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纳豆激酶活性测定方法的比较
纳豆激酶是由纳豆芽孢杆菌经发酵产生的一种丝氨酸蛋白酶,可用于溶栓药物的开发.本文比较了两种测定纳豆激酶活性方法:琼脂糖--纤维蛋白平板法和枯草杆菌蛋白酶活力测定方法,为快速、准确地标示纳豆激酶的效价提供技术支撑.
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前纳豆激酶原基因化学诱导型表达载体的构建及鉴定
目的 克隆前纳豆激酶原基因,实现其在大肠杆菌中的表达,并对其表达条件进行研究.方法 从枯草芽孢杆菌中分离纯化基因组DNA作为模板,通过PCR扩增前纳豆激酶原基因,将其克隆到质粒pUC19中,构建重组克隆质粒pNK并转化大肠杆菌DH5α;将目的基因片段与表达载体pET30a连接,构建重组表达质粒pENK,转化大肠杆菌BL21(DE3),对其表达条件进行研究.结果 序列检测结果表明,所克隆片段全长1 152bp,与Genbank中已报道序列相比较,同源性达到100％.转化菌pENK108-BL21(DE3)经IPTG诱导表达目的产物,SDS-PAGE检测结果显示具特异条带,Western Blotting检测结果表明,表达产物确系目的融合蛋白.转化菌pENK108-BL21(DE3)在LB培养基中经37℃培养,1mmol/L IPTG诱导4h后,目的产物表达量达到大,约占菌体总蛋白的31％.时间凝块法显示表达物具有一定的纤溶作用.结论 成功构建前纳豆激酶原基因化学诱导型表达载体,并对转化菌的表达条件进行了研究.
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脑梗的糖尿病人能做胃转流手术吗?
您好!首先向您及您全家问好!我今年48周岁,患糖尿病13年了,已有并发症,双侧脑梗,眼底病变Ⅱ期,刚发现有点儿心肌缺血,不重,没有明显感觉,说话有点儿不顺,一般人听不出来,能正常上班.我的父母都有糖尿病、高血脂,现在都已不在了.我现在的治疗办法是降胆固醇、疏通血管、注射胰岛素控制血糖.前一段有个节目在中央电视台新闻频道播了3次,《焦点访谈》播了1次,说是国内研制了一种纳豆激酶,有溶化陈旧性脑梗的作用,原是日本一位叫须久洋行的博士研制出来的保健品,前段北京保健品市场上摆满了.但是北京市一位老干部吃了两个月,后来一检查,梗塞一点儿没溶.焦点访谈的节目是讲某医院做的一个实验,在实验盒内放了日本和国产的纳豆激酶,日本纳豆激酶把栓塞溶得很彻底,国产纳豆激酶一点没溶.向主任,不知道日本纳豆激酶什么时候能进口我国?
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固体发酵产纳豆激酶工艺条件的研究
本文以大豆为原料,采用固体发酵法制备纳豆激酶,并对其发酵工艺条件进行了研究.实验结果表明,固体发酵产纳豆激酶的佳发酵条件为:发酵时间48小时,发酵温度30～37℃,培养基初始pH值7.0,培养基的含水量70%.
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纳豆激酶活性测定的方法学研究
目的:确定一种测定纳豆激酶活性的方法.方法:建立琼脂粉-纤维蛋白平板法测定纳豆激酶的活性,并对本法与纤维蛋白平板法、琼脂糖-纤维蛋白平板法测定纳豆激酶活性的特点进行了比较.结果:琼脂粉-纤维蛋白平板法测定纳豆激酶活性,具有溶圈明显、易于测量、机械强度好、操作简便、成本低等优点,该法的测定下限为55 IU·mL-1,精确测定范围为326.6～2 200 IU·mL-1.结论:琼脂粉-纤维蛋白平板法可以测定纳豆激酶的活性.
关键词： 纳豆激酶 活性 琼脂粉-纤维蛋白平板法 -
纳豆激酶缓释片的制备及药物释放影响因素的研究
目的:制备纳豆激酶缓释片并研究其体外释药影响因素.方法:采用直接压片法制备纳豆激酶缓释片,研究了不同骨架材料、HPMC用量、PVP用量、不同稀释剂、MCC用量对纳豆激酶缓释片体外释药速率的影响.结果:骨架材料和稀释剂的种类对药物释放有明显影响,释药速率随着HPMC和PVP用量的增加而减慢,而MCC用量的增加可加快药物的释放.结论:以HPMC与PVP作为混合骨架材料、MCC作为稀释剂,具有良好的缓释效果,HPMC,PVP和MCC的用量是影响药物释放速率的重要因素.
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高效纳豆激酶片的制备
目的 探讨纳豆的佳制备方法及高效纳豆激酶片的制备过程.方法 通过分离和筛选,选择出枯草芽孢杆菌纳豆亚种为菌种,并确定其活性的检测方法,然后将佳条件下发酵的纳豆经调味、制粉压片后制成纳豆激酶片.结果 将大豆煮熟,接入纳豆菌后发酵,发酵后的纳豆经冷冻、升华干燥后粉碎,然后用葡萄糖、食盐、卡拉胶等调味,压制成片.结论 经以上处理后的纳豆激酶片,既大地保留了其活性,又掩盖了其原有的臭味,口味易于接受,有较好的可操作性和良好的发展前景.
关键词： 纳豆激酶 发酵 枯草芽孢杆菌纳豆亚种 -
纳豆及纳豆激酶的保健功效
纳豆是一种发酵豆制品,作为日本人的主要佐餐食品已有1000多年的历史了.多吃纳豆对人体健康的益处很多,可防治心脏病、中风、癌症、骨质疏松、肥胖症以及病原菌引起的消化道疾病.
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纳豆在预防心脑血管疾病方面的保健作用
纳豆实际上就是发孝大豆,中国称之为豆鼓,在日本、韩国已有上千年的食用历史.1987年,日本须见洋行博士发现了纳豆中所含的纳豆激酶具有溶血栓作用并获得国际社会所认可之后,纳豆在防止骨质疏松、抑制高血糖、溶解血栓、抗菌消毒、预防高血压、抗癌及抗氧化等的保健作用[1],特别是在预防心脑血管疾病的作用就越来越受到人们的重视.
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发酵纳豆中加入中药后对纳豆激酶活力的影响
目的:通过对纳豆发酵中加入中药苦参、板蓝根、漏芦、红花后纳豆激酶活力的改变进行研究,从而筛选出能够提高纳豆激酶活力的中药,同时也将中药之药性融入其中,以便更好地提高纳豆之医疗、保健功能.方法:本实验采用纤维蛋白-琼脂糖平板法测定发酵后产物中纳豆激酶的活力大小.结果:苦参、板蓝根可提高纳豆激酶活性,漏芦可降低纳豆激酶活性,红花可抑制枯草芽孢杆菌的生长使之没有活性.结论:发酵纳豆中加入中药后对纳豆激酶的活力有不同程度的影响.
关键词： 纳豆芽孢杆菌 纤维蛋白-琼脂糖平板法 纳豆激酶 中药 -
纳豆激酶及其药理作用的研究进展
血栓栓塞性疾病是引起死亡的主要原因之一,是现今仅次于癌症的第二大病症.据世界卫生组织(WHO)估计,全世界共有血栓患者1 500万[1],每年死于心脑血管病的人数超过1 200万人.其中在美国,男性急性心肌梗死的死亡率达27%,女性为44%.在我国,每年需要进行溶血栓治疗的人数超过300万,每年死于心脑血管疾病的人数约为200万人,占因病死亡总人数的40.7%,其比例远高于癌症,居各类死因之首.
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纳豆激酶纤维蛋白溶解和抗血栓作用初步研究
目的:初步探讨纳再激酶的纤维蛋白溶解和抗血栓的作用.方法:通过研究纳豆激酶对正常新西兰兔凝血功能、纤维蛋白降解产物和大鼠血小板血栓(动-静脉旁路法)的影响来评价纳豆激酶的纤溶和抗血栓作用.结果:纳豆激酶中、高剂量可明显缩短ELT、延长TT、APTT.增加FDP的含量;纳豆激酶高剂量能减少大鼠血小板血栓模型之血栓湿重,但对血栓干重无明显影响.结论:纳豆激酶具有纤维蛋自溶解作用.
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纳豆激酶对颈动脉粥样硬化和高血脂患者的疗效观察
目的 评估纳豆激酶(NK)在降低颈总动脉中膜厚度(CCA-IMT)、颈动脉斑块面积和血脂中的作用,探讨其作用机制和潜在临床应用.方法 入选病例来自于中山大学附属第三医院中医科门诊,按抽签法随机分为两组(每组41例),NK组:患者每天口服纳豆激酶6 000 FU,ST组:患者每天口服辛伐他汀20 mg,疗程26周.在治疗前和治疗后,采集记录患者的CCA-IMT、颈动脉斑块面积和血脂谱[总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)和高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)],并进行统计学分析.结果 入选82例患者,其中76例(NK 39例,ST 37例)按要求完成疗程.经26周治疗后,NK组患者的斑块面积和CCA-IMT显著下降(P＜0.01),斑块面积从(0.25±0.12)cm2下降到(0.16±0.10)cm2,而CCA-IMT从(1.13±0.12)mm降到(1.01 ±0.11)mm,NK组的下降幅度显著大于ST组(P＜0.01),NK组和ST组的斑块面积变化率分别是-36.6％与-11.5％;NK能显著降低TG、TC和LDL-C水平(P＜0.05),但是与ST组比较,下降幅度相对较小(约为ST组的50％);NK同时有提升HDL-C的作用(P＜0.05),而ST对HDL-C水平没有影响.NK组患者降脂幅度与动脉粥样硬化的改善指标没有正相关关系(r=0.35,P=0.09).结论 本研究为纳豆激酶有效改善颈动脉粥样硬化的先驱性临床研究.观察结果显示,每天服用NK是控制颈动脉粥样硬化发展的有效方法,效果比辛伐他汀更显著.在管理动脉粥样硬化上,NK可能是潜在的比他汀类更好的选择.NK改善动脉粥样硬化的机制可能与降低血脂没有直接关系,与他汀类药作用机制不同.
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兔小肠吸收纳豆激酶及其分布特征研究
目的 研究兔小肠吸收纳豆激酶及其分布特征. 方法 双夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血浆中纳豆激酶;链霉菌抗生物素蛋白-生物素-过氧化物酶复合物(SABC)免疫组织化学技术观察小肠吸收纳豆激酶分布.结果 颈总动脉血栓模型兔十二指肠注射纳豆激酶液体发酵粗酶液,高剂量组(4500 IU / kg ·bw)注射1、1.5、2、3 h和低剂量组(2500 IU / kg ·bw)注射1.5、2、3 h,血浆中纳豆激酶检测阳性.免疫组化染色结果 表明,正常兔口服纳豆激酶粗制液后,空肠纹状缘深棕色阳性吸收颗粒多,上皮细胞胞浆中有深棕色阳性吸收颗粒,十二指肠与回肠纹状缘有棕色、弥漫性的阳性吸收颗粒,吸收强度为空肠＞回肠＞十二指肠. 结论 纳豆激酶可经小肠吸收进入血浆.
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纳豆激酶粗制液对家兔溶血栓作用及其机制研究
目的: 观察纳豆激酶粗酶液体外、体内溶解血栓的作用.方法: 20% FeCl3制造兔颈动脉血栓模型;18只日本大耳兔,随机分为3组,即十二指肠肠腔注射纳豆激酶(Nattokinase,NK)高、低剂量实验组(分别4500 U/kg、2500 U/kg)、生理盐水模型对照组.结果: 体外试验表明,纳豆菌株B.N.12液体发酵粗酶液作用血凝块10 h、22 h后,溶解率分别为78.23%、98.16%,对照组分别为21.43%、23.91%(P＜0.05,P＜0.01);动物试验表明,与对照组相比,NK高剂量组注射1.0 h、1.5 h后,凝血时间(coagulation time ,CT) (P＜0.05)、凝血酶原时间(prothrombin time, PT) (P＜0.05)、凝血酶时间(thrombin time, TT) (P＜0.01)和活化的部分凝血活酶时间(activiated partial thrombopastin time ,APTT) (P＜0.05)均显著延长,注射2 h后优球蛋白溶解时间(euglobulinlysis time, ELT)和纤维蛋白原(fibrinogen, FIG)含量显著降低(P＜0.01、P＜0.05),纤维蛋白降解产物(fibrinogen degradation products, FDP)含量明显增高(P＜0.05),血浆D-二聚体(D-dimer)呈阳性,病理组织切片表明肺静脉、肾小球毛细血管中无明显血栓,只有少量红细胞聚积;低剂量组CT、PT和APTT各指标及FIG含量无显著变化,但ELT明显缩短(P＜0.05),FDP含量、TT值显著增高(P＜0.05),且血浆D-dimer呈阳性.结论: 纳豆激酶在体内和体外均具有明显的溶栓效果,提高纤溶活性、增强抗凝作用是其溶栓机制之一;纳豆激酶低剂量临床应用可能更具安全性.
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纳豆激酶液体发酵条件的研究
纳豆来源于中国的豆豉.纳豆含有大量丰富的生理活性物质,具有抗血栓、降血压、抗菌、抗氧化、预防癌症、有利于神经损伤的再生[1],能诱发玻璃体后脱离(PVD)[2,3],抗血小板聚集[4]等多种显著的生理调节功能,日益受到世界各国的重视.1987年,日本的须见洋行[5]首先在这种日本传统食品中发现并且提取出具有溶解血栓功能的活性物质,将其定名为纳豆激酶(nattokinase,NK).较之传统纤溶性药物,纳豆激酶具有多方面的优势,如来源广泛、天然、可口服、易被人体吸收、内出血倾向小,更重要的是纳豆激酶可以直接作用于交联纤维蛋白,降低血中胆固醇、降低血压、抑制骨质疏松症、抑制动脉粥样硬化、维持血细胞的正常形态和功能等[6-12].纳豆激酶分子量远远小于尿激酶、t-PA,是一个单链蛋白,易被人体吸收,且作用时间长(＞8h),可望成为具有开发潜力的新型药物.
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新一代溶栓药物纳豆激酶
血栓栓塞性疾病是引起死亡的主要原因之一,是现今仅次于癌症的第二大病症.目前,溶解血栓是治疗这一类疾病的重要手段,当今用于临床治疗的药物包括链激酶(strep tkinase,SK)、尿激酶(Urokinase,UK)、组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)、单链尿激酶型血纤溶酶原活剂(SCUPA)、化学修饰的血纤溶酶-链激酶激活剂复合物(APSAC)等.
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纳豆激酶研究进展
纳豆激酶(nattokinase)是一种在纳豆发酵过程中由纳豆菌(baciuus natto)或纳豆枯草杆菌(bacillus subtilis natto)产生的丝氨酸蛋白酶,它可分泌到细胞外.纳豆激酶具有很强的纤溶活性,不但能直接作用于纤溶蛋白,而且还能激活体内纤溶酶原,从而增加内源性纤溶酶的量与作用[1].人体内的血栓引发脉管栓塞、脑血栓中风、急性心肌梗死等严重的心血管疾病,尤其对中老年人的身体健康造成很大的危害,目前全世界血栓患者达1 500万,潜在的溶栓剂市场达20亿美元.但溶栓制剂,如尿激酶、链激酶、重组组织型纤溶酶原激活剂等存在半衰期短、副作用大、价格昂贵等缺点,难以成为适用的大众药品.而纳豆激酶具有安全性好,作用迅速,成本低,可由细菌发酵生产等优点,可用于开发新一代溶栓剂或保健食品[2],具有极为广阔的前景.本文对其研究进展综述如下.
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纳豆激酶对实验动物溶栓作用的研究
目的 观察纳豆激酶在体内溶解血栓的作用.方法 利用30%FeCl3制造大鼠颈动脉血栓模型,随机分为5组,包括血栓对照组,低剂量纳豆激酶组,高剂量纳豆激酶组,蚓激酶对照组和生理盐水对照组.利用花生油喂食的方法构建高脂血症动物模型,分成4组进行试验,包括普通饲料对照组,添加花生油对照组,同时添加低剂量纳豆激酶和同时添加高剂量纳豆激酶组.结果 血栓复制40 min后,纳豆激酶组与单纯血栓组相比,股动脉血压显著下降.此外,纳豆激酶组与单纯血栓组比较,经纳豆激酶处理的动物其血栓的湿质量、干质量降低.在高脂血症动物模型中,添加纳豆激酶组表现出总胆固醇(TC)和高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)明显降低,而且这种趋势随着纳豆激酶量的增高更加显著.结论纳豆激酶在体内具有明显的溶栓效果,并且有一定的预防和降低血脂的作用.
关键词： 纳豆激酶 大鼠 Sprague-Dawley 小鼠 近交BALB C -
纳豆激酶对实验动物溶栓作用的研究
目的 观察纳豆激酶在体内溶解血栓的作用.方法 利用30%FeCl3制造大鼠颈动脉血栓模型,随机分为5组,包括血栓对照组,低剂量纳豆激酶组,高剂量纳豆激酶组,蚓激酶对照组和生理盐水对照组.利用花生油喂食的方法构建高脂血症动物模型,分成4组进行试验,包括普通饲料对照组,添加花生油对照组,同时添加低剂量纳豆激酶和同时添加高剂量纳豆激酶组.结果 血栓复制40 min后,纳豆激酶组与单纯血栓组相比,股动脉血压显著下降.此外,纳豆激酶组与单纯血栓组比较,经纳豆激酶处理的动物其血栓的湿质量、干质量降低.在高脂血症动物模型中,添加纳豆激酶组表现出总胆固醇(TC)和高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)明显降低,而且这种趋势随着纳豆激酶量的增高更加显著.结论纳豆激酶在体内具有明显的溶栓效果,并且有一定的预防和降低血脂的作用.
关键词： 纳豆激酶 大鼠 Sprague-Dawley 小鼠 近交BALB C
