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血清及脑组织中单胺类神经递质高效液相色谱电化学检测方法研究
目的建立一种快速准确测定大鼠血清及脑组织中单胺类神经递质去甲肾上腺素(NE)、肾上腺素(E)、多巴胺(DA)和5-羟色胺(5-HT)含量的高效液相色谱-电化学检测方法.方法采用ODS柱,流动相为缓冲液(0.02mol/L柠檬酸三钠和0.05mol/L磷酸氢二钠):甲醇=85:15的溶液,流速1.0ml/min.结果四种神经递质保留时间的RSD在0.29%～0.67%之间、峰面积RSD在0.09%～0.36%之间,重现性好.4种回收率在85.3%～95.4%之间,检测限NE为0.083ng/ml、E为0.51ng/ml、DA为0.046ng/ml、5-HT为0.078ng/ml,线性范围NE在1.0～100 ng/ml之间、E为5.0～80ng/m之间、DA为1.0～80ng/ml之间、5-HT为1.0～60ng/ml之间,相关系数在0.996～0.999之间.结论该方法为单胺类递质的神经毒理学、药理学等研究提供了一个简单灵敏、稳定可靠的方法.
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PAG内微量注射OFQ并同时电针对脊髓背角单胺类和氨基酸类递质释放的影响
我们以往的工作表明,大鼠中脑导水管周围灰质(PAG)内微量注射孤啡肽(OFQ)对抗针刺镇痛;并使脊髓背角谷氨酸(Glu)释放增加,ν-氨基丁酸(GABA)、5羟色胺(5-HT)、去甲肾上腺素(NE)释放减少;脊髓背角广动力范围(WDR)神经元的C-纤维反应和后放电增多.本研究的目的是采用核团内注射、微透析加高效液相电化学检测的方法,观察PAG内微量注射OFQ并同时电针,对大鼠脊髓背角单胺类和氨基酸类递质释放的影响.
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HPLC-ECD检测猕猴血清中单胺类递质
目的:通过应用HPLC-ECD分离测定猕猴血清中单胺类递质,验证其与经前期综合征(PMS)肝气逆证的内在关系,筛选科学有效的检测方法.方法:采用ZORBA×SB-C18.色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相:乙酸钠100 mmol·L-1,柠檬酸85 mmol·L-1,正二丁胺0.4 mmol·L-1,辛烷基磺酸钠1.5 mmol·L-1,乙二胺四乙酸(EDTA)0.2 mmol·L-1,甲醇18%,抽滤.流速0.9 mL·min-1,量程1μA.结果:猕猴血清中去甲肾上腺素(NE),肾上腺素(E),多巴胺(DA)和5-羟色胺(5-HT)回收率依次为97.0%,97.8%,99.5%,100.3%,RSD 0.22%～0.93%,重复性较好.结论:该方法操作简便、快速、准确,是检测猕猴血清中单胺类递质检测的一种理想方法.
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桔梗与氯丙嗪伍用对大鼠脑纹状体多巴胺的影响
目的:研究桔梗与氯丙嗪联合应用对大鼠脑纹状体单胺类神经递质多巴胺的影响,探讨中西药配伍应用后可能发生的药物相互作用与机制.方法:大鼠随机分成4组:生理盐水组、桔梗(生药15.2 g·kg~(-1)·d~(-1))单独给药组、氯丙嗪(20mg·kg~(-1)·d~(-1))单独给药组、氯丙嗪与桔梗(20 mg·kg~(-1)·d~(-1)+15.2 g·kg~(-1)·d~(-1))合并给药组,每组6只,给药10 d后,利用微透析法在大鼠脑纹状体取样,HPLC检测透析液中多巴胺水平.结果:药后140 min(取样点80 min)时,氯丙嗪+桔梗组中多巴胺水平(1.52±0.34)μg-L~(-1)显著高于氯丙嗪组(1.25±0.22)μg·L~(-1)(P<0.05)和生理盐水组(1.06±0.24)μg·L~(-1)(P<0.01).结论:桔梗与氯丙嗪合用后大鼠脑内多巴胺水平升高,治疗时同时给予桔梗,可以减少氯丙嗪的用量,达到保持疗效,降低其不良反应的目的.
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生物电化学在检测恶性血液性疾病方面的研究进展
血液性疾病是当今社会威胁人类健康重要疾病之一,严重威胁着公共健康护理.这类恶性血液性疾病对身体健康的威胁已日益得到人们的重视.然而,在对恶性血液性疾病的现有治疗手段中,低检出率和高复发率是治疗过程中的主要问题.如果能提高恶性血液性疾病的早期诊断率和检出率,则将能极大地提高病人的存活率.因此,针对恶性血液性疾病的早期诊断显得尤为重要.近年来,针对肿瘤细胞和血液检测的生物电化学方法吸引了越来越多的学者的关注.由于许多肿瘤细胞表面蛋白是重要的生物标志物,其数量和状态的变化以及各种电生理活动的变化,往往表明机体内有一些潜在的疾病.每个肿瘤细胞具有特定的内或外的生物标志物,以区别于正常细胞系,因此可以通过生物电化学技术检测它们的生物标志物.这为生物电化学检测肿瘤细胞活性、诊疗疾病和药物的筛选提供了极大的理论和实验支持.近几年来,随着生物传感器技术、纳米技术、探针和电极技术、芯片实验室技术的发展,极大地促进了细胞的生物电化学研究,特别是针对血液和细胞的检测和耐药性区分的发展.本文列举了几种重要的生物电化学技术的发展情况,重点评述了其在血液学领域里的研究进展,并以此为基础展望了其研究前景.
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微透析技术实时检测肾热缺血后葡萄糖变化的动物实验研究
目的 探讨应用微透析技术研究兔肾热缺血再灌注损伤后肾皮质葡萄糖浓度变化规律的可行性. 方法 新西兰大耳白兔20只,其中实验组10只,麻醉后游离出右肾及其动静脉,将微透析探针置入肾背侧皮质内,复方氯化钠溶液持续灌注平衡60 min后,连接电化学分析系统,阻断肾动静脉60 min,然后开放动静脉,观察60 min.利用电化学方法实时在线检测肾透析液中葡萄糖含量的变化.对照组10只,仅游离出肾动静脉而不结扎,同样留置微透析针取样,连续检测葡萄糖浓度,比较2组在正常灌注期、缺血期和再灌注期葡萄糖浓度的变化. 结果 葡萄糖电极的电流响应与其浓度呈良好的线性关系,微透析针的回收率在(63.6±2.1)%.实验组兔肾皮质正常状态下测得的透析液葡萄糖浓度为(1.89±0.37)mmol/L,缺血期葡萄糖浓度为(0.69±0.12)mmol/L(LSD检验,P=0.000),缺血期较自身正常灌注期降低(36.7±2.4)%;再灌注期葡萄糖浓度为(0.62±0.14)mmol/L(LSD检验,P=0.000).与对照组比较,实验组缺血期(t=-11.975,P=0.000)和再灌注期(t=-11.993,P=0.000)葡萄糖浓度显著降低. 结论 应用微透析与活体在线电化学技术相结合的方法可以方便、灵敏检测肾缺血再灌注损伤后葡萄糖水平,可以较好地实时反映肾皮质缺血状态.
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柱前衍生-电化学检测HPLC法测定大鼠脑内的谷氨酸和γ-氨基丁酸
目的:建立大鼠脑组织内谷氨酸和γ-氨基丁酸的HPLC测定方法.方法:大鼠脑组织匀浆液低温离心,上清液经甲醇沉淀蛋白并稀释至合适浓度后与邻苯二醛在亚硫酸钠存在下发生衍生化反应,衍生物经HPLC分离, 电化学检测.结果:谷氨酸在0.1～2.0μg.ml-1,γ-氨基丁酸在0.05～1.0μg.ml-1浓度范围内,线性关系良好.谷氨酸测定的日内和日间变异系数(RSD)分别小于3.4%和4.5%,γ-氨基丁酸测定的日内和日间变异系数(RSD )分别小于4.2%和8.6%.两者回收率分别为95.9%～102.3%和107.2%～110.0%.谷氨酸和γ-氨基丁酸的小检出浓度均为5ng.ml-1.SD大鼠小脑、皮层、丘脑、海马内谷氨酸的含量分别为960.2、1068.0、460.2和846.6μg.g-1;γ-氨基丁酸的含量分别为186.0、165.4、149.3和188.6μg.g-1.结论:本法简便、灵敏、准确,可用于大鼠脑组织内谷氨酸和γ-氨基丁酸的测定.
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毛细管区带电泳电化学检测人体尿样中的双氯灭痛、氯丙嗪
目的 建立毛细管区带电泳法测定人体尿样中双氯灭痛、氯丙嗪含量的方法.方法采用弹性石英毛细管(31.5 cm,25 μm i.d.,360 μm o.d.),以4.90×10-3 mol/L Na2HPO4 - 7.80×10-3 mol/L NaH2PO4(pH = 7)为缓冲液,10 kV分离电压,5 kV电渗进样10 s,碳纤维电极工作电极(长200 μm,直径8 μm),检测电势0.72 V.结果双氯灭痛、氯丙嗪两种药物分别在9.90×10-6～5.00×10-4 mol/L(r = 0.998 2)、5.0×10-7～1.0×10-4 mol/L(r = 0.999 8)范围内表现出良好的线性,其回收率分别为104%,96.0%.结论该方法简便、快速、准确,可作为人体尿样中双氯灭痛、氯丙嗪的分离检测方法.
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孤啡肽(OFQ)参与痛觉调制和针刺镇痛及其中枢机制
1994年在克隆阿片受体cDNA的过程中,发现一种与阿片受体有较高同源性的受体-孤儿阿片受体(orphan opioid receptor),1995年找到了它的内源性配体-Nociceptin,即Orphanin FQ(OFQ,我国学者将其译为孤啡肽).由于OFQ与经典的阿片肽的氨基酸序列较为接近,而且也主要分布在中枢神经系统,尤其是与痛觉密切相关的区域,这提示OFQ参与伤害性感觉的传递和调制.因此,孤啡肽及其受体一经发现,就受到痛觉研究者们的极大关注.我们课题组在这项前沿研究中,在多种动物实验模型上如:电刺激甩尾、热水刺激甩尾、福尔马林炎症疼痛,采用行为学、电生理学(脊髓背角广动力范围神经元放电)、免疫组化、推挽灌流、放射免疫、原位杂交、激光共聚焦以及高效液相色谱-电化学检测(HPL-EC)等多种方法,探索了OFQ在痛觉调制及电针镇痛中的作用.现就我室近年来有关孤啡肽在痛觉调制及针刺镇痛中的作用作一概述.
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小波技术在毛细管电泳电化学检测中的应用与发展
小波变换是一种具有良好应用前景的信号处理技术.它能够同时提供信号的时域和频域信息,可将信号分频处理.毛细管电泳电化学检测器虽然有较高的灵敏度,但其电流噪声也影响其检测限和精密度.本文介绍了近年来利用小波变换处理毛细管电泳电化学检测信号的应用现状,表明该方法 是提高毛细管电泳电化学检测检测限、优化图谱的方法 之一.同时也对其在毛细管电泳电化学检测系统中的进一步发展做出了预测.
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毛细管区带电泳分离/电化学检测果汁中有机酸
目的:建立毛细管区带电泳分离/电化学检测果汁中有机酸的方法.方法:以溴化十六烷基溴化吡啶(CPB)作电渗流反向修饰剂,在电泳溶液中添加β-环糊精(β-CD)以提高分离选择性,并进行分离条件的优化,实现了草酸、柠檬酸、苹果酸、酒石酸、琥珀酸、延胡索酸六种有机酸的基线分离. 采用纳米钯修饰碳糊电极安培检测器分别加以测定.结果:本法对有机酸检测限(S/N=3)低于2μmol/L,线性范围在2个数量级以上(1×10-6～1.0(10-3mol/L),相对标准偏差1.05%～2.15%,加标回收率93.4%.结论:本法快速,灵敏度高,选择性强,适合于果汁中几种有机酸的同时测定.
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单胺类神经递质高效液相色谱检测方法的改进
单胺类递质是调节神经生理功能的重要物质,包括肾上腺素、去甲肾上腺素、多巴胺等.随着研究日趋深入,分离、检测此类递质的方法学研究也越来越重要.目前,国内外大多报道应用高效液相色谱(HPLC)-电化学检测作为首选分析方法,但由于单胺类递质的不稳定性,生物结构的相似性以及样本自身的内源性干扰物影响,加上样品中含量极微(ng/L),我们在实验中发现现有的测定方法重复性不稳定,因此对其进行了改进,建立了灵敏度高、重复性好的检测方法.
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高效液相-电化学检测法测定大鼠血浆灯盏乙素浓度及其药代动力学
目的:建立高效液相色谱-电化学检测法测定大鼠血浆中灯盏乙素浓度方法并研究其药代动力学.方法:血浆样品经液-液萃取后,用高效液相色谱-电化学检测法进行分析.色谱柱为Hypersil Cl8(ID150mm×4.6mm,5μm,);流动相为磷酸盐缓冲液-甲醇-乙睛(65∶35∶10);流速:0.6mL/min;电化学检测器工作电压为0.6V.结果:线性范围5ng/mL～1 000ng/mL,高、中、低3种浓度的平均方法回收率分别为100.35%、98.33%、109.3l%.日内、日间精密度(RSD)均小于10%.结论:本方法稳定、可靠,可用于灯盏乙素的血药浓度分析及大鼠灌胃药代动力学研究.
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HPLC法测定CRF血浆抗坏血酸及脱氢抗坏血酸水平的研究
目的 应用高效液相色谱(high performance liquid chromatography,HPLC)和电化学检测技术建立快速测定慢性肾衰竭(chonic renal failure,CRF)患者血浆抗坏血酸(ascorbic acid,AA)及脱氢抗坏血酸(dehydroascorbic acid,DHAA)含量的方法.方法 应用15%的偏磷酸溶液作为血液样本的蛋白沉淀剂及抗坏血酸的保护剂,处理后血浆样品-70℃保存,可极大提高血样中抗坏血酸的稳定性;分析柱为Inertsil ODS-3(DIKMA)150mmx4.6mm,4.5μm;进样量为10 μl,流速为0.8 ml/min,电压为0.8 V,柱温25℃;流动相由50 nmol/L磷酸钾和1 mmol/L乙二胺四乙酸(EDTA)溶液组成,pH为3.0.结果 线性范围2 μmol/L至200 μmol/L;其峰高与浓度的相关系数大于0.999;抗坏血酸的平均回收率为101.89%,AA的日内(n=5)和日间(n=5)的平均相对标准偏差(RSD)分别为1.710%和5.915%.结论 用高效液相色谱和电化学检测法检测CRF患者血浆中从及DHAA含量,特异性强,灵敏度高.
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高效液相色谱法测定生物样品中五羟色胺含量
目的:建立高效液相色谱法测定生物样品中五羟色胺含量的方法.方法:采用高效液相色谱-电化学检测器法.结果:HPLC法测定生物样品中五羟色胺的线性范围为0.05～50ng/mL,r=0.9997.平均回收率大于90%,日内和日间相对标准偏差均小于5%.结论:本法简便、准确、快捷,可用于生物样品中的5-羟色胺的测定.
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低压液相色谱电化学法检测复合维生素制剂中的维生素A
低压液相色谱电化学检测方法已成功地用于液态复合维生素制剂中维生素A的测定.文章详细地介绍了固定相,色谱柱和其它组成部分.检测系统由以氧化方式的玻璃质碳精工作电极为核心的贴壁流电池组成.通过改变流动相中甲醇的百分含量得到佳色谱分离条件.某色谱柱在65%～0.075M醋酸盐缓冲液为流动相时的保留时间是2.8分钟可以满足复合样品中维生素的测定.变异系数是3.8%(n=10),回收率在厂家要求的范围内.300pg的检测限(按倍噪比3∶1计算)远远低于药品中维生素A的含量.
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酸度对MCF-7细胞电化学行为的影响
目的:研究不同酸度条件下混合标准品(黄嘌呤、鸟嘌呤、腺嘌呤和次黄嘌呤)的电化学行为,为细胞裂解液电化学响应信号的归属提供依据.方法:采用电化学法对混合标准品及细胞裂解液进行单线扫描,对比分析细胞裂解液电化学信号的归属,同时对比高效液相色谱法检测结果,佐证电化学方法的正确性;进一步检测不同酸度条件下混合标准品电化学响应信号的变化,分析酸度对电化学法检测结果的影响.结果:混合标准品溶液和细胞裂解液分别在0.68V和1.00V左右出现了两个较大的响应信号,可以归属为黄嘌呤和鸟嘌呤、腺嘌呤和次黄嘌呤的混合峰.在pH=7.4、pH =7.2和pH =7.0的缓冲溶液中,黄嘌呤和鸟嘌呤混合峰出峰位置从0.67V处逐渐移动到0.71V处,腺嘌呤和次黄嘌呤混合峰出峰位置从1.00V处逐渐移动到1.03V处.结论:随着pH值的降低,标准品的电化学响应信号不断向高电位方向移动,混合标准品与细胞裂解液电化学响应信号位置的微小差别在于其酸度的差异.
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高效液相色谱法测定人血浆3-氯酪氨酸浓度
目的 建立人血浆3-氯酪氨酸(3-CT)浓度的定量分析方法 .方法 用三氯乙酸沉淀血浆蛋白后,HPLC-ECD定量检测.结果 3-氯酪氨酸血浆标准曲线的线性范围为0.062 5～2.000/μmol·L-1,r>0.996 6,回收率>71.8%.日内和日间的精密度(RSD%)分别<8.8%和11.1%.3-氯酪氨酸的保留时间为(16.57±0.30)min,总分析时间32 min.测得健康人和尿毒症患者(各6例)血浆3-CT浓度分别为(0.16±0.13)和(2.47±0.73)μmol·L-1(P<0.01).结论 本法所需样本量低,预处理步骤简便,适用于临床进行氧化应激、治疗、预后、诊断等研究工作之需.
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恩他卡朋及有关物质的HPLC-电化学检测器法测定
建立了高效液相色谱-电化学检测法测定恩他卡朋及其有关物质[(z)-异构体和3,4-二羟基-5-硝基苯甲醛].采用苯基柱,以0.04 mol/L磷酸盐缓冲液(pH 2.1)-甲醇(54:46)为流动相,玻碳圆盘电极为工作电极,银-氯化银电极为参比电极,工作电位为+o.65 V.思他卡朋及其两个有关物质分别在0.06～40、0.06～40和0.06～27μg/ml浓度范围内线性关系良好,检测限分别为0.05、0.06和0.03ng.恩他卡朋的回收率为99.9%,RSD为1.5%.
关键词： 恩他卡朋:(Z)-异构体 有关物质 高效液相色谱 电化学检测 测定 -
高效液相色谱法测定多巴胺-β-羟化酶活性
目的 建立一种通过高效液相色谱法测定酶促反应的产物真蛸胺(Octopamine)的量来确定大鼠血清及脑组织中多巴胺-β-羟化酶活性的方法.方法 采用ODS柱,流动相为缓冲液(0.02 mol/L柠檬酸三钠和0.05 mol/L磷酸氢二钠) ∶甲醇=85 ∶ 15的溶液,流速1.0 mL/min.结果 待测物真蛸胺标准溶液的保留时间和峰面积的RSD分别在0.29～0.67之间和0.09～0.36之间,重现性好;回收率在85.3%～95.4%之间,检测限1.58 pmol/mL;真蛸胺的线性范围在10～160 pmol/mL之间,相关系数为0.999 6.结论 该方法为神经毒理学、药理学等研究提供了一个简单灵敏、稳定可靠的方法.
