中国生化药物杂志
Chinese Journal of Biochemical Pharmaceutics 중국생화약물잡지
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来源于豆豉的纳豆激酶基因在大肠杆菌中活性表达研究
目的构建大肠杆菌表达质粒pTYB102,实现纳豆激酶基因(nattokinase gene)在大肠杆菌中高活性表达.方法以纳豆芽孢杆菌基因组DNA为模板,采用PCR方法分别扩增编码前肽、成熟肽的序列(pro-NK),构建大肠杆菌表达质粒pTYB102,转化大肠杆菌ER2566.在IPTG诱导下,分别在37℃(2 h)、30℃(3 h)和15℃(14 h)培养.结果pTYB102能表达有活性的纳豆激酶.SDS-PAGE表明,15℃表达杂蛋白质更少.结论证明具有77个氨基酸序列的前肽(pro序列)对纳豆激酶的活性表达是必不可少的.
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苦参碱与氧化苦参碱抑制HepG2细胞增殖的对比研究
目的比较研究苦参碱与氧化苦参碱体外抑制肝癌HepG2细胞增殖的效果并初步探讨其机制.方法不同剂量苦参碱与氧化苦参碱注射液处理细胞,细胞计数及溴化四唑蓝实验观察细胞增殖抑制;光镜观察细胞形态改变;流式细胞仪和Tunnel实验观察细胞凋亡并检测细胞周期;免疫组化观察凋亡相关基因Bax与Bcl-2的表达.结果0.8 g/L苦参碱处理细胞3 d即可明显抑制HepG2细胞增殖,细胞存活率为51%;1.5g/L苦参碱可明显诱导细胞凋亡,用药后大量细胞被阻滞于S期;1.5 g/L的苦参碱使HepG2细胞凋亡相关基因Bax表达增强,Bcl-2的表达减弱.与苦参碱同浓度的氧化苦参碱不能抑制细胞增殖,1.5 g/L氧化苦参碱处理细胞3 d,细胞存活率仍为84.2%;氧化苦参碱的浓度增至8.0g/L时才出现明显凋亡峰.结论体外苦参碱诱导HepG2细胞凋亡能力强于氧化苦参碱,并调控了凋亡相关基因的表达,而氧化苦参碱浓度6倍于苦参碱时细胞才出现凋亡.
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细脚拟青霉总多糖对人外周血单核细胞TNF-α水平及增殖活性的影响
目的提取分离细脚拟青霉总多糖(PtPs),探讨其对人外周血单核细胞(PBMC)的调节作用.方法采用水提醇沉淀法提取PtPs成分;用不同浓度的PtPs单独或协同脂多糖(LPS)在体外刺激PBMC,酶联免疫法测定TNF-α的水平,溴化四唑蓝法测定增殖活性.结果所得PtPs制品的纯度为76.1%;适当剂量的PtPs(100～500μg/ml)能够单独或协同LPS提高PBMC对TNF-α的分泌;还可剂量依赖性地促进PBMC的增殖活性.结论PtPs对体外培养的PBMC具有激活作用,可能是发挥免疫药理作用的主要活性成分.
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南蛇勒蛋白对黑色素瘤细胞的抑制及分化作用
目的从南蛇勒中分离纯化具有抑制黑色素瘤作用的蛋白质--南蛇勒蛋白(CMP),并对黑色素瘤细胞KI735M2增殖的抑制及细胞的分化进行研究.方法采用盐析、凝胶色谱的方法对CMP进行分离纯化,溴化四唑蓝法检测CMP对黑色素瘤细胞KI735M2增殖的抑制作用的量效和时效关系,形态学观察法检测细胞的分化.结果CMP相对分子质量为19 800,22.0μg/ml CMP抑制黑色素瘤细胞增殖60%(P＜0.05),使细胞增殖第5天处于停顿,抑制率为96%(P＜0.05),不同浓度的CMP使黑色素瘤细胞形成具有分化特征的树突状结构.结论CMP对黑色素瘤细胞KI735M2的增殖具有抑制作用.
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碱性成纤维细胞生长因子对培养大鼠胚胎脊髓神经细胞的作用
目的探讨碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对大鼠胚胎脊髓神经细胞的作用.方法在培养孕18 d的大鼠胚胎脊髓神经细胞中加入bFGF,通过培养细胞并计数存活的脊髓神经细胞集落数,检测超氧化物歧化酶(SOD)的活力及丙二醛的含量,并观察bFGF对脊髓神经细胞生长发育的影响.结果bFGF可促进脊髓神经细胞分化、增殖,SOD活力、丙二醛含量明显变化,脊髓神经细胞胞体较大、突起较长,培养14 d后脊髓神经细胞的数量也明显增高.结论bFGF能促进脊髓神经细胞生长发育,增加脊髓神经细胞的胞体和突起长度,增强脊髓神经细胞内SOD活力,降低丙二醛含量.
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SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛇毒抗瘤蛋白的相对分子质量
目的建立改进的低分子SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛇毒抗瘤蛋白的相对分子质量(Mr).方法考察不同因素对电泳结果的影响,对Mr标准进行直线回归分析,确定蛇毒抗瘤蛋白中组分的Mr.结果测得各条带的Mr分别为:23 500、15400、13400、11 300、9 300、8 000.结论此法供试品处理方便,用量少,在含6 mol/L尿素的分离胶(交联度为16.5%,丙烯酰胺总浓度为6%)中能同时显示中、低Mr的条带,是一种测定中、低Mr的较好方法.
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重组人胰高血糖素样肽-1对实验性糖尿病大鼠血糖的影响
目的观察重组人胰高血糖素样肽-1[rhGLP-1(7-36)NH2和rhGLP-1(7-37)]对实验性糖尿病大鼠模型血糖和血浆胰岛素水平的影响.方法正常SD大鼠按3.24g/kg腹腔注射50%葡萄糖,诱发暂时性高血糖动物模型.腹腔注射不同剂量(20、40、80μg/kg)rhGLP-1(7-36)NH2和rhGLP-1(7-37),间隔取血测定血糖与血浆胰岛素水平.正常SD大鼠按60 mg/kg腹腔注射链脲佐菌素,建立实验性1型糖尿病大鼠模型.静脉输注rhGLP-1(7-36)NH2[4.0ng/(kg·min)]120 min并观察血糖变化.结果腹腔注射40、80 μg/kg rhGLP-1(7-36)NH2和rhGLP-1(7-37)处理组大鼠的血糖、血浆胰岛素水平与对照组之间的差别具有非常显著性意义(P＜0.001),且呈现一定的量效关系.二者之间促胰岛素分泌和降血糖活性差异无显著性.静脉输注rhGLP-1(7-36)NH2 60min后,血糖水平(17.04±1.31)mmol/L(P＜0.05),120min后血糖水平(11.98±1.05)mmol/L(P＜0.001).结论rhGLP-1能显著改善实验性糖尿病大鼠的血糖水平,这与其促胰岛素分泌活性有关.
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动态浊度法定量测定肝素钠注射液细菌内毒素的含量
目的研究肝素钠注射液细菌内毒素的测定方法及影响因素.方法用动态浊度法测定细菌内毒素的含量.结果肝素钠注射液经10倍稀释后对鲎试剂与细菌内毒素的凝集反应无干扰,可应用动态浊度法定量测定.结论用该法测定肝素钠注射液细菌内毒素含量,结果准确,可替代家兔法.
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铬(Ⅵ)存在下谷胱甘肽的电化学检测
目的探讨铬(Ⅵ)与还原型谷胱甘肽(GSH)之间的作用机制,并建立一种GSH的电化学检测方法.方法采用循环伏安法研究GSH与铬(Ⅵ)相互作用,从而影响铬(Ⅵ)在金电极上的电响应.结果在含0.001 mol/LH2SO4的0.1 mol/L NaNO3溶液中铬(Ⅵ)离子在金电极表面于+0.2 V(Vs.SCE)有一较强的还原峰,当溶液中加入少量GSH时,该峰电流下降,并且随着GSH的不断加入峰电流逐渐减小,在一定的浓度范围内GSH加入量与峰电流的下降呈线性关系,据此建立了一种GSH的电化学检测方法,其线性范围为7.0×10～1.0×10-9mol/L,检测限为1.0×10-9mol/L,RSD为0.4%.结论获得灵敏、简便、快速的间接的GSH电化学分析方法.
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黄芩苷脂质体的制备及在小鼠体内的分布
目的制备黄芩苷脂质体并考察其在小鼠体内的分布,为黄芩苷脂质体治疗乙型肝炎提供依据.方法用逆相蒸发法制备黄芩苷脂质体,测定其粒径及包封率,观察静脉注射黄芩苷脂质体及黄芩苷水溶液后,不同时间在小鼠体内的分布.结果5批黄芩苷脂质体平均粒径为(360±42)nm,平均包封率为(56.0±5.3)%.黄芩苷脂质体主要分布于肝、脾,以肝脏中分布多,而在血中清除加快.结论逆相蒸发法制备黄芩苷脂质体条件易控制,重复性好,可获得较高包封率和符合肝靶向要求的脂质体;黄芩苷脂质体具有一定的肝靶向性,可延缓黄芩苷在体内的代谢为乙肝治疗提供新途径.
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人红细胞保护蛋白对羟基自由基的清除作用
目的研究人红细胞保护蛋白(HRPRP)在体外对羟基自由基(·OH)的清除作用并探讨其抗氧化机制.方法可见光照射试管内N-羟基-2-硫代吡啶酮产生·OH,用脱氧核糖作检测分子,分光光度法测定N-羟基-2-硫代吡啶酮随光照时间产生·OH的量.在反应体系中加入不同浓度的铜锌超氧化物歧化酶(Cu,Zn-SOD)、HRPRP及二硫苏糖醇(DTT)活化HRPRP,观察它们对N-羟基-2-硫代吡啶酮产生的·OH的清除作用.结果Cu,Zn-SOD和HRPRP对·OH的清除率无显著性差异(P＞0.05),DTT活化的HRPRP对·OH的清除率显著大于Cu,Zn-SOD(P＜0.01)及未活化HRPRP(P＜0.01).结论证实HRPRP在巯基还原剂提供还原当量,暴露其自身活性位点时具有高效而特异的清除·OH的能力,提示HRPRP清除·OH可能是重要的抗氧化机制之一.
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星点设计结合效应面法优化红豆杉细胞同步化条件
目的通过星点设计法优化红豆杉细胞悬浮培养中的同步化条件.方法以磷酸盐阻断、放线菌酮和低温3种同步化方法为考察因素,通过对细胞分裂指数测定结果进行二项式拟合描绘三维效应面,从效应面上选取较佳的实验条件.结果二项式拟合数学模型复相关系数较高,R2=0.97,佳同步化方法为磷酸盐阻断11.574 d,放线菌酮0.290mg/ml,温度8.379℃.结论星点设计结合效应面法可用于优化红豆杉细胞培养的同步化条件,且效果良好.
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纳豆激酶抗凝血作用的研究
目的研究纳豆激酶(NK)的活性和抗凝血作用.方法采用纤维蛋白平板法测定NK的活性;采用试管法测定家兔全血凝固时间、血浆复钙时间、凝血酶时间、大鼠凝血活酶时间、凝血酶引起的纤维蛋白凝固时间;采用Quick法测定大鼠凝血酶原时间.结果固体粉末NK的活性为565 510 U/g,是尿激酶的3.13倍;液体NK的活性为15 234 U/ml;NK能显著延长家兔全血凝固时间、血浆复钙时间、凝血酶时间、大鼠凝血活酶时间、凝血酶引起的纤维蛋白凝固时间、大鼠凝血酶原时间.结论NK对凝血过程的三阶段都有影响.
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凋亡素基因的克隆及其原核表达
目的建立凋亡素基因克隆及原核表达的方法.方法根据已报道的鸡贫血病毒凋亡素基因设计合成一对引物,通过PCR扩增,构建重组质粒pUC18-VP3,将其与pET30质粒分别用限制性内切酶NdeⅠ、EcoR Ⅰ消化,构建原核表达载体pET30-VP3,用以转化感受态的E.coli DE3,经IPTG化学诱导表达,表达产物进行SDS-PAGE电泳鉴定.结果凋亡素基因在E.coli DE3中获得了大量表达.结论该结果对凋亡素进一步开发为抗肿瘤新药具有重要意义.
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铜绿假单胞菌外毒素的制备及其抗肿瘤作用
目的从铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)ATCC 27853株的培养液中分离纯化出一种外毒素蛋白(PAP),测定其对肿瘤细胞生长的影响.方法收集培养液,采用硫酸铵沉淀,超滤,柱色谱等手段分离纯化,用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定其相对分子质量.采用溴化四唑蓝法检测PAP对体外培养的肝癌细胞SMMC-7721和白血病细胞K562生长的影响.结果PAP的相对分子质量为52 600,它对这两种肿瘤细胞的增殖都有非常显著的抑制作用(P＜0.01).结论PAP具有一定的抗肿瘤作用.
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m4AChR-Gilα融合蛋白的建立、表达及几种配体对其机能的影响
目的通过Baculovirus-Sf9细胞系统制备并表达m4AChR-Gilα融合蛋白,检测几种配体对融合蛋白质中m4AChR与Gilα间相互作用,并以该融合蛋白质为工具,筛选m4AChR的特异性配体.方法两步聚合酶链反应建立m4AChR-Gilα融合cDNAs,并在Sf9细胞内表达.通过[3H]QNB和[35S]GTPγS替代结合实验研究几种配体乙酰胆碱、卡巴胆碱、AF-102B、prifinium、AF-DX116和阿托品对m4AChR-Gilα融合蛋白的作用.结果m4AChR-Gilα融合蛋白表达水平为(47.04±1.58)pmol/g蛋白,不同配体使融合蛋白质中Gilα与二磷酸鸟苷的亲和力发生变化.结论杆状病毒表达的m4AChR-Gilα融合蛋白具备m受体配体结合特性和组分间的偶联功能.配体通过改变融合蛋白质中Gilα与二磷酸鸟苷的亲和力,活化该融合蛋白质.
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薯蓣属植物中薯蓣皂苷元的研究进展
薯蓣属植物是一类极其重要的经济作物,其中30多种薯蓣属植物所含薯蓣皂苷(元)是合成多种甾体激素比较理想的重要原料.此文对我国薯蓣属植物的资源分布、薯蓣皂苷元的提取和生产工艺、化学成分、组织培养进行了概述,展望了该产业的发展前景.
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天然食品来源的血管紧张素转换酶抑制肽的研究进展
血管紧张素转换酶(ACE)在血压调节中扮演着重要的角色.近抑制肽的研究在食品医药界倍受关注,ACE抑制肽通过抑制血管紧张素Ⅰ向血管紧张素Ⅱ的转换以及阻止ACE使激肽失活而起到降压作用.利用某些蛋白酶对食品蛋白质进行定向水解或通过微生物发酵可产生具有降压作用的活性短肽,现在人们已从许多蛋白质源中分离到了各种ACE抑制肽.此文对近年来天然食品蛋白质来源的ACE抑制肽的研究进展做一简介.
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肽核酸在分子生物学方面的应用研究进展
肽核酸是一种核酸类似物,它是由2-氨基乙基甘氨酸蛋白骨架取代核酸的磷酸戊糖,可以高度特异地与所选基因序列的靶点结合.肽核酸能高亲和性、高特异性地与DNA或RNA杂交形成稳定双螺旋或三螺旋结构,并且杂合分子表现极强的热稳定性.此文就肽核酸在基因治疗中作为反义药物、杂交探针等分子生物学中的应用研究进展予以综述.
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蚯蚓纤溶酶的研究进展及趋势
综述了蚯蚓纤溶酶的理化性质、酶学性质、药效学特性、化学修饰及分子生物学等方面的研究进展,提出了蚯蚓纤溶酶研究领域的发展方向.
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嵌段共聚物在药学中的应用
嵌段共聚物属于两亲类共聚物,在水中能自发生成多分子聚集的胶束,这些胶束主要以疏水的嵌段为内核,亲水嵌段环绕在外构成外壳,这种胶束可以有效地增溶油溶性药物.嵌段共聚物无毒、无刺激、无免疫原性,胶束尺寸和病毒相仿,其大小适合在体内传输.此文综述了嵌段共聚物胶束在药用载体、药物输送、分离和释放等方面的应用.
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高效液相色谱法测定蛹虫草人工固体培养物中核苷类化合物的含量
目的建立高效液相色谱法测定蛹虫草人工固体培养菌皮中核苷类化合物的含量.方法采用pH 6.5磷酸盐缓冲液-甲醇(85:15)为流动相,流速为1.0 ml/min,检测波长为260nm.结果蛹虫草人工固体培养物菌皮中主要成分虫草素在4.03～100.8μg/ml范围内线性关系良好,回归方程为A=39.58 C-0.034 2;尿苷在3.68～92.0μg/ml范围内线性关系良好,回归方程为A=24.329 C-0.002 7;腺苷在3.84～96.11 μg/ml范围内线性关系良好,回归方程为A=18.012 C-0.023 5.结论人工固体培养菌皮中核苷类成分的含量随培养时间发生一定的变化,高效液相色谱法可用于蛹虫草人工培养物中核苷类化合物的测定,为控制其质量提供了简便易行的方法.
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氨甲环酸氯化钠注射液中Z-异构体的控制方法
氨甲环酸又称止血环酸、凝血酸,主要用于急性或慢性、局限性或全身性原发性纤维蛋白溶解亢进所致的各种出血,以及富有纤溶酶原激活物脏器的外伤或手术出血.氨甲环酸氯化钠注射液是近上市的新制剂,在其制备过程中易产生乳光,导致澄明度不合格,而Z-异构体是影响澄明度的主要因素.以下从几个方面论述对氨甲环酸氯化钠注射液Z-异构体的控制,使之更好地用于工业化生产.
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重组人粒细胞集落刺激因子成品蛋白质含量测定方法的研究
目的研究重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)成品蛋白质含量测定方法.方法用三氯醋酸-Lowry法和高效液相色谱外标法测定rhG-CSF成品蛋白质含量.结果两种方法均能有效排除rhG-CSF成品中甘露醇的干扰,与经典的Lowry法相比,蛋白质的回收率均大于96%,RSD均＜5%.结论三氯醋酸-Lowry法和高效液相色谱外标法均可用于测定rhG-CSF成品的蛋白质含量,高效液相色谱法操作更简便,更准确.
| 年 | 期数 |
| 2016 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2015 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2014 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 |
| 2012 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2011 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2010 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2009 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2008 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2007 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2006 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2005 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2004 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2003 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2002 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2001 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2000 | 01 02 03 04 05 06 |
