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基因工程茵文献资料
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rHAP在大肠杆菌中的诱导条件优化
目的 研究用乳糖替代异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)作为诱导剂进行重组rHAP的表达.方法 研究了rHAP基因工程大肠杆菌的生长、工程茵表达rHAP时IPTG诱导表达的起始工程茵浓度、诱导物IPTG和乳糖的用量及乳糖诱导时间与rHAP表达水平之间的关系.结果 在摇瓶实验中,通过优化,选择在培养物的A560值达到3.0时进行诱导剂诱导可以使重组蛋白的表达实现大化;使用乳糖进行诱导,在浓度0.5 g/L时可以使rHAP的表达量与1 mmol/L的IPTG诱导时相当;诱导时间控制在3 h可使目的 蛋白的产生量达到大,能够占到总可溶性蛋白的20%.结论 获得了使用乳糖作为诱导剂获得rHAP的适诱导条件,降低了成本,为规模化生产打下了基础.
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产肌酐水解酶基因工程菌的构建
从恶臭假单胞菌基因组中PCR扩增到肌酐水解酶基因,并构建成含有肌酐水解酶基因的重组质粒PMG36e-C,重组质粒PMG36e-C电转化保加利亚乳酸成功构建了含肌酐水解酶的基因工程乳酸茵.SDS-PAGE测定基因工程茵合成的肌酐水解酶亚基分子量约为28 KD,在体外测定茵酶液活性可达0.19 u/mL,为开发具有分解肌酐的对尿毒症有治疗作用的可食用基因工程菌奠定基础.
