弗林蛋白酶(furin)多肽抑制剂的合成研究

目的 以绿豆胰蛋白酶抑制剂(MBTI)Lys活性片段22肽为模板,设计能抑制弗林蛋白酶(furin)的多肽抑制剂.方法 根据furin的专一性底物的特定氨基酸序列来改造设计抑制剂,用Fmoc法固相合成了两条多肽抑制剂(MBI 13和MBI 14). 结果纯化的MBI13和MBI14经HPLC和质谱鉴定合成正确,对furin的抑制常数分别为:5.6×10-7 M和2.3×10-7 M.结论 以MBTI Lys片段为模板经过突变和优化设计,得到了较为理想的furin抑制剂,为进一步的药物设计提供依据.

采用两步凝胶吸附法制备人凝血酶原复合物的工艺研究

目的 应用两步凝胶色谱法制备高纯度、高安全性的人凝血酶原复合物(PCC)制剂.方法 检测合格的健康人血浆经离心去除冷沉淀后,采用DEAE-Sephadex A50进行吸附色谱,经洗涤、洗脱得到洗脱液,加入0.3%的磷酸三丁酯和1%的吐温80(S/D)进行病毒灭活;灭活后的制品再重新进行二次吸附色谱,洗涤、洗脱去除残留的S/D试剂的同时,进一步提高制品的纯度、效价等质量指标.结果 终制品的回收率达70% ,比活、S/D残留量等各项指标达到药典标准.结论 用所建立的工艺制备的PCC制剂的比活及安全性指标高于传统工艺制得产品.

从赤赤魟组织中分离到的福安肽的抗肿瘤活性的初步研究

目的 研究从赤魟组织中分离到的福安肽(Fuantai,FAT)的抗肿瘤活性及对促血管生成因子表达的影响.方法 MTT法检测FAT对体外培养的人癌细胞生长的影响;小鼠移植性肝癌(H22)模型用于检查FAT对肿瘤生长的影响;免疫组化法检查福安肽对癌组织促血管生成因子表达的影响.结果 FAT对体外培养的人早幼粒白血病细胞(HL-60)、人子宫颈癌细胞(HeLa)和人低分化鼻咽癌细胞(CNE-2Z)的生长无明显影响;FAT无论腹腔注射还是灌胃都显著抑制小鼠移植性肝癌的生长,且对小鼠体重增长无明显影响.当FAT的用量为50.0 mg/(kg·d) (ip或ig)共21 d对H22的抑制率分别为 67.5%和84.0%.免疫组化检测结果显示,FAT明显下调小鼠肝癌组织血管内皮细胞生长因子 ,碱性成纤维细胞因子和血小板衍生生长因子的表达.结论 FAT的抗肿瘤活性可能与其抑制肿瘤血管生成有关.

卵磷脂脂质体滴眼液治疗眼干燥症的研究

目的 研究卵磷脂(PC)脂质体滴眼液治疗兔眼干燥症的疗效,并探讨其流变学性质.方法 测定0.1%,0.2%和0.4%PC脂质体滴眼液的流变学性质,并通过建立兔眼干燥症模型, 考察 3种不同浓度的PC脂质体滴眼液的疗效.结果 3种不同浓度的 PC脂质体滴眼液均为非牛顿流体,且均可显著改善兔眼干燥症,PC在0.1%和0.2%浓度效果较好.结论 PC脂质体滴眼液可有效治疗兔眼干燥症,且与其独特的流变学性质有关.

甘草酸人工抗原的合成鉴定及免疫原性分析

目的 制备中药甘草的活性成分甘草酸(GA)的人工抗原及抗血清,为制备GA的单克隆抗体、并建立快速检测GA的酶联免疫吸附测定(ELISA)提供技术基础.方法 将GA与载体蛋白牛血清白蛋白(BSA)偶联起来制得完全抗原后,经基质辅助激光解吸飞行时间质谱鉴定其相对分子质量,用此抗原免疫BALB/c小鼠,制备抗血清,并通过间接ELISA法和竞争ELISA法检测其抗体效价和特异性.结果 合成的人工抗原GA-BSA 中GA与BSA的结合比约为7∶1;免疫小鼠得到特异针对GA的多抗血清,GA抗体的效价为1∶8 000.结论 成功地合成了GA的人工抗原,且该抗原有较好的免疫原性,可应用于建立GA的免疫分析方法.

海藻酸钠法固定化谷氨酸脱羧酶的研究

目的 研究海藻酸钠法固定化谷氨酸脱羧酶的适条件.方法 以海藻酸钠为载体,分别研究了海藻酸钠浓度、CaCl2浓度、固定化时间和固定化酶的适pH、适温度、适底物浓度及反复利用的稳定性.结果 适固定化条件为3%海藻酸钠、0.1 mol/L CaCl2、固定化时间6 h.固定化酶的适pH为5.0、适温度为42℃、适底物浓度1%,反应进行4次后一半的酶活损失,底物转化率在90%以上. 海藻酸钠法固定化谷氨酸脱羧酶可以很好的转化谷氨酸钠生成γ-氨基丁酸,具有实用的潜力.

一种新型蚯蚓脱氧核糖核酸酶酶学性质的研究

目的 研究蚯蚓组织中1种新型脱氧核糖核酸酶(EWD1)的主要酶学性质.方法 用S DS-PAGE凝胶电泳、质谱分析、毛细管等点聚焦电泳法和酶活性测定等方法.结果 EWD1的相对分子质量约为157 000.Mn2+、Ca2+是该酶的抑制剂,Mg2+对酶的活性基本上没有影响.该酶的适温度为37℃,适pH值为 5.2,等电点为6.12.以小牛胸腺DNA为底物,测得Km为1.58 mg/mL,Vmax为5.36 mg/(m L·min).结论 蚯蚓组织中发现的此种脱氧核糖核酸酶EWD 1具有特殊的酶学性质,明显区别于已知的脱氧核糖核酸酶类.

纤溶酶产生菌株BS-26的发酵工艺优化

目的 对纤溶酶产生菌株BS- 26发酵工艺进行优化.方法 通过单因素试验和正交试验,确定了摇瓶发酵的佳条件.结果 该菌株产纤溶酶佳的发酵条件为:3%糊精、1%酵母粉、0.02%CaCl2、0.07%MgSO4,初始pH 7.0,接种量为6%,装液量为70/250(mL/mL),摇床温度37℃,转速180 r/min,发酵时间60 h,在该条件下产酶酶活可达593.03 U/mL,是原发酵培养条件下产酶活力的4.5倍.结论 此发酵条件可以很好地提高纤溶酶的活力,为发酵规模的扩大奠定了基础.

丹皮酚抑制大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤脑组织细胞间黏附分子-1和血管细胞黏附分子-1的表达

目的 观察丹皮酚对大鼠脑缺血再灌注损伤后脑组织细胞间黏附分子-1(ICAM-1)和血管细胞黏附分子-1(VCAM-1) 表达的影响,以探讨其脑保护的作用机制.方法 线栓法制备大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型,大鼠脑缺血2 h再灌注24 h,采用Western blot及RT-PCR法观察大鼠脑组织ICAM-1、VCAM-1的蛋白及mRNA表达.结果 丹皮酚明显降低缺血区脑组织ICAM-1、VCAM-1的蛋白及mRNA的表达.结论 丹皮酚可能通过降低缺血区脑组织黏附分子表达发挥脑保护作用.

赤魟软骨黏多糖对家兔血脂水平和凝血时间的影响

目的 研究赤魟软骨黏多糖的降血脂和抗凝血活性.方法 观察赤魟软骨黏多糖对高脂家兔血脂的调节作用和正常家兔全血凝血时间的影响.结果 赤魟软骨黏多糖能显著降低高脂家兔血清总胆固醇(TC)、血清甘油三酯(TG)和血清低密度脂蛋白(LDL-C)含量, 提高血清高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)含量,对正常血脂家兔的胆固醇无明显影响,能显著延长家兔全血的凝血时间.结论 赤魟软骨黏多糖具有较强的降血脂和抗凝血活性.

肺癌靶向血栓蛋白hu3D3VH-tTF的表达及活性鉴定

目的 制备一种用于肺癌血管靶向栓塞治疗的融合蛋白hu3D3VH-tTF,并鉴定其生物学活性.方法 利用重叠PCR技术构建tTF与hu3D3VH的融合基因,克隆至表达载体pET22 b(+ ),在E.coli BL21(DE3)中表达,镍亲和色谱柱纯化目的 蛋白.ELISA检测融合蛋白hu3D3VH组分与肺腺癌细胞A549选择性结合活性,凝血实验和FⅩ活化实验鉴定融合蛋白 tTF组分的促凝血活性.结果 获得序列正确的hu3D3VH/tTF /pET22 b(+)重组子,融合蛋白在E.coli BL21(DE3)中高效表达.纯化后的融合蛋白与肺腺癌细胞A549具有选择性结合活性,并能活化FⅩ、有效促发血液凝固. 结论成功构建hu3D3VH/tTF/pET22 b(+)重组子,hu3D3VH/tTF 融合蛋白具有hu3D3VH的选择性结合能力同时具有TF的促凝血活性,为开展选择性肺肿瘤血管血栓性栓塞研究奠定了基础.

通关藤诱导白血病细胞U937,HL60细胞凋亡的实验研究

目的 探讨通关藤抑制白血病细胞增殖作用及其机制.方法 以不同浓度的通关藤提取物制剂处理白血病细胞U937、HL60,1～5 d,以四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测对细胞增殖的影响,以Annexin V/PI双染法检测细胞的凋亡程度,Western blot检测凋亡相关蛋白caspase3 ,PARP改变,以JC-1染色法检测线粒体跨膜电位(ΔΨm)水平.结果 通关藤提取物制剂呈时间和剂量依赖性抑制U937、HL60细胞增殖,50 μL/mL时能明显降低线粒体跨膜电位(ΔΨm),活化caspase 3,剪切PARP,诱导细胞凋亡.结论 通关藤提取物制剂对U937、HL60白血病细胞有显著的抑制和诱导凋亡作用,能通过降低线粒体跨膜电位途径触发白血病细胞凋亡.

长效人红细胞生成素的制备和质量控制进展

长效人红细胞生成素是一类刺激体内红细胞生成的蛋白类激素,与普通人红细胞生成素不同,其大大延长了体内半衰期 ,可减少注射次数,提高患者的依从性且具有更佳的疗效.此文综述了近几年长效人红细胞生成素的研究和质量控制进展.

超声对生物大分子的作用及其在透明质酸降解中的应用

此文介绍了超声波对生物大分子的作用,并综述了近年来超声不同作用机制在生物大分子方面的应用,重点介绍了目前超声降解透明质酸的情况.

硒化合物诱导肿瘤细胞凋亡的研究进展

硒化合物具有显著的抗癌作用,其抗癌作用是通过多种机制产生的.诱导肿瘤细胞凋亡是其抗癌作用主要的一个方面 ,硒化合物可以通过氧化应激、ROS介导、调控癌基因和抑癌基因的表达、调节细胞周期相关蛋白及酶的表达、激活caspase系列酶等途径来诱导肿瘤细胞凋亡.此文综述硒化合物诱导肿瘤细胞凋亡机制的研究现状与进展.

蛋白定向进化及应用进展

目的 作为对自然进化的体外模拟,定向进化是改进蛋白功能与活性的有效手段.定向进化的成功与否取决于突变体库的多样性以及筛选方法的效率.目前已发展出多种创造和筛选突变体的策略及手段,并将定向进化的对象从蛋白延伸到有机体,使定向进化在许多领域得到了广泛的应用.

单克隆抗体药物的研究进展

通过淋巴细胞杂交瘤技术或基因工程技术制备单克隆抗体药物,已经成为生物制药领域的一个重要方面,由于单克隆抗体药物专一性强、疗效显著,因此成为近年来研究的热点药物之一.此文就单抗药物的分类、应用进行了综述,并对其应用前景及存在的不足作了概述.

D-氨基葡萄糖盐酸盐体外抗肿瘤及其免疫调节作用

目的 研究D-氨基葡萄糖盐酸盐(GAH)体外抗肿瘤作用和免疫增强作用.方法 MTT法观察体外GAH对肿瘤细胞生长和小鼠淋巴细胞增殖的影响,酶联免疫法(ELISA)观察 GAH对淋巴细胞分泌细胞因子IL-2的影响.结果 GAH明显抑制SGC-7901细胞的生长,对HepG-2、LS-174细胞生长的抑制作用较弱.GAH具有有丝分裂原样的作用,能够诱导淋巴细胞增殖并且分泌IL-2.结论 GAH有一定的抗肿瘤作用和免疫增强作用.

短尾蝮蛇毒磷脂结合抗凝蛋白对家兔血液流变学的影响

目的 研究从短尾蝮蛇毒中纯化的磷脂结合抗凝蛋白(PBAP)对家兔血液流变学的影响.方法 采用LBY-N6A自清洗旋转式黏度计测量家兔全血黏度、红细胞压积等指标.结果 0.4 mg/kg PBAP注射于家兔耳缘静脉后显著降低低切、中切、高切变率下家兔的全血黏度,对红细胞压积也有显著影响(P<0.05).结论 短尾蝮蛇毒磷脂结合抗凝蛋白具有显著改善家兔血液流变的作用.

SPSS正交设计提取林蛙油多糖

目的 研究中性蛋白酶水解提取林蛙油多糖的佳工艺参数.方法 以料水比、中性蛋白酶浓度、水解时间和水解温度为考察因素,提取液中多糖含量为指标,通过SPSS软件设计L9(34)正交试验,并用SPSS进行数据处理.结果 通过正交实验,得出中性蛋白酶提取林蛙油多糖工艺条件为料水比1∶100、加酶量为5%、水解时间1 h、水解温度50℃.结论 运用SPSS软件设计L9(34)正交表并进行数据处理,大大方便了实验结果处理,使实验方便科学,得出中性蛋白酶水解提取林蛙油多糖的工艺.

石花多糖对辐射损伤小鼠防护作用的研究

目的 研究地衣类石花多糖对辐射损伤小鼠造血功能及DNA损伤的防护作用.方法 用内源性脾结节形成(CFU-S),骨髓有核细胞计数(BMNC),脾脏指数观察石花多糖50,80 mg/kg腹腔注射对137Cs γ射线照射小鼠造血功能的影响;单细胞凝胶电泳(SCGE)技术检测小鼠淋巴细胞照射后的DNA双链断裂,观察给药后小鼠DNA损伤修复情况.结果 照射前连续给药3 d,照后第7天受照小鼠的BMNC、CFU-S和脾指数与对照组相比有明显的增高;SCGE中各项指标显示,给药组的DNA损伤的修复明显增加,呈明显的量 -效关系.结论 石花多糖对辐射损伤小鼠具有良好的辐射防护作用.

胸腺五肽的波谱学解析与结构表征

目的 为多肽类化合物的NMR 解析提供理论基础和方法学依据.方法 利用NMR、2D NMR及 IR、UV、MS并借助1H-1H COSY、13C-1H COSY及DEPT实验技术详细研究了胸腺五肽的结构特征.结果 对胸腺五肽的氢谱和碳谱进行了完全归属.结论 胸腺五肽的结构得到确认并为多肽类药物的结构解析提供了有益的分析依据.

露点法测定透明质酸钠凝胶渗透压

目的 探讨透明质酸钠凝胶渗透压的测定方法.方法 用VAPRO 5520渗透压仪分别测定0.5 %,1.0%和2.3%透明质酸钠凝胶渗透压;比较0.5%透明质酸钠凝胶称量加样与取样器加样的测定结果.结果 0.5%,1.0%和2.3%透明质酸钠凝胶渗透压分别为295,312和330 mOsmol/kg,RSD分别为0.40%,0.18%和0.37%;称量加样与取样器加样测定结果相同.结论 VAPRO 5520渗透压仪能准确测定0.5%,1.0%和2.3%透明质酸钠凝胶渗透压.

《中国生化药物杂志》征稿简则