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荧光原位杂交探针在腺泡状软组织肉瘤诊断中的应用
腺泡状软组织肉瘤是一种好发于儿童和青年的罕见恶性软组织肉瘤,主要症状为缓慢生长的软组织肿块,多数患者在诊断数年后出现远处转移,预后差。腺泡状软组织肉瘤的肿瘤组织中存在特异性基因非平衡易位:der(17)t(X;17)(p11.2;q25)[1-2],即Xp11.2处TFE3端粒侧基因经复制后易位至17q25位点,并与该位点着丝粒侧的ASPL基因融合形成ASPL-TFE3基因,同时原X染色体是完整的,而17 q25端粒侧基因丢失。根据腺泡状软组织肉瘤特有的基因改变,我们设计了一种荧光原位杂交( FISH)多克隆探针,用来判断肿瘤组织内是否存在TFE3基因的非平衡易位,提供了一种诊断腺泡状软组织肉瘤的新方法。
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帕金森病相关的线粒体多态性基因型分析
目的 建立基于荧光杂交探针和熔解曲线分析方法,检测线粒体单核苷酸多态性的快速而可靠的技术,为与帕金森病相关的环境和遗传因素相互作用的人群流行病学研究提供技术支持.方法 从全血中提取线粒体DNA,设计特异性引物和荧光素标记探针,在LightCycler仪器上进行实时PCR和熔解曲线分析,根据检测探针上特异等位基因的荧光探针的熔点温度(Tm值)给样本的10个单核苷酸多态性分型,测序验证熔解曲线分析结果.结果 在线粒体DNA的1719、4580、7028、8251、9055、10398、12308、13368、13708和16391位点上的野生型向突变型变化,引起检测探针的Tm值依次降低6.51、8.29、3.26、7.82、4.79、2.84、2.73、9.04、8.53和9.52℃.熔解曲线分析获得的150个基因型分析结果与测序结果100%一致.结论 荧光杂交探针技术能快速和有效地检测线粒体DNA多态性.这种方法将能够用于大规模的环境流行病学研究,并有助于研究帕金森病的发病机制,识别遗传易感生物标志和保护易感人群.
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实时荧光定量聚合酶链反应技术及应用
从1985年Kary Mullis发明了聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)技术,到1988年Saiki发现耐热DNA聚合酶,使PCR进入应用阶段,至今已有近20年的历史了.实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,RQ-PCR)在核酸定量方面具有高敏感性、特异性强、可重复性等优点,从应用以来,给分子诊断领域带来了一次革命,并被广泛应用,成为科研的主要工具之一.本研究旨在阐述RQ-PCR的基本原理,介绍5种荧光化学方法:水解探针(hydrolysisprobes)、分子信标(molecularbeacons)、荧光标记引物(fluorescently-labeled primer)、双杂交探针(dual hybridization probes)、双链DNA嵌合剂SYBR Green Ⅰ(the double-stranded DNA-intercalating agent SYBR Green Ⅰ),并阐述其研究进展及应用.
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肽核酸在分子生物学方面的应用研究进展
肽核酸是一种核酸类似物,它是由2-氨基乙基甘氨酸蛋白骨架取代核酸的磷酸戊糖,可以高度特异地与所选基因序列的靶点结合.肽核酸能高亲和性、高特异性地与DNA或RNA杂交形成稳定双螺旋或三螺旋结构,并且杂合分子表现极强的热稳定性.此文就肽核酸在基因治疗中作为反义药物、杂交探针等分子生物学中的应用研究进展予以综述.
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荧光杂交探针技术检测单核苷酸多态性
目的 建立一种基于荧光杂交探针技术快速检测单核苷酸多态性方法.方法 提取线粒体DNA,在LightCycler仪器上进行实时PCR和熔解曲线分析,测序验证.结果 熔解曲线分析获得的150个基因型分析结果与测序结果100%一致.结论 实时PCR和杂交探针技术能快速、有效的检测单核苷酸多态性.
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采用杂交探针的实用PCR可同时检测影响药物
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广东地区汉族人MBL基因点突变的研究
目的: 研究我国汉族人群甘露聚糖结合凝集素(MBL)结构基因外显子1第52、54、57位密码点突变(CGT52TGT、GGC54GAC和GGA57GAA).方法: 收集广东地区汉族普通人群的血标本,提取白细胞基因组DNA, 以PCR扩增目的基因片段,应用荧光探针杂交可视技术检测其MBL基因的点突变.结果: 从202份样本中,检出GGC54GAC点突变纯合子6例和杂合子44例(等位基因频率为0.139), GGA57GAA点突变杂合子1例(频率为0.002),未发现CGT52TGT点突变(频率为0).结论: 广东地区汉族人群MBL基因点突变的频率较高,为防治MBL缺损病提供了一定的实验依据.