细胞与分子免疫学杂志
Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology 세포여분자면역학잡지
- 主管单位： 中国免疫学会；第四军医大学
- 主办单位： 陕西省免疫学会,中国免疫学会
- 影响因子： 0.81
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 1007-8738
- 国内刊号： 61-1304/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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Wnt/β-catenin通路参与脂肪间充质干细胞对大鼠肾小球系膜细胞增殖的调控
目的 探讨脂肪间充质干细胞(ADSC)经Wnt/β联蛋白(β-catenin)通路对肾小球系膜细胞增殖的影响.方法 以大鼠ADSC的条件培养基作用于HBZY-1大鼠肾小球系膜细胞,通过流式细胞术分析细胞周期、RNA干扰、实时定量PCR和Western blot等技术分析HBZY-1细胞增殖能力、Wnt信号通路中相关基因和蛋白表达水平的变化.结果 在ADSC条件培养基作用下,HBZY-1细胞增殖受到明显抑制,dickkopf WNT信号通路抑制物1(DKK1) mRNA表达水平明显升高,而纤连蛋白(fibronectin)和转化生长因子β1(TGF-β1)的mRNA表达显著降低,同时系膜细胞的β-catenin和Bcl-2蛋白的表达受到明显抑制.ADSC中DKK1 mRNA表达水平显著高于HBZY-1细胞,利用小干涉RNA敲低ADSC的DKK1表达后,其β-catenin蛋白的表达水平显著升高.将干扰后的ADSC条件培养基作用于HBZY-1细胞,可重新增加HBZY-1细胞Wnt信号通路中β-catenin和Bcl-2的蛋白水平.结论 Wnt/β-catenin信号通路可能参与ADSC对HBZY-1肾小球系膜细胞增殖的调控.
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Toll样受体4的活化抑制人表皮原代黑素细胞的黑素合成
目的 探讨黑素细胞Toll样受体4(TLR4)的活化对黑素细胞黑素合成的影响.方法 以原代培养的黑素细胞为研究对象,采用TLR4的激动剂脂多糖(LPS)刺激细胞,首先检测黑素含量的变化,其次用实时定量PCR和Western blot法检测前黑素体蛋白(Pmel17)、酪氨酸酶(TYR)、小眼畸形相关转录因子(MITF)的表达变化;后用电镜观察黑素小体的变化.结果 LPS刺激细胞后,黑素含量明显减少,黑素合成相关蛋白Pmel17和TYR的表达降低,且这种变化依赖于MITF转录因子的调控,同时电镜结果显示黑素小体合成被抑制.结论 TLR4的活化降低黑素细胞的黑素合成,提示细菌的产物可以通过天然免疫影响黑素合成.
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下调MDA-MB-231乳腺癌细胞骨硬化蛋白(SOST)可增加间接共培养的MG-63成骨细胞的成骨作用
目的 构建靶向抑制骨硬化蛋白(SOST)基因的小干扰RNA (siRNA)腺病毒,感染MDA-MB-231乳腺癌细胞并与MG-63成骨细胞共培养,检测对成骨相关分子表达的影响.方法 针对SOST基因RNA序列设计带3个干扰片段的2对引物,以pB2B为模板,扩增“背靠背”排列的H1和U6启动子.两个PCR产物以Gibson DNA Assembly的方式同时连接腺病毒穿梭质粒pAdTrace-OK,经同源重组、HEK293细胞包装获得SOST-siRNA腺病毒.感染MDA-MB-231乳腺癌细胞,实时定量PCR检测SOST mRNA的表达水平,ELISA检测SOST蛋白水平.将转染该腺病毒的MDA-MB-231细胞与MG-63成骨细胞间接共培养,实时定量PCR检测护骨因子(OPG)、骨钙蛋白(OCN)、整合素结合涎蛋白(IBSP)、核因子κB受体激活蛋白配体(RANKL)的表达情况.结果 成功获得带3个干扰片段的腺病毒穿梭质粒,经同源重组和包装后,获得AdR-siSOST腺病毒.用该病毒感染MDA-MB-231细胞后,明显抑制SOST的表达.在乳腺癌骨转移体外模型中感染Ad-siSOST腺病毒,能导致MG-63细胞的OPG、OCN、IBSP mRNA表达上升,RANKL mRNA降低.结论 在乳腺癌骨转移体外模型中感染Ad-siSOST腺病毒,能促进MG-63细胞的成骨分化,提高OPG/RANKL的比例.
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黄芩素通过抑制胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)促进HeLa细胞凋亡
目的 探讨黄芩素和U0126对人宫颈癌HeLa细胞凋亡的影响及机制.方法 HeLa细胞先用(1、2、5、10、20、50、100、200、300) μmol/L黄芩素,(1、2、5、10、20、30) μmol/L U0126处理24h后,CCK-8法筛选佳的处理浓度.而后分别用200 μmol/L黄芩素、10 μmol/L U0126、200 μmol/L黄芩素联合10 μmol/L U0126处理HeLa细胞24h,流式细胞术检测细胞周期、细胞凋亡,原位末端转移酶标记技术(TUNEL)法检测细胞凋亡指数;实时定量PCR检测HeLa细胞胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)、Bax和Bc0-2的mRNA水平、Western blot法检测ERK1/2、Bax和Bcl-2蛋白水平.结果 HeLa细胞经不同浓度的黄芩素或经不同浓度的U0126处理后,CCK-8法证明黄芩素佳抑制浓度为200 μmol/L,U0126佳抑制浓度为10 μmol/L;HeLa细胞经200 μmol/L黄芩素处理24h后,G0/G1期细胞比例明显增多,S期细胞比例明显下降,采用200 μmol/L黄芩素联合10 μmol/L U0126处理HeLa细胞24h,S期细胞比例显著降低;10 μmol/L U0126和200 μmol/L黄芩素单独处理HeLa细胞,引起明显细胞凋亡,二者联合处理凋亡更明显;HeLa细胞经200 μmol/L黄芩素或10 μmol/L U0126单独处理或联合处理24h后,ERK1/2和Bcl-2的mRNA表达水平明显降低、而Bax的mRNA水平升高;蛋白水平上,ERK1/2的磷酸化水平明显降低,Bax蛋白水平增加,Bcl-2的蛋白水平降低.结论 黄芩素和U0126均可抑制HeLa细胞增殖、诱导细胞凋亡,增加G0/G1期细胞比例,降低S期细胞比例,联合应用效果更明显.
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过表达海兔属Ras同源物I(ARHI)增加人SW480结肠癌细胞凋亡
目的 观察海兔属Ras同源物I(ARHI)对SW480人结肠癌细胞凋亡的影响.方法 采用pcDNA3.1-FLAG-ARHI质粒转染和G418筛选法建立稳定表达ARHI的SW480细胞,采用反转录PCR验证ARHI mRNA和蛋白的表达.流式细胞术检测过表达ARHI对结肠癌细胞凋亡的影响;Western blot法检测蛋白激酶B(Akt)、磷酸化Akt (p-Akt)、p53和Bcl-2的蛋白水平.结果 成功建立过表达ARHI的SW480细胞,过表达ARHI的SW480细胞凋亡率明显增加,Bcl-2和p-Akt蛋白水平明显降低、P53蛋白表达水平增加,而Akt蛋白水平无明显变化.结论 过表达ARHI通过抑制Akt水平增加SW480人结肠癌细胞凋亡.
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免疫诱导干燥综合征C57BL/6J小鼠模型的多器官病变
目的 探讨干燥综合征小鼠模型不同时期各脏器的免疫损伤情况.方法 将80只C57BL/6J小鼠随机分为空白组和模型组.模型组40只小鼠通过免疫诱导法建立干燥综合征模型.分别于第4、6、8、10周各处死10只小鼠,无菌分离颌下腺、胸腺、肺、脾脏、肾脏,HE染色观察各脏器组织病理改变情况.结果 与空白组相比较,模型组各脏器在第6周开始出现较明显病理改变,表现为典型颌下腺淋巴细胞浸润及腺体破坏,肺、肾、脾等脏器相应的损害现象,第8周及第10周表现为明显.结论 免疫诱导法建立的干燥综合征C57BL/6J模型小鼠具有多系统损害的特征,造模第8周后表现明显.
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miR-338-5p通过靶向核因子κB1调控B细胞生物学功能
目的 验证miR-338-5p对核因子κB1(NF-κB1)水平的影响,研究其对B细胞生物学功能的调控作用.方法 利用双荧光素酶报告基因检测系统进行miR-338-5p靶基因的验证;采用抗IgM抗体和/或重组人B细胞活化因子(rhBAFF)蛋白刺激的B细胞培养体系,将miR-338-5p激动剂、miR-338-5p拮抗剂、NF-κB1小干扰RNA(siNF-κB1)及其对应的阴性对照制剂转染CD20κB淋巴细胞,利用实时定量PCR法检测各转染组NF-κB1 mRNA水平,Western blot法检测NF-κB1蛋白(p105、p50)的水平,ELISA检测培养上清中IgG含量.结果 靶基因验证实验显示,miR-338-5p模拟物与报告载体共转染组的hRluc/hLuc萤光素酶活力比值显著升高;体外培养实验结果显示,在抗IgM抗体与rhBAFF蛋白共培养体系,miR-338-5p激动剂转染组NF-κB1 mRNA、p105蛋白、p50蛋白、IgG水平均显著升高,siNF-κB1的作用与miR-338-5p激动剂相反;miR-338-5p拮抗剂转染组NF-κB1 mRNA、IgG水平均显著降低;相关性分析结果表明,NF-κB1 mRNA水平与IgG水平呈显著正相关.结论 miR-338-5p靶向正调控NF-κB1、间接作用于BAFF信号参与调控B细胞生物学功能.
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冻存复苏制备同体来源的细胞毒性T淋巴细胞
目的 观察冻存复苏对淋巴细胞增殖及杀伤活性的影响,并探索小鼠同体CTL的制备.方法 5.0×106个/mL脾源性单个核细胞经CELLBANKER2小鼠淋巴细胞冻存液缓慢冻存,6d后再采用39℃水浴快速复苏;分别取新鲜淋巴细胞和冻存复苏后(CP)淋巴细胞经体外100 ng/mL CD3ε单克隆抗体(mAb)、10 ng/mL重组小鼠白细胞介素2(rmIL-2)刺激扩增7d分别获取细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)和CP-CIK;骨髓来源的树突状细胞(DC)分别于同系异体来源和冻存复苏后自体来源的脾源性单个核细胞混合培养制备细胞毒性T淋巴细胞(CTL).台盼蓝拒染法分别计数活细胞,流式细胞术检测CD3+T及调节性T细胞(Treg)比例,ELISA检测上清中γ干扰素(IFN-γ)含量、乳酸脱氢酶(LDH)释放法分析细胞毒活性.结果 淋巴细胞经冻存复苏后,细胞存活率为78％,冻存前、复苏后CD3+T淋巴细胞及Treg比例无统计学差异;CP-CIK与新鲜CIK在细胞扩增、Treg比例、上清中IFN-γ水平以及细胞毒活性均无明显差异;同体CTL和异体CTL在细胞扩增、Treg比例、上清中IFN-γ水平以及细胞毒活性方面也无显著差异.结论 淋巴细胞的冻存复苏有助于获取与传统CTL同等增殖活性及杀伤活性的同体来源的CTL.
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四甲基吡嗪通过调节细胞因子和抗体水平缓解实验性自身免疫性重症肌无力大鼠的肌无力症状
目的 探究川芎嗪即四甲基吡嗪(TMP)对实验性自身免疫性重症肌无力(EAMG)大鼠的免疫调节机制.方法 建立实验性自身免疫性重症肌无力Lewis大鼠模型,实验随机分为空白对照组、EAMG模型组、10 mg/kg TMP处理组和20 mg/kgTMP处理组,每组10只;记录大鼠体质量,并采用Lennon EAMG评分标准评价大鼠肌无力症状;免疫荧光技术检测神经肌肉接头处乙酰胆碱受体(AChR)、IgG和C3含量;ELISA检测血清中R97-116抗体(IgG1、IgG2a和IgG2b)的水平,以及肿瘤坏死因子α(TNF-o)、γ干扰素(IFN-γ)和白细胞介素10(IL-10)水平.结果 TMP能抑制EMAG大鼠体质量与肌无力评分下降,逆转肌肉接头处AChR含量的下降与IgG和补体C3含量的上升;降低血清中R97-116抗体(IgG1、IgG2a)和TNF-α,增加IL-10含量,IgG2b和IFN-γ的含量无明显变化.结论 TMP能缓解肌无力的症状,可能是通过调节细胞因子和IgG1和IgG2a的水平实现的.
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过表达β联蛋白和T细胞因子抑制物(ICAT)促进人宫颈癌Caski细胞的增殖和迁移
目的 探讨β联蛋白和T细胞因子抑制物(ICAT)的高表达对人宫颈癌Caski细胞增殖和迁移的影响.方法 含ICAT基因腺病毒(AdICAT)感染Caski细胞,采用实时定量PCR检测ICAT mRNA水平,Western blot法检测ICAT蛋白水平;MTT法检测各组细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞周期,TranswellTM小室迁移实验检测细胞迁移能力.结果 AdICAT感染后,Caski细胞的ICAT mRNA和蛋白水平均显著增加;过表达ICAT后,促进Caski细胞的增殖,S期细胞比例明显增加,细胞迁移能力增强.结论 Caski细胞过表达ICAT后,促进其增殖和迁移.
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C1q/肿瘤坏死因子相关蛋白6(CTRP6)介导庆大霉素所致大鼠急性肾损伤
目的 探讨抗炎细胞因子C1q/肿瘤坏死因子相关蛋白6(CTRP6)在庆大霉素所致急性肾损伤(AKI)中的作用.方法 SD大鼠分为5组,对照组、模型组和3个实验组.模型组和实验组皮下注射庆大霉素400 mg/(kg·d),连续注射2d,建立庆大霉素中毒性AKI动物模型;3个实验组大鼠在注射庆大霉素前2d,分别给予(0.5、5、50) mg/kg的CTRP6腺病毒表达载体.苦味酸比色法检测肌酐(Cr)含量,紫外分光光度法检测血清尿素氮(BUN)含量,ELISA检测血清CTRP6的水平以及肾组织匀浆中白细胞介素1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的水平.Western blot法检测肾脏组织中CTRP6、NOD样受体家族含pyrin结构域蛋白3(NLRP3)和caspase-1的表达.结果 与对照组相比,模型组大鼠AKI指标血清BUN和Cr水平较对照组显著增高,炎症因子IL-1β和TNF-α的分泌量以及NLRP3和caspase-1蛋白表达水平也显著增加.与模型组相比,实验组大鼠血清BUN和Cr水平降低,IL-1 β和TNF-α的分泌减少,NLRP3和caspase-1的表达水平下降.随着注射CTRP6腺病毒表达载体注射剂量的增加,抑制效果逐渐增强.结论 CTRP6以剂量依赖的方式减弱庆大霉素所致的大鼠急性肾功能损伤.
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过表达Raf激酶抑制蛋白(RKIP)抑制人肝星状细胞增殖
目的 研究Raf激酶抑制蛋白(RKIP)对LX-2人肝星状细胞增殖的影响.方法 用重组质粒pcDNA3.1-RKIP转染LX-2细胞,G418筛选并培养稳定转染的细胞.MTT法和集落形成试验检测过表达RKIP对LX-2细胞增殖、集落生成的影响;Western blot法检测RKIP、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、1型胶原蛋白(Coi1)、基质金属蛋白酶1(MMP-1)、MMP-2及胞外信号调节激酶/丝裂原激活蛋白激酶(ERK/MAPK)信号通路相关蛋白的表达水平.结果 与对照细胞相比,过表达RKIP明显抑制LX-2细胞增殖和集落形成,下调Col1、α-SMA、MMP-1和MMP-2蛋白表达,降低ERK/MAPK磷酸化水平.结论 过表达RKIP抑制LX-2细胞的增殖,其机制与抑制ERK/MAPK信号通路有关.
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消退素D1(resolvin D1)抑制小鼠激活型小胶质细胞对PC12细胞的损伤及机制
目的 探讨消退素D1(RvD1)在小鼠活化BV-2小胶质细胞介导PC12神经元损伤中所起的作用及相关机制.方法 BV-2细胞分为对照组、脂多糖(LPS)处理组、RvD1联合LPS处理组和RvD1组.各组BV-2细胞处理12 h、24h,ELISA检测上清液中白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6、肿瘤坏死因子α(TNF-α)的水平;收集以上各组细胞培养24h的上清液培养PC12细胞24h后,MTT法检测PC12细胞存活率,Western blot法检测各组BV-2细胞核因子κB p65(NF-κB p65)蛋白的水平.结果 与对照组比较,LPS处理的PC12细胞存活率降低,BV-2细胞上清液中IL-1β、IL-6、TNF-α的水平均升高,NF-κB p65核转位增加;而与LPS处理组相比,RvD1联合LPS处理组PC12细胞存活率升高,BV-2细胞上清液中IL-1β、IL-6、TNF-α的含量均降低,NF-κB p65核转位减少.结论 RvD1可通过抑制NF-κB p65核转位,抑制LPS激活的BV-2细胞对PC12神经元的损伤.
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脆性X精神发育迟缓基因1(FMR1)真核表达载体的构建及其应用
目的 构建人脆性X精神发育迟缓基因1(FMR1)真核表达载体,建立稳定转染FMR1的HeLa细胞系.方法 采用PCR扩增出人FMR1的cDNA编码区序列,利用DNA重组技术将其定向插入pEGFP-N2真核表达载体中,并对重组质粒进行双酶切及DNA测序鉴定.用脂质体将验证的重组质粒转染至HeLa细胞,通过G418筛选建立FMR1稳定转染的HeLa细胞系.进一步运用Western blot法、免疫荧光染色结合激光扫描共聚焦显微镜技术鉴定FMR蛋白(FMRP)在HeLa细胞中的表达及定位.结果 双酶切和DNA测序结果表明pEGFP-N2-FMR1真核表达质粒构建成功.Western blot和激光共聚焦显微镜结果显示GFP-FMRP融合蛋白在HeLa细胞中成功表达且主要定位在细胞质.结论 成功建立FMR1稳定转染的HeLa细胞系并可以表达FMRP.
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C1q和肿瘤坏死因子相关蛋白4(CTRP4)降低子痫前期大鼠滋养层细胞的caspase-1和IL-1β水平
目的 探讨C1q和肿瘤坏死因子相关蛋白4(CTRP4)对子痫前期大鼠胎盘滋养层细胞的影响.方法 构建子痫前期大鼠模型,采集正常孕鼠和模型大鼠胎盘滋养层组织,运用实时定量PCR和Western blot法检测CTRP4、白细胞介素1β(IL-1β)和caspase-1 mRNA和蛋白表达水平;分离培养正常孕鼠和模型鼠滋养层细胞,在不同时间点,运用流式细胞术检测碘化丙啶和caspase-1双阳性(PI+ caspase-1+)细胞(pyroptosis),运用实时定量PCR和Western blot法检测IL-1 β和caspase-1表达水平;在模型大鼠滋养层细胞培养基中分别加入(0.5、5、15、25、50) ng/mL CTRP4重组蛋白或(10、20) ng/mL CTRP4蛋白中和抗体,处理72 h后检测pyroptosis细胞数目和caspase-1、IL-1β水平.结果 子痫前期大鼠胎盘滋养层组织caspase-1、IL-1β表达增强,CTRP4表达水平下调;CTRP4重组蛋白处理体外培养的大鼠滋养层细胞可显著减少PI+ caspase-1+细胞数量并降低caspase-1、IL-1β水平,而CTRP4蛋白中和抗体处理显著增加PI+ caspase-1+细胞数量并增强炎症反应.结论 CTRP4可显著抑制caspase-1/IL-1 β炎症调节通路的活性,并抑制子娴前期大鼠胎盘滋养层细胞的pyroptosis.
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人乳头瘤病毒16 E5(HPV16 E5)蛋白抑制角质形成细胞生长因子诱导的细胞自噬
目的 研究人乳头瘤病毒16 E5(HPV16 E5)蛋白对角质形成细胞生长因子(KGF)诱导的细胞自噬的影响.方法 构建HPV16 E5蛋白真核表达载体pCI-neo-E5,采用LipofectamineTM 2000转染至HaCaT人角质形成细胞,实时定量PCR检测HPV16 E5 mRNA转录水平.转染pCI-neo-E5并以KGF刺激HaCaT细胞后,实时定量PCR检测自噬相关蛋白beclin l、自噬相关基因5(ATG5)、ATG7及LC3B mRNA的水平,Western blot法检测LC3BⅡ蛋白的表达量,免疫荧光技术检测LC3B的分布.结果 成功构建HPV16 E5真核表达载体pCI-neo-E5并可有效表达.角质形成细胞转染pCl-neo-E5,自噬相关蛋白mRNA的水平显著降低,抑制KGF诱导的LC3BⅡ表达水平升高和LC3B的聚集.结论 HPV16 E5蛋白通过下调自噬相关蛋白的表达,抑制KGF诱导的细胞自噬.
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应用CRISPR/Cas9系统构建Rev-erbβ基因敲除的HEK293细胞系
目的 利用成簇的、规律间隔的短回文重复序列/Cas9核酸酶(CRISPR/Cas9)基因组编辑技术,构建Rev-erbβ基因敲除的HEK293细胞系.方法 通过单向导RNA (sgRNA)介导Cas9蛋白对目的基因靶位点DNA进行特异性的切割,然后经DNA同源重组单向导RNA或非同源末端连接方式进行修复,以实现对Rev-erbβ基因进行敲入、敲除修饰操作的目的.首先,针对Rev-erbβ基因设计4个sgRNA,经筛选选择活性较高的sgRNA1及sgRNA2用于构建pCMV-hCas9-U6-Rev-erbβ sgRNA1&sgRNA2串联载体.然后将pCMV-hCas9-U6-Rev-erbβ sgRNA1&sgRNA2和pAd-E1/hRev-erbβ donor质粒载体共转染至HEK293细胞,通过药物筛选、克隆化及序列测序获得整合有外源供体基因片段的一条链,另一条链为片段缺失的Rev-erbβ基因完全敲除的HEK293(Rev-erbβ-/-)细胞系.后通过用Western blot法和实时定量PCR对敲除Rev-erbβ HEK293细胞系(C3-6)进行检测.结果 敲除Rev-erbβ基因的HEK293细胞系中均未检测到Rev-erbβ mRNA和蛋白质的表达.结论 利用CRISPR/Cas9技术,成功构建了基因定点修饰和敲除的Rev-erbβ-/-HEK293细胞系,为Rev-erbβ的功能和作用机制研究提供有效工具.
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肺结核患者外周血中结核分枝杆菌耐热抗原特异性的TNF-α+ γδ T细胞数量和亚群分析
目的 探讨结核分枝杆菌耐热抗原(MTB-HAg)刺激下,肺结核患者、潜伏性MTB感染者、健康者外周血γδ T细胞中肿瘤坏死因子α(TNF-α)产生细胞数量的差异.方法 采集15例正常成人外周血,根据人MTB感染T细胞酶联免疫斑点诊断试剂盒检测结果分为健康者(n=9)和潜伏性MTB感染者(n=6),另采集肺结核患者外周血(n=12),3组经密度梯度离心法获取外周血单个核细胞(PBMC),用MTB-HAg刺激20h.收集细胞,流式细胞术检测TCRαβ+T细胞、TCRγδ+T细胞、CD4+ αβ T细胞、CD8+αβ T细胞、TCR-Vδ2+T细胞亚群中产生TNF-o产生细胞的比例.结果 肺结核患者外周血γδ T细胞中TNF-α产生细胞比例显著低于潜伏性MTB感染者和健康者;肺结核患者外周血Vδ2T细胞中TNF-α产生细胞比例显著低于潜伏性MTB感染者和健康者;肺结核患者外周血中Vδ2T细胞在TNF-α+γδ T细胞中所占比例显著低于潜伏性MTB感染者和健康者.结论 肺结核患者外周血MTB-HAg特异性γδ T细胞及其Vδ2亚群产生细胞因子TNF-α能力显著低于潜伏性MTB感染者和健康者.
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低强度脉冲超声促进人骨性关节炎软骨细胞合成细胞外基质
目的 探讨低强度脉冲超声(LIPUS)对人骨性关节炎(OA)软骨细胞的细胞外基质(ECM)的影响及相关作用机制.方法 取膝关节置换术后废弃软骨组织,进行软骨细胞分离、培养、鉴定;取第2代软骨细胞随机分为OA对照组、30 mW/cm2LIPUS处理的OA组、30 mW/cm2 LIPUS联合5μmol/L LY294002处理的OA组,除对照组外,其他组给予LIPUS刺激20 min/d×7d;采用实时定量PCR法检测细胞中2型胶原蛋白(Col2)、聚集蛋白聚糖(aggrecan)、基质金属蛋白酶13(MMP-13)mRNA的水平,Westem blot法检测细胞中Col2、aggrecan、MMP-13、Akt及磷酸化Akt (p-Akt)蛋白的表达.结果 与OA对照组相比,LIPUS处理的OA组细胞内Col2、aggrecan mRNA和蛋白水平均增高,MMP-13表达降低,p-Akt蛋白的表达显著增加,Akt的表达则与OA对照组无显著性差异;与LIPUS处理的OA组细胞相比,LIPUS联合LY294002处理的OA组细胞中Col2、aggrecan mRNA和蛋白表达均降低,MMP-13表达增高,p-Akt蛋白的表达显著降低,Akt的表达则与LIPUS处理的OA组无显著性差异.结论 LIPUS促进人OA软骨细胞合成细胞外基质,并抑制其降解.
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雌二醇下调系统性红斑狼疮合并妊娠患者B淋巴细胞表面部分抑制性受体的水平
目的 观察血清雌二醇对系统性红斑狼疮(SLE)合并妊娠患者B淋巴细胞表面抑制性受体CD72、CD32b、白细胞相关免疫球蛋白样受体1(LAIR-1)表达的影响.方法 提取40例SLE合并妊娠患者和10例健康妊娠妇女的B淋巴细胞,采集妊娠第5、6、7周外周血中雌二醇刺激B细胞进行培养.ELISA检测B淋巴细胞表面抑制性受体CD72、CD32b、LAIR-1表达水平.结果 正常妊娠女性在孕5、6、7周时雌二醇浓度逐渐增加,而CD72、CD32b、LAIR-1无明显变化;分离SLE妊娠妇女B淋巴细胞,经(500、1000、1500) U/L雌二醇体外刺激后,B细胞CD72、CD32b、LAIR-1随着雌二醇剂量的增加逐渐降低,且低于正常妊娠妇女对照组.结论 雌二醇可下调SLE合并妊娠患者B淋巴细胞CD72、CD32b、LAIR-1的表达.
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肾综合征出血热患者血浆外泌体固有免疫相关长链非编码RNA含量测定及临床意义
目的 观察肾综合征出血热(HFRS)患者血浆外泌体(exosome)固有免疫相关长链非编码RNA (IncRNA)的含量变化情况及其与疾病发生发展的关系.方法 提取并鉴定HFRS患者及健康对照者血浆外泌体,对其中的lncRNA进行高通量测序,找出具有足够丰度的固有免疫相关lncRNA,进行实时定量PCR鉴定,分析其与HFRS发生发展的关系.结果 提取血浆外泌体;发现固有免疫相关lncRNA抗病毒应答负性调节因子(NRAV)、干扰素应答负性调节因子(NRIR)及核旁斑装配转录物1(NEAT1)在HFRS患者血浆外泌体中有一定丰度,其中NEAT1含量显著低于健康对照,但与疾病的进展无明显关系.结论 HFRS患者血浆外泌体中含有多种固有免疫相关lncRNA,其中NEAT1含量降低与HFRS的发生显著相关.
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抑制MDA-MB-231乳腺癌细胞BCL11A的表达可促进其凋亡
目的 探讨B细胞慢性淋巴细胞性白血病/淋巴瘤基因11A (BCL11A)在乳腺癌组织中的表达分布情况及沉默BCL11A后对MDA-MB-231乳腺癌细胞凋亡的影响.方法 利用免疫组织化学法检测62例乳腺癌及8例癌旁组织中BCL11A的表达,分析BCL11A表达与乳腺癌临床病理特征的关系;利用化学合成的针对BCL11A的小干涉RNA(siRNA),转染MDA-MB-231细胞48 h后,反转录PCR和Western blot法检测BCL11A沉默效率,流式细胞术检测细胞的凋亡水平.结果 BCL11A主要定位在细胞质,且在乳腺癌组织中的表达量明显高于癌旁组织,BCL11A的表达量和临床分期相关,与患者的年龄、肿瘤大小无关;合成的BCL11A-siRNA能有效沉默BCL11A在MDA-MB-231细胞中的表达,BCL11A基因沉默后MDA-MB-231细胞凋亡明显增加.结论 BCL11A在乳腺癌组织中高表达,沉默BCL11A后可促进乳腺癌细胞凋亡.
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抗间质上皮转化因子(c-Met)单价抗体的制备及生物学活性检测
目的 用抗人间质上皮转化因子(c-Met)阻断型嵌合抗体ch3E1D7表达质粒构建单价抗体慢病毒穿梭质粒,利用慢病毒表达系统实现其在HEK293T细胞中快速表达,并对纯化后抗体的亲和力及中和活性进行检测.方法 设计抗c-Met的单价抗体,命名为mono3E1 D7,利用基因工程技术构建单价抗体三条链的慢病毒表达载体,磷酸钙法转染HEK293T细胞,表达的单价抗体经蛋白A琼脂糖4B亲和层析柱纯化,SDS-PAGE检测抗体完整性,ELISA检测单价抗体在体外阻断c-Met与其配体HGF结合的生物学活性.结果 感染单价抗体慢病毒的HEK293T细胞上清纯化后,SDS-PAGE分析可见55 ku的重链、25 ku的轻链以及30 ku的杵状结构链(Knob)三条带.且纯化后的单价抗体能与c-Met抗原结合,同时还具有阻断c-Met与HGF结合的中和活性.结论 成功获得抗人c-Met阻断型单价抗体.
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兔抗醛-酮还原酶家族1成员B10(AKR1B10)多克隆抗体的制备及鉴定
目的 制备兔抗醛-酮还原酶家族1成员B10(AKR1B10)多克隆抗体,并鉴定其特异性.方法 应用逆转录PCR法扩增AKR1B10全基因,将扩增产物连接到原核表达载体pET-15b上,构建重组质粒pET-15b-AKR1B10,将其转化至大肠杆菌E.coli DH5α中.用异丙基硫代β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导其表达,表达产物经SDS-PAGE分析鉴定出阳性者进行克隆,扩大培养,提取重组蛋白,用His-tag纯化柱纯化重组蛋白.将纯化的重组蛋白皮下注射到新西兰白兔,加强免疫得到抗血清.用AKR1B10重组蛋白制备抗体纯化柱,从抗血清中纯化出抗AKR1B10多克隆抗体,并进行SDS-PAGE、ELISA、Westem blot法鉴定.结果 成功构建了重组质粒pET-15b-AKR1B10,并获得高纯度的重组蛋白His-Tag-AKR1B10,制备的多克隆抗体相对特异性地识别AKR1B10.结论 兔抗AKR1B10多克隆抗体制备成功,特异性较好.
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Toll样受体4(TLR4)的内吞通路及其调控机制研究进展
Toll样受体(TLR)是一类天然免疫受体,TLR4信号通路主要分为髓样分化因子88(MyD88)依赖通路和β干扰素诱导的含TIR结构域接头蛋白(TRIF)/TRIF相关的接头分子(TRM)依赖通路,激活后分别诱导促炎因子和1型干扰素的产生,有助于机体清除病原体.但是,不受控制的TLR4激活也会导致自身免疫性疾病和炎症性疾病等.因此,ⅡR4表达水平的有序调控对于维持机体免疫平衡具有重要意义.TLR4在细胞中的生物合成、定位、转移和内吞等过程是决定其功能的重要环节,其中TLR4的循环和转移是一种受多种因素调控的动态的复杂过程.本文就TLR4信号通路及其内吞调控研究进展进行综述.
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人类免疫缺陷病毒1感染与髓源性抑制细胞相关性研究进展
人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)感染者自身的持续免疫活化程度是决定疾病进展的关键.过度免疫活化导致机体免疫系统功能亢进,多种免疫细胞功能改变.髓源性抑制细胞(MDSC)是具有免疫抑制作用的细胞,参与机体免疫调节.在HIV-1感染者中,MDSC显著增多且与CD4+T细胞绝对数等疾病进展指标有关.随着高效抗逆转录病毒治疗的实施,MDSC也发生相应变化.疫苗诱导的MDSC对保护性细胞免疫应答有抑制作用,提示阻止MDSC的诱导可能提高HIV疫苗的有效性.因此,了解MDSC在HIV-1感染者中功能的改变有利于进一步探究HIV-1感染者免疫活化状态的成因,为HIV-1的治疗以及疫苗的研制提供新思路.
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白细胞介素27对树突状细胞和单核巨噬细胞影响的研究进展
白细胞介素27(IL-27)是一种IL-6/IL-12家族细胞因子,主要由激活的抗原提呈细胞产生,通过激活Janus激酶-信号转导子与转录激活子(JAK-STAT)和丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)等信号通路发挥作用.初认为IL-27能够促进1型辅助T(Th1)细胞、1型调节性T(Tr1)细胞的分化,抑制Th2细胞、Th17细胞、调节性T细胞(Treg)的分化,现在发现对某些T细胞亚群具有相反的效应,比如Treg.IL-27在不同的自身免疫性疾病中表现出促炎和抗炎的双重作用.作为强大的抗原提呈细胞,树突状细胞(DC)和单核巨噬细胞是适应性免疫的启动者,引起免疫应答或耐受.IL-27对DC和单核巨噬细胞的作用并不一致,而这种差异很可能是由不同信号通路的比率、细胞因子微环境、疾病的发展阶段引起的.阐明IL-27对DC和单核巨噬细胞的影响或许可以及早地阻断异常免疫反应,对自身免疫性疾病的治疗提供新的途径.
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Toll样受体8激动剂在树突状细胞抗肿瘤免疫治疗中的研究进展
树突状细胞(DC)作为功能强大的专职抗原提呈细胞,在诱导机体产生抗原特异性细胞毒性T细胞(CTL)中发挥重要作用.因此,现在的研究聚焦于使用免疫刺激性配体以增强DC在肿瘤中的抗原提呈功能,促进Th1型细胞免疫.由于小分子Toll样受体8(TLR8)激动剂直接激活DC、增强DC抗原提呈功能和细胞免疫应答,特别是Th1细胞应答.因此,TLR8激动剂已经成为抗肿瘤免疫调节药物或免疫佐剂的研究热点.本文在总结TLR8激动剂的结构和免疫调节作用的基础上,重点阐明TLR8激动剂增强DC免疫原性的机制,以及TLR8激动剂用于制备新一代DC疫苗的研究进展,探讨TLR8激动剂作为免疫刺激性配体在肿瘤免疫治疗中的临床应用前景.
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Toll样受体信号转导通路参与神经损伤修复的研究进展
Toll样受体(TLR)是一类广泛分布于免疫系统的模式识别受体,它们能够识别病原体相关分子模式,功能与免疫炎症反应相关.在过去认为是免疫豁免区的中枢神经系统中同样也有TLR的分布.在中枢或外周神经系统受到损伤后,TLR接受外界刺激,其信号转导通路上的各分子修饰和表达情况会发生一系列变化,从而导致损伤局部和周围组织免疫微环境进一步改变.而这种免疫微环境的改变在中枢和外周神经系统存在着一定的差异,这些差异可能是导致中枢神经系统损伤后难以再生的原因之一.本文总结了TLR及其下游分子参与神经损伤修复的相关研究进展.
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抗神经元抗体相关的中枢神经系统疾病
抗神经元抗体是一组作用于神经元的抗体,这些抗体通常发现于某些特殊的中枢神经系统疾病如边缘叶脑炎、抗N-甲基-D-天冬氨酸受体(NMDAR)脑炎、僵人综合征、Morvan综合征等患者的血清和(或)脑脊液中.这些抗体的发现为许多中枢神经系统疾病发病机制的研究提供了新的视角,并且为这些疾病的治疗提供了新的方向,在很大程度上改变了这些疾病的预后.并且,随着检测方法的不断提高,新发现的抗体种类不断增加,抗神经元抗体相关的中枢神经系统疾病谱也随之扩大.因此,我们对这些抗体相关的中枢神经系统疾病进行综述,以期为基础研究及临床工作提供一定的指导.
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巨噬细胞极化相关机制的研究进展
极化的巨噬细胞是多种单核细胞在一定条件刺激后活化,从而形成一系列功能表型的极端状态,在机体宿主防御、免疫应答、维持内环境稳定中扮演着重要角色.因此,明确巨噬细胞极化的机制可能给自身免疫性疾病的治疗提供新的思路.巨噬细胞的极化是多因子相互作用的过程,受到许多调控分子的调控,多种分子通路对巨噬细胞极化过程都有影响,微小RNA(microRNA)、间充质于细胞和去乙酰化酶抑制剂也对巨噬细胞极化过程有影响.
| 年 | 期数 |
| 2018 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2017 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2016 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2015 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2014 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2013 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2012 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2011 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2010 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2009 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2008 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2007 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2006 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2005 | 01 02 03 04 05 06 z1 |
| 2004 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2003 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2002 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2001 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2000 | 01 02 03 04 05 06 |
| 1999 | 01 02 |
| 1995 | 01 02 03 |
| 1994 | 01 02 |
| 1993 | 01 02 03 04 |
| 1992 | 01 02 03 04 |
| 1991 | 01 02 03 04 |
| 1990 | 01 02 |
| 1989 | 01 02 03 04 |
