中国生化药物杂志
Chinese Journal of Biochemical Pharmaceutics 중국생화약물잡지
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心肌肌钙蛋白Ⅰ的融合表达和分离纯化
目的 研究人心肌肌钙蛋白(cTnⅠ)在大肠杆菌中稳定高效的融合表达和分离纯化,以满足临床诊断的需要.方法 人cTnⅠ DNA序列由pdf 5-cTnⅠ质粒经PCR 亚克隆而得,然后将其插入pET32a(+)载体,构建成pET32a(+)-cTnⅠ表达质粒,以大肠杆菌BL21(DE3)为表达菌,在IPTG诱导下进行表达.结果 硫氧还蛋白(TrxA)- cTnⅠ融合蛋白得到高效表达,并经金属螯合亲和色谱一步纯化得到目的 蛋白质.试剂盒检测结果表明该重组蛋白质具有cTnⅠ免疫原活性.结论 构建了pET32a(+)-cTnⅠ重组质粒,并在大肠杆菌中获得高效表达,为建立急性心肌梗死早期诊断试剂奠定了基础.
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NDRG4基因的克隆、表达及抑瘤活性研究
目的 克隆、表达抑癌基因NDRG4,纯化后考察其抑瘤活性.方法 将NDRG4基因克隆进PQE30/M15表达载体,诱导表达后亲和色谱纯化,对纯化表达产物进行一系列检测,考察其抑瘤作用.结果 表达产物NDRG4蛋白相对分子质量为38 856,表达量为19.58%,纯度为92%,等电点为6.2,流式细胞术证实该蛋白质对HHCC和7901肿瘤细胞均阻滞在G1期,细胞实验和裸鼠致瘤抑制实验证实该蛋白质对肿瘤细胞的生长和肿瘤的发生发育有较强抑制作用.结论 构建了NDRG4的PQE30/M15表达载体并取得高表达,表达蛋白质有较强抑瘤活性,为基因功能研究奠定了基础.
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虫草素/LDH纳米复合物对U937肿瘤细胞的抑制作用
目的 防止虫草素被腺苷脱氨酶降解.方法 虫草素置换层状双氢氧化物(LDH)中的NO3-,插入到LDH层间,得到稳定虫草素/LDH纳米复合物.将复合物作用于U937肿瘤细胞,研究其对肿瘤细胞的抑制作用.结果 LDH能够抑制U937肿瘤细胞的腺苷脱氨酶对虫草素的降解,虫草素/LDH纳米复合物抑制肿瘤细胞的复制生长,诱导细胞凋亡.结论 LDH可以防止虫草素被腺苷脱氨酶降解.
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B群链球菌荚膜多糖抗原的分离纯化工艺研究
目的 为提高荚膜多糖抗原得率,降低荚膜多糖中残余蛋白质含量和核酸含量,提高荚膜多糖抗原纯度,优化B群链球菌荚膜多糖的提取纯化工艺条件.方法 研究pH值,沉淀核酸和荚膜多糖的乙醇浓度,乙醇沉淀多糖所需的温度和时间;比较蛋白酶K法、Sevag法和冷酚抽提法去除荚膜多糖中杂蛋白质的效果.结果 建立起25%乙醇沉淀去核酸,冷酚抽提法去蛋白质分离纯化荚膜多糖,55%乙醇沉淀多糖的方法.3批GBSⅢ发酵液中获得的荚膜多糖的唾液酸含量为12.4%～14.8%;分配系数(Kav)≤0.5的多糖回收率达90%以上;荚膜多糖得率为0.021～0.027 g/L,抗原纯度较高.结论 从发酵液中提取纯化荚膜多糖抗原的工艺是可行有效的.
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重组人β干扰素在DHFR--CHO细胞中的高效表达
目的 由二氢叶酸还原酶缺陷型的中国仓鼠卵巢(DHFR--CHO)细胞高效表达重组人β干扰素(rhIFN-β),比较来源于E.coli、Yeast和CHO细胞的IFN-β抗增殖活性.方法 采用PCR技术,从pLG104R载体中扩增目的 基因,经XhoⅠ和SmaⅠ双酶切后克隆到真核表达载体pCI-dhfr中,采用阳离子脂质体介导方法,将构建的表达载体转染到CHO细胞中.通过MTX的加压筛选,以病毒诱导的细胞病变抑制(CPEI)法进行活性定量检测,获得稳定、高效表达rhIFN-β的CHO细胞株,并扩大培养.分离纯化后,定量并鉴定表达产物.采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法比较E.coli、Yeast和CHO细胞表达体系所生产的rhIFN-β的抗增殖活性.结果 得到由CHO细胞株表达的rhIFN-β纯品,且抗增殖活性显著高于其他2个表达体系.结论 CHO细胞可大规模生产rhIFN-β,且活性高于其他表达体系,显示了以CHO细胞为生产平台的优越性.
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鬼臼毒素脂质体的稳定性研究
目的 预测鬼臼毒素脂质体的稳定性.方法 采用离心-分光光度法测定稳定性参数(KE)值.采用经典恒温加速试验法分别在25,30,40℃恒温条件下,在不同间隔时间用高效液相色谱法测定鬼臼毒素脂质体中药物浓度,预测鬼臼毒素脂质体在4℃下的有效期t0.9.结果 在光照条件下放置10 d的KE值较0 d增加的多,增加了12.21倍,而在4,25,30,40℃放置10 d的KE值较0 d分别增加了3.88,5.85,6.96,8.12倍;鬼臼毒素脂质体在4℃下的有效期t0.9为5 d,t0.5为60 d.结论 鬼臼毒素脂质体的稳定性与温度有关,温度越高,稳定性越差,应低温保存.
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羧甲基葡聚糖体外抗肿瘤作用的研究
目的 研究不同取代度羧甲基葡聚糖(CMG)的体外抗肿瘤作用.方法 以HL-7702正常肝细胞、HepG-2肝癌细胞、MGC-803胃癌细胞为实验材料,通过四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法分析.结果 各种取代度的CMG对HL-7702的生长影响较小,但对HepG-2和MGC-803的抑制作用明显,并且随浓度升高对HepG-2、MGC-803的抑制作用也随之增强,尤以取代度为0.556的CMG2为显著.CMG2浓度达到500 μg/mL时对HepG-2的生长抑制率为54.3%,浓度为1 000 μg/mL时对MGC-803抑制率达到51.3%.结论 在体外实验中,取代度0.55左右的CMG能有效抑制HepG-2肝癌细胞、MGC-803胃癌细胞的生长.
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高纯度木瓜蛋白酶的分离纯化和性质研究
目的 建立木瓜蛋白酶的分离纯化工艺路径.方法 采用初步采集处理,20%,40%硫酸铵分级沉淀、SP-sephadex C50柱色谱、羟基磷灰石柱色谱,从番木瓜乳汁中分离纯化木瓜蛋白酶.结果 获得比活为1 184 U/mg的纯酶,活力回收率为55.79%,纯化的酶经SDS-PAGE呈单一条带,高效液相色谱呈单一条带,纯度达到99.31%.该酶耐高温,适pH值为7.2,对酪蛋白的动力学常数(Km)为3.5×10-5 mol/L.结论 应用此方法成功纯化了高纯度的木瓜蛋白酶.
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重组人生长激素脂质体的制备及载药研究
目的 采用乙醇注入法结合反复冻融技术制备重组人生长激素脂质体,并考察影响包封率的主要因素.方法 采用乙醇注入法制备空白脂质体,并通过反复冻融载药,采用葡聚糖凝胶柱分离结合CBB G-250染色法测定游离药物含量,计算包封率;考察孵化时间、孵化温度、冻融次数对包封率的影响;对冻干制品的外观、复溶速度、粒径及分布进行综合评分,优选冻干支持剂.结果 孵化时间为40 min、孵化温度为10℃、冻融次数为3次时,能够获得较高包封率的脂质体,包封率为63.59%.海藻糖在脂质体冷冻干燥过程中具有好的保护作用.结论 乙醇注入法结合反复冻融可用于大分子蛋白质类脂质体的制备.
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羟乙葛根素对β肾上腺素受体的阻断作用
目的 观察异黄酮类化合物羟乙葛根素对肾上腺素受体的作用.方法 分别利用离体家兔血管和离体蛙心观察羟乙葛根素对α,β肾上腺素受体的作用.结果 羟乙葛根素对去甲肾上腺素引起的离体血管的收缩作用影响不明显,但可以使异丙肾上腺素兴奋离体蛙心的张力曲线幅度降低,频率变慢,与普萘洛尔具有相同的作用.结论 羟乙葛根素可阻断β肾上腺素受体,但对α肾上腺素受体作用不明显.
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盲肠扁桃体提取物免疫调节作用的初步研究
目的 探讨盲肠扁桃体提取物的生物活性.方法 利用顺铂造成雏鸡免疫抑制,运用淋巴细胞转化试验、四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法和测定白细胞介素-2(IL-2)分泌水平对提取物进行生物活性检测.结果 提取物组的淋巴细胞转化率和IL-2水平明显高于抑制组(P＜0.01);不同剂量提取物(1∶1 000～1∶10 000)的吸收度值明显高于抑制组(P＜0.01).结论 盲肠扁桃体提取物在一定实验浓度能增强免疫抑制性机体的免疫功能,恢复正常免疫水平.
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重组溶葡萄球菌酶成品中主药蛋白质含量的测定
目的 建立一种反相高效液相色谱法测定重组溶葡萄球菌酶成品中主药蛋白质的含量.方法 Vydac C18柱(250 mm×4.6 mm, 300A, 5 μm),流动相A为0.1%三氟乙酸溶液,流动相B为三氟乙酸-乙腈(1∶999)进行梯度洗脱,流速为1 mL/min,进样量为20 μL,检测波长为280 nm.结果 重组溶葡萄球菌酶在5～30 μg范围内和峰面积之间具有很好的线性关系,相关系数为0.999 8,多次测定的RSD＜10%,平均回收率为103.7%,RSD为1.46%.结论 此方法可以用于重组溶葡萄球菌酶的含量测定.
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果胶在结肠靶向给药系统中的应用
通过简单描述结肠的生理结构特点和果胶作为结肠制剂的特性,综述了凝胶化果胶、钙化果胶以及果胶与其它复合物形成的共聚物,作为结肠定位制剂药物载体的性质,和影响药物释放的因素及其优势,同时讨论了果胶在结肠靶向给药系统中的应用前景,并对利用果胶制备高水平的结肠靶向制剂提出了看法和建议.
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仙人掌多糖的研究进展
目的 仙人掌多糖具有明显的抗衰老、消炎、抗癌和降血糖等作用,是仙人掌具有多种功效的原因之一.此文对仙人掌多糖的研究进展进行了综述,以期为仙人掌的综合利用和仙人掌多糖的进一步研究提供参考.
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眼部降压药前列腺素的研究进展
青光眼是具有病理性高眼压或视盘灌注不良致视神经损害和视功能障碍的眼病,持续的高眼压可以给眼球各部分组织和视功能带来损害,如不及时治疗,视野可以全部丧失而至失明.前列腺素作为局部激素在各器官中发挥不同的作用,对动物和人的眼滴用前列腺素具有较好的降眼压效果.
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甲壳素及其衍生物的质量分析研究进展
评述了甲壳素及其衍生物的质量分析研究进展.从外观性状、比旋度、黏度、溶解度、热稳定性等介绍了性状;从光谱法、色谱法和物理化学反应等介绍了鉴别;从含氮量、相对分子质量及其分布、酸碱度、干燥失重、炽灼残渣、重金属、蛋白质、离解常数、纯度等介绍了检查;从脱乙酰度、取代度、氨基葡萄糖、甲壳素及其衍生物含量等讨论了含量测定,并对其质量标准前景作了展望.
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辅酶Q10的生物合成途径及发酵工艺优化
辅酶Q10作为生物体有氧呼吸链中不可缺少的电子递氢体,广泛应用于生物医药、化妆品和保健品等领域.微生物发酵法生产辅酶Q10具有产物活性高、原料成本低等优点.此文对辅酶Q10的生物合成途径和发酵工艺优化进行了综述.
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牛和羊胎盘肽的制备及其生物活性的研究
目的 探索一种新型的免疫调节剂,充分利用动物胎盘.方法 利用超滤法从牛和羊胎盘中提取胎盘肽,采用改良的加脲Tricine-SDS-PAGE法测定其相对分子质量;利用紫外光扫描其大吸收峰;并通过建立体外抑制兔淋巴细胞模型,利用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法测定所提取胎盘肽的免疫调节作用.结果 从牛和羊胎盘中成功提取出了胎盘肽,其相对分子质量分别为4 785和4 386;其大吸收峰分别为210.5和225.4 nm;牛和羊胎盘肽均可使顺铂抑制的兔外周血T淋巴细胞的转化率显著提高,其中牛胎盘肽以1∶1×103、1∶1×104 2组吸收度明显高于抑制组(P＜0.05);羊胎盘肽以1∶1×102、1∶1×103和1∶1×104 3组效果为明显(P＜0.01).结论 牛和羊胎盘中含有的胎盘肽可成功提取出来,其可明显提高淋巴细胞的转化率,是一种较为理想的免疫调节剂.
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亲和色谱分离纯化低分子肝素
目的 探索亲和色谱纯化低分子肝素的方法.方法 以壳聚糖为载体,以抗凝血酶Ⅲ及凝血酶为配基分别制备亲和吸附剂,采用亲和方法分离纯化低分子肝素,并对两者的纯化效果进行比较.结果 前者制备的低分子肝素抗Ⅹa因子活性为173.9 IU/mg,比纯化前提高1.7倍;后者制备的低分子肝素抗Ⅹa因子活性为646.0 IU/mg,比纯化前提高6.3倍.结论 经壳聚糖-抗凝血酶Ⅲ纯化的低分子肝素其抗Ⅹa因子活性显著提高.
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胸腺肽溶液不同生产方法的比较
目的 比较从小牛胸腺中提取活性胸腺肽溶液的不同方法.方法 将小牛胸腺匀浆液分别经冻融、酸化和酶解3种方法提取胸腺肽溶液.结果 3种方法制备的胸腺肽溶液均符合国家药品标准,但收率和活性不同.结论 3种方法对胸腺肽溶液的收率和质量有较大的影响,B法适合于胸腺肽溶液的大规模生产.
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情系胰岛素——记李显林高级工程师
1982年,李显林先生从南京药学院(现中国药科大学)毕业分配到刚刚组建的徐州生物化学制药厂工作,从此结缘了胰岛素这一中国生化药物主打产品.1985年,李显林先生被推荐为该厂副厂长;1993年就任该厂厂长.现任该厂改制后的江苏万邦生化医药股份有限公司(万邦医药)董事长、总经理.
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| 2010 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2009 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2008 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2007 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2006 | 01 02 03 04 05 06 |
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| 2003 | 01 02 03 04 05 06 |
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| 2001 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2000 | 01 02 03 04 05 06 |
