重组人白细胞介素-18的高浓度复性、纯化和活性检测

目的摸索大规模生产重组人白细胞介素-18(rhIL-18)高效简便、成本低廉的生产工艺.优化rhIL-18高浓度下优复性、纯化方案,建立快速准确的活性检测方法.方法采用液相色谱和光谱学方法检测复性效率,筛选确定rhIL-18优复性条件,再用Sepherose FFANX阴离子交换柱结合分子筛HiPrep Sephacryl S-100进行纯化.采用3H-掺入法检测rhIL-18产品对人外周血单个核细胞的促增殖作用,用流式细胞术检测其促γ-干扰素生成能力.结果建立了一套rhIL-18复性、纯化、活性检测方案.结论液相色谱和光谱学方法相结合,可用于检测rhIL-18的复性效率,流式细胞术也可用于检测rhIL-18的生物活性.

富硒维酶素的制备和抗瘤活性研究

目的研究富硒维酶素的制备及其所含成分的测定方法和抗肿瘤活性.方法用棉病囊菌经固体发酵利用亚硒酸钠制备富硒维酶素.测定富硒维酶素含硒量和其他成分,并与维酶素比较.初步进行对小鼠的抗肿瘤活性试验.结果制备的富硒维酶素含硒量比维酶素高0.026%.与维酶素比较对几种肿瘤具有不同程度的抗肿瘤作用,特别对Lewis肺癌的抑瘤作用达到37.8%～51.0%.结论棉病囊菌可以利用亚硒酸钠制备富硒维酶素,后者对Lewis肺癌的抑瘤率比维酶素提高了大约2.5倍.

硫酸软骨素对鸡胚绒毛尿囊膜的血管生成抑制作用

目的观察硫酸软骨素的血管生成效应.方法将15 g/L硫酸软骨素溶液4μl加到孵化4 d的鸡胚绒毛尿囊膜血管网上,24 h后观察对血管生长的影响.同时设有同浓度的氢化可的松组和肝素组及三蒸水组作为对照组.结果硫酸软骨素使鸡胚绒毛尿囊膜血管发生大面积褪色,血管密度减低;氢化可的松组血管结构模糊,分枝发生断裂,颜色变浅,血管密度减少;肝素组血管生长旺盛,血管密度增加;正常对照组血管网清晰,呈叶脉状,放射状生长.结论硫酸软骨素有显著的抗血管生成活性.

γ-亚麻酸乙酯的合成研究

目的确定合成γ-亚麻酸乙酯的佳工艺路线.方法以黑加仑油为原料采用尿素包和、柱色谱法、酸催化法等联合方法分离及合成γ-亚麻酸乙酯.结果确定黑加仑油经2～3次尿素包和,反应温度80℃,反应时间90min,3%盐酸作酸性溶媒,乙醇和γ-亚麻酸比例为3:1的制备工艺.结论酸催化法合成γ-亚麻酸乙酯工艺简便,易于操作,产品收率高、稳定性好.

木瓜凝乳酶基因克隆及毕赤酵母分泌型重组表达载体构建

目的扩增木瓜凝乳酶基因,构建重组表达载体.方法提取木瓜组织RNA,采用RT-PCR方法扩增木瓜凝乳酶基因,测序并利用BLAST软件进行序列分析.利用基因重组方法构建重组表达载体.结果扩增得到木瓜凝乳酶基因.结论构建了可在毕赤酵母表达系统中表达天然木瓜凝乳酶蛋白的重组表达载体.

疏通化纤丸对小鼠免疫功能的调节作用

目的观察疏通化纤丸对小鼠免疫功能的影响.方法以地塞米松引起小鼠免疫功能低下,以左旋咪唑作阳性对照,测定疏通化纤丸对免疫功能正常和低下小鼠巨噬细胞吞噬功能、血清溶血素含量以及ConA诱导T淋巴细胞增殖的作用.结果疏通化纤丸能明显提高免疫功能正常和低下小鼠的廓清指数、吞噬指数,能促进ConA诱导的正常小鼠脾淋巴细胞的增殖,而左旋咪唑仅对免疫低下的小鼠才有提高以上指标的功能.结论疏通化纤丸对机体免疫功能具有显著的提高作用.

严重急性呼吸综合征冠状病毒特异转移因子的制备及其免疫活性研究

目的制备严重急性呼吸综合征(SARS)冠状病毒特异转移因子并探讨其免疫学活性.方法以灭活的SARS冠状病毒免疫健康猪,取免疫后猪的脾脏和淋巴结,透析法提取转移因子,并作相应检测.通过巨噬细胞吞噬功能试验和白细胞黏附抑制试验探讨该品的免疫学活性.结果各项检测合格.巨噬细胞吞噬功能试验证明该品能促进巨噬细胞吞噬功跑.白细胞黏附抑制试验显示该品能提高未黏附白细胞抑制指数.结论SARS冠状病毒特异转移因子具有免疫增强作用和特异的免疫活性.

艰难梭菌A毒素的纯化

目的建立一种纯化艰难梭菌A毒素的方法.方法将艰难梭菌VPI 10463菌株经透析培养,50%饱和硫酸胺盐析,酸沉淀,再经DEAE-Toyopearl 650M离子交换色谱.结果精制的艰难梭菌A毒素Native-PAGE及对流免疫电泳均为单一带,相对分子质量为550 000,小鼠毒力为1×106MLD/ml,Vero细胞毒性为1×107CU/ml.凝血活性为1:512,肠袢试验为阳性.结论该法简便、实用、可行.

月桂氮卓酮复合促吸收剂促胰岛素经舌下黏膜吸收的研究

目的研究促胰岛素经舌下黏膜吸收的月桂氮卓酮(Azone)复合促吸收剂.方法应用正常大鼠的降血糖实验对Azone复合促吸收剂的组成进行正交筛选,研究胰岛素在不同组成的促吸收剂作用下对猪舌下黏膜的体外渗透扩散系数及促渗比.结果由正交实验确定了佳组成中Azone复合促吸收剂的比例为2.5%Azone、5%丙二醇、2.5%吐温80.胰岛素分别在5%丙二醇、5%丙二醇+2.5%吐温80、5%丙二醇+2.5%吐温80+2.5%Azone促吸收剂作用下的促渗比分别为1.9(P＞0.05)、2.6(P＞0.05)和7.8(P＜0.05).结论Azone复合促吸收剂中Azone是使黏膜通透性发生变化的主要因素.

羊胎免疫调节因子生物活性的研究

目的探讨不同相对分子质量(Mr)及不同工艺方法获得的山羊羊胎免疫调节因子(GEIF)生物活性效果.方法运用Ea玫瑰花环试验和T淋巴细胞转化试验进行对比分析.结果超滤法提取GEIF,不同Mr(3 000、5 000和10 000)Ea玫瑰花环恢复率和T淋巴细胞转化率之间没有明显差异;超滤法提取GEIF,Ea玫瑰花环恢复率和T淋巴细胞转化率均高于透析法.结论采用超滤法提取GEIF生物活性优于透析法,不同Mr提取GEIF生物活性无明显差异.

海洋星虫提取物的营养分析及免疫调节作用的初步观察

目的测定海洋星虫提取物的蛋白质、氨基酸和微量元素含量,并初步观察其对小鼠免疫功能的影响.方法采用盐溶液抽提、超滤、乙醇沉淀等步骤,从海洋星虫制备得到海洋星虫提取物,分别采用凯氏定氮法、氨基酸自动分析仪和等离子体发射光谱仪测定蛋白质含量、氨基酸组成和微量元素水平.结果海洋星虫提取物的蛋白质含量为55.3%,含牛磺酸、赖氨酸、精氨酸等18种氨基酸和Zn、Cu、Ge、Se等7种微量元素.动物实验表明,海洋星虫提取物能显著提高小鼠的胸腺指数和脾指数,促进脾脏T淋巴细胞转化.结论海洋星虫提取物营养丰富,能明显提高机体的免疫功能.

高效液相色谱法测定甲磺酸帕珠沙星注射液中右旋体的含量

目的建立甲磺酸帕珠沙星注射液中右旋异构体含量的高效液相色谱测定方法.方法Shim-pak CLC-ODS柱(150 mm×6.0 mm,5μm),流动相为L-异白氨酸硫酸铜溶液(取L-异白氨酸1.3g、硫酸铜1.0 g和水1 000ml溶解用0.1 mol/L盐酸或0.1 mol/L氢氧化钠调pH至3.5)-甲醇(75:25);检测波长:320 nm.结果甲磺酸帕珠沙星右旋体在0.5～100μg/ml浓度范围内呈良好的线性关系(r=0.999 3),平均回收率为99.54%,RSD为1.01%(n=9).结论此法快捷、专属性及重现性好,可用于甲磺酸帕珠沙星和D-甲磺酸帕珠沙星杂质的含量测定.

玻璃酸作为滴眼液媒介的机制及药效学研究

目的综述玻璃酸作为滴眼液媒介的机制和药效学研究.方法查阅相关文献资料,同时结合实验,分析玻璃酸提高药物在眼内生物利用度的机制及应用.结果玻璃酸通过其物理增黏、膜亲和以及与药物的结合等作用,可显著提高药物的生物利用度.结论以玻璃酸为媒介的滴眼液具有较高的生物利用度,应用前景广阔.

后基因组时代药物研究的新领域--蛋白质组学

为加速现代药物研究的进程,各种生物技术手段在后基因时代大力发展起来.尤其是蛋白质组学作为一种全新的技术平台,正日益广泛地应用于药物发现和药物开发的研究中.此文对蛋白质组学在涉及药物研究过程中的新技术及其应用进行了综述.

动物细胞表达的基因重组蛋白质药物

介绍了美国FDA 1996年至今批准的利用动物细胞表达的重组蛋白质药物,主要介绍了组织型纤溶酶原激活剂突变体、β-干扰素、新型红细胞生成刺激蛋白、凝血因子Ⅶ,并对它们的结构改造、生物活性、临床适应证、分离纯化等做了介绍.

几种造血刺激因子在肿瘤化疗中的应用

白细胞和中性粒细胞的减少为肿瘤化疗中常见的毒性作用.造血刺激因子为一类可调节血细胞生存、增殖及分化的生理性物质,为肿瘤化疗的血液学毒性提供有力的解决手段.

蛋白质的定向进化及应用

酶的定向进化是蛋白质工程的新策略,它模拟自然的进化机制,用突变和定向筛选的方法在体外人为改造酶.此文综述了定向进化的原理和基本方法,并阐述了研究意义和在医药领域的新研究成果.

玻璃酸钠在眼科的临床研究应用进展

参阅文献、结合作者在眼科使用玻璃酸钠黏弹剂等的情况,经综合、分析和归纳,玻璃酸钠作为黏弹剂可使眼科手术顺利进行,作为眼用制剂的媒介已有较多成熟产品在临床上使用.玻璃酸钠在眼科临床具有广阔的应用前景.

胰蛋白酶抑制剂研究概况

胰蛋白酶抑制剂泛指具有抑制胰蛋白酶活性作用的一类物质,此文对其来源、结构与功能的关系、在基因工程方面的发展以及目前研究较多的肿瘤相关胰蛋白酶抑制剂近几年的研究概况进行了综述.

内皮抑素及其研究前瞻

肿瘤是一种血管生成依赖性疾病.内皮抑素能够抑制新生血管的形成,从而抑制肿瘤的发展和转移,并且在长期反复治疗中不会引起耐药性.它在肿瘤治疗中的应用前景广阔.此文就其作用机理、性质、功能、及应用的研究进展作了综述.

参芪胶囊及其原药材中多糖的含量测定

目的测定参芪胶囊及原药材黄芪、党参、甘草中多糖的含量.方法用硫酸苯酚法测定多糖含量.结果参芪胶囊的多糖含量为0.95g/10粒;原药材黄芪、党参、甘草中的多糖含量分别为6.97%、23.83%、2.44%.结论参芪胶囊中多糖含量略低于等量原药材中多糖含量(黄芪3g、党参3 g、甘草2 g,理论多糖含量0.97 g)之和.测定方法可行.

胰腺激活提取对胰酶原粉收率和激肽释放酶活性的影响

目的探讨胰腺激活、提取温度和时间对胰酶收率和三酶(蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶)活力以及胰酶中激肽释放酶活性的影响.方法改变激活、提取温度和时间,了解影响胰酶收率、三酶活力和胰酶中激肽释放酶活性的主要因素.结果选择较佳的胰酶生产工艺条件(激活温度5℃,激活时间40h,提取温度10℃,提取时间4 h),胰酶收率可达9%～11%,胰蛋白酶、胰淀粉酶、胰脂肪酶的活力比为1:18:7,胰酶中激肽释放酶的活力达(1 100±100)u/mg,产品质量符合出口标准.结论该方法简便实用,便于生产推广.

乌鸡精水解工艺的研究

目的改进乌鸡白凤口服液和乌鸡精中乌鸡水解的生产工艺.方法选用不同的蛋白酶、加水量(浓度)、水解时间等因素进行比较试验,以正交试验测定水解液中游离氨基酸总含量评定效果.结果以木瓜蛋白酶和中性蛋白酶合用,用量分别为底物的1.0%、0.5%,加水量为底物的5倍,水解时间为6 h为佳条件.结论此试验为乌鸡精产品的生产节省工时、降低成本和能耗提供了理论依据.

高效液相色谱法测定灯盏花素缓释片的含量及释放度

目的建立测定灯盏花素缓释片含量的高效液相色谱法,测定体外释放度.方法采用0DS柱,0.02mol/L K2HPO4缓冲液(用磷酸调pH 7.5)-甲醇(60:40)为流动相;检测波长为335 nm;流速为1.0 ml/min进行检测.转篮法测定释放度.结果灯盏花素浓度在0.996～99.6μg/ml范围内与峰面积呈良好线性关系,高、中、低3种浓度的平均回收率为99.1%～99.5%(n=5),日内、日间RSD分别为0.69%(n=6)、0.82%(n=5).结论采用高效液相法测定灯盏花素缓释片的体外释放具有灵敏、准确、专属性高的优点.

酸性多糖中的葡萄糖醛酸与中性糖的含量测定

目的对酸性多糖中的葡萄糖醛酸(GA)与中性糖的含量进行测定.方法将葡萄糖和GA配成一系列混合糖,比较硫酸咔唑法和间羟联苯法测定GA含量的准确度;分别建立葡萄糖和GA对硫酸蒽酮的标准曲线以扣除GA对中性糖测定的干扰.结果葡萄糖的存在对用硫酸咔唑法测定GA有干扰,而用间羟联苯法测定几无干扰;另外,GA的存在对用硫酸蒽酮法测定中性糖有一定干扰.结论应采用间羟联苯法测定酸性多糖中的GA含量,同时扣除GA在硫酸蒽酮法中的干扰以得到中性糖的含量.

弹性蛋白酶胶囊的药效学实验研究

目的对弹性蛋白酶胶囊的抗高血脂作用及抗肝损害作用进行药效学实验研究.方法高血脂大鼠和酒精性肝损伤小鼠分为低、中、高3个剂量组,灌胃给药30 d,取血检测.结果弹性蛋白酶胶囊能明显抑制血清胆固醇和甘油三酯的升高,减少小鼠肝细胞脂肪变性,降低肝组织中甘油三酯、丙二醛含量,升高还原性谷胱甘肽.结论弹性蛋白酶胶囊具有明显的调节血脂作用,对酒精性肝损伤有明显的保护作用.

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