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酸性成纤维细胞生长因子的神经保护作用
脑、脊髓神经细胞受损后,常常不能重建正确的树突和轴突联系,即使经过治疗,患者的预后仍不理想.大量的研究证实,神经系统损伤后各类生长因子、神经营养因子(NTF)可促进神经元存活和轴突再生.目前,国内外的研究主要集中在NTF、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)和酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)上.近10年来,成纤维细胞生长因子的神经保护作用已得到确认,作者就aFGF在神经系统中的作用综述如下.
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脊髓神经细胞缺血再灌注损伤模型的建立及鉴定
目的：探索SD胎鼠原代脊髓神经细胞缺血再灌注损伤模型的建立方法。方法：将妊娠15 d的孕鼠处死后取出胎鼠脊髓，分离神经细胞行原代细胞培养，采用谷氨酸诱导脊髓神经损伤的方法制作脊髓缺血再灌注损伤模型，通过测定细胞活力及培养液中LDH、MDA含量确定谷氨酸的佳浓度及作用时间，鉴定模型。结果：采用200μmol/mL谷氨酸液作用15 min可方便地制作脊髓神经细胞缺血再灌注损伤模型。结论：通过模拟谷氨酸过度释放环节，制作脊髓神经细胞缺血再灌注损伤模型，方法简便，可重复性高。
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稳恒磁场对大鼠胚胎脊髓神经细胞影响
目的观察稳恒磁场对体外培养成年大鼠胚胎脊髓神经细胞生长发育的影响.方法采用绘制细胞生长曲线的四氮甲基唑蓝(MTT)法检测和脂质过氧化物的方法,了解不同强度的稳恒磁场对体外培养成年大鼠胚胎脊髓神经细胞生长的影响.在相差显微镜下观察细胞生长发育情况,并测定其细胞内琥珀酸脱氢酶的活性.结果1～10mT的稳恒磁场对大鼠胚胎脊髓神经细胞无抑制生长作用,当磁场的强度达到50～200 mT时其作用才表现出来,随着强度的加大,其抑制作用增强.结论一定强度的稳恒磁场对成年大鼠胚胎脊髓神经细胞具有抑制作用,且存在强度效应关系.
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氦-氖激光照射对大鼠胚胎脊髓神经细胞影响
目的研究氦-氖(He-Ne)激光照射对大鼠胚胎脊髓神经细胞增殖分化的影响.方法用波长为632.8nm,输出功率为2mw的He-Ne激光直接照射培养于96孔培养板中的大鼠胚胎脊髓神经细胞,分组、照射不同的时间,每天1次,照射时间分别为:3 min(A组)、6 min(B组)、10 min(C组),连续照射10 d后,计数集落形成率,测定蛋白质含量和丙二醛(MDA)含量,并与对照组进行比较.结果 A组集落形成率较对照组明显增加(P＜0.01)而B组和C组显著减少(P＜0.01);A、B实验组相对蛋白质含量较对照组明显增加(P＜0.05);C组相对蛋白质含量较对照组明显减少(P＜0.01).而MDA含量无明显改变(P ＞0.05).结论胚胎脊髓神经细胞受低功率He-Ne激光直接照射后,其影响与照射时间有关,短时间吸射可能促进增殖分化,而长时间反而有抑制其增殖分化的作用.
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周围神经阻滞麻醉对脊髓生物学的影响
背景：周围神经阻滞麻醉后是怎样产生功能抑制的，对脊髓和大脑中枢有何影响，是怎样调节周围神经的，中枢在解剖形态上有何改变，目前尚不明确。
目的：观察周围神经阻滞麻醉对脊髓神经细胞生物学的影响。
方法：将60只新西兰大白兔随机分为坐骨神经阻滞麻醉组、蛛网膜下腔阻滞麻醉组和硬膜外腔阻滞麻醉组，每组20只；每组再分实验组和对照组，每组10只。坐骨神经阻滞麻醉组的实验组在股骨头与坐骨结节连线中点注射利多卡因，蛛网膜下腔阻滞麻醉组的实验组在蛛网膜下腔注射布比卡因，硬膜外腔阻滞麻醉组的实验组在硬膜外腔注射利多卡因，各组的对照均在相同部位注射生理盐水。
结果与结论：坐骨神经阻滞麻醉、硬膜外腔阻滞麻醉或蛛网膜下腔阻滞麻醉30 min后，均有相应节段脊髓灰质后角Ⅲ、Ⅳ板层小圆细胞、前角Ⅸ板层外侧大多角细胞的尼氏体减少，核偏向一端，c-Fos蛋白表达减弱或无表达，提示脊髓相应节段的神经细胞功能受到抑制；另外蛛网膜下腔阻滞麻醉后，脊髓软脊膜有分层或断裂现象。 -
碱性成纤维细胞生长因子对培养大鼠胚胎脊髓神经细胞的作用
目的探讨碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对大鼠胚胎脊髓神经细胞的作用.方法在培养孕18 d的大鼠胚胎脊髓神经细胞中加入bFGF,通过培养细胞并计数存活的脊髓神经细胞集落数,检测超氧化物歧化酶(SOD)的活力及丙二醛的含量,并观察bFGF对脊髓神经细胞生长发育的影响.结果bFGF可促进脊髓神经细胞分化、增殖,SOD活力、丙二醛含量明显变化,脊髓神经细胞胞体较大、突起较长,培养14 d后脊髓神经细胞的数量也明显增高.结论bFGF能促进脊髓神经细胞生长发育,增加脊髓神经细胞的胞体和突起长度,增强脊髓神经细胞内SOD活力,降低丙二醛含量.
关键词： 碱性成纤维细胞生长因子 脊髓神经细胞 脂质过氧化 体外培养 -
大鼠蛛网膜下腔注射脂多糖后脊髓神经细胞内肿瘤坏死因子的表达及其动态变化
目的:探讨蛛网膜下腔注射脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)后,肿瘤坏死因子(TNF-α)在脊髓组织内表达水平的动态变化及其在神经细胞内的定位.方法:SD大鼠蛛网膜下腔注射LPS后,采用ELISA法检测大鼠脊髓组织匀浆内TNF-α含量;脊髓组织切片经神经丝(NF)和TNF-α免疫荧光双染色后,在荧光显微镜下观察TNF-α在脊髓神经细胞内的定位.结果:脊髓组织内的TNF-α于蛛网膜下腔注射LPS后 1 h 开始升高,6 h 达到第一个高峰,随后下降,至24 h 降至低但仍高于正常水平,而后又开始上升,在第5天时达到第二个高峰后再逐渐下降,到第14天仍略高于正常水平.结论:脊髓组织内的细胞受LPS刺激后,可产生大量的TNF-α,介导神经组织的炎症反应;脊髓灰质内的神经细胞是LPS的主要靶细胞,可能具有调节脊髓损伤局部炎症反应的生物学功能.
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稳恒磁场和He-Ne激光对大鼠胚胎脊髓神经细胞增殖和分化的影响
目的: 研究稳恒磁场和He-Ne激光对大鼠胚胎脊髓神经细胞增殖分化的影响.方法: 将大鼠胚胎脊髓神经细胞随机分为一个对照组,四个实验组.用磁感应强度为16 mT、60 mT的稳恒磁场及波长为632.8 nm,输出功率为2 mW的He-Ne激光分别直接作用于96孔培养板中的大鼠胚胎脊髓神经细胞,连续作用10 d后,计数集落形成率,并与对照组进行比较.结果: 16 mT 实验组和He-Ne激光照射2 min组的集落形成率较对照组明显增加(P<0.01)而60 mT实验组和He-Ne激光照射8 min组均显著减少(P<0.01).结论: 胚胎脊髓神经细胞受不同物理因子作用其影响不同,与稳恒磁场的强度的大小;及低功率He-Ne激光照射的时间有关:稳恒磁场的强度较低,激光照射的时间较短能促进增殖分化;稳恒磁场的强度高,激光照射的时间长反而有抑制其增殖分化的作用.
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硒对体外大鼠胚胎脊髓神经细胞增殖和分化的影响
目的: 观察硒对体外大鼠胚胎脊髓神经细胞增殖和分化的影响.方法: 用Lowry法检测不同浓度硒作用下培养细胞的总蛋白含量,显微镜下观察神经细胞的形态并对集落形成率进行比较.结果: 低浓度(1.0 μmol/L)的硒对神经细胞的增殖和分化有明显促进作用而高浓度的硒(≥50.0 μmol/L)对其有抑制作用.结论: 硒对神经细胞的增殖和分化具有双重性影响,其生物学作用性质与剂量有关.
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JNK抑制剂及NAC对氧糖剥离后复氧复糖所致脊髓神经元损伤的保护作用
目的：初步探讨JNK(The c-Jun NH-terminal kinase)抑制剂及N-乙酰半胱氨酸(N-acetylcysteine，NAC)对脊髓神经细胞氧糖剥夺复糖复氧的保护作用。方法：离体脊髓神经元氧糖剥夺复糖复氧损伤(oxggen-glucose deprivation/regain，OGD/R)模型建立。随机分组：A组对照组(n=6)；B组JNK抑制剂组(n=6)；C组NAC处理组(n=6)。分别于脊髓神经元氧糖剥夺(oxygen-glucose deprivation，OGD)4 h后，再复氧复糖4、12、24 h，应用MTT法检测细胞凋亡。结果：成功建立OGD/R模型；脊髓神经元OGD/R后,B组和C组MTT各时间点吸光值均高于A组，但B组和C组间差异不显著。结论：JNK抑制剂及NAC能有效抑制体外培养的脊髓神经元氧糖剥夺复糖复氧所引起的凋亡。
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鹿茸多肽对β-淀粉样蛋白诱导脊髓神经元细胞凋亡的保护作用
[目的]探讨鹿茸多肽对β-淀粉样蛋白诱导脊髓神经元细胞凋亡的保护作用.[方法]体外进行胎鼠脊髓神经元细胞培养传代,细胞进入对数生长期后进行实验.MTT比色法检测不同浓度β-淀粉样蛋白作用24 h后细胞活力变化;检测25μmol/L β-淀粉样蛋白作用24 h后,细胞凋亡百分数和观察细胞caspase-3表达情况.[结果]不同浓度的β-淀粉样蛋白作用24 h后对细胞活力均明显下降,并呈剂量依赖性(P<0.05);鹿茸多肽可明显抑制β-淀粉样蛋白诱导的脊髓神经元细胞凋亡现象(P<0.05),且可使caspase-3的表达量下降.[结论]鹿茸多肽通过抑制β-淀粉样蛋白诱导脊髓神经元细胞caspase-3表达增高而对其细胞凋亡发挥保护作用,本实验为探索新的治疗脊髓神经损伤的药物提供了重要的理论基础.
关键词： 鹿茸多肽 脊髓神经细胞 细胞凋亡 β-淀粉样蛋白 Casepase-3 -
蛛网膜下腔神经阻滞麻醉对兔脊髓神经元形态及c-fos蛋白表达的影响
目的:观察蛛网膜下腔神经阻滞麻醉对兔脊髓神经细胞的生物学影响.方法:选用健康新西兰大白兔30只,随机分为实验组和对照组.每组15只.基础麻醉后实验组用5 g/L布比卡冈进行蛛网膜下腔神经阻滞麻醉(腰麻),对照组用生理盐水代替局麻药.于麻醉后30 min灌注取材,HE染色观察2组兔L5-7节段脊髓神经元形态的变化,免疫组化法检测脊髓神经元中c-fos蛋白的表达.结果:与对照组相比,实验组L5-7节段脊髓灰质后角Ⅲ、Ⅳ板层的小圆细胞及前角Ⅸ板层外侧大多角细胞胞质中均有尼氏体减少、神经元c-fos蛋白阳性细胞数减少[(68.9±1.4) vs (12.3±1.6),t=60.352,P<0.001]和脊髓软脊膜分层或断裂现象(P<0.001).结论:蛛网膜下腔神经阻滞麻醉后,兔脊髓相应节段的神经细胞功能受到抑制,脊髓软脊膜有分层或断裂现象.
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BDA示踪观察脊髓胸腰段损伤后不同时间段膀胱排尿神经通路的改变
目的 应用生物素葡聚糖胺(BDA)示踪技术观察大鼠背侧胸腰段脊髓损伤(SCI)后不同时间段膀胱排尿神经通路改变的差异.方法 清洁级雌性SD大鼠90只,随机分为5组:1d组、3d组、7d组、14d组、21d组(每组分别设对照组8只,SCI组10只).使用标准化脊髓损伤动物模型实验装置制备背侧脊髓损伤动物模型,损伤部位定于T10～L1水平,对照组大鼠仅咬除棘突和椎板,不损伤脊髓.模型制备后分别于1d、3d、7d、14d、21 d给予对照组及SCI组大鼠膀胱壁注射BDA.注射2周后取材,免疫组化方法显示大鼠脊髓切片中BDA阳性神经元.结果 BDA阳性神经元经免疫组化学方法显色后呈棕褐色.SCI 1 d、3 d、7 d、14 d、21 d各组脊髓T10～L1平面的阳性神经细胞数与对照组相比均明显减少,SCI 14 d、21 d组较SCI 3 d、7d组阳性神经细胞数又有所增加.结论 大鼠背侧胸腰段脊髓损伤后支配排尿的神经通路受损,在损伤早期呈现出损伤进行性加重趋势,至损伤后1周左右脊髓神经细胞出现修复,神经通路可有部分修复.
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丙烯腈对体外培养大鼠胚胎脊髓神经细胞增殖分化的影响
目的研究丙烯腈(ACN)对体外培养的大鼠胚胎脊髓神经细胞增殖分化的影响.方法 16 d的大鼠胚胎脊髓组织作原代细胞培养,从细胞形态学及细胞计数观察研究细胞生长与分化过程,同时测定蛋白质含量和丙二醛(MDA)含量并与对照组进行比较.结果 10.0～100.0 mg/L ACN组明显抑制脊髓神经细胞分化、增殖、集落形成率明显减少,细胞体积小,细胞内MDA含量增加,蛋白质相对含量降低,并显示浓度效应关系.结论 ACN引起的大鼠胚胎脊髓神经细胞的增殖和分化抑制,可能与ACN诱发蛋白质合成下降和脂质过氧化物有关.
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DREAM信号通路调控疼痛敏感化的研究进展
近年来通过对下游调控元件拮抗剂调节子(downstream regulatory elementantagonistic modulator,DREAM)基因剔除小鼠的研究发现,在急性疼痛或慢性病理性疼痛等动物模型中,DREAM对疼痛行为的敏感化具有调控作用.存在于脊髓神经细胞中的DREAM是一种新型的Ca2+结合蛋白,是调控前强啡肽基凶表达的转录抑制物[1-3].通过药理学及生物化学分析可知,由于内源性K阿片系统的激活,导致DREAM基因剔除小鼠对疼痛的反应明显减少,同时DREAM的缺乏也可减少机体对炎症性疼痛的反应[4-5].因此,DREAM及其通路的研究成为治疗慢性疼痛的新亮点.
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NGF对大鼠胚胎脊髓神经细胞分化和增殖作用
[目的]研究神经生长因子(NGF)对大鼠胚胎脊髓神经细胞分化和增殖的作用.[方法]加入NGF到大鼠胚胎脊髓神经细胞进行培养,显微镜下计数存活脊髓神经细胞集落数及测定细胞相对蛋白质的含量.[结果]脊髓神经细胞胞体增大、突起延长且有丰富的神经纤维连结成网络状,细胞集落数增加,细胞相对蛋白质含量增加,显示出剂量一效应关系.[结论]一定剂量的NGF能促进大鼠脊髓神经细胞分化和增殖,增强其活性.
关键词： 神经生长因子(NGF) 脊髓神经细胞 分化和增殖 体外培养 -
初生牛脊髓神经细胞尼氏体硫堇——伊红染色法
尼氏体又称虎斑,是神经细胞的一种特殊结构,具有嗜碱性的特点易被碱性染料,如甲苯胺蓝、硫堇等着染.受染后呈块状(形如虎斑)或粒状.尼氏体分布在神经细胞除轴突之外的细胞质中,核周围颗粒较大 , 近边缘处较小而细长.尼氏体还可因生理状态的改变而变化,如在生理情况下,尼氏体大而数量多,反映出神经细胞旺盛的功能状态;在神经元受损伤时尼氏体的数量可减少甚至消失 .因此取材时应尽量获取新鲜材料才能制作出满意的标本.材料与方法:1.取初生小牛脊髓,10%福尔马林固定24hr.2.流水冲洗12～24hr.3.常规脱水,石蜡包埋、切片.4.切片脱蜡到水,进入0.5%的硫堇水溶液中,染15～30min(37℃),冷却.5.蒸馏水洗.6.70%酒精分色(镜下控制),0.5%伊红(醇溶)复染.7.酒精脱水(95%,100%各2次).8.二甲苯透明,中性树胶封片.结果尼氏体呈紫红色,位于神经元胞体及树突中.讨论此染色法使脊髓灰质中神经元内的尼氏体清晰可辨.起到即可辨认器官又可同时观察细胞中特殊结构的效果,是一种显示尼氏体的优良方法.
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枸杞多糖对脊髓神经细胞辐射损伤后的保护作用研究
目的:研究枸杞多糖(LBP)对辐射损伤脊髓神经(SCN)细胞的保护作用,并观察自噬相关蛋白LC3 Ⅱ/Ⅰ表达的变化,探讨LBP对辐射损伤保护作用的机制.方法:体外培养SCN细胞,应用不同剂量(0、2、6、10 Gy)X射线辐照损伤后,采用四甲基噻唑蓝(MTT)法检测细胞存活率确定佳辐射剂量,建立辐射损伤模型.用不同浓度(15、25、40 mg/L)LBP对辐射损伤的SCN细胞进行干预后,分别采用MTT法检测细胞存活率以确定适LBP干预剂量;用佳辐射剂量和LBP干预后,采用Western blot和免疫组化法检测自噬相关蛋白LC3 Ⅱ/Ⅰ的表达.结果:X射线辐照后,SCN细胞存活率在2～10 Gy范围内随着照射剂量的增加而逐渐降低,和正常对照组比较差异均具有统计学意义(P＜0.05);MTT实验结果显示,与辐射组相比,不同浓度LBP干预后SCN细胞存活率均明显升高,差异具有统计学意义(P＜0.05),故确定10GyX射线照射和40 mg/L LBP干预进行后续造模.免疫组化和Westernblot检测结果均显示,与正常对照组相比,辐射组细胞的自噬相关蛋白LC3 Ⅱ/Ⅰ表达明显升高,差异具有统计学意义(P＜0.05);与辐射组相比,LBP+辐射组细胞LC3 Ⅱ/Ⅰ蛋白表达亦明显升高,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论:LBP对体外培养的脊髓神经元辐射损伤具有保护作用,可能与LBP促进自噬相关蛋白LC3 Ⅱ/Ⅰ表达有关.
