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前纳豆激酶原基因化学诱导型表达载体的构建及鉴定
目的 克隆前纳豆激酶原基因,实现其在大肠杆菌中的表达,并对其表达条件进行研究.方法 从枯草芽孢杆菌中分离纯化基因组DNA作为模板,通过PCR扩增前纳豆激酶原基因,将其克隆到质粒pUC19中,构建重组克隆质粒pNK并转化大肠杆菌DH5α;将目的基因片段与表达载体pET30a连接,构建重组表达质粒pENK,转化大肠杆菌BL21(DE3),对其表达条件进行研究.结果 序列检测结果表明,所克隆片段全长1 152bp,与Genbank中已报道序列相比较,同源性达到100%.转化菌pENK108-BL21(DE3)经IPTG诱导表达目的产物,SDS-PAGE检测结果显示具特异条带,Western Blotting检测结果表明,表达产物确系目的融合蛋白.转化菌pENK108-BL21(DE3)在LB培养基中经37℃培养,1mmol/L IPTG诱导4h后,目的产物表达量达到大,约占菌体总蛋白的31%.时间凝块法显示表达物具有一定的纤溶作用.结论 成功构建前纳豆激酶原基因化学诱导型表达载体,并对转化菌的表达条件进行了研究.
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乌司他丁对严重创伤患者凝血功能的影响
乌司他丁是从男性尿液中分离纯化的尿胰蛋白酶抑制剂,除对多种蛋白酶、糖和脂水解酶有抑制作用外,还能延长部分活化凝血酶原时间和凝血酶时间,有抗纤溶作用[1-2].目前临床上主要用于急性胰腺炎的治疗[3-4].本研究旨在探讨乌司他丁对严重创伤患者凝血功能的影响.
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髓系白血病血浆尿激酶型纤溶酶原激活物及其受体的检测与临床意义
尿激酶型纤溶酶原激活物(u-PA)与尿激酶型纤溶酶原激活物受体(u-PAR) 是近年特别关注的两个纤溶因子,它们除了纤溶作用外,还参与胞外基质降解、细胞修复和组织重塑等过程.因此这两个因子与恶性肿瘤细胞的生长、浸润和预后有关.我们对急性和慢性髓系白血病患者血浆u-PA和u-PAR水平及其在化疗前后变化中的临床意义进行研究.
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纤溶酶原激活物抑制剂-1基因多态性与代谢综合征
纤溶酶原激活物抑制剂-1(plasminogen activator inhibitor-1, PAI-1)是纤溶系统的主要调节因子,与纤溶酶原激活物(tPA)结合后,迅速失活而发挥抗纤溶作用.故可减少纤维蛋白降解,引起纤维蛋白聚集,保持人体正常血液中纤溶系统与凝血系统的动态平衡.
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髋、膝关节置换术抗纤溶药序贯抗凝血药平衡
髋、膝关节置换术(total hip arthroplasty, THA;total knee arthroplasty, TKA)常伴随大量失血及高输血率,文献报道THA、TKA围手术期总失血量多在1000 ml以上,输血率为30%~60%[1]。大量失血会增加手术风险,输血也会增加免疫反应、疾病传播的风险,同时加重患者的经济负担[2]。氨甲环酸(tranexamic acid, TXA)是一种纤溶酶抑制剂,可有效减少THA、TKA围手术期的失血量、降低输血率,已被大多数研究及骨科医师所肯定。但TXA不同使用方案的效果存在明显差异,给临床工作中安全合理地应用TXA造成困难。THA、TKA患者是静脉血栓栓塞症(venous thrombo embolism, VTE)的高发人群,应用抗凝血药物能有效降低其发生风险,但不恰当的使用可能加重术后出血。TXA的抗纤溶作用可能加重VTE风险,因此使用TXA后如何及时、有序地序贯使用抗凝血药预防VTE,从而达到抗纤溶和抗凝血的平衡,即在不增加深静脉血栓形成(deep ve-nous thrombosis, DVT)的基础上大限度减少出血、降低输血率已成为目前研究的重点。
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蚓激酶治疗脑梗死的临床观察
蚓激酶是从蚯蚓中提取的一种蛋白水解酶,是一种多分酶制剂,其中含有类似组织纤维蛋白酶原激活物(t-PA)的成分,因其具有溶栓、抗凝和去纤溶作用.黑龙江省大庆市第六医院选择了经临床和CT确诊为脑梗死的36例患者,随机分为治疗组和对照组,观察其临床疗效,证明蚓激酶疗效肯定、安全,未见明显副作用.结果报道如下.
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蚓激酶治疗脑梗死的临床观察
蚓激酶是从蚯蚓中提取的一种蛋白水解酶,是一种多分酶制剂,其中含有类似组织纤维蛋白酶原激活物(t-PA)的成分,因其具有溶栓、抗凝和去纤溶作用,我们选择了经临床确诊为脑梗死的36例患者,随机分为治疗组和对照组,观察其临床疗效,证明蚓激酶疗效肯定、安全、未见明显副作用.结果报道如下.
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PAI-1基因多态性与糖尿病慢性并发症的研究进展
血浆纤溶酶原激活物抑制物-1(plasminogen activatorinhibi-tor one,PAI-1)是纤溶系统的主要生理抑制剂,属于丝氨酸蛋白酶抑制剂超家族,可与组织型和尿激酶型纤溶酶原激活物(t-PA和u-PA)特异性结合,使二者迅速失活,从而发挥抗纤溶作用.
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低分子肝素临床新论
肝素是由葡萄糖胺和葡萄糖醛酸交联而成的粘多糖酯,分子量0.5万~3万.由于其生物活性不一,仅低分子的1/3部分有较强的抗凝作用,高分子部分易致出血、血小板减少、脂质代谢异常等不良反应,临床应用受限.为此,近年国内外研究人员致力于低分子肝素的开发,将肝素经化学或酶解聚后生成平均分子量在4000~6500的肝素片段.临床已使用的有达肝素钠、那屈肝素钙、依诺肝素钠、舍托肝素钠、亭扎肝素钠、瑞肝素钠等品种.它们因分子量较小,抗凝效果和纤溶作用较强,而抗血小板、诱发出血的作用大为减弱,并且生物利用度高达98%,量效关系明确,确定剂量时抗凝效果易于预测,血浆半衰期较普通肝素长2~3倍,不透过胎盘屏障,给药更为方便等优势,而备受临床青睐,目前广泛用于下列疾病.
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检测血浆GMP-140,PC,Fb和D-D对鉴别诊断肝硬化和肝癌的临床意义
血小板α颗粒膜蛋白(GMP-140)是一种反应血小板活化程度的蛋白,是血小板活化的特异标志物;蛋白C(PC)是一种由肝脏合成的依赖维生素K的具有抗凝和纤溶作用的蛋白;凝血因子I(Fb)是凝血过程中必不可少的凝血因子;D二聚体(D-D)是一种继发性纤溶的产物.我们检测肝硬化和原发性肝细胞癌患者血浆GMP-140,PC、Fb和D-D含量,以探讨其临床意义.
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蝎毒肽Ⅰ纤溶作用的血管内皮细胞介导机制研究
全蝎是我国传统名贵药材,祖国医学认为其有祛风、止痉通络、解毒之功效.现代药理研究证明蝎毒是全蝎的主要有效成分,由蛋白质和非蛋白质两大部分组成,其中大部分是发挥药理活性的蛋白质.1994年,吕欣然等[1]首次报道蝎毒对大鼠有纤溶作用.作者为从蝎毒中寻找低毒高效的纤溶组分,对蝎毒蛋白进行分离纯化,并对其分离后的多种蛋白组分进行纤溶筛选.今在此实验基础上,以人脐静脉内皮细胞为受试对象,拟进一步揭示其有效纤溶组分蝎毒肽Ⅰ纤溶的内皮细胞介导机制.
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普恩复治疗脑梗死的临床观察
普恩复胶囊是从蚯蚓中提取的一种蛋白水解酶,是一种多分酶制剂,其中含有类似组织纤维蛋白酶原激活物(t-PA)的成分,因其具有溶栓、抗凝和去纤溶作用,我们选择了经临床和CT确诊为脑梗死的36例患者,随机分治疗组和对照组,观察其临床疗效,证明普恩复胶囊疗效肯定、安全、未见明显副作用.结果报道如下.
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低分子肝素及其临床应用
低分子肝素在治疗血栓栓塞性疾病如急性脑梗死、急性冠脉综合征及老年冠心病中均有较好疗效.1作用特点[1]低分子肝素是由标准肝素经化学或酶学方法解聚而成,相对分子量为4 500,其抗Xa因子活性高,而抗凝血酶活性低,有促进纤溶作用,增强血管内皮细胞的抗血栓作用.
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蛛网膜下腔出血患者74例的临床护理体会
蛛网膜下腔出血(SAH)主要是由于颅内血管的先天性动脉瘤、动静脉畸形、高血压动脉硬化性动脉瘤等因素引起血管破裂,血液流入蛛网膜下腔所致.患者常因大量出血、再出血和并发血管痉挛而死亡,做好急性期护理对制止出血或减少复发、缓解血管痉挛、改善预后十分重要.对74例患者采取有效护理措施,患者未发生再次破裂出血,疗效满意.1 临床资料本组病例74例,其中男性33例,女性41例,中位年龄47岁.全部病例均经CT证实,临床症状有剧烈头痛、呕吐、昏迷、精神症状、尿失禁以及脑膜刺激症、瞳孔不等大等体征.给予甘露醇,呋塞米等脱水降颅压治疗,并给予具有抗纤溶作用的止血药物6-氨基己酸降低再出血率,静脉尼莫地平[1]防治SAH后脑血管痉挛的发生等治疗,63例治愈出院,7例转外科手术治疗,4例死亡.
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低分子量肝素及其眼科应用的研究进展
低分子量肝素是80年代新发现的由标准肝素处理而得到的肝素片段,与母体肝素相比,具有纤溶作用强,有更高的生物利用度和更长半衰期等优点,正在取代标准肝素,并在内科及外科领域得以广泛应用.近年来研究发现,其在眼科领域也具有抑制细胞增生、减轻炎症反应、预防纤维蛋白渗出、减轻角膜及后囊混浊、抑制后发性白内障形成、降低视网膜脱离的发生率和降低眼压等作用.本文除简介低分子量肝素的有关知识外,重点介绍其在眼科应用的研究进展.
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浅谈对进行静脉溶栓治疗的急性心肌梗死患者的护理方法
急性心肌梗死(AMI)是在冠状动脉粥样硬化病变的基础上,血栓形成导致血供急剧减少或中断,使相应的心肌发生严重而持久的急性缺血性坏死.该病是心血管内科的常见病、多发病,去除血栓是其主要治疗手段,溶栓治疗是该病的一种重要的治疗方法.尿激酶是我国应用广的溶栓剂,其能直接激活并裂解纤溶酶原,生成纤溶酶,从而发挥纤溶作用,溶解冠状动脉内血栓,使堵塞的血管再通,抢救濒死的心肌.尿激酶无抗原性和致热源性,在人体内无抗体存在,可多次重复静脉注射.笔者结合长期在CCU工作的实践经验认识到,对AMI静脉溶栓患者,从治疗前到治疗后,每个护理环节都非常重要.
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纳豆和纳豆激酶在预防和治疗疾病中的作用
纳豆是日本的传统食品,已食用千年.但从1987年,须见洋行教授道次发现纳豆中含有丰富的纳豆激酶,同时纳豆激酶还具有很强的纤溶作用之后,纳豆及其酶制剂便引起普遍关注.很多学者对其进行了药理学和治疗或预防疾病的研究[1],并发现其有纤溶治疗、抗菌、降血压、降胆固醇、降血脂和抗氧化等作用.与此同时一些食品生产和制造公司也对纳豆作了深加工.如日本的大和制药公司从纳豆中提取出纳豆激酶,冻干成粉剂,再制成软、硬胶囊作为保健食品推向市场,在美国、韩国和欧洲市场销售.目前已证明纳豆和纳豆激酶对一些疾病有很好的预防和治疗功效[2].现就其预防和治疗某些疾病的研究进展综述如下:
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心血管病、糖尿病和SLE患者血浆u-PA和u-PAR检测及其应用意义
尿激酶型纤溶酶原激活物(urokinase type plasminogen activator,u-PA)与尿激酶型纤溶酶原激活物受体(urokinase type plasminogen activator receptor,u-PAR)是近年特别关注的纤溶因子,它们除了纤溶作用外,还参与胞外基质降解、细胞修复和组织重塑等过程,与肿瘤生物行为的密切关系及其临床意义已有较多报道[1],而对心血管病、糖尿病和系统性红斑狼疮(SLE)等疾病的临床报道很少,我们报告心血管病、糖尿病和SLE三组疾病血浆u-PA和u-PAR水平的变化及其应用意义.
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海洋微生物代谢产物FGFC1的纤溶促进作用
目的:研究海洋微生物产生的吡喃并异吲哚酮化合物FGFC1体外和实验动物体内促纤溶作用.方法:采用异硫氰酸荧光素(F1TC)纤维蛋白降解法和急性肺血栓大鼠模型法研究FGFC1体外和体内的纤溶促进作用.结果:在体外FITC-纤维蛋白降解实验中,FGFC1在0.5~ 25 μmol/L浓度范围内,其纤溶促进作用随着浓度升高逐渐增强;当FGFC1浓度≥25 μmol/L时,其纤溶促进作用维持在高水平,EC50为5 μmol/L.在大鼠急性肺血栓实验中,FGFC1的剂量为5或10 mg/kg能溶解肺血栓,达到与5 nmol/L剂量单链尿激酶型纤溶酶原激活剂相当的溶栓效果.结论:溶栓药物先导化合物FGFC1具有优良的纤溶促进作用和溶栓效果.
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纳豆激酶溶栓作用研究进展
纳豆激酶(nattokinase,NK)是一种由纳豆杆菌(Bacillus natto)产生的具有强烈纤溶作用的丝氨酸蛋白酶,与一些传统的溶栓剂相比,具有安全性好、成本低、口服有效等优点.该文就纳豆激酶溶栓作用的研究进展作一综述.