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血浆病毒灭活研究进展
随着医学科学的进步,血液的安全性愈来愈受到关注.为了提高血液的安全性,在血液检测项目逐渐增加的同时,血液检测技术也在不断改进.然而,由于病毒感染血液后"窗口期"的存在,血液输注仍无法达到"零风险".在临床输血中,血浆的输注占有较大的比例;而血浆中也是病毒含量较多的血液成分之一.近年来发展起来的血浆病毒灭活技术在提高血浆安全性方面具有一定的潜力.血浆病毒灭活的技术很多,目前比较成熟的技术有两种:溶剂/去污剂方法和亚甲基蓝联合可见光照射方法;此外,以病毒核酸为靶点的光化学技术倍受瞩目.
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光谱法研究亚甲基绿(MG)、亚甲基蓝(MB)与DNA的识别作用及纳米材料对识别作用的影响
通过可见光谱法研究了亚甲基绿(MG)、亚甲基蓝(MB)与CT-DNA的相互作用,并且研究了纳米材料胶体金对该识别作用的影响.研究结果表明,MG、MB与DNA相互作用方式是不相同的,尽管它们在化学结构上只存在很小的差异.MG是以插入方式与DNA作用的,而MB与DNA作用存在沟槽和插入两种方式,并以沟槽方式为主.此外,通过在胶体金溶液中的研究表明,胶体金可以明显地提高小分子化合物与DNA作用检测的灵敏度.
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亚甲基蓝对大鼠局灶性脑缺血再灌注后血脑屏障的保护作用
目的探讨亚甲基蓝对大鼠局灶性脑缺血再灌注引起血脑屏障破坏的保护作用。方法雄性Sprague-Dawley大鼠18只随机分为假手术组(n=6)、模型组(n=6)和亚甲基蓝组(n=6)。用线栓法制备大鼠左侧大脑中动脉栓塞1 h再灌注模型。亚甲基蓝组于再灌注即刻及再灌注2 h分别静脉给予亚甲基蓝3 mg/kg、1.5 mg/kg；模型组给予相同体积的生理盐水；假手术组手术操作与模型组相同，不插入线栓，不静脉注射药物。再灌注47 h后HE染色观察大鼠脑缺血周边皮层组织学结构，白蛋白免疫组化染色法检测血脑屏障通透性的变化，免疫组化染色法和免疫荧光双标染色法检测胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)和水通道蛋白-4(AQP-4)的表达。结果 HE染色显示，模型组缺血周边大脑皮层的细胞和血管形态不完整，而亚甲基蓝组病理变化减轻；模型组白蛋白、GFAP和AQP-4表达均明显高于假手术组(P<0.01)，亚甲基蓝组白蛋白、GFAP、AQP-4表达均低于模型组(P<0.05)。免疫荧光双标染色显示，AQP-4与GFAP在星形胶质细胞上共定位。结论亚甲基蓝可能是通过减轻胶质细胞增生及下调AQP-4表达来改善局灶性脑缺血再灌注损伤引起的血脑屏障破坏。
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单点注射聚桂醇治疗婴幼儿颈部大囊型淋巴管畸形
目的 探讨亚甲基蓝在验证大囊型淋巴管畸形囊间交通性的临床价值及采用单点注射聚桂醇硬化疗法治疗婴幼儿颈部大囊型淋巴管畸形的疗效.方法 我院小儿外科、新生儿科2014年1月～2016年6月收治的17例婴幼儿颈部大囊型淋巴管畸形,通过囊内注射亚甲基蓝验证囊间交通性,认为囊间交通后行单点注射聚桂醇治疗,治疗后记录并发症发生情况,定期门诊复查彩超或MRI测量囊肿大小评价疗效.结果 经囊内注射亚甲基蓝验证囊间交通性,共15例囊间交通并行单点注射聚桂醇硬化疗法治疗,显效7例(46.7％),有效5例(33.3％),无效3例(20％),总有效率80％.注射后出现面红2例(13.3％),发热2例(13.3％),皮疹1例(6.7％),局部肿胀1例(6.7％).治疗前病变大小11～127 ml(平均51.7 ml),治疗后病变大小0～33 ml(平均10.5 ml).无过敏性休克、皮肤坏死、神经血管损伤等并发症.结论 亚甲基蓝用于验证囊间交通性,结合单点注射聚桂醇治疗婴幼儿颈部大囊型淋巴管畸形操作简单、可靠性高、疗效确切,无严重并发症,值得临床推广.
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活细胞硫化氢检测新方法
目的:建立测定活细胞释放微量硫化氢(hydrogen sulfide,H2S)的简易方法.方法:在细胞培养板盖上方黏附滤膜,细胞释放的硫化氢与滤膜上的醋酸锌反应产生硫化锌,采用亚甲基蓝分光光度法测定并计算细胞释放的硫化氢的量.应用该方法分别检测了HepG2细胞和人脐静脉内皮细胞硫化氢的释放量.结果:HepG2细胞添加L-半胱氨酸以及辅酶磷酸吡哆醛后,继续培养12 h,H2S释放量为(859.39±19.12) nmol/(min·106cells)；给予胱硫醚-γ-裂解酶抑制剂炔丙基甘氨酸(DL-propargylglycine,PAG)后,H2S产率下降到(341.34±105.90) nmol/(min·106cells)；胱硫醚-β-合酶抑制剂间羟胺处理后,H2S产率下降到(375.05±174.50) nmol/(min·106cells)；两种酶抑制剂联合使用后H2S释放量显著抑制,为(204.47±97.14) nmol/(min·106cells).人脐静脉内皮细胞也可内源性产生H2S,HUVEC细胞H2S的释放量为(26.23±3.24) nmol/(min·106 cells),约为HepG2细胞产量的1/30.台盼蓝检测细胞活性大于95％,细胞生长状态良好,表明该方法无细胞毒作用,细胞可根据实验需要继续培养.结论:滤膜吸附法简便易行、实用可靠,可应用于活细胞释放硫化氢的测定.
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大鼠中枢神经系统一氧化氮对电针镇痛作用影响的研究
中枢神经系统一氧化氮(nitric oxide, NO)在痛和痛觉调制过程中的作用及其机制,受到国内外广泛关注,积累了大量的实验资料.但迄今为止,电针(EA)镇痛时中枢神经系统NO的作用及其机制尚不清楚.本工作电针大鼠双侧"足三里"穴,观察向大鼠侧脑室微量注射NO前体和供体物质、一氧化氮合酶(NOS)抑制剂以及血红蛋白(Hb)、亚甲基蓝(MB)等,对大鼠痛和电针镇痛作用的影响,试图探讨NO在中枢神经系统痛觉调制和针刺(电针)镇痛过程中的作用及其机制.
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不同光照方式介导的光动力疗法对牛牙粪肠球菌根管感染模型的体外抗菌效应
目的 体外研究2种不同光照方式介导的光动力疗法(PDT)对根管内粪肠球菌(E.faecalis)感染的抗菌效应.方法 以亚甲基蓝为光敏剂,将成功建立根管E.faecalis感染模型的18个牛切牙样本,随机分为2组,每组9个样本,分别采用不同光照方式进行PDT处理,即将光导纤维置于根管口照射或置于根管内距离根尖1 mm处照射.于实验前、后分别取样,即刻培养,采用菌落计数法检测根管内E.faecalis数目.结果 经PDT处理后,2组根管内E.faecalis数目较实验前均显著下降(P＜0.05),但组间比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 在相同光照参数条件下,直根管内PDT抗菌效应不受光导纤维在根管内位置的影响.
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亚甲基蓝分光光度法测定双氯芬酸钠
目的研究双氯芬酸钠的分光光度测定方法.方法双氯芬酸钠与过量的亚甲基蓝反应生成一能被氯仿萃取的蓝色配合物.结果方法的线性范围和检出限分别为0.9～5.0μg/ml及0.40μg/ml.结论该方法用于药品中双氯芬酸钠的测定,结果令人满意.
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中枢神经系统一氧化氮对大鼠的痛觉调制作用
以钾离子透入引起大鼠甩尾的电流强度(mA)作为痛反应指标,采用侧脑室微量注射L-精氨酸(L-Arg)、亚甲基蓝(MB)等,观察大鼠痛阈的变化,分析探讨中枢神经系统中一氧化氮(NO)对大鼠痛觉的调制作用.结果显示:大鼠侧脑室微量注射NO前体及供体物质L-Arg和硝普钠(SNP)均引起明显的痛敏效应.微量注射MB和L-NAME后大鼠痛阈升高非常显著.侧脑室微量注射MB和L-Arg混合液后,大鼠痛阈较单纯注射MB组表现出明显降低的趋势,但与L-Arg组相比大鼠痛阈升高明显.提示:提高中枢内NO水平具有明显的痛敏效应,而降低中枢神经系统NO水平表现显著镇痛作用.中枢神经系统NO对大鼠痛觉的调制作用至少部分是通过NO-cGMP途径实现的.
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亚甲基蓝介导的光动力疗法诱导牙周炎中巨噬细胞凋亡的体内外研究
目的·探讨亚甲基蓝介导的光动力疗法(methylene blue-mediated photodynamic therapy,MB-PDT)能否诱导牙周炎组织中巨噬细胞的凋亡并抑制牙槽骨吸收.方法·体外实验中,将巨噬细胞分为3组:对照组(Control组),不接受治疗;MB组,只受MB处理;MB-PDT组,MB联合激光处理;检测各组细胞的凋亡情况及凋亡相关基因的表达.体内实验中,通过正畸钢丝结扎SD大鼠上颌双侧第一磨牙并接种牙周致病菌诱导牙周炎,6周后12只大鼠去除结扎丝并全部接受龈下刮治术和根面平整术(scaling and rootplanning,SRP),治疗后随机分为3组:SRP组,仅用生理盐水处理;MB组,仅用吩噻嗪染料MB处理;MB-PDT组,光敏剂联合激光治疗,每周治疗1次.所有大鼠在接受治疗3周后处死,采用免疫荧光实验和Micro CT分别检测各组大鼠牙周组织中巨噬细胞的凋亡情况和牙槽骨吸收水平.结果·体外实验结果显示10 μmol/L MB和40 J/cm2的光剂量组合可引起50％以上巨噬细胞死亡,且此模式下的MB-PDT诱导巨噬细胞发生凋亡的现象明显,同时MB-PDT诱导巨噬细胞中促凋亡基因Bax/抑凋亡基因Bcl-2的比值上调.体内实验结果显示,经MB-PDT处理后,炎症牙周组织中浸润的巨噬细胞发生凋亡,而SRP组和MB组大鼠牙周组织中浸润的巨噬细胞未出现凋亡.Micro CT结果显示MB-PDT组大鼠的牙槽骨吸收程度较SRP组和MB组轻(P＜0.05),而SRP组和MB组大鼠间无明显差异.结论·MB介导的光动力疗法可诱导牙周炎中过度增殖的巨噬细胞发生凋亡,并抑制牙槽骨吸收,较单纯的SRP治疗而言是一种良好的牙周炎辅助治疗方法.
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NO前体和供体对大鼠海马脑片神经元活动的影响
应用细胞外记录单位放电技术,在大鼠海马脑片上观察了左旋精氨酸(L-arg)、N-硝基左旋精氨酸(L-NNA)、SIN-1、及亚甲基蓝(methylene blue,MB)对CA1区神经元自发放电的影响,旨在了解左旋精氨酸:NO通路在海马放电中的作用及其可能的机制.实验结果如下:(1)用Larg(1 mmol/L)灌流海马脑片2 min,在54个放电单位中有42个单位(77.8%)放电频率降低,12个单位(22.2%)无明显反应.用L-NNA(0.15 mmol/L)灌流海马脑片2 min,在29个放电单位中有25个单位(86.2%)放电频率增加,4个单位(13.8%)无明显变化.L-NNA的作用可被预先灌流L-Arg而逆转.(2)给予一氧化氮(NO)供体SIN-1(5 mmol/L),25个单位(100%)放电频率均明显减少,呈明显的剂量依赖性.(3)给脑片灌流鸟苷酸环化酶抑制剂亚甲基蓝(3μmol/L)30 min后,10个单位的平均放电频率较对照时明显增加,但亚甲基蓝不能消除L-arg对海马神经元的作用.综合上述结果,似可以认为,静息的海马有基础性NO释放,NO可抑制海马的放电活动,其作用似不通过鸟苷酸环化酶介导.
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改良亚甲基蓝法测定血浆硫化氢
硫化氢(hydrogen sulfide,H2S)作为新的气体信号分子参与多系统生理及病理生理功能的调节,并受到学术界广泛关注.但迄今为止,血液中H2S浓度的检测依旧是本领域的一大难题.本文旨在建立一种简易的改良亚甲基蓝分光光度计法,提高亚甲基蓝法检测H2S浓度的敏感性.亚甲基蓝法测定血浆H2S时,大量血浆蛋白会影响测定结果.本方法先加入过量醋酸锌溶液使血浆中游离H2S、HS-、S2-形成ZnS沉淀,并使血浆蛋白变性析出；加入5 mol/L NaOH强碱溶解变性的蛋白,而ZnS沉淀不溶于强碱；离心去除大量蛋白质；再加入0.2％N,N-二甲基对苯二胺盐酸盐溶液使ZnS完全溶解,用三氯乙酸沉淀剩余蛋白质,后用分光光度计法测定H2S浓度.结果显示,各种离子甚至硫酸根离子以及硫代硫酸根离子不影响该方法检测的特异性.而向样本中添加4.5％白蛋白可降低检测数值,表明H2S与蛋白质结合影响本方法的检测,而且该方法不能检测全部与蛋白结合的H2S.该方法回收率为81.9％,表明该方法的精确度基本达到要求.利用该方法检测到65名健康志愿者的冻存血浆样本H2S浓度为(13.93±4.98) μmol/L,且SD大鼠新鲜和冻存后血浆H2S浓度之间没有明显差异.本方法能够较为准确地检测血浆中H2S的含量,具有稳定性好,灵敏度高,操作简单,需要样本少,可实现高通量等优点,能够用于临床及基础研究中血浆H2S的检测.
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光敏灭菌辅助龈下刮治后不同深度牙周袋的恢复率比较研究
目的 评价PERIOWAVETM光敏灭菌法治疗慢性牙周炎后≥4 mm牙周袋的恢复效果.方法 经伦理委员会同意后,选择45例患者(每位患者口腔内至少有4个以上≥5 mm的牙周袋并分布在2个以上口腔区域内),在接受基础检查以及根面平整术(SRP)治疗后,随机分入3组,A组在SRP之后接受1次PERIOWAVETM光敏灭菌治疗,B组在SRP后及6周后各接受1次PERIOWAVETM治疗,而C组仅接受SRP治疗.在基础检查及12周后测量牙周袋深度.结果 在基础检查中共有1 851个≥5 mm牙周袋,经过治疗后,C组有212(36.7%)个牙周袋≤3 mm,A组有160 (62.5%)个牙周袋≤3 mm,而B组有187(84.6%)个牙周袋≤3 mm;705个4 mm的牙周袋,治疗后PD≤3 mm的C组147(66.5%)个,A组160(62.5%)个,B组187(84.6%)个.经两样本二项分布检验,对于基础检查中为测量为4 mm及≥5 mm牙周袋,B组的恢复均明显好于A组及C组(P＜0.0001).结论 在SRP基础上加以2次光敏灭菌治疗牙周炎对于浅(4 mm)及深(≥5 mm)牙周袋深度的恢复均明显大于单独使用SRP.
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亚甲基蓝对猪凝血酶病毒灭活/去除工艺验证实验
目的 验证亚甲基蓝光化学法灭活猪凝血酶中病毒的灭活效果,完善生产工艺.方法 在SINV、EMCV、PPV和PRV等4种病毒中,加入0.5 mg/L的亚甲基蓝置于病毒光照灭活仪上光照2h和用60 kD膜超滤的灭活病毒方法来验证工艺的可行性.结果 经亚甲基蓝可有效灭活病毒,经超滤法滤除可有效去除病毒.掺入到凝血酶原液中的病毒以及在原培养物中病毒都丧失了对细胞的感染性,降低的滴度TCID50高于4 Log10.结论 亚甲基蓝光化学法可有效灭活猪凝血酶中病毒.
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乳腺癌患者淋巴清扫中应用两种示踪剂对示踪准确率、检出率及患者生活质量的影响
目的:研究乳腺癌患者淋巴清扫中应用两种示踪剂对示踪准确率、检出率及患者生活质量的影响.方法:选取2011年3月至2014年2月在我院进行淋巴清扫治疗的乳腺癌患者87例,按照随机分组法分为亚甲基蓝组(44例)和纳米炭混悬液组(43例),对两组患者的生活质量、示踪准确率、检出率进行分析.结果:两组患者检出率、灵敏度、准确率和假阴性率差异均无统计学意义(P＞0.05).两组患者生理功能评分差异无统计学意义(t=0.722,P＞0.05);两组患者在生理职能、情感职能、社会功能、躯体疼痛、活力和精神健康等方面的得分差异均无统计学意义(P＞0.05).结论:乳腺癌患者淋巴清扫中应用两种示踪剂对示踪准确率、检出率影响较小,两种示踪剂下患者生活质量差异较小,因此在临床上亚甲基蓝和纳米炭混悬液均可作为示踪剂使用.
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浮选富集-原子吸收光谱法同时测定矿泉水中铜和铅
浮选富集是利用一些重金属离子与KI、亚甲基蓝生成络合物M-I-MB体系,络合物浮选于水相和有机相之上,弃去液相,所得的浮选物富集了溶液中的重金属.由于浮选技术和溶剂萃取不同,它与水相和有机相体积关系不大,所以取样量大,富集倍数高,提高了检测灵敏度.过去该技术应用于分光光度法时,需进一步分离各金属,操作复杂[徐其亨,刘绍璞.理化检验化学分册.1984,20(4):48].而将浮选富集技术与原子吸收光谱法结合起来,既有浮选技术富集倍数高,又有原子吸收法选择性好的特点,不需进一步分离,可直接测定,在适当pH时还可同时测定几种元素,操作简便快速.现将应用此新法同时测定矿泉水中铜(Cu)和铅(Pb).报告于下.
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亚甲基蓝在医药化学教学实践中的运用
医药卫生行业的许多专业技术与化学密不可分,在化学课程的实验教学中,以亚甲基蓝为例,介绍其在蓝瓶子实验、维生素C的定性鉴定、表面活性剂类型检测中的具体应用,可营造一种医药专业背景下开展化学教学的氛围,激发学生学习化学这一基础学科的兴趣,提高学习的主动性与积极性.
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介绍一种显示肥大细胞快捷简便的染色方法
目前关于肥大细胞的染色方法很多，如经典的甲苯胺蓝染色、阿尔辛蓝-番红花红染色、硫堇染色、地衣红染色等，因种种原因目前尚无法广泛应用，本文现介绍一种显示肥大细胞的染色方法，该方法安全、简便、快捷，并且可用于新鲜或固定的组织标本。
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光动力疗法联合龈下刮治和根面平整术治疗重度慢性牙周炎的疗效观察
目的 比较光动力疗法(photodynamic therapy,PDT)辅助龈下刮治术及根面平整术(scaling and root planing,SRP)和单独使用SRP治疗重度慢性牙周炎的临床疗效.方法 对34例重度慢性牙周炎患者做自身对照,每个病人选取PD≥7 mm的位点,一共300个,随机分为实验组(SRP/PDT)和对照组(SRP).实验组在龈下刮治术及根面平整术后做一次光动力治疗(光敏剂为26.7 mmol·L-1亚甲基蓝,660 nm激光),对照组仅行SRP.术前、术后1个月、3个月检查实验组及对照组的牙周探诊深度(probing depth,PD)和探诊出血(bleeding on probing,BOP).结果 实验组和对照组术前PD和BOP差异无统计学意义(P>0.05),术后1个月和3个月的结果显示,两组PD和BOP较术前均有改善,且实验组的PD和BOP改善效果均优于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05).结论 对重度慢性牙周炎患者应用PDT辅助SRP治疗较单独使用SRP效果更佳.
关键词： 重度慢性牙周炎 光动力疗法 亚甲基蓝 龈下刮治术及根面平整术 -
银(I)—过硫酸钾—亚甲基蓝测定痕量银新体系
本文基于在Hac-NaAc(pH=5.0)酸性溶液中,以邻菲罗啉为活化剂,银催化过硫酸钾氧化亚甲基蓝的反应,建立了一种催化动力学光度法测定痕量银的新方法 .在实验确定的佳条件下,本方法 的低检出限为:1.12×10-6g·L-1,相对标准偏差为2.3%.测定的线性范围为(0.01～0.12mg·L-1).该方法 尝试应用于自来水中痕量银和黑白照相纸中的银的测定,结果 令人满意.
