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降糖通络汤对DPN大鼠NGF mRNA表达的影响及对雪旺细胞抗氧化、抗凋亡作用机制研究
目的:观察降糖通络汤对实验性糖尿病大鼠周围神经病变(DPN)治疗作用,并通过促进NGF、抗氧化、抗凋亡的环节对其作用机制予以研究.方法:采用静脉注射链脲佐菌素60mg/kg制备DPN模型,按血糖随机分为模型对照组、降糖通络汤36、18、9g生药/kg组、盐酸二甲双胍+甲钴胺分散片对照组(细胞实验为金芪降糖片),给药8周,1次/d.观察给药后2、8周空腹血糖及光热辐射痛阈变化,免疫组织化学测定坐骨神经的神经生长因子(NGF)蛋白表达、RT-PCR法测定NGF mRNA表达.IF测定高糖培养SC细胞中诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)表达、RT-PCR法测定高糖培养雪旺细胞还原型辅酶Ⅱ(NADPH)氧化酶p22-phox亚基表达.RT-PCR法测定细胞Casepase-3 mRNA、Bcl-2 mRNA表达,TUNEL法测定雪旺细胞凋亡.结果:降糖通络汤36、18g生药/kg组可明显降低空腹血糖(P＜0.01),缩短对热光源刺激的躲避潜伏期(P＜0.01).促进坐骨神经NGF mRNA表达(P＜0.01),抑制细胞核iNOS、NADPH p22-phox mRNA表达(P＜0.01)、抑制Casepase-3 mRNA表达(P＜0.01)、促进Bcl-2 mRNA表达(P＜0.01),抑制凋亡率.结论:降糖通络汤通过促进NGF、抑制氧化应激、控制凋亡发挥对周围神经病变的治疗作用.
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珍珠明目滴眼液改善高渗诱导角膜上皮细胞损伤的作用机制研究
目的 探讨珍珠明目滴眼液(ZMED)对高渗诱导人角膜上皮细胞(HCEC)损伤的保护作用及相关机制.方法 采用110 mmol/L氯化钠高渗溶液刺激离体培养的HCEC建立干眼损伤模型,药物组分别给予不同稀释倍数的ZMED;分别采用MTT法、乳酸脱氢酶(LDH)实验检测ZMED对高渗诱导损伤HCEC的保护作用;采用流式细胞术分析各组细胞凋亡率;采用AO/EB双染法和Hochest荧光染色法观察各组细胞凋亡形态的差异;通过Western blotting法检测Caspase凋亡通路上关键蛋白表达水平的变化.结果 ZMED可以明显增加高渗诱导损伤的HCEC存活率并降低其LDH释放量;ZMED稀释25倍以下作用于高渗诱导HCEC后,细胞凋亡率较模型组明显降低,且凋亡的HCEC数量呈浓度依赖性减少;ZMED给药后剪切态的Caspase-9、Caspase-3、PARP呈浓度依赖性下调.结论 ZMED对110 mmol/L氯化钠高渗溶液诱导损伤的HCEC有明显的保护作用,该作用可能与其抑制线粒体介导的Caspase-9/Casepase-3细胞调亡通路相关.
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LY－294002对人宫颈癌细胞株Bcl－2表达的影响
目的：探讨不同浓度磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）抑制剂（LY－294002）对人宫颈癌细胞株Bcl－2表达的影响。方法培养人宫颈癌He－la细胞，分为对照组和LY294002干预组，干预组再细分为4个亚组，分别以终浓度为5、10、20、40μmol／L 的 PI3 K 抑制剂 LY294002处理人宫颈癌Hela细胞，作用48 h。 Western 印迹方法和RT－PCR方法检测各组人宫颈癌细胞株 Bcl－2表达变化。结果 Western 印迹方法检测发现，对照组宫颈癌细胞株有大量的Bcl－2阳性表达，与对照组相比在以终浓度为5μmol／L的 LY294002处理48 h后，宫颈癌细胞株的 Bcl－2阳性表达迅速降低（ P＜0．05），随着LY294002终浓度的升高，宫颈癌细胞株的Bcl－2阳性表达也随之降低。 RT－PCR方法检测 Bcl－2 mRNA时发现，Bcl－2 mRNA的表达也随着LY294002的终浓度的升高而降低。结论 LY－294002能够降低人宫颈癌细胞Bcl－2的表达。
关键词： 宫颈癌 LY-294002 Casepase-3 凋亡 Hela细胞 -
尼莫地平对大鼠急性脑缺血再灌注损伤的作用机制研究
目的 探讨尼莫地平对急性脑缺血再灌注损伤的的早期保护作用.方法 线栓法复制大鼠急性脑缺血模型.30只雄性Wistar大鼠随即分为假手术组、模型组、尼莫地平组3组.模型组采血2h再灌注2h.尼莫地平组大鼠在缺血0时刻起每小时腹腔注射给药一次,剂量为5mg/kg.各组大鼠在手术4h后实验结束后,行腹主动脉采血,同时取完整脑组织.Western blot检测各组大鼠脑组织中AMPK、磷酸化AMPK(p-AMPK)、Bax、活化的caspase-3蛋白(cleaved caspase-3)的表达.结果 与模型组相比,尼莫地平组大鼠脑组织p-AMPK蛋白和casepase-3的表达明显下降,Bax表达显著高于模型组.结论 尼莫地平对大鼠急性脑缺血再灌注损伤有保护作用,抑制体内缺血诱导的神经细胞凋亡,其作用与下调AMPK有关.
关键词： 尼莫地平 缺血再灌注损伤 AMPK Bax Casepase-3 -
大鼠脑创伤后caspase-3的过度表达与细胞凋亡的关系
目的:探讨大鼠脑创伤后海马神经组织中casepase-3表达及其在细胞凋亡中的机制.方法:雄性Wistar大鼠72只随机分成对照组和创伤组,用Marmarou方法造成大鼠重型弥漫性颅脑创伤,采用免疫组织化学检测海马CA1区神经细胞casepase-3蛋白表达情况,原位细胞DNA断裂检测末端标记(TUNEL)法观察大鼠海马CA1区神经细胞凋亡动态变化.同时行TUNEL与caspase-3双标染色.结果:对照组海马区神经细胞casepase-3未见明显表达,创伤组海马CA1区神经细胞casepase-3表达在伤后3小时开始升高,伤后3天达高峰(P＜0.01),伤后7天下降明显.对照组海马区未见TUNEL阳性细胞,创伤组海马区TUNEL阳性细胞伤后3小时开始增多,伤后3天达高峰(P＜0.01),伤后7天下降.可见创伤组TUNEL染色与caspase-3免疫染色双标阳性的细胞伤后6小时细胞数量逐渐增多,于伤后3天达高峰(P＜0.01),伤后7天双标阳性细胞数量下降.Casepase-3表达与TUNEL阳性细胞明显相关(P＜0.01).结论:大鼠脑创伤后casepase-3的过度表达是影响大鼠脑创伤后神经细胞凋亡原因之一,抑制casepase-3活性表达对神经组织起保护作用.
关键词： 大鼠 颅脑创伤 Casepase-3 凋亡 -
丁苯酞对大鼠脑创伤后 caspase-3的表达与细胞凋亡的影响
目的：探讨丁苯酞在大鼠脑创伤后海马神经组织中casepase-3表达及其在细胞凋亡中的作用。方法雄性Wistar大鼠120只随机分成3组，用Marmarou方法造成大鼠重型弥漫性颅脑创伤，采用免疫组织化学检测casepase-3蛋白表达情况，末端标记（ TUNEL）法观察大鼠脑内神经细胞凋亡动态变化。结果对照组海马区神经细胞casepase-3未见明显表达，创伤组海马区神经细胞casepase-3表达在伤后3 h开始升高，伤后3 d达高峰，伤后7 d下降明显。药物组海马区神经细胞casepase-3表达在伤后3 h开始升高，伤后3 d达高峰，高峰值低于创伤组（P＜0．01），伤后7 d下降明显。对照组海马区未见TUNEL阳性细胞，创伤组海马区TUNEL阳性细胞伤后6 h开始升高，3 d达高峰，伤后7 d下降。药物组海马区TUNEL阳性细胞伤后6 h开始升高，3 d达高峰，高峰值低于创伤组（P＜0．05），伤后7 d下降。 casepase-3表达与TUNEL阳性细胞明显相关（P＜0．01）。结论大鼠脑创伤后casepase-3的过度表达是影响大鼠脑创伤后神经细胞凋亡原因之一，丁苯酞可以抑制casepase-3活性表达，减少神经细胞凋亡，对神经组织起保护作用。
关键词： 大鼠 颅脑创伤 Casepase-3 凋亡 丁苯酞 -
鹿茸多肽对β-淀粉样蛋白诱导脊髓神经元细胞凋亡的保护作用
[目的]探讨鹿茸多肽对β-淀粉样蛋白诱导脊髓神经元细胞凋亡的保护作用.[方法]体外进行胎鼠脊髓神经元细胞培养传代,细胞进入对数生长期后进行实验.MTT比色法检测不同浓度β-淀粉样蛋白作用24 h后细胞活力变化;检测25μmol/L β-淀粉样蛋白作用24 h后,细胞凋亡百分数和观察细胞caspase-3表达情况.[结果]不同浓度的β-淀粉样蛋白作用24 h后对细胞活力均明显下降,并呈剂量依赖性(P<0.05);鹿茸多肽可明显抑制β-淀粉样蛋白诱导的脊髓神经元细胞凋亡现象(P<0.05),且可使caspase-3的表达量下降.[结论]鹿茸多肽通过抑制β-淀粉样蛋白诱导脊髓神经元细胞caspase-3表达增高而对其细胞凋亡发挥保护作用,本实验为探索新的治疗脊髓神经损伤的药物提供了重要的理论基础.
关键词： 鹿茸多肽 脊髓神经细胞 细胞凋亡 β-淀粉样蛋白 Casepase-3 -
骨碎补对重型颅脑损伤大鼠脑细胞凋亡IL-2含量及Casepace-3表达的影响
目的:探讨重型颅脑损伤大鼠脑细胞凋亡、Casepase-3表达和血清IL-2含量变化的规律及骨碎补对其干预作用.方法:72只大鼠随机分为正常对照组、模型组、给药组,参照Feeney自由落体冲击造模法复制动物模型,正常对照组只给予切开头皮.于伤后4h给药组灌食骨碎补水提取物,其余两组灌食等量生理盐水.每日1次,连续7d.灌胃后24h、72h、168h分别通过TUNEL法、免疫组化法及ELISA法检测脑细胞凋亡、Casepase-3表达和血清IL-2含量.结果:重型颅脑损伤大鼠受伤后脑细胞随即出现显著凋亡并一直持续至168 h,凋亡程度于伤后24 h达到高峰,此后逐步下降.血清IL-2含量于伤后24 h明显降低,此后逐步回升.Casepase-3表达于伤后24h明显升高,并一直持续至168 h,三个时段没有明显变化.服用骨碎补后重型颅脑损伤大鼠在伤后24 h血清IL-2含量下降明显改善,细胞凋亡明显减轻,而Casepase-3表达未受影响.结论:骨碎补具有抑制重型颅脑损伤大鼠受伤早期细胞凋亡的作用,此作用可能与其能对抗血清IL-2含量下降有关.
关键词： 骨碎补 重型颅脑损伤 TUNEL Casepase-3 IL-2 -
尼莫地平对耳蜗缺血再灌注损伤的保护作用
目的 观察尼莫地平对豚鼠耳蜗缺血再灌注损伤的保护作用并探讨其作用机制.方法 42只豚鼠随机分为干预组、实验组和正常对照组,干预组和实验组各18只,用FeCl3诱导小脑前下动脉缺血后以尿激酶溶栓制备缺血再灌注模型,干预组在应用FeCl3 10分钟前腹腔注射尼莫地平0.5mg/kg,实验组在相同条件下注射等量生理盐水;正常对照组6只,不造模,不注射任何药物.连续记录各组耳蜗血流量,基底膜Hoechest33342荧光染色观察细胞核形态学变化,耳蜗中轴切片免疫组织化学染色检测螺旋神经节Casepase-3的表达.三组均于实验术前检测ABR,实验组、干预组分别于再灌注后1、2、6h再行A13R检测.结果 小脑前下动脉缺血后,实验组和干预组耳蜗血流量明显下降,再灌注后又明显回升,ABR反应阈值较对照组上升,实验组较干预组上升明显,差异有统计学意义(P<0.01).实验组、干预组均出现内毛细胞缺损,且实验组内毛细胞缺损率较对照组高,差异有统计学意义(P<0.01).缺血再灌注后,实验组螺旋神经节Casepase-3较干预组表达增强,差异有统计学意义(P<0.01).结论 豚鼠耳蜗缺血再灌注导致内毛细胞和螺旋神经节细胞发生凋亡损伤,尼莫地平对耳蜗缺血再灌注损伤有一定保护作用.
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超微六味地黄汤对孕期被动吸烟胎鼠脑Bax、Bcl-2和Casepase-3的影响
目的 研究六味地黄汤超微和传统饮片对胎鼠脑发育不全的干预作用,并从细胞凋亡角度探讨其机理.方法 采用孕鼠被动吸烟造成胎鼠脑发育不全,分别给予六味地黄汤超微和传统饮片进行治疗.采用免疫组化法检测Bax、Bd-2和casepase-3. 结果 模型组三项指标均明显高于正常组(P<0.01);治疗组与模型组相比Bax和Caspase-3明显减少(P<0.01);但仍高于正常组(P<0.01);治疗组与模型组相比Bcl-2变化不大(P>0.05).超微全量组和1/3量组Caspase-3表达较传统组少(分别为P<0.05和P<0.01);超微全量组Caspase-3的表达较超微113量组少(P<0.01). 结论 孕期被动吸烟可以导致胎鼠脑Bax、Bcl-2和Casepase-3表达水平升高,六昧地黄汤能降低Bax和Casepase-3的表达水平.
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后适应对大鼠脑缺血-再灌注损伤线粒体结构和功能的影响
目的 观察后适应对大鼠脑缺血-再灌注损伤线粒体结构和功能的影响.方法 雄性SD大鼠随机分为假手术组、缺血-再灌注模型组(MCAO)、MCAO+预适应组、MCAO+后适应组和MCAO+尼莫地平组.大鼠脑缺血-再灌注24 h后,取脑进行TUNEL染色,免疫组织化学检察Bcl-2,Bax,Casepase-3和p53的蛋白表达,测定大鼠脑组织线粒体肿胀度、膜流动性、膜磷脂(PL)和丙二醛(MDA)含量、测定线粒体Na十-K+-ATP酶、Ca2+-ATP酶和超氧化物歧化酶(SOD)活性,并观察线粒体超微结构的改变.结果 脑缺血-再灌注后半暗带线粒体的MDA含量明显增高,PL含量减少,膜脂流动性降低;ATP含量及Na+-K+-ATP酶、Ca2+-ATP酶、SOD活性明显降低.与MCAO组比较,后适应组大鼠凋亡细胞和Bax、Casepase-3、p53蛋白表达明显减少,ATP含量及Na+-K+-ATP酶、Ca2+-ATP酶、SOD活性明显升高.MCAO组大鼠脑线粒体肿胀,线粒体嵴断裂、溶解和消失,后适应明显减少缺血-再灌注引起的线粒体损伤程度.结论 后适应对MCAO大鼠脑和线粒体的保护作用可能与其减少神经原凋亡,抑制p53、Pax、easepase-3表达,增加线粒体Na+-K+-ATPase、Ca2+-ATPase、SOD活性有关.
关键词： 后适应 脑缺血 Casepase-3 -
LY-294002对人宫颈癌细胞株Caspase-3表达的影响
目的 探讨不同浓度磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)抑制剂(LY-294002)对人宫颈癌细胞株Caspase-3表达的影响.方法 培养人宫颈癌Hela细胞,随机分为对照组和LY294002干预组,干预组再随机细分为4个亚组,分别以终浓度为5、10、20、40 μmol/L的PI3K抑制剂LY294002处理人宫颈癌Hela细胞,作用48 h.Western blot方法和RT-PCR方法检测各组人宫颈癌细胞株Caspase-3表达变化.结果 Western blot方法检测发现,对照组宫颈癌细胞株有微量的Caspase-3阳性表达,在以终浓度为5 μmol/L的LY294002处理48h后,宫颈癌细胞株的Caspase-3阳性表达显著升高,与对照组相比差异显著(P＜0.05),随着LY294002的终浓度的升高,宫颈癌细胞株的Caspase-3阳性表达也随之上升,呈剂量依赖性.RTPCR方法检测Caspase-3 mRNA时发现,Caspase-3 mRNA的表达也随着LY294002的终浓度的升高而升高,呈一定的剂量依赖性.结论 LY-294002能够上调人宫颈癌细胞Caspase-3的表达.
关键词： 宫颈癌 LY-294002 Casepase-3 凋亡 Hela细胞 -
加味瓜蒌薤白汤对实验性心肌缺血大鼠心脏保护作用的研究
目的 观察加味瓜蒌薤白汤对实验性心肌缺血大鼠心电图、心脏病理显微结构、bax、bcl-2、Casepase-3、p53、VEGF含量的影响,探讨该方对实验性心肌缺血大鼠心脏的保护作用及机理.方法 将Wistar大鼠80只随机分为空白对照组、模型组及全方高、中、低剂量组与全方去黄芪组、全方去黄芪加黄芪甲苷组、心得安组,各组分别灌胃2周造模,记录各组动物心电图;继续灌胃2周,取心脏行常规HE染色和SABC免疫组化染色,取血测VEGF.结果 全方中剂量组、全方去黄芪加黄芪甲苷组与心得安组均可有效阻止异丙基肾上腺素引起的心肌断裂和心电图损害,与空白对照组相似.上述两组与心得安组均可通过抑制p53表达以调节bcl-2/bax的表达,并抑制Casepase-3的表达,抑制心肌细胞凋亡,与模型组相比差异有显著性.上述三组VEGF含量降低,与模型组比较差异有显著性;全方中剂量组及全方去黄芪加黄芪甲苷组与心得安组比较,差异亦有显著性.结论 加味瓜蒌薤白汤治疗心肌缺血作用肯定,其作用机理与抑制p53表达,调节bcl-2/bax表达,抑制Casepase-3表达,抑制心肌细胞凋亡,降低VEGF含量相关.
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甘草次酸对哮喘大鼠气道重塑及肺组织Casepase-3、Bax、Bcl-2表达的影响
目的:观察甘草次酸对哮喘大鼠气道炎症、气道重塑及肺组织Casepase-3、Bax、Bcl-2表达的影响,探讨其抗哮喘机制.方法:将60只雄性大鼠随机分为正常对照组、哮喘模型组、地塞米松组及甘草次酸(200、100、50mg/kg)剂量组.以卵清蛋白加氢氧化铝致敏复制大鼠哮喘动物模型,病理观察甘草次酸对哮喘大鼠肺组织气道炎症浸润和气道重塑的影响;采用RT-PCR和Western-blot法检测哮喘大鼠肺组织Casepase-3、Bax及Bcl-2 mRNA和蛋白表达.结果:与哮喘模型组比较,甘草次酸200mg/kg可减少哮喘大鼠肺组织炎症浸润,改善或逆转气道重塑;甘草次酸200、100 mg/kg可上调哮喘大鼠肺组织Bax、Caspase-3 mRNA和蛋白表达水平,下调Bcl-2mRNA和蛋白表达水平.结论:甘草次酸对哮喘大鼠气道炎症及气道重塑有较好的改善作用,其机制可能与上调促凋亡因子Bax、Caspase-3和下调抗凋亡因子Bcl-2有关.
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Survivin基因在急性白血病患者中的表达及其临床意义
目的:探讨Survivin基因在急性白血病(acute leukemia,AL)患者骨髓中的表达及其临床意义.方法:应用实时荧光定量PCR方法检测77例AL患者和20例正常人骨髓中Survivin及casepase-3基因的表达.结果:Survivin基因在初治的AL患者中的表达较正常对照组明显升高(P<0.01),治疗缓解后Survivin表达降低,复发的患者其表达再次升高.初治组casepase-3 mRNA表达水平较对照组明显降低(P<0.01),治疗缓解后表达升高,复发的患者其表达降低,初治和复发的患者两种基因表达均无明显差异(P>0.05).Survivin基因表达水平与白血病患者的性别、年龄、发热、出血、淋巴结肿大等临床特征及初诊白细胞数、血红蛋白、血小板计数等实验室数据无关(P>0.05).而与白血病分型、CD34抗原表达及骨髓中原始细胞比例有关(P<0.05).此外,Survivin基因表达与原始细胞比例呈正相关(r=0.785,P<0.001),而与casepase-3基因表达呈负相关(r=-0.638,P<0.001).结论:Survivin基因异常表达可能在白血病发病中起着重要作用,并且与AL复发及预后密切相关.Survivin可能通过抑制casepase-3的表达而抑制细胞凋亡,其过表达与白血病性造血及恶性增殖有关,是白血病患者预后不良的一个生物学标志.
