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中药有效成分族群辨识研究概况
中药有效成分族群辨识研究是在中医理论指导下,以临床疗效为指引,在充分整合中医药学、生物学、化学和信息学等多学科的理论方法、技术和研究成果的基础上,高效、快速地发现活性较强的单一有效成分,揭示中药多组分及多靶点的作用机理和整体疗效.现阶段的中药有效成分族群辨识技术主要包括了亲和色谱层析技术、生物芯片技术和信息技术等.本文对该技术的研究背景和常用技术进行了综述,并展望了下一步的研究方向.
关键词： 中药有效成分族群辨识 亲和色谱 生物芯片 信息 药效团 -
亲和色谱及其数学模型在中药活性成分研究中的应用
亲和色谱具有特异性强、回收率高和灵敏便捷的特点,广泛应用于中药活性成分的筛选、低分子糖和蛋白多肽的分离富集、作用机制研究及作用靶点的发现.该文综述了亲和色谱及其吸附等温模型、动力学模型和吸附热力学机制在中药领域的应用,为中药活性成分筛选、分离纯化和药物相互作用领域中亲和色谱吸附理论的应用提供借鉴和参考.
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亲和色谱应用于天然活性成分筛选的研究进展
亲和色谱法(affinity chromatography)是一种利用固定相的结合特性来分离分子的色谱方法.利用化合物和固定相表面之间的某种特异性亲和力,将目标化合物从大量无亲和活性的化合物中分离出来.该方法可同时进行色谱分离和活性筛选,作为一种高通量筛选方法广泛应用于各种活性药物的筛选.该文主要针对亲和色谱的发展历史、筛选技术类型及其在天然活性成分筛选中的应用进行了综述.并就其应用前景进行讨论,以期更好地发挥亲和色谱在药物筛选中的应用.
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Jo-1抗原的提取和纯化
目的 改进从兔胸腺中纯化能用于斑点印迹法检测抗-Jo-1抗体、Jo-1抗原的方法.方法 用PBS提取兔胸腺匀浆中的ENA,经丙酮沉淀上清中的总蛋白制成兔胸腺丙酮粉,再经以特异性抗-Jo-1抗血清中的IgG为配体制备的亲和色谱柱对Jo-1抗原纯化,得到高比活的制品.结果 100 g兔胸腺可制得5～7 g丙酮粉,其中的蛋白质含量为19%～24%.经亲和色谱分离的洗脱峰组分约可富集Jo-1抗原1900倍,抗原活性回收率为2.5%,并只对抗-Jo-1抗血清有特异性反应.虽然在SDS-PAGE上洗脱峰组分并非单一条带,但免疫印迹只发现50 ku处有阳性条带.在含有MgCl2的水溶液中,高纯度的Jo-1抗原能长时间保持高活性.结论 亲和色谱法可从兔胸腺中纯化出满足斑点印迹法检测抗-Jo-1抗体要求的抗原,并有可能成为大量获取高纯度Jo-1抗原的方法.
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血红蛋白增多症合并糖尿病患者糖化血红蛋白测定一例分析
糖化血红蛋白作为糖代谢长期监测指标日益受到临床的重视,目前实验室常用的测定方法有离子交换树脂微柱法、免疫法、电泳法以及亲和色谱微柱法.我们对1例合并遗传性持续性胎儿血红蛋白增多症(HPFH)的糖尿病患者进行糖化血红蛋白检测时,发现一些问题,讨论如下.
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生物活性化合物的靶点鉴别方法
生物活性化合物作用靶点的确认是化学生物学和药物开发中的关键问题之一.随着科技的进步与发展,许多靶点鉴别的方法和技术已经被报道.目前的靶点鉴别方法主要有两大类:亲和色谱为基础的直接法,通过检测药物与其靶点的结合来鉴别靶点;非亲和为基础的间接法,通过生理学反应或生物化学标记而推断药物的靶点或作用途径.本文主要围绕这两类靶点鉴别方法进行综述.
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整体柱在生物大分子分析中的应用
目的介绍整体柱在分离分析生物大分子上的应用.方法综述近年来国内外有关文献.结果整体柱可应用于液相色谱(包括反相高效液相色谱,亲和色谱,离子交换色谱和微柱液相色谱)和毛细管电色谱,在生物大分子分离分析上具有广阔的应用前景.结论整体柱是不需要填料,用原位聚合法制备的连续柱体,其制备方法简单,内部结构均匀、重现性好、具有较高的柱效和很好的通透性.特有的孔结构在生物大分子分析上显出极大的优势.
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HPFH合并糖尿病1例HbA1c测定分析
糖化血红蛋白(HbA1c)作为糖代谢长期监测指标日益受到临床的重视,目前实验室常用的测定方法有离子交换树酯微柱法、免疫法、电泳法以及亲和色谱微柱法.我们对l例合并遗传性持续性胎儿血红蛋白增多症(HPFH)的糖尿病患者进行HbA1c检测时,发现异常.讨论如下.
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人源化抗人TNFα单克隆抗体纯化工艺的优化
目的 考察中国仓鼠卵巢细胞(Chinese hamster ovary,CHO细胞)表达的人源化抗人TNFα单克隆抗体的亲和色谱过程中的杂质洗脱工艺,优化目的蛋白洗脱工艺条件.方法 以目的蛋白回收率和宿主细胞蛋白残留量为评价指标,筛选佳的杂质洗脱缓冲液;利用实验设计方法,以纯度、洗脱峰pH值、宿主细胞蛋白残留量为评价指标,考察目的蛋白洗脱缓冲液的pH值和浓度对工艺的影响,优化目的蛋白洗脱工艺条件.结果 优化后的亲和色谱工艺,在保持目的蛋白高回收率(优化前为86.5％,优化后为86.7％)的同时,可显著降低目的蛋白洗脱峰中宿主细胞蛋白残留量(由1 218×10-6降低至78×10-6),提高目的蛋白纯度(优化前为95.5％,优化后为96.6％),减轻后续纯化压力;提高了目的蛋白洗脱峰的pH值(由3.59提高到4.25),有利于目的蛋白的稳定.结论 优化了人源化抗人TNFα单克隆抗体的亲和色谱工艺,本工艺有效、可行.
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云芝糖肽的硼酸亲和色谱纯化
应用硼酸亲和色谱纯化云芝糖肽,佳吸附条件为含0.4 mol/L NaCl的0.2 mol/L磷酸盐缓冲液(pH8.5),佳洗脱条件为0.2 mol/L的硼酸溶液.纯化后,糖含量提高66%,蛋白含量提高2.65倍,蛋白-糖之比从0.31提高到0.69.
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绿豆胰蛋白酶抑制剂的分离和纯化
目的 研究1种高效分离纯化绿豆胰蛋白酶抑制剂(MBTI)的方法.方法 采用硫酸抽提,硫酸铵分级沉淀,缓冲液溶解沉淀,用相对分子质量(Mr)为30 000的超滤膜去除大分子蛋白质,Mr为5 000的超滤膜除盐及小分子蛋白质,亲和色谱纯化,得MBTI,高效液相色谱法(HPLC)和SDS-PAGE电泳法分别测定其纯度和Mr,以酪蛋白为底物测其活性.结果 纯化的MBTI经HPLC和SDS-PAGE鉴定为2条蛋白质带,其Mr分别为12 000和8 000,其活性约为大豆蛋白酶抑制剂的3倍.结论 超滤法与亲和色谱结合能快速高效地分离纯化MBTI.
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DSA亲和色谱检测肝癌特异性γ-谷氨酰转移酶的临床应用
目的 应用建立的凝集素亲和色谱技术,分离血清肝癌特异性γ-谷氨酰转移酶(HS-GGT),并观察HS-GGT在正常人、良性肝病及原发性肝癌(PHC)患者中的变化,以期建立1种简便易行的PHC实验室诊断方法.方法 PHC 64例、肝外肿瘤22例、良性肝病68例及正常对照血清21例,以神经胺酸酶(NMD)水解后直接用欧蔓陀罗凝集素(DSA)亲和色谱柱分离,首先用柱平衡液洗脱不结合组分,再用0.05 mol/L醋酸洗弱结合组分,后用0.1 mol/L醋酸洗脱强结合组分,用连续监测法测定洗脱液的GGT活性,计算各组分所占比例,统计分析其临床应用价值.结果 DSA强结合的GGT Ⅲ为PHC患者所特有,以其在总GGT所占比例大于2%为PHC诊断的Cutoff值,其诊断特异性为95.5%,灵敏度为85.8%,准确度为92.0%.结论 该方法能较好地鉴别诊断PHC,较以往的其他检测方法更为简便,并有较高诊断灵敏度和特异性.
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磷酸激酶亲和色谱介质的制备
目的 制备适合分离纯化磷酸激酶的亲和色谱介质.方法 以纸纤维为载体,环氧氯丙烷等为活化剂,考察接臂、配基对磷酸激酶吸附效果的影响,确定亲和色谱介质制备的工艺路线,并对主要工艺参数进行优化.结果 己糖激酶纯化倍数可达 20倍以上,酶活回收率近60%.结论 以自制的亲和色谱介质分离纯化啤酒酵母中的磷酸激酶,成本低,操作简单,分离效果良好.
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心肌肌钙蛋白Ⅰ的融合表达和分离纯化
目的 研究人心肌肌钙蛋白(cTnⅠ)在大肠杆菌中稳定高效的融合表达和分离纯化,以满足临床诊断的需要.方法 人cTnⅠ DNA序列由pdf 5-cTnⅠ质粒经PCR 亚克隆而得,然后将其插入pET32a(+)载体,构建成pET32a(+)-cTnⅠ表达质粒,以大肠杆菌BL21(DE3)为表达菌,在IPTG诱导下进行表达.结果 硫氧还蛋白(TrxA)- cTnⅠ融合蛋白得到高效表达,并经金属螯合亲和色谱一步纯化得到目的 蛋白质.试剂盒检测结果表明该重组蛋白质具有cTnⅠ免疫原活性.结论 构建了pET32a(+)-cTnⅠ重组质粒,并在大肠杆菌中获得高效表达,为建立急性心肌梗死早期诊断试剂奠定了基础.
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麦胚凝集素的分离纯化和鉴定
目的研究用鸡卵黏蛋白为配基亲和色谱法分离纯化麦胚凝集素,并对纯化的麦胚凝集素进行性质分析.方法先制备鸡卵黏蛋白的亲和吸附剂,然后用其纯化麦胚凝集素.结果此亲和色谱方法使纯化后的麦胚凝集素比其粗提液纯度提高约1 000倍,相对分子质量为20 420,pI为5.10.结论鸡卵黏蛋白亲和色谱法是一种经济适用的纯化麦胚凝集素的好方法.
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亲和色谱法从猪骨胶原蛋白酶解物中分离纯化血管紧张素转换酶抑制剂
目的从猪骨胶原蛋白酶解物中分离出高纯度的血管紧张素转换酶抑制剂.方法将胶原蛋白酶解物用双蒸水溶解,先上Sephadex G-25柱,用含有10mmol/L吡啶的0.6 mol/L醋酸溶液洗脱,收集对血管紧张素转换酶有抑制作用的峰值部分冻干;再上血管紧张素转换酶抑制剂亲和柱洗脱,测定各收集管洗脱液的比抑制活力,收集峰值部分冻干.结果亲和色谱柱洗脱液峰值管比抑制活力达1450u/mg,为粗提液的906倍,活力回收率为12.1%.结论利用亲和色谱法,能够从猪骨胶原蛋白酶解物中分离出高纯度的血管紧张素转换酶抑制剂.
关键词： 亲和色谱 胶原蛋白 酶解物 纯化 血管紧张素转换酶抑制剂 -
蛇毒纤溶酶的分离纯化及其溶栓作用
目的获得大量高纯度的蛇毒纤溶酶并进行药效实验.方法用离子交换柱色谱和单克隆抗体亲和色谱技术进行纯化,用体外和半体内血栓模型研究其抗血栓作用.结果得到纯度为95%以上的纤溶酶.结论纯化后的蛇毒纤溶酶具有显著的抑制血栓形成的作用.
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单克隆抗体SZ-95亲和色谱纯化人血小板第4因子
目的用单克隆抗体亲和色谱从人血小板破碎液中纯化血小板第4因子(PF4)方法将单克隆抗体SZ-95-IgG与溴化氰活化的Sepharose 4B凝胶连接成亲和色谱柱SZ-95-IgG-Sepharose 4B,人血小板破碎液经此亲和色谱柱上样后,经洗脱获得PF4,采用15%SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定其纯度,用点印迹鉴定其免疫活性结果SZ-95-Sepharose4B亲和色谱柱的偶联率为72%,每1 ml(约1×109个血小板)血小板破碎液中可以纯化到PF41 8ug,其相对分子量约为12 kD,经点印迹显示与单抗SZ-95反应显带结论用SZ-95-Sepharose4B亲和色谱柱纯化的PF4产品得率高、纯度高、活性好.
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蚯蚓纤溶酶的分离纯化及抗栓活性研究
目的摸索蚯蚓纤溶酶的分离纯化工艺和研究蚯蚓纤溶酶的抗血栓活性.方法采用分步盐析、透析、凝胶色谱和亲和色谱法分离纯化蚯蚓纤溶酶;此酶的体内抗栓活性检测采用动静脉旁路血栓形成抑制实验法.结果分离纯化得到的蚯蚓纤溶酶比活高,为1605 IU/mg;蚯蚓纤溶酶的体内血栓形成抑制效果比尿激酶作用显著.结论该法分离纯化工艺简单,特异性好,纯化的纤溶酶比活高;体内抗栓活性比尿激酶作用显著.
关键词： 蚯蚓纤溶酶 分离纯化 亲和色谱 A-V旁路血栓形成抑制实验 -
亲和色谱分离纯化低分子肝素
目的 探索亲和色谱纯化低分子肝素的方法.方法 以壳聚糖为载体,以抗凝血酶Ⅲ及凝血酶为配基分别制备亲和吸附剂,采用亲和方法分离纯化低分子肝素,并对两者的纯化效果进行比较.结果 前者制备的低分子肝素抗Ⅹa因子活性为173.9 IU/mg,比纯化前提高1.7倍;后者制备的低分子肝素抗Ⅹa因子活性为646.0 IU/mg,比纯化前提高6.3倍.结论 经壳聚糖-抗凝血酶Ⅲ纯化的低分子肝素其抗Ⅹa因子活性显著提高.
