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膝沟藻毒素Gonyautoxins的分离纯化
目的从微小亚历山大藻(Alexandrium mimutum Halim)Amtk 2中分离纯化膝沟藻毒素gonyautoxins. 方法用凝胶色谱、离子交换色谱等方法从人工培养的微小亚历山大藻Amtk 2酸酒精萃取物中分离纯化膝沟藻毒素.结果从100 L Amtk 2培养液中获得(6.74±0.31)×109个藻细胞,其酸酒精萃取物经凝胶色谱分离首次在国内得到膝沟藻毒素GTX-4,GTX-1,GTX-3和GTX-2混合物(29.59±0.28) mg.从此混合物中取出4.06 mg经两次离子交换色谱纯化得到纯GTX-4(0.40±0.002) mg, GTX-1(5.95±0.03)×10-2 mg,GTX-3(6.92±0.05)×10-4 mg和GTX-2(0.11±0.005) mg.结论人工培养的微小亚历山大藻Amtk 2酸酒精萃取物通过凝胶色谱和两次离子交换色谱分离能够得到纯的膝沟藻毒素GTX-4,GTX-1,GTX-3和GTX-2.
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古糖酯的稳定性研究
目的探讨古糖酯的稳定性.方法本文采用凝胶色谱(HPGC),聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE),紫外扫描,明胶比浊法来考察古糖酯在高温、高湿、强光照射及加速条件下分子量和分子量分布宽度及样品中硫酸根含量的变化情况.结果这几种方法适用于古糖酯的稳定性考察,在高温60 ℃和80 ℃条件下样品有所降解,80 ℃条件下更为明显,其他条件下样品稳定性良好.结论古糖酯具有良好的稳定性.
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凝胶色谱法测定注射用硫酸头孢匹罗高分子杂质
目的:建立注射用硫酸头孢匹罗高分子杂质的测定方法.方法:采用Sephadex G-10凝胶高效液相色谱系统,以头孢噻肟钠对照品为替代对照品进行测定,按自身对照外标法进行计算.结果:注射用硫酸头孢匹罗高分子杂质含量小于0.04%.结论:方法简便,结果可靠,为注射用硫酸头孢匹罗高分子杂质的质量控制提供参考.
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双水相萃取-凝胶色谱联用法提取菲牛蛭中的水蛭素
目的 建立水蛭素的双水相萃取-凝胶色谱联用提取法.方法 以抗凝血酶活性单位(ATU)为指标,在优化双水相萃取工艺条件基础上,建立以广西菲牛蛭消化液为原料的聚乙二醇/硫酸铵双水相萃取-凝胶色谱联用提取水蛭素新工艺.结果 在所考察的实验范围内,水蛭素对照品双水相萃取佳工艺条件是:PEG 2000、( NH4)2SO4、NaCl质量分数依次为22％、20％、0.04％,萃取液温度35℃、pH 6.0；萃取物经凝胶色谱除杂以后,得到纯度较高的产品.实验建立的提取工艺处理水蛭素对照品ATU回收率达到81.92％,粗提液分离纯化及小规模工艺放大实验ATU回收率分别为80.34％、80.36％.所获产品比活性达到3 210.27 ATU·mg-1、不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳及光谱扫描结果与水蛭素对照品相同.结论 双水相萃取-凝胶色谱联用提取水蛭素效果较好.
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凝胶色谱法同时测定香菇多糖制剂中多糖分子量和含量
目的 建立一种同时测定香菇多糖制剂中多糖分子量分布和含量的凝胶色谱方法.方法 采用TSKgel G5000PWxl、G4000PWxl、G3000PWxl (7.8 mm×30 cm,7μm)凝胶色谱柱串联,以右旋糖苷为对照品,0.1 mol· L-1乙酸钠-乙酸水溶液为流动相,通过示差检测器检测,柱温为60℃,流速为0.6 mL·min-1,进样量为100 μ上L.结果 Dextrans的分子量对数logM/W与峰保留时间在22～47 min内呈良好的线性关系(r=0.9990)；多糖进样量在20.12～201.20 μg范围内与峰面积呈良好的线性关系(r =0.9999),加样回收率平均值为106.33％,RSD=1.55％(n=9).结论 本方法简便、准确、重复性好,可用于香菇多糖注射制剂的质量控制.
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注射用头孢唑林钠中高分子杂质的检查法
目的对注射用头孢唑林钠中高分子杂质进行分离分析.方法采用以Sephadex G-10为填料的凝胶色谱系统,以自身对照外标法对头孢唑林钠中高分子杂质进行定量测定.结果缔合物在Sephadex G-10凝胶色谱系统中的色谱行为和高分子杂质一样,都在Kav=0处表现为单一的色谱峰,可精确对高分子杂质峰进行定量.结论方法简便,结果可靠.
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应用中空纤维柱和凝胶色谱纯化鸡胚流感病毒
目的 研究鸡胚尿囊腔培养流感病毒的纯化方法.方法 采用中空纤维柱超滤、病毒裂解和两次Sepharose 4FF凝胶色谱纯化流感病毒.结果 通过中空纤维柱超滤可去除76.53％～93.66％卵清蛋白,再通过两次Sepharose 4FF凝胶色谱纯化,流感病毒样品总蛋白含量与血凝素含量比值小于4.5,卵清蛋白含量小于500 ng/mL,SDS-PAGE电泳和Western免疫印迹的电泳条带和血凝素特异性条带与英国国家生物制品检定所(NIBSC)的标准品一致.结论 该工艺纯化的流感病毒的纯度符合《中国药典》2010版的要求.
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采用两步凝胶吸附法制备人凝血酶原复合物的工艺研究
目的 应用两步凝胶色谱法制备高纯度、高安全性的人凝血酶原复合物(PCC)制剂.方法 检测合格的健康人血浆经离心去除冷沉淀后,采用DEAE-Sephadex A50进行吸附色谱,经洗涤、洗脱得到洗脱液,加入0.3%的磷酸三丁酯和1%的吐温80(S/D)进行病毒灭活;灭活后的制品再重新进行二次吸附色谱,洗涤、洗脱去除残留的S/D试剂的同时,进一步提高制品的纯度、效价等质量指标.结果 终制品的回收率达70% ,比活、S/D残留量等各项指标达到药典标准.结论 用所建立的工艺制备的PCC制剂的比活及安全性指标高于传统工艺制得产品.
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海带硫酸多糖的提取、纯化及其理化分析
目的研究海带硫酸多糖(LPS)的提取制备及其组分的纯化和理化性质.方法采用酶解法从海带提取制备LPS,海带浆加入纤维素酶、半纤维素酶、果胶酶和蛋白酶,50℃水解4 h.取滤液加入氯化钙,离心去除海藻酸钙.取上清液加入十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)与LPS结合沉淀,离心收集CTAB-LPS沉淀物.加入氯化钙溶液进行盐解,将LPS游离释放出来,加入乙醇使LPS析出.离子交换色谱和凝胶过滤色谱法分离纯化其多糖组分.结果酶解提取法的收率为5‰,色谱法分离得到4个主要多糖组分,测定其分子量分别为210、120、400和140 kD.酶解法的提取收率高于水煮法.结论 LPS的开发具有广阔的前景.
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阿莫西林中高分子杂质的测定与质量分析
目的 比较不同厂家阿莫西林原料、胶囊、混悬剂中高分子杂质的含量.方法 采用Ohpak SB-802.5HQ(聚合基柱)高效液相凝胶色谱系统进行分离分析.结果 21批阿莫西林样品中高分子杂质的测定结果均为1%以下.结论 国产与进口阿莫西林中的高分子杂质含量无显著差异.
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自身对照外标法测定头孢唑啉钠的高分子杂质含量
为了解和控制β-内酰胺类抗生素产品中高分子杂质的含量,本文采用Sephadex G-10凝胶色谱系统,以自身对照外标法对头孢唑啉钠高分子杂质进行了定量测定,结果表明缔合物在Sephadex G-10凝胶色谱系统中和高分子杂质具有相似的色谱行为,即在Kav＝0处表现为单一的色谱峰,可精确对高分子杂质峰进行定量.
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凝胶渗透色谱净化-气相色谱法测定酱腌菜中山梨酸和苯甲酸
目的:建立凝胶渗透色谱净化-气相色谱法测定酱腌菜中山梨酸和苯甲酸的方法.方法:样品中山梨酸和苯甲酸经过乙醚提取,凝胶渗透色谱净化,毛细管柱(FFAP,30 m×0.32mm×0.25μm)分离后,FID检测器检测.结果:山梨酸和苯甲酸在50μg/ml～800μ/ml时与峰面积有良好的线性关系(r>0.999),检出限(3S/N)分别为0.55 mg/kg和0.84 mg/kg,加标回收率为82.2%～91.7%,相对标准偏差(n=3)为0.5%～5.5%.结论:该方法能满足酱腌菜中山梨酸、苯甲酸的测定要求.
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凝胶渗透色谱-气相色谱法测定蔬菜中24种有机磷和氨基甲酸酯类农药残留
目的:建立蔬菜中24种有机磷和氨基甲酸酯类农药残留的检测新方法.方法:样品用乙腈提取,经SX-3凝胶色谱柱净化,用气相色谱法进行检测.结果:24种有机磷和氨基甲酸酯类农药分离良好,在蔬菜中的低检出浓度为0.01～0.02 mg/kg,在蔬菜中3个浓度添加水平的平均回收率为70.1%～113.4%,相对标准偏差(RSD)为1.8%～12.4%.结论:方法准确,杂质干扰少,操作简便,适用于蔬菜样品中农药多残留的检测.
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凝胶渗透色谱净化-气相色谱-质谱联用法测定焙烤食品中的富马酸二甲酯
目的 建立凝胶渗透色谱净化-气相色谱-质谱联用法测定焙烤食品中富马酸二甲酯的方法.方法 焙烤食品中的富马酸二甲酯用乙酸乙酯超声提取后,用冷冻离心机离心,旋转蒸发仪浓缩,再经凝胶渗透色谱净化后,以气相色谱-质谱法进行定性分析和定量分析.结果 富马酸二甲酯浓度为0.02 μg/ml ～ 5.0 μg/ml时,浓度和峰面积具有良好的线性关系,标准曲线回归方程为y=1.071x-0.044 18,相关系数(r)为0.999 99,检出限为0.012 mg/kg,加标回收率为62.0％ ～ 95.0％,相对标准偏差(RSD)为2.1％ ～5.0％.结论 该方法的精密度和准确度符合分析的要求,且操作简便,为焙烤食品中富马酸二甲酯含量的检测提供了很好的依据.
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凝胶色谱-超高效液相色谱法测定食品中20种常见非食用色素
目的 建立凝胶色谱-超高效液相色谱法(GPC-UPLC)测定食品中20种常见非食用色素的含量.方法 食品样品经环己烷提取,离心后取上清液通过全自动凝胶色谱仪净化浓缩,净化液经0.45 μm滤膜过滤,流动相乙腈-0.1％甲酸溶液,梯度洗脱,流速0.3ml/min,采用Acquity UPLC BEH C18(50 mm ×2.1 mm,1.7μm)柱分离,DAD检测器,检测波长210 nm～800 nm,以峰面积标准曲线法定量.结果 20种色素在15 min内实现完全分离,线性范围为1μg/m1～40 μg/ml,相关系数0.879～1.000,检出限:0.01 mg/kg～0.3 mg/kg;回收率为60.3％ ～ 103.2％.结论 该方法可靠、准确、灵敏度高,适合测定食品中的20种非食用色素的含量.
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硫酸软骨素注射液小分子杂质检查方法研究
目的:建立硫酸软骨素注射液小分子杂质测定方法.方法:采用凝胶色谱与示差检测器考察硫酸软骨素注射液的小分子杂质含量,同时串连二极管阵列检测器以考察其各组分的纯度和组成.结果:硫酸软骨素注射液样品中小分子杂质得到有效分离,其Mw为2521,Mn为1763,DAD检测证实它们紫外光谱与硫酸软骨素近似.结论:本方法可作为硫酸软骨素注射液小分子杂质的检测方法.
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次氯酸对人血清白蛋白的氧化修饰影响及与高级氧化蛋白产物的关系
目的 研究次氯酸对人血清白蛋白(HSA)的氧化修饰影响及与高级氧化蛋白产物(AOPPs)之间的关系.方法 有氧条件下在恒定浓度的HSA(60mg/ml)内加入不同浓度次氯酸(0、1、5、10、20、30、40、50、60mmol/L,终浓度),观察氧化剂对HSA的修饰作用.凝胶排阻色谱法检验HSA氧化修饰结果,在线光谱扫描(190nm～400nm)分析修饰产物的光谱特性.结果 次氯酸可氧化修饰人血清白蛋白,其修饰产物主要为二聚体HSA和六聚体HSA.发现次氯酸对HSA单体和HSA二聚体的氧化修饰为一级反应;对诱导生成的AOPPs为准一级反应;而对诱导生成的HSA六聚体则为二级修饰反应.同时发现白蛋白对AOPPs的主要贡献者是六聚体形式的HSA,光谱分析表明HSA聚集体的大吸收峰发生红移,提示HSA聚集体是由于蛋白中的酪氨酸残基通过氧化交联方式而聚集形成的.结论 HSA经次氯酸处理后主要发生了蛋白聚集.而对AOPPs的主要贡献者是六聚体形式的HSA.
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超声处理对β-内酰胺类抗生素高分子杂质含量的影响
目的:考察超声前处理方法对β-内酰胺抗生素高分子杂质含量的影响.方法:采用葡聚糖凝胶(Sephadex)G-10高效液相色谱系统对不同厂家的注射用头孢曲松钠和阿莫西林胶囊进行分析.结果:采用超声前处理的方法可导致注射用头孢曲松钠和阿莫西林胶囊的高分子杂质含量出现不同程度的降低(5.5%～14.8%).结论:检测β-内酰胺类抗生素的高分子杂质含量时应尽量避免强烈的超声处理.
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阿莫西林胶囊聚合物杂质测定中的异常情况研究
目的 研究阿莫西林胶囊聚合物测定中出现的异常情况.方法 按照2005年版<中国药典>规定的分子排阻色谱法原理,采用高效液相色谱(HPLC)法和AKTATMLC抗生素高分子专用分析系统两种方法进行分析.结果与结论 采用HPLC法时聚合物杂质含量超出药典规定范围,采用AKTATMLC抗生素高分子专用分析系统法进行复核时出现双杂质峰现象,即聚合物杂质峰出现异常分离情况,以第1个杂质峰作为聚合物杂质进行计算,发现聚合物杂质含量小于0.2%,在药典规定范围内.结论有条件的实验室应使用AKTATMLC抗生素高分子专用分析系统与较大柱床体积的色谱柱来检查阿莫西林胶囊聚合物,检查时若出现聚合物杂质峰异常分离,应以第1个杂质峰作为聚合物杂质进行计算.
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注射用头孢哌酮钠舒巴坦钠中高分子杂质的含量测定
目的:建立注射用头孢哌酮钠舒巴坦钠中高分子杂质含量的测定方法.方法:以葡聚糖凝胶Sephadex G-10(粒度40～120μm)为凝胶柱;洗脱剂为pH=7.0的0.01 mol/L磷酸盐缓冲液;洗脱速度1.0 mL/min;上样量为200μL;用BP300-B型高分子杂质分析仪检测.结果:注射用头孢哌酮钠舒巴坦钠中高分子杂质的分离令人满意.结论:方法可行.
关键词： 注射用头孢哌酮钠舒巴坦钠 高分子杂质 含量测定 凝胶色谱
