转基因牛乳中重组人乳铁蛋白的仿生亲和纯化

目的 从转基因牛乳中亲和纯化重组人乳铁蛋白.方法 从仿生亲和介质库中筛选亲争配体,进行重组人乳铁蛋白的纯化研究.结果 筛选出可以特异性结合重组人乳铁蛋白的固定化β-丙氨酸亲和配体,从转基因牛乳中一步纯化的重组人乳铁蛋白纯度为95.2%,蛋白回收率可达81.9%.经放大实验表明该亲和纯化工艺适合工业上大规模纯化乳铁蛋白.结论 固定化β-丙氨酸可从转基因牛乳中纯化出高纯度重组人乳铁蛋白,工艺适合工业化生产.

阳离子PLGA载基因纳米粒的初步研究

目的 制备并评价阳离子PLGA载基因纳米粒(pDNA-CTAB-NPs).方法 纳米沉淀法制备空白阳离子PLGA纳米粒(CTAB-NPs),与报告基因pEGFP复合,考察其理化性质、抗核酸酶降解能力、体外释药特性、细胞毒性及其在A549细胞中的转染情况.结果 pDNA-CTAB-NPs呈球形或类球形,平均粒径175.5 nm,Zeta电位+12.54mV,pDNA结合充分(95%),抗核酸酶降解能力强,具有缓释效果,符合Higuchi释放动力学方程(r=0.997 7),细胞毒性较低,能在A549细胞中表达.结论 pDNA-CTAB-NPs是一种制备工艺简单,性能良好,极富潜力的非病毒纳米基因载体.

梯度洗脱高效液相色谱法检测注射用辅酶A有关物质

目的 建立注射用辅酶A有关物质的测定法.方法 采用Hypersil ODS色谱拄,以磷酸盐缓冲液(pH7.0)与乙腈为流动相梯度洗脱;检测波长259 nm,柱温25℃,流速1.0 mL/min.结果 在此条件下,辅酶A与有关物质得到有效分离,辅酶A、5'-磷酸腺苷、氧化型辅酶A和3'-脱磷辅酶A的检测限分别为0.01 u,0.15 ng,50 ng和100 ng.结论 此法专属、灵敏、准确,适用于药品的质量控制.

牛黄解毒片中不同单味组分对雄黄可溶性砷含量影响的比较研究

目的 研究牛黄解毒片中各单味组分对雄黄可溶性砷含量的影响.方法 采用雄黄与牛黄解毒片中的7种单味药按牛黄解毒片处方比例分别组方分为9组供试品并经人工胃液处理后,用分光光度法分别测定可溶性砷的含量.结果 与雄黄组相比,雄黄与处方中各组分单独组方后测得的可溶性砷含量均有不同程度降低.其中大黄+雄黄组和甘草+雄黄组使可溶性砷含量减少为84.9%和81.1%,而冰片+雄黄组等影响不显著.结论 牛黄解毒片中的大黄、甘草等与雄黄配伍能较显著地抑制雄黄中可溶性砷的溶出,为进一步探讨雄黄复方中影响可溶性砷盐的主要物质提供参考依据.

高速逆流色谱法分离纯化延胡索乙素和原阿片碱

目的 确定高速逆流色谱法分离纯化延胡索乙素和原阿片碱的条件.方法 采用TBE300A型高速逆流色谱仪,以分配系数和分相时间为依据设计一组溶剂体系,初步确定适宜的溶剂体系;根据高速逆流色谱出峰数目及分离度确定较佳的溶剂体系和工作条件,并测定所收集峰的各组分的纯度.结果 石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水(22:25:23:17)为溶剂体系,流速为2.0 mL/min,仪器转速800 r/min,温度25℃,从延胡索总碱中可一步纯化得到原阿片碱和延胡索乙素,得率分别为16.9%和14.7%,纯度分别为99.3%和98.8%.结论 该溶剂体系分离结果 可靠,可作为延胡索乙素、原阿片碱化学对照品的制备分离方法 .

反相离子对HPLC法测定盐酸二甲双胍中双氰胺的含量

目的 建立反相离子对HPIE法测定盐酸二甲双胍中双氰胺含量的方法 .方法 采用Agilent HC-C18(2)色谱柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),以甲醇-10 mmol/L庚烷磺酸钠溶液(含0.8%三乙胺,用H3PO4调pH 3.0)(15:85)为流动相;流速:1.0 mL/min;检测波长:218 nm;柱温:30℃.结果 反相离子对HPLC法测定盐酸二甲双胍中双氰胺含量的线性范围为0.01～26.12μg/mL;相关系数r=0.999 9;重复性的RSD为1.8%;精密度RSD为1.6%;高、中、低3种浓度的加样回收率分别为98.8%,102.1%,103.6%;RSD分别为0.8%,1.2%.0.9%.结论 此法简便、快速、准确、专属性好.

rHAP在大肠杆菌中的诱导条件优化

目的 研究用乳糖替代异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)作为诱导剂进行重组rHAP的表达.方法 研究了rHAP基因工程大肠杆菌的生长、工程茵表达rHAP时IPTG诱导表达的起始工程茵浓度、诱导物IPTG和乳糖的用量及乳糖诱导时间与rHAP表达水平之间的关系.结果 在摇瓶实验中,通过优化,选择在培养物的A560值达到3.0时进行诱导剂诱导可以使重组蛋白的表达实现大化;使用乳糖进行诱导,在浓度0.5 g/L时可以使rHAP的表达量与1 mmol/L的IPTG诱导时相当;诱导时间控制在3 h可使目的 蛋白的产生量达到大,能够占到总可溶性蛋白的20%.结论 获得了使用乳糖作为诱导剂获得rHAP的适诱导条件,降低了成本,为规模化生产打下了基础.

望江南葸醌苷对小鼠免疫功能的影响

目的 探讨望江南蒽醌苷(AG)对环磷酰胺(CTX)造成的免疫低下小鼠的保护作用.方法 体外,将小鼠胸腺和脾淋巴细胞与不同浓度的AG共培养,用MTT法检测AG对胸腺和脾淋巴细胞增殖的影响;体内,腹腔注射CTX形成免疫抑制模型.结果 体内试验中,与模型对照组小鼠相比,能显著升高外周血的白细胞数.增强腹腔巨噬细胞的吞噬功能,能促进胸腺/脾淋巴细胞增殖,增加胸腺指数和脾指数.结论 AG具有免疫增强作用.

s-油酰丙醇胺对人脐静脉内皮细胞黏附分子表达的影响

目的 探讨s-油酰丙醇胺对用肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导的人脐静脉内皮细胞黏附分子(VCAM-1,I-CAM-1,E选择素)表达的影响.方法 从新鲜的脐带中分离出人脐静脉内皮细胞,培养至3~9代,用不同浓度的s-油酰丙醇胺(10,50.100 μmol/L)孵育12 h后,用TNF-α(20 ng/mL)孵育8 h,采用荧光实时定量PCR和细胞酶联免疫吸附试验分别检测VCAM-1,ICAM-1,E选择素的mRNA及蛋白的表达,同时采用细胞黏附实验检测其对细胞黏附的影响.结果 相对于正常的人脐静脉内皮细胞,TNF-α诱导后的人脐静脉内皮细胞黏附分子(VCAM-1,ICAM-1,E-选择素)的表达明显增加.s-油酰丙醇胺可以显著的抑制VCAM-1的表达,并呈现出一定的剂量依赖性,而且对人急性单核细胞性白血病细胞(THP-1)的黏附也有明显的抑制作用,但对ICAM-1,E-选择素的表达却没有影响.结论 s-油酰丙醇胺和大多数的PPAR α激动剂一样,能够抑制慢性炎症,减少单核细胞的黏附,抑制VCAM-1的表达,而对急性炎症没有作用,如对E-选择素的表达无影响.

乌司他丁对大鼠脑缺血再灌注后海马突触功能的保护作用

目的 探讨乌司他丁在大鼠脑缺血再灌注损伤中对海马突触素水平及学习记忆的影响.方法 线栓法制备大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型.于再灌注3,6,12,24,48,72和168 h,采用免疫组化和图像分析技术分析海马突触素的表达.另取大鼠进行Morris水迷宫测试.结果 乌司他丁显著升高大鼠海马突触素免疫反应产物的校正光密度值,逃避潜伏期缩短,平台象限距离百分比增加,穿过平台次数增加.结论 乌司他丁能增强缺血再灌注损伤大鼠认知能力,上调突触素的表达是其可能机制之一.

溴化氰切割融合蛋白条件的研究

目的 研究不同因素对溴化氰切割融合蛋白的影响.方法 将含有pThioHisA-G13重组质粒的BL21工程茵,经IPTG诱导后,超声破碎,分离并溶解包涵体,再选择不同量的溴化氰、酸浓度及不同溶剂等条件进行溴化氰切割试验,Tricine-SDS-PAGE检测切割效果.结果 溴化氰的量,酸浓度及不同溶剂对溴化氰切割包涵体的效果均有影响.结论 高效率的切割需要在酸性条件下进行;以尿素作为促溶剂比70%的甲酸更有利于小肽的切割.

高效液相色谱法测定首乌丸中大黄素的含量

目的 建立首乌丸中大黄素含量的测定方法 .方法 运用正交实验优化样品处理的提取条件,采用高效液相色谱法检测大黄素含量,色谱柱为UltimateXB-C18(5 μm,250 mm×4.6 mm),流动相为甲醇-0.1%磷酸溶液(87:13),检测波长254 nm.结果 大黄素在1.89～60.37μg范围内与峰面积呈良好的线性关系,r=0.999 8,游离大黄素和总大黄素的平均加样回收率分别为100.16%和99.87%,RSD分别为0.91%和1.50%.结论 此法简便、准确、快捷,可用于首鸟丸的质量控制.

不同分子量和脱乙酰度壳聚糖用作组织工程材料的性质评价

目的 对不同相对分子质量(Mr)和脱乙酰度的壳聚糖用于组织再生修复的前景进行评价.方法 MTT法测定Mr,为5万,20万,50万,100万,脱乙酰度分别为85%和95%的8种壳聚糖对骨髓间充质干细胞的亲和性,测定它们在体外、体内的降解特性,并通过检测接触角考察了它们的亲水性.结果 在所研究的8种壳聚糖中,Mr为50万和100万,脱乙酰度为95%的壳聚糖更利于骨髓间充质干细胞的黏附生长,亲水性较强,在体内埋植8～16周后仍能保持形态完整,利于种子细胞生存.结论 Mr为50万和100万,脱乙酰度为95%的壳聚糖能够与骨髓间充质干细胞复合用于组织再生修复.

高效液相色谱法考察蒜酶活力测定中的影响因素

目的 考察底物蒜氨酸纯度对蒜酶活力测定数值的影响,比较催化温度为25,35,37℃时蒜酶活力测定数值的差异.建立可行的蒜酶活力检测方法 .方法 采用高效液相色谱法,以蒜氨酸的减少量计算蒜酶活力.结果 进行蒜酶活力测定时,底物蒜氨酸的纯度应不小于90%,确定蒜酶催化反应温度为35℃.结论 建立了以95%蒜氨酸为底物,催化温度为35℃的蒜酶活力测定条件.

还原性谷胱甘肽、抗坏血酸对酪氨酸酶的抑制作用

目的 研究还原性谷胱甘肽(GSH)与抗坏血酸(VC)对酪氨酸酶活性的抑制作用.方法 从新鲜雪梨中提取酪氨酸酶,分别以邻苯二酚、左旋多巴为底物,观察GSH、VC对酪氨酸酶活性的影响.结果 VC浓度为0.33mmol/L时,对酪氨酸酶的抑制率达到91.48%;GSH浓度为0.27 mmol/L时,对酪氨酸酶的抑制率达到57.42%.当GSH和VC浓度分别为0.1和0.13 mmol/L时,两者的联合作用对酪氨酸酶的抑制率可高达79.85%.结论 GSH与VC对酪氨酸酶都有较高的抑制作用,它们联合作用于酪氨酸酶比单独作用的抑制率有明显提高.

哌嗪化合物作为酶抑制剂的研究进展

此文综述了哌嗪化舍物作为酶抑制剂在抗2型糖尿病、抗真菌、治疗勃起功能障碍、抗肿瘤、治疗阿尔茨海默病、与抗血栓等方面的研究开发情况.

透明质酸生物合成的研究进展

此文综述了透明质酸合酶分子生物学研究概况,并对利用基因工程改造生产茵株的研究现状及发展趋势进行了论述.

鹿茸的活性物质及药理作用的研究进展

对近年来鹿茸的活性物质及其对保护损伤心肌,治疗神经系统损伤和骨质疏松,抗肝纤维化、抗关节炎、抗缺氧、抗疲劳等方面药理作用的研究进展进行综述,为进一步开发利用鹿茸提供参考.

蛋白质组学技术在硒化合物作用机制研究中的应用

硒是人体中非常重要的微量元素,其化合物的存在形式是多种多样的.硒具有很强的抗氧化、防癌抑癌作用,其作用是通过多种机制产生的.蛋白质组学的产生与发展为在蛋白质水平上探索硒化合物时机体的作用模式、功能机理、调节调控方式提供了技术支持,从而为病理研究、药物筛选、新陈代谢途径研究等提供依据.

普鲁兰多糖衍生物的制备及其应用

普鲁兰多糖是一种有着广泛应用的微生物支链淀粉,为了扩大其应用范围,人们对其衍生化做了大量研究,此文综述了普鲁兰多糖衍生物的制备及应用.

以壳聚糖为载体的口服基因药物

口服给药由于服用方便、病人依从性好、治疗费用低等优势一直是研究的热点.基因药物临床试验的成功再次激起了人们对基因药物口服给药的研究热情.以壳聚糖为载体的口服基因药物临床前研究已取得长足进展,但要成功地应用于临床,尚需对水溶性、胃肠道稳定性、膜通透性、转染效率等关键问题进行深入研究.

2009年度全国医药学术交流会暨临床药学与药学服务研究进展培训班通知