种液相色谱方法相当.结论 Lowry法由于赋形剂的干扰,测定结果偏高,不宜采用;柱前衍生HPLC法虽然灵敏度更高,但操作较繁琐;Bradford法和RP-HPLC法可作为注射用尖吻蝮蛇血凝酶蛋白质含量的测定方法.
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高效液相色谱法测定复方氨基酸注射液(9AA)中抗氧剂的含量
目的 建立高效液相色谱(HPLC)测定复方氨基酸注射液(9AA)中抗氧剂焦亚硫酸钠与L-盐酸半胱氨酸含量的方法.方法 采用HPLC法测定.强酸型阳离子交换柱(磺化苯乙烯-二乙烯基苯共聚物),以0.04 mol/L磷酸溶液为流动相,柱温为50℃,检测波长为200 nm,测定焦亚硫酸钠的含量;采用C18柱,以二硫代二丙酸为氧化剂,异硫氰酸苯酯柱前衍生化,梯度洗脱,检测波长为254 nm,测定L-盐酸半胱氨酸的含量.结果 焦亚硫酸钠和L-盐酸半胱氨酸分别在0.04～0.36和4.24～38.12 mg/L范围内线性关系良好,回收率分别为98.6％和99.6％,RSD分别为0.90％和1.5％(n=9).结论 建立了准确高效的焦亚硫酸钠与L-盐酸半胱氨酸的HPLC测定方法,为质量标准的提高提供依据.
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重组钙调蛋白及其突变体蛋白的分离纯化及活性鉴定
目的 建立一种简单稳定高效分离纯化体外重组钙调蛋白(CaM)及其突变体蛋白的方法.方法 将CaM及其三种钙结合位点突变体的cDNA插入pGEX-6p-3质粒载体后,转化大肠杆菌BL21感受态细胞,大量培养并利用异丙基硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)诱导CaM及其突变体的GST融合蛋白表达,GS-4B beads进行分离纯化.采用SDS-PAGE检测目的蛋白纯度和相对分子质量;采用Bradford方法测定纯化后蛋白浓度;采用膜片钳技术检测纯化后蛋白的活性.结果 纯化的CaM及突变体蛋白具有较高的纯度;CaM及突变体蛋白得到了大量表达;纯化后蛋白可恢复已“run-down”心肌细胞膜钙通道的活性.结论 本研究成功建立了一种稳定高效简单的重组CaM及其突变体蛋白的分离纯化方法,为深入研究CaM的生物学功能奠定了基础.
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苦参碱磁性缓释颗粒的制备及性能研究
目的 制备苦参碱磁性缓释颗粒,并对其性能进行研究.方法 以壳聚糖、Fe3O4纳米粒为主要材料,采用L9(34)正交试验法优选制备工艺,并评价其性能.结果 正交设计获优处方为:微晶纤维素质量0.40g,壳聚糖浓度2.0％,壳聚糖质量0.25 g,磁性纳米粒质量为0.12g,药物体外释放行为符合一级动力学方程,并具有明显的磁敏感性.结论 该制剂制备工艺合理可行,有较好的缓释效果和顺磁性,可作为消化系肿瘤治疗的给药剂型.
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酸性丝氨酸蛋白酶ASPNJ对K562白血病细胞的抑制与损伤作用研究
目的 研究酸性丝氨酸蛋白酶ASPNJ单独用药及与多柔比星联合用药对体外培养的人慢性髓系白血病细胞株K562的抑制作用,并初步探讨其作用机制.方法 应用MTT比色法、台盼蓝拒染法检测细胞增殖和细胞活力,倒置显微镜下观察细胞的动态变化,瑞氏-吉姆萨染色法观察细胞的形态改变,流式细胞术检测细胞凋亡.结果 沙蚕丝氨酸蛋白酶ASPNJ有效抑制K562细胞的增殖和活力并呈浓度和时间依赖性,联合用药显示ASPNJ显著增加多柔比星的杀伤作用;K562细胞出现凋亡所具有的形态学变化,ASPNJ明显诱导K562细胞的凋亡.结论 沙蚕丝氨酸蛋白酶ASPNJ对体外培养的K562细胞具有明显的抑制作用并能增强多柔比星的效应,其作用机制可能与直接的细胞毒性作用及诱导凋亡有关.
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Box-Behnken实验设计法优化胸腺五肽脂质体的处方工艺
目的 优化胸腺五肽脂质体的处方工艺.方法 采用三因素三水平的Box-Behnken实验设计,利用响应面法对影响胸腺五肽脂质体包封率的主要因素进行考察,以包封率为响应值,建立相应的二项式数学模型优化处方.结果 优处方是脂质体膜材料中磷脂与胆固醇的质量比为17:5,磷脂与药物的质量比为17:2,有机相与水相的体积比为3:1.包封率的预测值与理论值偏差较小.结论 Box-Behnken实验设计法可用于胸腺五肽脂质体处方的优化,经优化的处方工艺稳定可行.
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RGD-FasL羟乙基壳聚糖缓释纳米粒制备及生物学研究
目的 使用羟乙基壳聚糖制备纳米颗粒(NPs),用来包载RGD-FasL融合蛋白(RF),鉴定其功能并评估其在肝癌治疗中的作用.方法 采用离子凝胶法制备RF羟乙基壳聚糖缓释纳米粒(RF-NPs);通过透射电镜、动态光散射法考察其理化性质;用紫外分光光度仪检测蛋白浓度来计算其载药率、包封率和体外释放度;通过MTT比色法检测对H22细胞增殖活性的影响,应用H22细胞建立小鼠肝癌模型进行体内抑瘤研究.结果 制备的RFNPs呈球形或类球形,平均粒径198.3 nm,Zeta电位+25 mV,包封率较高,且具有缓释效果,150 mg/L浓度时对H22细胞抑制率大于70％,并能在小鼠体内产生比较明显的抑瘤效果.结论 离子凝胶法制备RF-NPs的条件缓和、方法简单,是癌症治疗中具有很好的前景的蛋白药物载体.
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兔心肌中次黄嘌呤纯化工艺的优化
目的 探索从兔心肌中提取次黄嘌呤的佳工艺.方法 比较三氟乙酸法、酶解法、酸碱法和醇沉法提取的次黄嘌呤的产率和纯度,得到优化制备工艺.结果 利用醇沉法,向细胞充分破碎后的匀浆液中加入4倍体积的纯水,超声提取,向提取液中加入乙醇至浓度60％,置60℃水浴反应120 min,提取的次黄嘌呤产率为0.83 mg/g,纯度为82.4％.结论 经过纯化工艺比较,醇沉法提取的次黄嘌呤的含量和纯度优于其他方法.
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苯基乙炔磺酰胺与荜拨酰胺抗肺癌A549细胞增殖作用研究
目的 探讨HSP70抑制剂PFT-μ(苯基乙炔磺酰胺)及荜拨酰胺单独使用及合用时,对非小细胞肺癌A549细胞增殖活性的影响.方法 MTT法检测荜拨酰胺、PFT-μ单用及合用对A549细胞增殖的影响;DAPI染色观察A549细胞凋亡形态改变;Western blot法检测相关凋亡蛋白PARP、Bid的变化.结果 荜拨酰胺剂量依赖性抑制A549细胞增殖,两药合用显著降低细胞增殖活性,与各单独给药组存在统计学差异(P＜0.01);两药合用后细胞核数目明显减少,但是凋亡现象没有荜拔酰胺组明显;PFT-μ不引起相关凋亡蛋白变化.荜拔酰胺降低Bid表达,增加PARP剪切体表达.与荜拨酰胺组相比,合用增加Bid表达,减少PARP剪切体表达.结论 PFT-μ与荜拨酰胺合用,能增加对A549细胞的细胞毒性,但二者可能通过不同的方式促进细胞死亡.
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降纤酶肽图分析
目的 采用反相高效液相色谱法测定尖吻蝮蛇降纤酶和白眉蝮蛇降纤酶肽图.方法 将降纤酶样品用胰蛋白酶水解,酶解所得的肽段通过反相高效液相色谱法进行分析,采用C18色谱柱,以0.1％三氟乙酸为A相,乙腈-水-三氟乙酸(90:10:0.1)为B相进行梯度洗脱得到降纤酶肽图.结果 降纤酶各个肽段都能得到很好的分离,白眉蝮蛇降纤酶和尖吻蝮蛇降纤酶肽图存在显著差异.结论 本法简便、快速,可应用于不同蛇种来源降纤酶的鉴别,以减少临床不良反应的发生.
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柱前衍生化HPLC法测定黄河滩枣多糖的单糖组成
目的 建立PMP(1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮)柱前衍生化HPLC法测定黄河滩枣多糖的单糖组成.方法 采用水提醇沉法提取黄河滩枣多糖,多糖水解后进行PMP衍生化,HPLC法测定黄河滩枣多糖的单糖组成及摩尔比,并对等度和梯度洗脱两种模式的测定结果进行分析比较.结果 黄河滩枣多糖由D-甘露糖、L-鼠李糖、D-半乳糖醛酸、D-葡萄糖、D-半乳糖、L-阿拉伯糖等六种单糖组成,它们的摩尔比约为0.54:0.50:0.27:2.03:5.40:1.00,等度和梯度洗脱测定结果基本一致.结论 本实验改进的等度洗脱方式更加简便易行,快速准确,适用于黄河滩枣多糖的单糖组成分析.
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黄原胶对疼痛的缓解作用
目的 研究黄原胶对疼痛的缓解作用.方法 分别采用小鼠腹腔注射醋酸及大鼠左后肢关节腔注射碘乙酸钠诱导疼痛模型,前者以小鼠扭体反应潜伏期和扭体次数为指标,后者以大鼠左后肢机械缩足阈值和承重分布为指标,评价黄原胶对疼痛的缓解作用.结果 与生理盐水组相比,黄原胶可明显延长小鼠扭体反应的潜伏期并减少扭体次数,显著抑制碘乙酸钠诱导的大鼠左后肢机械缩足阈值及承重分布的降低.结论 黄原胶可显著缓解疼痛.
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胰腺提取物冻干粉中常见金属元素的测定
目的 建立胰腺提取物冻干粉针剂中Na、K、Cd、Pb等15种常见金属元素含量分析方法,为药品质量控制及临床安全用药提供科学依据.方法 注射用胰腺提取物,微波消解,采用在线内标,建立电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)技术测定其中15种金属元素的含量.结果 ICPMS试验条件为射频功率1 350 W、采集模式Spectrum、样品提升速度0.4 mL/min、Barbington雾化器、载气流速1.14 L/min.各金属元素线性关系良好(r均＞0.999 0),方法准确度、精确度和稳定性均达到要求.胰腺提取物中,Na、Mg、K、Ca、Mn、Cu、Sb和Ba批间相对误差均较小(均小于2.13％);Cr、Fe、As、Ag、Cd和Pb批间相对误差较大(20.55％ ～ 86.60％).结论 浓缩冻干胰腺提取物中影响药品渗透压的主要常见元素中除Fe外,其余元素含量稳定;多种重金属元素含量不稳定.
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依诺肝素钠相对分子量的EP与USP分析方法对比研究
目的 以国产依诺肝素钠和其原研药为样品,比较欧洲药典(EP)和美国药典(USP)测定依诺肝素钠相对分子质量(Mr)方法的差异,为国内该品种的药典标准制定提供参考.方法 采用这两种方法分别检测了10批国产依诺肝素钠原料药和2批原研药注射液LOVENOX的Mr情况.结果 USP方法测得平均Mr均较EP方法结果偏高在200以内,Mr2 000以下组分比例EP方法偏高,而Mr2000 ～8 000组分比例USP方法偏高,但差距均在4％以内.国产依诺肝素钠Mr与原研药的基本一致.结论 EP和USP方法分析依诺肝素钠Mr结果较为接近.
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多条溶出曲线评价氨氯地平阿托伐他汀钙分散片的质量
目的 比较自制氨氯地平阿托伐他汀钙分散片与参比制剂在不同溶出介质中溶出曲线的相似性.方法 分别以水、pH 1.0盐酸溶液、pH4.5醋酸盐缓冲液和pH6.8磷酸盐缓冲液为溶出介质,测定自制制剂与参比制剂的体外溶出曲线,采用f2相似因子法考察其相似性.结果 在不同pH值的溶出介质中,自制制剂中的氨氧地平和阿托伐他汀钙的溶出曲线与参比制剂比较,f2相似因子均大于50.结论 在不同pH值的溶出介质中,自制制剂和参比制剂的体外溶出行为相似.
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安络化纤丸对大鼠高脂性脂肪肝的治疗作用
目的 探讨安络化纤丸对大鼠高脂性脂肪肝的治疗作用.方法 以连续饲以高脂饲料(基础饲料加10％猪油、2％胆固醇、0.5％胆酸钠、5％蛋黄)1个月的方法建立高脂性大鼠脂肪肝模型,造模成功后给予安络化纤丸治疗4周,观察一般情况及测定血清丙氨酸氨基转换酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转换酶(AST)、总胆固醇(TC)和甘油三酯(TG)水平,测定肝匀浆TG、丙二醛(MDA)及肝组织超氧化物歧化酶(SOD)水平,并对大鼠肝脏行病理学检查.结果 安络化纤丸可明显降低高脂性脂肪肝大鼠血清ALT、AST、TC和TG水平,降低肝组织TG含量,提高肝组织SOD活性,并降低肝组织MDA水平.安络化纤丸可显著改善高脂性脂肪肝大鼠肝组织的病理损害.结论 安络化纤丸对大鼠高脂性脂肪肝有明显的治疗作用,其作用可能与其抗氧化作用有关.
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高效液相色谱法测定人参蜂王浆口服液中五味子木脂素成分的含量
目的 建立人参蜂王浆口服液中五味子醇甲、五味子甲素、五味子乙素三种五味子木脂素成分含量测定的高效液相色谱法.方法 样品超声提取后,滤过,取续滤波,采用高效液相色谱法测定.色谱柱为依利特Hypersi ODS2(250 mm×4.6 mm,5μm),以甲醇-水为流动相进行梯度洗脱,流速为1.0 mL/min,检测波长为254 nm.结果 五味子醇甲、五味子甲素、五味子乙素分别在0.045 4 ～11.35,0.049 3 ～12.33,0.055 3 ～ 13.82 μg/mL浓度范围内与峰面积呈良好线性关系;平均加样回收率依次为96.4％,100.1％和106.1％;RSD(n =9)依次为3.7％,2.7％和2.3％.精密度和重复性良好.结论 所建立的方法准确、简便,适用于人参蜂王浆口服液中五味子醇甲、五味子甲素、五味子乙素的含量测定.
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酶解高效液相色谱法测定硫酸软骨素的含量
目的 建立酶解高效液相色谱法测定硫酸软骨素含量的方法.方法 采用硫酸软骨素ABC酶制备样品,高效液相色谱法测定含量.以Ultimate XB-NH2柱(4.6 mm×25 cm,5μm)分离样品,醋酸钠缓冲液(pH 5.6)-乙腈(950:50)为流动相,流速1.0 mL/min,检测波长232 nm,进样量10 μL,柱温30℃.结果 在此色谱条件下,硫酸软骨素A、B、C三组分分离良好;硫酸软骨素浓度在300 ～3 000 μg/mL之间与峰面积呈良好线性关系;高、中、低三个浓度平均加样回收率为102.1％,100.4％和97.5％.结论 本法简便、准确、可靠,可用于硫酸软骨素的含量测定.
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木蝴蝶提取物对大鼠实验性脉络膜新生血管的抑制作用
目的 探讨木蝴蝶提取物对实验性脉络膜新生血管的抑制作用,并分析其可能机制.方法 脉络膜新生血管模型大鼠90只随机分为激光光凝对照组(A组)、木蝴蝶提取物组(B组)和生理盐水组(C组),A组不给 药,B组给予木蝴蝶提取物100 mg/kg,C组给予生理盐水.分别在第1,7,21和28天观察新生血管发生率和血管内皮生长因子(VEGF)阳性表达情况.结果 脉络膜新生血管发生率都在第21天达高峰,B组与A、C两组比较有显著差异(P＜0.05).从第7天开始,A、C两组光镜下均可见光凝斑部位机化增厚,Bruch膜破裂,B组在早期的炎症反应较轻.第3和7天,各组视网膜各层VEGF阳性表达无显著差异(P＞0.05).第14和21天,A、C组VEGF阳性表达明显高于B组(P＜0.05或0.01).结论 木蝴蝶提取物可以防治脉络膜新生血管的早期形成,VEGF在新生血管形成的早期起着关键性的作用.
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银杏外种皮多糖对人子宫内膜癌细胞HEC-1B增殖的影响
目的 观察银杏外种皮多糖(GBEP)对人子宫内膜癌细胞HEC-1B增殖的影响.方法 体外培养人子宫内膜癌细胞HEC-1B,血清饥饿24 h后,用不同浓度(0,40,80,160 mg/L)的GBEP作用24,48,72 h,用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞增殖能力,流式细胞仪检测细胞的增殖周期.结果 GBEP抑制人子宫内膜癌细胞HEC-1B增殖的作用呈时间、剂量依赖性;作用72 h后,HEC-1B细胞G0/G1期细胞减少,S期细胞增多,G2/M期细胞较对照组也增多(P＜0.05).结论 GBEP对子宫内膜癌HEC-1B细胞的增殖有抑制作用,与引起细胞周期阻滞有关.
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亚甲基蓝对猪凝血酶病毒灭活/去除工艺验证实验
目的 验证亚甲基蓝光化学法灭活猪凝血酶中病毒的灭活效果,完善生产工艺.方法 在SINV、EMCV、PPV和PRV等4种病毒中,加入0.5 mg/L的亚甲基蓝置于病毒光照灭活仪上光照2h和用60 kD膜超滤的灭活病毒方法来验证工艺的可行性.结果 经亚甲基蓝可有效灭活病毒,经超滤法滤除可有效去除病毒.掺入到凝血酶原液中的病毒以及在原培养物中病毒都丧失了对细胞的感染性,降低的滴度TCID50高于4 Log10.结论 亚甲基蓝光化学法可有效灭活猪凝血酶中病毒.
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新合成磺酰脲类化合物Ⅰ4抗血小板聚集及抗血栓作用
目的 研究新合成磺酰脲类化合物Ⅰ4抗血小板聚集及抗血栓作用.方法 测定Ⅰ4对ADP诱导兔血小板聚集、小鼠凝血时间、大鼠颈动脉旁路血栓、大鼠血栓阻塞时间的作用.结果 Ⅰ4显著抑制二磷酸腺苷(ADP)诱导的体外兔血小板聚集,延长小鼠凝血时间,降低大鼠颈动脉旁路血栓重量,明显延长电刺激诱导的大鼠颈动脉血栓形成时间.结论 Ⅰ4具有显著的抗血小板聚集及抗凝血作用.
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不同来源鹿茸肽对成骨细胞作用的比较
目的 比较塔里木马鹿茸肽与梅花鹿茸肽对成骨细胞增殖分化的影响,并分析药材差异性.方法 以相同工艺从两种鹿茸中提取不同肽段的鹿茸肽.以MTT法及PNPP法检测不同肽段鹿茸肽对原代大鼠成骨细胞的增殖分化作用.采用粉末鉴别及薄层色谱法分析塔里木马鹿茸与梅花鹿茸的结构及甘氨酸含量差异.以凝胶电泳法及HPLC法分析鹿茸肽成分差异.结果 从塔里木马鹿茸中分离得到3种不同肽段的鹿茸肽,分别为相对分子质量(Mr)＞ 30 kD组分(样A)、Mr5～10 kD组分(样B)、Mr＞5 kD组分(样C);从梅花鹿茸中分离得到3种不同肽段的鹿茸肽,分别为Mr＞ 30 kD组分(样D)、Mr5～10 kD组分(样E)、总肽组分(样F).样B和C显著促进大鼠成骨细胞增殖并上调碱性磷酸酶活性,样F仅具有促进细胞增殖作用,其余组分作用微弱.塔里木马鹿茸与梅花鹿茸粉末形态类似,但含有更多甘氨酸成分,其鹿茸肽含更多潜在活性成分.结论 塔里木马鹿茸与梅花鹿茸存在较大差异,前者包含抗骨质疏松成分.
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W/O/W复乳溶剂蒸发法制备水溶性药物微球研究进展
介绍了W/O/W复乳溶剂蒸发法制备水溶性药物微球的基本步骤及存在问题,重点综述制备工艺的关键影响因素,并在此基础上阐述W/O/W复乳溶剂蒸发法技术的研究进展,提出该法在实际应用中存在的主要问题,并对其发展前景进行展望.
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糖苷类化合物体外生物转化的研究进展
糖苷类化合物的体外生物转化可为发掘药物体内起效的物质基础提供依据,同时能极大提高药物的生物利用度.本文对黄酮苷、皂苷、环烯醚萜苷的体外生物转化进行了综述.
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透明质酸应用于干细胞培养的研究进展
透明质酸是一种广泛存在于细胞基质中的大分子酸性黏多糖,是一种重要的细胞外基质成分,具有良好的生物相容性和力学特性,体内可自行降解,同时通过与细胞表面受体结合,直接影响组织构建,促进细胞迁移以及胞外基质重构.研究表明透明质酸具有影响体外培养干细胞的黏附、迁移、增殖、老化及分化的能力.本文对透明质酸用于干细胞培养的新研究进展进行综述.
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脂肪来源干细胞在移植脂肪中的分化及其相关miRNA的表达
本文介绍脂肪来源干细胞(ADSCs)在移植脂肪中经信号通路传递信号来调控ADSCs分化中转入因子的活性,及其分化中miRNA的表达,阐明ADSCs成脂分化中的作用机制,另外,从ADSCs成脂分化中脂肪细胞的形态变化观察其组织学特点及对几种检测手段的简单介绍.
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单唾液酸四己糖神经节苷脂钠质控研究进展
单唾液酸四己糖神经节苷脂钠(GM1)是从猪脑中提取制得的对神经细胞功能损伤具有作用的物质.本文对近年来GM1质量标准、质量控制和检测方法进行了综述.
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低分子肝素制备的研究进展
肝素作为一种有效的抗凝药物广受关注,但其在使用过程中出现的各种副作用使人们的目光转向了低分子肝素(LMWH).LMWH具有更高的安全性、更好的皮下注射药物动力学、更长的半衰期和更好的生物利用度.本文阐述了LMWH的各种制备方法,探讨了LMWH制备的发展趋势,为LMWH研究者选择适当的制备方法提供参考.
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作用于血液系统的蛇毒蛋白酶的研究进展
蛇毒是蛇毒腺分泌的天然毒液,含有多种蛋白质、多肽、酶类和其它小分子物质,它们参与蛇的捕食消化和防御功能.蛇毒中含有许多种影响血液系统功能的蛋白质或酶,因其显著的生物功能和药用活性,受到广泛关注.本文就对蛇毒中影响血液系统的丝氨酸蛋白酶、金属蛋白酶、磷脂酶A2、L-氨基酸氧化酶和5’-核苷酸酶等蛋白酶的新研究进展进行了综述.
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法舒地尔对蛛网膜下腔出血术后患者的脑保护作用
目的 探讨法舒地尔对蛛网膜下腔出血患者脑血管痉挛的作用和脑保护作用.方法 蛛网膜下腔出血患者76例随机分为治疗组和对照组,对照组给予尼莫地平治疗,治疗组给予法舒地尔静脉滴注30 mg/次,3次/d,疗程14 d.观察2组治疗前、治疗第7天、治疗1个疗程后患者脑血管痉挛比率、血神经元烯醇化酶值,并进行比较.结果 治疗组脑血管痉挛比率与对照组比较无统计学差异;血神经元特异性烯醇化酶值治疗组明显低于对照组.结论 法舒地尔具有抗脑血管痉挛和脑保护作用.
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恩替卡韦对慢性乙型肝炎患者外周血B淋巴细胞亚群的影响
目的 探讨恩替卡韦抗病毒治疗对慢性乙型肝炎患者外周血B淋巴细胞亚群的影响.方法 慢性乙型肝炎患者60例,随机分为对照组、治疗组各30例.对照组仅给予常规治疗,治疗组另外给予恩替卡韦0.5 mg/d,口服,疗程48周.检测治疗前后患者外周血CD5+B细胞(CD5+,CD19+)及传统B细胞(CD5-,CD19+)百分率.结果 对照组治疗前后外周血CD5 +B淋巴细胞百分率无明显变化,治疗组治疗后较治疗前明显下降,且明显低于对照组(P＜0.05).结论 恩替卡韦治疗对于慢性乙型肝炎患者体液免疫失衡有改善作用.
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丹参川芎嗪注射液联合小牛血清去蛋白注射液治疗急性脑梗死临床观察
目的 探讨丹参川芎嗪注射液联合小牛血清去蛋白注射液治疗急性脑梗死的临床疗效.方法 急性脑梗死患者80例随机分为治疗组与对照组.对照组单用丹参川芎嗪注射液治疗;治疗组给予丹参川芎嗪注射液联合小牛血清去蛋白注射液治疗.比较两组患者治疗前后血液流变学的变化以及两组治疗的总有效率.结果 治疗14 d后,两组的血液流变学各项指标及神经功能缺损评分均明显减低(P＜0.05);治疗后,观察组各项指标均明显优于对照组(P＜0.05)观察组总有效率为80.0％,明显高于对照组的67.5％ (P ＜0.05) 结论 丹参川芎嗪注射液联合小牛血清去蛋白注射液治疗急性脑梗死安全有效,能改善患者的预后
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蜂毒注射液联合芬太尼透皮贴剂治疗中晚期癌症疼痛的临床疗效观察
目的 探讨蜂毒注射液联合芬太尼透皮贴剂治疗中晚期癌症疼痛的临床疗效及安全性.方法 中晚期癌症疼痛患者87例随机分为对照组和观察组.对照组43例使用芬太尼透皮贴剂治疗,观察组44例采用蜂毒注射液联合芬太尼透皮贴剂治疗.观察并比较两组患者的疗效及安全性.结果 观察组的缓解率明显高于对照组(P＜0.01);两组治疗15和30 d后疼痛强度均较治疗前明显减轻,生活质量评分明显提高(P＜0.01);观察组治疗后的疼痛强度明显低于对照组(P ＜0.05或0.01),生活质量评分明显高于对照组(P＜0.05或0.01).观察组治疗中的不良反应总数明显低于对照组(P＜0.01).结论 蜂毒注射液联合芬太尼透皮贴剂治疗中晚期癌症疼痛的临床效果显著,不良反应少,值得在临床推广.
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48株儿童侵袭性肺炎链球菌血清型分布
目的 了解南京地区临床分离的侵袭性肺炎链球菌血清型分布情况.方法 用英膜肿胀实结果检测2007年1月-2010年12月临床分离的48株侵袭性肺炎链球菌的血清型别.结果 48株侵袭性肺炎链球菌常见的血清型别为19F(27.1％)、19A(22.8％)、14(18.7％)和9v(8.3％),有2株用丹麦抗血清无法确定血清型.结论 南京地区儿童临床分离的侵袭性肺炎链球菌的常见血清型为19F、19A、14和9v,与其它地区报道有一定差别.
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596株铜绿假单胞菌临床分布特点及耐药性分析
目的 分析我院596株铜绿假单胞菌对抗菌药物的耐药情况.方法 细菌鉴定采用VITEK32全自动细菌培养鉴定仪,药敏试验采用K-B纸片法.结果 铜绿假单胞菌主要从痰液标本中分离,占77.7％ (463/596);多的分布病区为呼吸内科(164株)、其次为干部病房(91株)和普通外科(48株).对阿米卡星的耐药性为84.9％、其次为碳青霉烯类(亚胺培南),耐药性79.8％、加酶抑制剂的复合药物(哌拉西林/他唑巴坦)耐药性为78.5％,对头孢哌酮/舒巴坦的耐药性位72.8％,敏感性尚可.结论 院内感染的主要病原菌之一为铜绿假单胞菌,其耐药机制复杂多样,对于大多数抗菌药物耐药,所以要及时进行检测,这样才能采取措施控制感染.
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干扰素α-2b联合阿德福韦酯治疗HbeAg阳性慢性乙型肝炎的临床观察
目的 观察干扰素联合阿德福韦酯治疗HBeAg阳性慢性乙型肝炎的临床疗效.方法 患者90例,随机分为3组,联合治疗组给予阿德福韦酯10 mg,1次/d,口服,干扰素α-2b 5 MU,隔日一次皮下注射;阿德福韦酯组给予阿德福韦酯10 mg,1次/d,口服;干扰素组给予干扰素α-2b 5 MU,隔日一次皮下注射;疗程均为48周.监测3组患者治疗12,24及48周以及随访结束24周时的ATL变化、HBV血清标志物、HBV DNA水平变化.结果 治疗12,24,48周以及随访结束24周时联合治疗组HBV DNA阴转率分别为56.7％,86.7％,96.7％和93.3％;ALT复常率为分别为53.3％,96.7％,96.7％,90.0％,均优于干扰素组(P ＜0.05);HBeAg转阴率分别为30％,46.7％,66.7％,63.3％,HBeAb阳转率分别为0,40.0％,60.0％,53.3％,均显著高于阿德福韦酯组和干扰素组(P＜0.05).三组病例均以野毒株为优势株,未发现变异.结论 干扰素联合阿德福韦酯治疗慢性乙型肝炎疗效优于单用干扰素及单用阿德福韦酯.
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透明质酸钠联合托特罗定治疗膀胱炎的临床疗效
目的 探讨透明质酸钠联合托特罗定治疗术后膀胱炎的临床疗效.方法 选择我院2011年8月-2012年6月收治的76例膀胱炎患者采用电切(电气化)手术后进行药物治疗,随机分为两组,观察组(38例)采用透明质酸钠联合托特罗定进行治疗;对照组(38例)仅采用口服托特罗定进行治疗,比较两组临床疗效及尿动力学参数的变化.结果 两组总有效率比较,观察组(97.4％)明显高于对照组(71.0％)(P＜0.05);尿动力学参数观察组治疗前后比较差异显著(P＜0.05),而对照组则无显著差异(P＞0.05).结论 透明质酸钠联合托特罗定治疗膀胱炎临床效果显著,能够明显改变患者尿动力学指标,安全、方便.
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左甲状腺素钠及锝[99Tc]亚甲基二磷酸盐结合自拟消瘿方治疗甲状腺机能亢进的临床研究
目的 观察左甲状腺素钠及锝[99Tc]亚甲基二磷酸盐结合自拟消瘿方治疗甲状腺机能亢进症(简称甲亢)患者的临床疗效,评价其对甲亢的治疗作用及优势.方法 选取符合中医和西医诊断标准的甲亢患者93例,随机分为对照组46例,采用左甲状腺素片及锝[99Tc]亚甲基二磷酸盐治疗;治疗组47例,在对照组基础上加服消瘿方;疗程均为2月.观察并比较两组体征、症状改善状况,血清甲状腺激素的变化及不良反应发生情况.结果 两组治疗后症状、体征、甲状腺激素水平均有明显改善(P＜0.01),治疗组有效率93.6％,对照组有效率78.3％,治疗组优于对照组(P＜0.05);不良反应发生率治疗组少于对照组(P＜0.05).结论 左甲状腺素钠及锝[99Tc]亚甲基二磷酸盐结合自拟消瘿方治疗甲亢疗效确切,优势明显.
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脑苷肌肽联合丹参川芎嗪注射液对急性脑梗死临床疗效观察
目的 观察脑苷肌肤联合丹参川芎嗪注射液对急性脑梗死临床疗效.方法 急性脑梗死患者64例随机分为对照组和观察组,每组32例.对照组采用丹参川芎嗪注射液治疗,观察组在对照组的基础上联合脑苷肌肽治疗.连续治疗2周.观察并对比两组患者的神经功能缺损评分、有效率、血液流变学指标以及不良反应.结果 观察组总有效率显著高于对照组(P＜0.01);两组患者全血黏度、血浆黏度、血小板聚集率以及神经功能缺损程度和生活能力状态评分均较治疗前显著降低(P ＜0.05或0.01).且治疗后观察组以上指标均显著低于对照组(P＜0.05或0.01);两组患者的不良反应无显著性差异(P＞0.05).结论 脑苷肌肽联合丹参川芎嗪注射液治疗急性脑梗死疗效显著.
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环氧化酶-2在非小细胞肺癌中的表达及其与预后关系的Meta分析
目的 采用Meta分析的方法,探讨环氧化酶-2(Cox-2)异常表达在非小细胞肺癌(NSCLC)预后中的作用.方法 检索PubMed、Embase、Web ofScience、CNKI中研究Cox-2表达与NSCLC预后关系的文献,收集每篇文献的相对危险比(HR)及95％可信区间(95％ CI),应用Meta分析随机效应模型对文献进行定量综合分析.结果 共入选16篇文献,累计NSCLC 1 892例,其中Cox-2阳性表达1 150例,阳性率60.8％.对入选文献进行一致性检验,文献具有异质性(Q=42.73,P=0.00),合并HR为0.90(95％ CI:0.76 ～ 1.04),Ⅰ期肺癌的合并HR为1.42(95％CI:1.02～ 1.81),腺癌的合并HR为0.63(95％ CI:0.33 ～0.93).结论 对全部16个研究进行分析显示Cox-2的阳性表达与NSCLC的预后无明确相关性;同时对人种、腺癌、Ⅰ期进行亚组分析,在不同种族中Cox-2的阳性表达与NSCLC的预后无关;在腺癌中,Cox-2的阳性表达提示预后良好;在Ⅰ期NSCLC中,Cox-2的阳性表达提示预后不良.
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奥曲肽联合鼻胃减压管治疗腹部手术致早期炎症性肠梗阻的疗效
目的 探讨奥曲肽联合鼻胃减压管治疗腹部手术致早期炎症性肠梗阻的疗效.方法 由腹部手术导致的早期炎症性肠梗阻患者60例随机分为对照组和治疗组,两组均给予常规鼻胃管保守减压治疗,仅治疗组加用奥曲肽,分析两组治疗3和7d后的效果(腹围、腹胀例数、腹痛例数和日均胃肠减压量),恢复过程的时间指标(腹围改善、自主排气恢复、减压导管留置、气液平面消失、腹胀和腹痛缓解),治疗前和治疗3,7d后的血浆炎症指标(C反应蛋白、肿瘤坏死因子α和白细胞介素-6)水平.结果 两组治疗后的血浆炎症指标均优于治疗前;治疗组治疗后的胃肠减压量均高于对照组,腹围、腹胀及腹痛例数小于对照组,减压导管留置时间及常见症状缓解时间均短于对照组,血浆炎症指标均低于对照组(P＜0.01或0.05).结论 奥曲肽联合鼻胃减压管治疗腹部手术致早期炎症性肠梗阻的疗效较好,不仅可改善肠梗阻症状,而且还可加快恢复时间并降低炎症指标水平.
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玻璃酸钠联合氨基葡萄糖治疗骨性膝关节炎的疗效观察
目的 观察玻璃酸钠联合氨基葡萄糖治疗骨性膝关节炎的疗效.方法 将270例骨性膝关节炎患者,随机分为玻璃酸钠联合氨基葡萄糖胶囊的观察组,及塞来昔布片治疗的对照组,5周为一个疗程.观察两组患者VAS、膝关节功能评分及临床疗效.结果 治疗后,两组患者VAS及膝关节功能评分均较治疗前明显改善(P＜0.05或0.01);治疗3周后,两组间的评分无明显差异;治疗6周后,观察组的评分均明显优于对照组(P＜0.05).观察组的有效率为76.3％,对照组为62.2％,观察组高于对照组(P＜0.05).结论 玻璃酸钠联合氨基葡萄糖胶囊可有效缓解骨性膝关节炎患者的疼痛,改善关节活动度,促进骨关节修复,具临床推广价值.
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胃癌根治术后应用紫杉醇脂质体行辅助化疗的临床疗效
目的 探讨胃癌根治术后应用紫杉醇脂质体行辅助化疗的临床疗效.方法 行胃癌根治术的胃癌患者82例随机分为对照组(采用顺铂、5-氟尿嘧啶治疗)和治疗组(紫杉醇脂质体联合顺铂、5-氟尿嘧啶治疗),分析两组术后3个月、6个月和1年的血清肿瘤标志物包括甲胎蛋白(AFP)、血清肿瘤特异生长因子(TSGF)及表皮生长因子受体(HER-2/neu ECD)的变化情况,术后1年的复发和转移情况,毒副作用和随访的总生存期.结果 除术后3个月的TSGF外,治疗组其余时间的AFP、TSGF和HER-2/neu ECD水平的下降值均高于对照组(P＜0.05);治疗组的吻合口(P＜0.01)和临近脏器(P＜0.05)的复发率均低于对照组;除腹腔广泛转移(P＜0.01)和肝转移(P＜0.05)外,其余脏器转移均无统计学差异;治疗组的恶心和呕吐的发生率高于对照组(P＜0.05),其他不良反应均无统计学差异;两组的累积生存率有统计学差异(P＜0.05);治疗组的中位生存期为11.9月明显高于对照组的7.2月(P＜0.05).结论 胃癌根治术后应用紫杉醇脂质体行辅助化疗的临床效果较好,减少术后复发和转移,患者的耐受较好,延长中位生存期.
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干扰素α-2b与阿德福韦酯联合治疗慢性乙型肝炎的病毒学应答研究
目的 探讨干扰素α-2b与阿德福韦酯联合治疗HBeAg阳性慢性乙型肝炎的病毒学应答.方法 HBeAg阳性慢性乙型肝炎患者85例随机分为对照组和观察组,两组均给予干扰素α-2b治疗,观察组加用阿德福韦酯;于治疗前、治疗12,24,36和48周检测两组的血清HBV DNA载量,比较两组的病毒学应答情况、HBV DNA转阴率、ALT复常率、HBeAg转阴率及转换率等.结果 (1)观察组12周的病毒学应答发生率和24周的充分应答率均高于对照组(P＜0.01);(2)观察组治疗后各时间点的HBV DNA载量均低于对照组(P＜0.05或0.01);(3)观察组治疗48周后的HBV DNA转阴率、ALT复常率、HBeAg转阴率及转换率均高于对照组(P＜0.05或0.01).结论 干扰素α-2b与阿德福韦酯联合治疗HBeAg阳性慢性乙型肝炎的病毒学应答较好,此外还可提高HBV DNA转阴率和HBeAg转阴率及转换率.
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腺苷钴胺联合胰激肽原酶肠溶片在治疗糖尿病周围神经病变中的应用及效果
目的 探讨腺苷钴胺联合胰激肤原酶肠溶片治疗糖尿病周围神经病变的应用效果.方法 糖尿病周围神经病变患者52例随机分为对照组和观察组,两组均给予胰激肽原酶肠溶片治疗,仅观察组加用腺苷钴胺.比较两组治疗1个月后的临床效果;观察治疗前后的肌电图指标(正中神经和腓总神经的运动神经传导速度、感觉神经传导速度),多伦多临床神经病变评分(TCSS评分),神经病变自觉症状问卷(TSS评分),视觉模拟评分法(VAS评分)和阴性症状指标(压力觉检查异常点数、温度觉和腱反射);观察不良反应情况.结果 观察组总有效率为88.5％,明显高于对照组的65.4％(P＜0.05);治疗后多数指标均有明显改善,治疗后治疗组的多数指标明显优于对照组;两组的不良反应发生率无统计学差异(P＞0.05).结论 腺苷钴胺联合胰激肽原酶肠溶片治疗糖尿病周围神经病变的效果较好,并改善糖尿病周围神经病变症状,且患者耐受较好.
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血脂康联合阿托伐他汀治疗高血压合并冠心病的临床疗效
目的 探讨血脂康联合阿托伐他汀治疗高血压合并冠心病的临床疗效.方法 高血压合并冠心病患者132例,随机分为对照组和观察组,每组66例.对照组给予阿托伐他汀治疗,观察组在对照组基础上给予血脂康治疗.2个疗程后,观察并比较两组患者的临床疗效.结果 观察组患者的心绞痛临床疗效、心电图效果及降压疗效的显效率和总有效率明显高于对照组(P ＜0.05或0.01);观察组治疗后的血脂及血压水平变化明显优于对照组(P＜0.05),硝酸甘油停用率明显高于对照组(P＜0.05);两组患者间的不良反应比较无显著性差异(P＞0.05).结论 血脂康联合阿托伐他汀治疗高血压合并冠心病能有效改善患者临床症状.
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脑利钠肽辅助厄贝沙坦治疗充血性心力衰竭的疗效观察
目的 探讨脑利钠肽辅助厄贝沙坦治疗充血性心力衰竭的疗效.方法 充血性心力衰竭患者76例随机分为对照组(厄贝沙坦治疗)和观察组(脑钠肽辅助厄贝沙坦治疗),分析两组治疗后的临床疗效,治疗前、治疗1周和1个月后的超声心动图指标、常规指标和血清生化指标;观察治疗过程中的不良反应等.结果 两组治疗1周后的左心室射血分数高于治疗前(P＜0.05),治疗1个月后的超声心动图指标均优于治疗前;治疗1周和1个月后的常规指标和血清生化指标均优于治疗前;观察组治疗1周和1个月后的总有效率、常规指标(除心率外)和血清生化指标均优于对照组,1个月后的超声心动图指标均优于对照组,均有统计学差异;两组的不良反应率无统计学差异.结论 脑利钠肽辅助厄贝沙坦治疗充血性心力衰竭的疗效较好,可提高治疗效果,并改善超声心动图和血清生化等指标,且患者的耐受性较好.
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乌司他丁对急性胰腺炎患者炎性因子的影响
目的 探讨乌司他丁对急性胰腺炎患者炎性因子的影响.方法 急性胰腺炎患者76例随机分为乌司他丁组和对照组,对照组给予常规治疗,乌司他丁组在对照组治疗基础上静脉滴注乌司他丁10万单位/次,3次/d,疗程10 d.观察两组治疗第1,4,7,10天血浆的肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)、C反应蛋白(CPR)值,并进行比较.结果 各检测指标值逐渐下降,TNF-α在乌司他丁组第7,10天明显低于对照组;IL-6和CPR在治疗第7天明显低于对照组.结论 乌司他丁可以有效降低急性胰腺炎患者炎性因子水平.
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非小细胞肺癌全脑放疗复发后替莫唑胺联合立体定向放疗补救治疗临床观察
目的 评价非小细胞肺癌(NSCLC)全脑放疗后颅内失败采用替莫唑胺联合立体定向治疗挽救的价值.方法 54例患者进入本次研究,所有全脑放疗后颅内复发转移的患者接受替莫唑胺化疗联合立体定向放疗,分析局控率,生存率情况,多因素分析确定和生存相关的预后因素.结果 随访率100％,中位随访时间为13个月.全组中位生存时间为11.7个月.独立递归分级指数(RPA)l,2,3级中位生存期分别为19,14,9个月.自脑转移开始患者的中位生存时间为15个月(6～22个月),立体定向治疗加替莫唑胺挽救治疗后6和12个月局部控制率分别为93％和65％.结论 联合治疗有较好的有效性和安全性,值得在NSCLC中颅内治疗失败后作为挽救治疗推广.
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“聚精汤”治疗50例少、弱精子症的临床研究
目的 探讨“聚精汤”治疗少、弱精子症的临床疗效.方法 少、弱精子症患者50例,口服聚精汤,疗程3个月,并随访3个月.观察疗效,并以精子活力、密度、畸形率等变化作为疗效指标,以精浆纤溶酶原激活因子(uPA)含量变化作为研究性指标.结果 治愈(配偶怀孕)10例,显效8例,有效24例,无效8例,总有效率达到84％.精子密度、畸形率、活力等均较治疗前明显改善(P＜0.01).患者精浆中uPA的含量明显比正常人低.治疗后精浆中uPA含量较治疗前明显上升(P＜0.01).结论 “聚精汤”治疗少弱精子症临床疗效可靠.在传统的健脾补肾法基础上同时配合活血法治疗少、弱精子症临床有一定的优势.同时证明了少、弱精子症患者精浆中“精瘀”证的存在,并认为精浆中uPA值的降低可以看作是中医“精瘀”证的客观指标.
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氟哌噻吨美利曲辛片辅助阿片类止痛药物治疗中重度癌性疼痛临床观察
目的 研究氟哌噻吨美利曲辛片(黛力新)辅助治疗中重度癌性疼痛的临床效果,考察其对生活质量相关因素(睡眠、缓解焦虑、抑郁等)的改善情况.方法 中重度肿瘤相关性疼痛(评分在4～10分)的恶性肿瘤患者82例,随机分组进行对症止痛处理,A组常规阿片类药物止痛,B组加用氟哌噻吨美利曲辛片1～2粒辅助阿片类止痛药物治疗,严格按照世界卫生组织(WHO)三阶梯止痛原则处理.根据疼痛评分滴定药物剂量,观察疼痛状况,睡眠质量,焦虑水平,生活质量评分情况.结果 B组的临床效果、生活质量相关因素的改善情况均明显优于A组.无明显增加阿片类药物的不良反应.结论 氟哌噻吨美利曲辛片辅助阿片类止痛药物治疗中重度癌性疼痛疗效好,能较好改善患者生活质量,临床接受程度高.
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急性心肌梗死急诊经皮冠状动脉介入术后N末端脑利钠肽前体浓度与左室重构、心功能变化的研究
目的 探讨急性心肌梗死急诊经皮冠状动脉介入术(PCI)前后血浆N末端脑利钠肽前体(NT-proBNP)浓度与左室形态和心功能的变化.方法 急性心肌梗死患者51例分为急诊PCI术组29例和常规药物组22例,于急诊介入术前或入院24 h内及入院第7天检测血浆NT-proBNP,入院24 h时内及心梗1个月后行超声心动图检测左室舒张末期内径,左室舒张末期容积,左心室射血分数,分析NT-proBNP的变化与左室重构的关系.结果 两组的NT-proBNP在治疗前后均明显下降,左心室射血分数增高;直接PCI组较药物治疗组治疗后血浆NT-proBNP明显下降.结论 急性心肌梗死患者中NT-proBNP能够有效反应心功能的变化,早期的PCI治疗可以改善左室的收缩功能,明显降低血浆NT-proBNP的水平.
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单唾液酸四己糖神经节苷脂钠联合脑蛋白水解物治疗帕金森病的疗效观察
目的 探讨单唾液酸四已糖神经节苷脂钠联合脑蛋白水解物治疗帕金森病的临床疗效及安全性.方法 帕金森病患者49例随机分为对照组和观察组.对照组24例,采用单唾液酸四己糖神经节苷脂钠注射液治疗.观察组25例,在对照组的基础上联合脑蛋白水解物治疗.治疗18周,以统一帕金森病评定量表(UPDRS)各部分评分相对于基线(治疗前评分)的变化为指标评估疗效.观察并比较两组患者的不良反应.结果 观察组的总有效率明显高于对照组(P＜0.01).两组患者治疗前后的UPDRS评分的各部分评分比较有统计学差异(P＜0.05或0.01),且治疗18周后,观察组的UPDRS评分的各部分评分明显低于对照组(P＜0.05).两组治疗期间的不良反应比较无统计学差异(P＞0.05).结论 单唾液酸四已糖神经节苷脂钠联合脑蛋白水解物治疗帕金森病的临床疗效显著,不良反应少,值得在临床推广.
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乳腺癌根治术后应用多西紫杉醇联合卡培他滨化疗的临床观察
目的 探讨乳腺癌根治术后应用多西紫杉醇联合卡培他滨化疗的临床效果和安全性.方法 行乳腺癌根治术的乳腺癌患者67例随机分为对照组和研究组,两组均给予卡培他滨治疗,仅研究组加用多西紫杉醇辅助治疗;分析两组的无进展生存期(RFS)、总生存期(OS)、术后1,2和3年的生存率;分析化疗的髓内、髓外的毒副作用及对心脏的毒性作用.结果 研究组的中位RFS和中位OS均长于对照组(P＜0.05或0.01),且研究组的术后1,2和3年生存率均高于对照组(P＜0.05);除研究组的中性粒细胞减少的发病率和恶心呕吐发病率高于对照组外(P＜0.05),其余的髓内、髓外的毒性情况均无统计学差异;研究组的心电图异常例数等与对照组比较均无统计学差异(P＞0.05),且两组在心功能异常上(LVEF＜ 50％)也无统计学差异.结论 乳腺癌根治术后应用多西紫杉醇联合卡培他滨化疗可延缓乳腺癌的复发,延长患者的总生存期,对髓内、髓外及心脏的毒性作用较小,安全性较高.
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贝伐单抗联合化疗治疗晚期结直肠癌的近期疗效与安全性观察
目的 观察贝伐单抗联合辅助化疗治疗晚期结直肠癌的临床疗效及安全性.方法 回顾性总结2008年1月～2012年6月期间分别给予贝伐单抗联合FOLFOX4和单独FOLFOX4方案进行化疗患者治疗后有效率、不良反应等.结果 贝伐单抗联合FOLFOX4组和单独FOLFOX4组有效率分别为32.5％和11.1％,差异有统计学意义(P＜0.05);疾病控制率分别为82.5％和46.7％,差异有统计学意义(P＜0.05).不良反应两组无显著性差异.结论 贝伐单抗联合化疗有效率提高,无明显增加毒副反应,值得临床推广.
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拉坦前列素在小切口囊外摘出术治疗青光眼术后白内障中的应用
目的 探讨拉坦前列素在小切口囊外摘出术治疗青光眼术后白内障中的应用效果.方法 青光眼术后白内障患者88例(92眼)随机分为对照组(单纯小切口囊外摘出术治疗)和观察组(拉坦前列素联合小切口囊外摘出术治疗),分析两组术前、术后1周和1个月的治疗效果(视力和眼压)、泪膜稳定性(泪膜破裂时间和基础泪液分泌)、炎症指标(前房房水的闪光和细胞计数)及并发症等.结果 两组术后的视力和眼压、泪膜稳定性和炎症反应均优于术前;观察组术后1个月的视力优于对照组(P＜0.05)、异常眼压例数少于对照组(P＜0.01)、并发症发生率低于对照组(P＜0.05),且其中的核坠入玻璃体腔的发生率也低于对照组(P＜0.05);术后的泪膜破裂时间均大于对照组、基础泪液分泌多于对照组、闪光和细胞计数均低于对照组(P ＜0.05或0.01).结论 拉坦前列素在小切口囊外摘出术治疗青光眼术后白内障中的应用效果较好,可提高疗效和泪膜稳定性,降低炎症反应和术后并发症.
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葛根素注射液联合美托洛尔治疗急性心力衰竭的临床近期疗效观察
目的 探讨葛根素注射液联合美托洛尔治疗急性心力衰竭的临床近期疗效及安全性.方法 急性心力衰竭患者84例随机分为对照组(采用美托洛尔治疗)和治疗组(采用葛根素注射液联合美托洛尔治疗),分析两组治疗后1,24,48和72 h的呼吸困难和临床症状改善情况,治疗前和治疗2周后的心功能包括左心室射血分数(LVEF)和左心室舒张末内径(LVDd)、左心室舒张功能包括等容舒张时间(IVRT)、舒张早期充盈峰速度E(峰E)、舒张晚期充盈峰速度A(峰A)、峰E/峰A(E/A),血浆N末端脑利钠肽前体(NT-proBNP)和心肌肌钙蛋白Ⅰ(cTnI)水平,治疗24 h后的液体入量、尿量和两者的差值及不良反应情况.结果 治疗组治疗后24 h的呼吸困难改善优于对照组(P＜0.05),48 h的呼吸困难和临床症状改善情况均优于对照组(P＜0.01);左心室舒张功能和LVEF均优于对照组(P＜0.05或0.01);治疗后的NT-proBNP和cTnI均低于对照组(P＜0.05或0.01),两指标的降低值均高于对照组(P＜0.01);治疗24 h后的尿量及尿量与液体入量的差值均多于对照组(P＜0.05);两组的不良反应发生率没有差异.结论 葛根素注射液联合美托洛尔治疗急性心力衰竭的临床近期疗效较好,改善临床症状、心功能和左心室舒张功能,且耐受性较好.
| 年 | 期数 |
| 2016 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2015 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2014 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 |
| 2012 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2011 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2010 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2009 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2008 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2007 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2006 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2005 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2004 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2003 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2002 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2001 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2000 | 01 02 03 04 05 06 |
