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细胞与分子免疫学

细胞与分子免疫学杂志

Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology 세포여분자면역학잡지

CSCD核心期刊
  • 主管单位: 中国免疫学会;第四军医大学
  • 主办单位: 陕西省免疫学会,中国免疫学会
  • 影响因子: 0.81
  • 审稿时间: 1-3个月
  • 国际刊号: 1007-8738
  • 国内刊号: 61-1304/R
  • 发行周期: 月刊
  • 邮发: 52-184
  • 曾用名: 单克隆抗体通讯
  • 创刊时间: 1985
  • 语言: 英文
  • 编辑单位: 《细胞与分子免疫学杂志》编辑部
  • 出版地区: 陕西
  • 主编: 杨安钢
  • 类 别: 基础医学
期刊荣誉:
  • 喜树碱诱导的HL-60细胞凋亡过程中线粒体的变化

    作者:贺芳;曾耀英;王通;邢飞跃;林羿;梁佩燕;肇静娴

    目的: 研究喜树碱(CPT)诱导的人早幼粒细胞性白血病细胞HL-60凋亡过程中线粒体的质量和膜电势的变化.方法: 以CPT诱导HL-60细胞凋亡为模型, 利用膜联蛋白V(annexin V)-FITC/PI双染流式细胞术, 研究HL-60细胞的凋亡和坏死.用DiOC6 (3)染色流式细胞术, 检测线粒体的膜电势(△ψm).用NAO染色流式细胞术, 检测线粒体的质量.结果: 在4×10-6 mol/L CPT的诱导下, HL-60 细胞(12 h)早期的凋亡率为(12.75±4.61)%, 对照组为(2.88±2.49)%, 二者相比较差异显著(P<0.01);CPT组坏死比率为(3.48±1.67)%, 对照组为(0.71±1.10)%(P<0.01).PI染色的结果显示, HL-60细胞(12 h)晚期凋亡细胞的百分率, CPT组为(3.52±1.07)%, 对照组为(0.46±1.06)%(P<0.01). 同时观察到, G2/M期细胞出现阻滞, G2/M期细胞的百分率, 对照组为(22.46±2.19)%, CPT组为(13.45±1.91)%(P<0.01).在12 h时间点, CPT组线粒体的质量显著低于对照组(P<0.01), 低线粒体质量的细胞所占百分率, 对照组为(4.53±1.26)%, CPT组为(25.74±2.09)%.同时, CPT组线粒体的膜电势显著下降(P<0.01), CPT组线粒体膜电势降低的比率为(17.71±5.23)%, 对照组为(1.64±2.00)%.结论: CPT诱导HL-60 细胞凋亡过程中, 线粒体的质量和膜电势均有所下降, 但其去极化作用增强.

  • Hyper-IL-6融合基因的构建及在真核细胞中的表达

    作者:郄春花;秦波;黄爱龙;刘杞;陈国民

    目的: 构建融合基因Hyper-IL-6并在真核细胞中进行表达.方法: 采用基因拼接(GeneSOEing)法将人类可溶性白细胞介素6受体和白细胞介素6的编码基因用一富含甘氨酸序列的接头经PCR扩增融合, 并定向克隆至pIRES2-EGFP, 构建与绿色荧光蛋白(GFP)共表达的融合重组质粒, 转染哺乳动物细胞, 通过绿色荧光蛋白、 RT-PCR和免疫组化检测Hyper-IL-6蛋白的表达.结果: PCR扩增出1 224 bp的Hyper-IL-6编码序列并成功构建重组质粒pIRES-HIL-6, 重组质粒转染真核细胞后经检测证实Hyper-IL-6能在真核细胞中表达.结论: 人类Hyper-IL-6重组表达质粒的成功构建与真核表达为以后对其进行活性分析和生物学功能的研究提供了基础.

  • 减毒鼠伤寒沙门氏菌运送CD8+T细胞表位的细胞免疫应答

    作者:张辉;焦新安;潘志明;张晓明

    目的: 探索减毒沙门氏菌运送CD8+ T 细胞表位诱导机体产生特异性细胞免疫应答的规律性.方法: 通过构建融合表达OVA 257~264aa和LCMV NP 118~132aa CD8+ T 细胞表位的原核表达质粒ptG2F, 以电穿孔法转化减毒鼠伤寒沙门氏菌SL7207, 筛选重组菌SL7207(ptG2F).采用静脉注射免疫C57BL/6和BALB/c小鼠, 间隔2 wk, 分别于第2次和第3次免疫后, 取免疫小鼠脾细胞, 用ELISPOT法检测特异性IFN-γ分泌细胞和IL- 4分泌细胞.结果: 携带CD8+ T细胞表位的重组菌SL7207(ptG2F)能诱导产生细胞免疫应答.在提呈OVA CD8+ T细胞表位时, 2次免疫后, 诱导产生的细胞免疫应答趋向于Th1; 而在3次免疫后, 呈现Th1/Th2的平衡转换.在提呈LCMV NP CD8+ T细胞表位过程中, Th2免疫应答水平高于Th1, 且有增强趋势.结论: 减毒沙门氏菌可以有效运送CD8+ T细胞表位并诱导产生特异细胞免疫应答, 这为减毒细菌作为运送载体的研究提供了参考依据.

  • 诱骗受体DcR3的基因构建、表达及特异性鉴定

    作者:李文珠;陶惠然;颜江华;张长弓;苏金华;王阶平;杨桂旺;庄国洪

    目的: 构建适于原核表达的人诱骗受体DcR3基因, 并进行重组蛋白的表达纯化及特异性鉴定.方法: 查得人DcR3 Cdna全序列, 将其分段设计引物, 通过重叠PCR获得DcR3基因.构建Pet-22b(+)/DcR3表达载体, 转化大肠杆菌Rosseta-gami, IPTG诱导表达, Ni柱纯化.采用ELISA进行特异性鉴定.结果: 通过重叠PCR获得了编码正确氨基酸序列的目的基因.目的蛋白以包涵体的形式表达, 表达量占菌体总蛋白的30%以上.纯化后, 蛋白纯度达95%以上.ELISA结果表明所纯化的蛋白可与抗DcR3抗体发生特异结合.结论: 诱骗受体DcR3基因的成功构建、表达及纯化, 为进一步的功能研究奠定了基础.

  • 人可溶性B淋巴细胞刺激因子基因的克隆及在大肠杆菌中的表达

    作者:孙剑;黎燕;冯建男;孙瑛勋;胡美茹;沈倍奋

    目的: 钓取人B细胞刺激因子基因, 构建其表达的大肠杆菌工程菌, 并体外表达、纯化可溶性B细胞刺激因子.方法: 从人外周血单个核细胞(PBMC)中提取总RNA并逆转录得到cDNA, 用PCR扩增目的基因, 连接到原核生物表达载体pET-30a上.制备质粒后, 酶切、进行菌落PCR及DNA测序对其进行鉴定.然后转化大肠杆菌BL21(DE3)并表达.对纯化的目的蛋白进行肽质量指纹分析、鉴定, 并进一步做体外B细胞刺激试验.结果: RT-PCR钓取出可溶性B细胞刺激因子基因片段.DNA测序结果与报道序列完全一致.在IPTG诱导下, 目的基因在工程菌中表达.利用镍金属螯合琼脂糖凝胶亲和层析柱分离.纯化目的蛋白的肽质量指纹图经Mascot搜索与B细胞刺激因子吻合.纯化的蛋白在体外可刺激B细胞增殖.结论: 成功地克隆可溶性B细胞刺激因子基因, 表达的纯化目的蛋白是具有生物学活性的B细胞刺激因子.

  • LFn-MAGE3融合蛋白表达及生物学功能初步研究

    作者:孔毅荣;付玲;郭强;于婷;于长明;陈薇

    目的: 表达融合蛋白LFn-MAGE3, 探讨无毒炭疽毒素用于治疗肿瘤的可能性.方法: 将LFn的编码序列导入PET21a表达载体中, 构建LFn融合表达载体PET21a-LFn.将全长MAGE-3基因插LFn融合表达载体中, 构建了PET21a-LFn-MAGE3融合蛋白表达载体.将该重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)中, 诱导表达LFn-MAGE3融合蛋白.表达产物用Q sepharose FF离子交换柱和Phe HP疏水柱进行纯化.LF毒性抑制实验和细胞免疫荧光实验检测融合蛋白的生物学活性.结果: 融合蛋白LFn-MAGE3在大肠杆菌BL21a获得胞内可溶性表达, 经纯化后, 获得一定纯度的LFn-MAGE3融合蛋白.细胞免疫荧光实验显示LFn-MAGE3能在PA(炭疽保护性抗原)协同下高效进入巨噬细胞.结论: 表达纯化获得的LFn-MAGE3融合蛋白能在PA协助高效进入细胞, 可以用于下一步的肿瘤免疫治疗的动物实验中.

  • 噬菌体改组库的构建及高活性水蛭素变异体的筛选

    作者:龙铟;刘家云;刘莉;王宗仁

    目的: 运用DNA家族改组方法提高水蛭素的抗凝血酶活性.方法: 将水蛭素HV1、 HV2、 HV3基因等量混合, 用DNase I消化, 回收50 bp左右的片段, 再经无引物和有引物PCR扩增获得与原基因大小相同的改组分子, 构建噬菌体展示的水蛭素改组文库, 经凝血酶亲和淘选, ELISA筛选高活性的水蛭素变异体.结果: 经过DNA改组和噬菌体亲和筛选, 成功获得抗凝血酶活性提高的水蛭素变异体HV2-N47K.结论: 用DNA家族改组及亲和淘选技术能够筛选出高活性的水蛭素变异体蛋白, 这为其他分子的改组提供了借鉴.

  • 肿瘤抗原基因OVA66对肿瘤细胞生物学特征的影响

    作者:李美星;王树军;王颖;张惠珍;尤强;周光炎;葛海良

    目的: 探讨肿瘤抗原基因OVA66对肿瘤细胞生物学特征的影响.方法: 采用脂质体法, 以重组真核表达载体pcDNA3.1-OVA66转染肝癌细胞系SMMC-7721, 经G418稳定筛选、克隆及扩增, 采用RT-PCR、Western blot和免疫细胞化学(ICC)染色法, 检测目的基因及其蛋白的表达.用FACS检测细胞周期的变化;电镜技术观察细胞的超微结构;体外运动、侵袭实验检测细胞运动及侵袭能力;并应用基因芯片技术检测相关基因的差异表达.结果: RT-PCR检测显示, 转染pcDNA3.1-OVA66的细胞中OVA66基因呈高表达.Western blot显示, 在OVA66蛋白处出现明显的条带.电镜和FACS检测表明, 该基因可增强肿瘤细胞的增殖能力.体外运动、侵袭实验证实, 该基因可促进肿瘤细胞的迁移、侵袭.基因芯片显示, 该基因的高表达可促进Ⅰ型纤溶酶原激活物抑制剂(PAI-1)等基因的表达, 影响肿瘤的侵袭和转移.结论: OVA66基因及其蛋白可促进肿瘤细胞的增殖、侵袭、转移等一系列生物学功能.

  • 过氧化物酶体增殖剂PFOA对小鼠免疫系统的影响

    作者:杨谨;李昂;杨谦;李旭

    目的: 研究过氧化物酶体增殖剂(PP)全氟辛酸(PFOA)对小鼠的免疫器官和免疫细胞、免疫功能的影响.方法: 喂养含PFOA的食物后, 观察C57B/6雄性小鼠胸腺和脾脏的重量及胸腺细胞和脾细胞数的变化.用碘化丙啶(PI)进行细胞DNA染色, 用小鼠单克隆抗体(mAb)进行细胞免疫荧光染色, 流式细胞术分析胸腺和脾细胞的细胞周期和细胞表型的变化.用蛋白A噬菌斑实验和ELISA法检测小鼠抗马红细胞的抗体生成B细胞和血清中IgM和IgG滴度的变化.用刀豆蛋白A(ConA)和脂多糖(LPS)分别刺激小鼠脾细胞, 用 3H-TdR掺入法检测淋巴细胞增殖活性的变化.结果: 强效的PP(如PFOA)能导致小鼠胸腺和脾脏严重萎缩;其脾脏中T和B细胞数减少50%, 胸腺细胞数减少>90%, 以成熟的CD4+ CD8+细胞数的减少显著, S和G2/M期细胞数的下降明显.PFOA还可降低马红细胞诱导的IgM和IgG抗体生成B细胞的数量和血清中特异性IgM和IgG抗体的滴度, 以及T细胞活化剂ConA和B细胞活化剂LPS刺激的淋巴细胞增殖反应强度.停止喂养含PFOA的食物后, 上述指标迅速恢复正常.结论: 强效的PP能对小鼠免疫系统产生明显的抑制作用.

  • 人α防御素融合表达、纯化及生物活性检测

    作者:傅海燕;张剑;路凡;蒲勤;王孝功;卢兹凡;徐俊卿;赵忠良

    目的:获得大量重组人α防御素(HDα)并检测其活性,为其深入研究提供必要的材料.方法:体外化学合成得到带有羟氨裂解位点编码序列的HDα基因片段,克隆入pBV220-IL-4表达载体构建重组表达载体pBV220-IL-4- HDα.测序正确后将重组质粒转入大肠杆菌DH5α中进行温度诱导表达.经羟氨裂解去除IL-4后,对所得蛋白进行纯化、复性,以SDS-PAGE和生物学活性检测鉴定其特性.结果:经温度诱导后,融合蛋白主要以包涵体的形式表达,表达产物约占菌体总蛋白的20%;羟氨裂解切除IL-4后,所得目的蛋白的纯度约为99.8%.抑菌活性试验和克隆形成试验显示,所得HDα对细菌生长有明显的抑制作用.结论:成功地构建了HDα基因的重组表达质粒,获得稳定表达的工程菌,并建立了复性与纯化技术,为进一步对其进行功能研究与应用奠定了基础.

  • HAI-1基因不同功能域的原核表达载体构建及融合蛋白表达

    作者:曾蕾;曹江

    目的: 分段克隆1型肝细胞生长因子激活剂抑制因子(HAI-1)基因的功能域并在大肠杆菌中表达, 为进一步研究HAI-1的生物学功能打下基础.方法: 针对HAI-1的不同功能域设计相应的5对引物, 分别扩增KD1、 KD1+LDLR、 KD2、 LDLR+KD2和KD1+LDLR+KD2片段.将PCR产物克隆至pGEM-T Easy载体中并经测序鉴定.将5个cDNA片段亚克隆至具有6个组氨酸标签(His-Tag)的原核表达载体pIVEX2.3-MCS中.以上述表达不同功能域的载体转化大肠杆菌BL21(DE3)菌株, 用IPTG诱导融合蛋白的表达, 表达产物以Western blot进行鉴定, 并进一步通过镍亲和层析柱纯化His-Tag标记的KD1+LDLR+KD2融合蛋白.结果: 成功地构建了HAI-1各功能域基因片段的原核表达载体.Western blot分析证实, 在大肠杆菌BL21(DE3)中分段表达了5种HAI-1不同功能域的His-Tag融合蛋白, 并通过亲和层析法纯化到了相对分子质量为22 200的KD1+LDLR+KD2 融合蛋白.结论: 重组质粒pIVEX2.3-MCS/HAI-1能在大肠杆菌BL21(DE3)中表达, 纯化的融合蛋白可用于研究HAI-1不同功能域的生物学作用.

  • 骨髓基质干细胞BMP-2和bFGF基因的联合修饰

    作者:李毅;陈槐卿;成敏;唐艳娟

    目的: 建立能够稳定表达BMP-2及bFGF的骨髓基质干细胞, 优化骨组织工程种子细胞.方法: 通过RT-PCR方法获取全长BMP-2及bFGF基因, 克隆入真核表达载体pcDNA3. 0, 鉴定正确后, 经脂质体介导导入分离培养的大鼠骨髓基质干细胞, G418筛选稳定表达株.利用RT-PCR、 Western blot、 ELISA、免疫组织化学染色方法分析转染细胞外源基因表达情况.结果: 成功构建了全长BMP-2及bFGF的真核表达载体, 转染大鼠骨髓基质干细胞后经G418筛选获得稳定表达株. RT-PCR结果显示稳定转染细胞中具有大量目的基因mRNA转录, ELISA检测培养上清中目的蛋白表达阳性, Western blot、免疫组化结果显示胞质中有目的蛋白的表达.结论: 获得了可以稳定表达BMP-2及bFGF的骨髓基质干细胞, 有利于组织工程骨缺损修复中的应用.

  • 利用噬菌体肽库筛选与人CD59特异性结合的短肽

    作者:程颖;高美华

    目的: 筛选并鉴定与人CD59分子特异结合的短肽, 为设计具有拮抗CD59肿瘤逃逸活性的短肽封条奠定基础.方法: 以高表达人CD59的中国仓鼠卵巢细胞(CHO)为靶细胞, 采用竞争结合试验, 对噬菌体随机12肽库进行5轮亲和筛选.用ELISA筛选噬菌体阳性克隆并对其进行DNA序列分析.结果: 随机挑选的16个克隆中, 有8个与人CD59的结合力高.测序后, 得到3个高度同源的氨基酸序列.DNAstar分析显示, 3个序列均与已公布的(PubMed)人CD2的氨基酸序列有一定的同源性.结论: 获得的序列H×A××××××P××为设计肿瘤逃逸相关的CD59活性位点的短肽封条提供了技术基础.

  • 猪链球菌2型人源分离株截短的溶菌酶释放蛋白基因的克隆及原核表达

    作者:王海丽;王长军;陆承平;潘秀珍;唐家琪

    目的: 克隆及表达猪链球菌2型(S.suis 2)人源分离株Habb截短溶菌酶释放蛋白(MRP)基因.方法: 根据S.suis 2 mrp基因的序列设计引物, 克隆和分析江苏海安患者分离株Habb截短mrp基因(tmrp), 构建原核表达质粒pGEX4T-2-mrp.在大肠杆菌中诱导带有谷胱甘肽转移酶(GST)标签的融合蛋白tMRP-GST表达;经亲和层析法纯化后, 用凝血酶酶切去除重组蛋白中的GST, 制备纯化的截短MRP(tMRP)抗原.用Western blot检测重组抗原的活性.结果: 序列分析表明, 获得的tmrp基因长957 bp;原核表达的融合蛋白tMRP-GST的相对分子质量(Mr)约61 000;凝血酶处理的tMRP抗原的Mr约为35 000.Western blot分析显示, MRP-GST、 tMRP蛋白均可与MRP多克隆抗血清发生特异性反应.结论: 成功地克隆人源分离株Habb截短的mrp基因, 并在原核系统实现高效表达, 制备的纯化抗原tMRP具有良好的抗原性, 为开展相关免疫学研究奠定了基础.

  • 青藏高原藏族外周血淋巴细胞cDNA文库的构建和鉴定

    作者:陈云天;吴建芳;曹越;格日力

    目的: 构建藏族外周血淋巴细胞全长cDNA文库并鉴定其质量.方法: 分离健康藏族人外周血液的淋巴细胞并提取总RNA, 利用SMART(switching mechanism at 5′ end of RNA transcript)技术, 构建全长cDNA文库并进行文库滴度和重组率的测定.扩增文库并随机挑取噬菌斑进行PCR鉴定插入片段的大小.结果: 构建的cDNA文库的滴度为1.8×109pfu/L, 重组率>98%, 文库扩增后的滴度达8×1012pfu/L, 插入片段的长度在0.75~2.0 kb之间, 平均长度为1.35 kb.结论: 构建的藏族外周血淋巴细胞cDNA文库具有很高的质量, 为进一步筛选、克隆藏族低氧反应相关基因奠定坚实的基础.

  • 抗血管生成肽βpep-25重组原核表达质粒的构建及鉴定

    作者:李恩孝;刘陕西;杨广笑;王全颖;吴胤瑛;施璠

    目的: 合成抗血管生成肽βpep-25片断, 构建并鉴定含βpep-25肽的重组原核表达质粒.方法: 人工设计合成βpep-25肽序列片断, 经测序正确后, 利用基因克隆技术将其克隆到pGEM-T easy载体中, 构建重组质粒pGEM-T-βpep-25;用Nae I和BamH I双酶切pGEM-T-βpep-25后, 将T-βpep-25肽片断克隆到经Nae I和BamH I双酶切的重组载体pBV220-NT4中, 构建重组原核表达质粒pBV220-NT4-βpep-25, 并对其分别用BamH I酶切, EcoR I和BamH I双酶切分析.结果: 经酶切分析和DNA测序人工合成的肽βpep-25序列(113 bp)与文献报道结果一致;分别用BamH I酶切, EcoR I和BamH I双酶切重组原核表达质粒pBV220-NT4-βpep-25可以得到4 030 bp、 364 bp和3 666 bp的片段, 结果表明目的肽片段已经成功地克隆到了重组表达载体中, 说明重组原核表达质粒构建成功.结论: 抗血管生成肽βpep-25重组原核表达质粒的构建成功, 为进一步在细胞内外及动物模型研究其作用机制和抗肿瘤作用奠定了基础.

  • 树突状细胞靶向性DNA疫苗的抗肿瘤免疫效应

    作者:朱波;程晓明;段玉忠;郭波;吴玉章;陈正堂

    目的: 构建含OVA-Fc融合基因并对树突状细胞具有靶向性的DNA疫苗, 评价其在肿瘤治疗中的作用.方法: 构建真核表达载体OVA-Fc-pcDNA3.1, 以脂质体转染法将其导入CHO细胞, 用流式细胞术和ELISA法检测融合蛋白OVA-Fc的表达.建立E.G7-OVA荷瘤小鼠模型, 用 51Cr释放实验测定免疫小鼠脾脏细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的抗肿瘤活性.通过观察荷瘤小鼠肿瘤的体积和生存期评价该肿瘤疫苗的疗效.结果: 酶切鉴定和序列测定证明, 真核表达载体OVA-Fc-pcDNA3.1构建正确.用流式细胞术和ELISA法均表明, 转染的CHO细胞能表达OVA-Fc融合蛋白.OVA-Fc能激发CTL的杀伤活性, 发挥抗肿瘤作用, 从而减缓肿瘤的生长, 延长荷瘤小鼠的生存期.结论: 含OVA-Fc-pcDNA3.1的树突状细胞靶向性DNA疫苗能在体内有效地激发抗瘤免疫应答, 为进一步开展临床实验奠定了基础.

  • 埃兹蛋白在肝细胞癌及其转移灶中的表达及意义

    作者:高飞;赵君;窦科峰;罗丁;陈勇

    目的: 了解人埃兹蛋白(ezrin)在正常肝、肝硬化组织、肝细胞癌(HCC)及其转移灶中的表达情况, 并探讨其表达与肝细胞癌侵袭转移的关系.方法: 用两步免疫组化染色法检测6例正常肝, 25例肝细胞癌及14例转移灶中埃兹蛋白的表达;用Western blot检测上述组织及12例肝硬化组织中埃兹蛋白的表达.结果: 在正常肝、肝细胞癌及转移灶中, 埃兹蛋白的强阳性表达率分别为0%、 28%、 57.1%, 各组织中埃兹蛋白的表达差异均有统计学意义(P<0.05).Western blot的结果表明, 转移灶中埃兹蛋白平均表达量是正常肝中的12.6倍, 硬化肝中的4.7倍, 肝细胞癌中的1.8倍.结论: 埃兹蛋白的高表达与肝细胞癌的侵袭转移关系密切, 可能是影响肝细胞癌患者预后及癌细胞转移的一个重要因素.

  • hTERT基因核心启动子调控的TRAIL基因表达载体的构建及对卵巢癌细胞凋亡的影响

    作者:李红梅;宋天保;于月成;曹云新;王红英;宋晖;张明

    目的: 构建了人端粒酶逆转录酶(human telomerase reserse transcription, hTERT)基因核心启动子调控的肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TNF-related apop tosis inducing ligand, TRAIL)基因真核表达载体并观察其对卵巢癌细胞凋亡的诱导作用.方法: 从人胎盘中提取总RNA, 利用RT-PCR技术扩增了TRAIL基因片段.测序正确后, 利用基因重组方法将TRAIL基因克隆入带有hTERT 基因核心启动子pIRES2-EGFP真核表达载体中.获得由hTERT基因核心启动子调控的绿色荧光蛋白和带有效应型TRAIL基因的真核表达载体hTERTpromoter-pIRES2-EGFP-TRAIL.用脂质体转染法, 将其转染卵巢癌细胞系SKOV3细胞中, 应用RT-PCR法检测转染前后卵巢癌细胞中外源基因的表达情况, 以流式细胞术检测TRAIL对卵巢癌细胞的细胞周期的影响及诱导凋亡的作用.结果: 经酶切鉴定及测序结果证实, 所构建的重组载体正确.转染hTERT promoter-pIRES2-EGFP-TRAIL载体后, SKOV3细胞的增殖受到抑制, 出现明显凋亡.结论: hTERT基因核心启动子在卵巢癌细胞中可特异性地调控其下游TRAIL基因的表达, 并发挥其促凋亡作用.构建由hTERT基因核心启动子调控的表达载体, 可能是一种新型和有希望的肿瘤治疗的途径.

  • 单个核细胞的接种密度对贴壁筛选法培养内皮祖细胞增殖的影响

    作者:肖刚峰;张怀勤;季亢挺;邓武;黄晓燕

    目的: 探讨单个核细胞接种密度对内皮祖细胞体外培养扩增的影响.方法: 采集正常脐血, 用密度梯度离心法分离单个核细胞并接种在包被纤维连接蛋白的24孔培养板中.按接种的密度分为5组, 即1×106/cm2, 2×106/cm2, 3×106/cm2, 4×106/cm2及5×106/cm2.在培养的第7天, 计数各组每孔细胞的集落数和贴壁细胞数.用流式细胞术和免疫荧光染色法对细胞的表面标志及功能进行鉴定.结果: 以不同密度接种的各组每1×106个单个核细胞得到的集落数和贴壁细胞数不同.3×106/cm2组的细胞集落和细胞数多, 细胞的集落数和贴壁细胞数具有良好的相关性.结论: 贴壁筛选法培养内皮祖细胞, 脐血单个核细胞接种密度以3×106/cm2 为宜, 通过计数细胞集落可粗略估计内皮祖细胞的增殖能力.

  • 肌炎灵胶囊对实验性多发性肌炎动物模型免疫机制的影响

    作者:吴以岭;袁国强;周勇;王旭丹

    目的: 观察肌炎灵胶囊对多发性肌炎动物模型体液免疫和细胞免疫的影响, 探索其作用机制.方法: 利用豚鼠肌浆球蛋白多点免疫Lewis大鼠造成肌炎模型, 在此基础上胃灌肌炎灵, 观察动物血清中特异性抗体、 ENA多肽抗体、 T淋巴细胞增殖情况, 且与泼尼松对照.结果: 肌炎灵可以显著抑制大鼠血清特异性抗体含量, 抑制由肌浆球蛋白(Myosin)和刀豆蛋白A(ConA)诱导的T淋巴细胞增殖.结论: 同泼尼松一样, 肌炎灵在一些非特异性和特异性细胞免疫及体液免疫方面起抑制作用, 以此发挥疗效.

  • 荷EL4肿瘤小鼠模型的建立及美法仑抑瘤作用免疫机制的探讨

    作者:李墨林;李传刚;舒晓宏;贾玉杰;秦志海

    目的: 建立荷小鼠淋巴瘤EL4的野生型C57BL/6小鼠及其裸鼠模型, 探讨美法仑(melphalan)抑瘤作用的免疫机制.方法: 给正常野生型C57BL/6小鼠皮下接种小鼠淋巴瘤EL4细胞, 建立荷EL4肿瘤的小鼠模型.于野生型C57BL/6小鼠皮下接种瘤细胞后12 d, 经腹腔给荷瘤小鼠单次注射不同剂量的美法仑, 找出美法仑可发挥大的抑瘤作用, 并能致使肿瘤消退、不再复发的小使用剂量.然后再给野生型C57BL/6小鼠及其裸鼠(遗传背景相同)皮下同时接种小鼠淋巴瘤EL4细胞建立两种荷瘤小鼠模型.同样于接种瘤细胞后12 d, 经腹腔给两种荷瘤小鼠模型均注射可使野生型C57BL/6小鼠肿瘤消退、不再复发的低剂量的美法仑, 以正常野生型C57BL/6小鼠为对照, 观察在T淋巴细胞缺陷的裸鼠体内美法仑的抑瘤作用.结果: 注射7.5 mg/kg美法仑治疗后, 免疫功能正常的野生型C57BL/6荷瘤小鼠的肿瘤消退;而荷瘤C57BL/6裸鼠的肿瘤仍继续生长.结论: 单一剂量的美法仑对荷淋巴瘤EL4小鼠具有明显的治疗作用, 其作用的发挥需要T淋巴细胞的参与, 可能与T细胞的杀伤作用有关.

  • 抗豌豆白蛋白1b单克隆抗体的制备与特性鉴定

    作者:王建和;顿新鹏;曲丽娜;杨唐斌;陈正望

    豌豆白蛋白1b (pea albumin 1b, PA1b)初从豌豆种子中分离获得[1], 后来从大豆中也分离到其同源物-豆类胰岛素[2], 二者均为含37个氨基酸的单链肽, 第3、 7、 15、 20、 22、 32位的氨基酸均为半胱氨酸.其三级结构也已研究清楚, 属于富含半胱氨酸的肽类家族, 因其具有潜在的新型抗生素特性和抗艾兹病毒特性而备受关注[3].PA1b在牛胃液中能够保持完整的结构[4], 水煮后仍能够保持其生物学活性[5].是一种可杀灭谷类象鼻虫, 对人和环境没有危害的昆虫毒剂.也能促进细胞的分裂[6], 对损伤组织的生长具有明显的促进作用.豆类胰岛素是一种7S的碱性球蛋白(basic 7S globulin, 7S Bg) 的天然配体.豆类胰岛素同7S Bg的结合与胰岛素同其受体的结合很相似.豆类胰岛素也具有调节细胞分裂和分化的功能[7].为了探明PA1b的生理和病理作用, 我们制备了抗PA1b的单克隆抗体(mAb)并进行了其特性鉴定.

  • 抗SARS冠状病毒M蛋白片段单克隆抗体的制备与初步鉴定

    作者:钱超;姜平;卢春;姚堃

    目的: 制备抗SARS冠状病毒(SARS-CoV) M 蛋白N端1~43氨基酸(aa)单克隆抗体(mAb), 并对其特性进行初步鉴定.方法: 用纯化的SARS-M/GST融合蛋白抗原免疫BALB/c小鼠, 采用杂交瘤技术制备抗M蛋白片段的mAb.用间接ELISA法筛选能分泌抗M蛋白片段mAb的杂交瘤细胞株. Western blot和间接ELISA鉴定所获mAb的特异性, 并用小鼠mAb亚类测定试剂盒检测所获的mAb Ig亚类.为分析mAb识别位点, 进一步将M蛋白片段截短为部分重叠的2段表达, 以Western blot初步定位mAb识别位点.结果: 获得1株可分泌特异性抗SARS-CoV M蛋白片段的mAb杂交瘤细胞株(3H9), Ig亚类鉴定为IgG2a, 轻链为κ型.Western blot显示其mAb可特异识别SARS-CoV M蛋白N端1~43aa, 间接ELISA证实mAb可与包被于聚苯乙烯微孔板上的SARS病毒全蛋白抗原发生特异性反应, 其识别位点位于M蛋白N端16~28aa.结论: 成功获得1株抗SARS-CoV M蛋白N端1~43aa mAb杂交瘤细胞, 并初步定位其识别位点.

  • 抗人CD40人-鼠嵌合抗体的构建及其表达

    作者:瞿秋霞;陈永井;葛彦;王勤;陈成;杨明峰;张学光

    目的: 通过基因工程抗体改造技术构建并表达抗人CD40人-鼠嵌合抗体.方法: 从分泌鼠抗人CD40单克隆抗体(mAb)的杂交瘤细胞株(5C11)中提取总RNA, 用一对特异性引物通过RT-PCR扩增mAb VH和VL的DNA编码区基因.根据序列分析的结果, 设计引物扩增VH和VL基因相应的信号肽序列.利用基因重组技术, 将mAb 5C11的VH、 VL基因及其相应信号肽序列与人IgG1的CH基因、 Cκ链基因进行拼接, 构建人-鼠嵌合抗体基因的表达质粒pIRES/h5C11.用脂质体法将其导入293T细胞株中进行瞬时表达.利用流式细胞术对表达产物进行鉴定.结果: NCBI基因数据库Blast的结果显示, 克隆的基因序列符合小鼠VH、 VL基因及其信号肽序列的特征.表达质粒pIRES/h5C11的构建正确, 并在293T细胞株中获得瞬时表达.表达的抗人CD40的人-鼠嵌合抗体和mAb 5C11具有相同的抗原结合位点.结论: 成功地克隆了鼠抗人CD40 mAb V区编码基因, 并实现了可溶性抗人CD40的人-鼠嵌合抗体在293T细胞中的瞬时表达.

  • 以鼠源重链Fd片段为模板导向筛选人源性抗γ-精浆蛋白抗体轻链

    作者:张青;张思河;易静;苏明权;包国强;郝晓柯

    目的: 以鼠源抗γ-sm抗体重链Fd片段为模板, 筛选人源性抗人γ-精浆蛋白抗体轻链.方法: 利用RT-PCR从前列腺癌患者外周血淋巴细胞扩增出全套的人抗体轻链基因, 克隆入含鼠源性抗γ-sm抗体重链Fd片段的噬粒载体pComb3X/mFd中, 电转化大肠杆菌XL1-Blue后建立人-鼠杂合的Fab抗体库.通过稀释滴定、限制性酶切和随机测序, 对所建杂合库的库容、重组率和多样性分别进行鉴定, 以M13K07辅助噬菌体超感染, 利用亲和纯化的γ-sm为抗原, 对挽救展示的噬菌体抗体库进行3轮淘筛和克隆鉴定.后对筛选出的杂合抗体进行初步的功能检测.结果: 构建成功1.2×107CFU、重组率为90%、多样性好的杂合人-鼠噬菌体抗体库.利用纯化的γ-sm 3轮亲和淘筛后, 5个克隆成功诱导表达特异性的pIII融合抗体.ELISA进一步检测表明, 5个克隆均呈特异性阳性反应, 其中2个克隆亲和力较高, 测序显示其所含轻链基因序列完全相同, 可变区来源于IGKV4-1*01胚系基因家族.结论: 利用鼠源Fd片段为模板, 导向筛选杂合噬菌体库, 成功筛选到人源性抗人γ-精浆蛋白抗体轻链.

  • 人源性抗血小板膜糖蛋白IIb/IIIa Fab噬菌体抗体库的构建

    作者:崔宇杰;董宁征;庞爱明;白霞;阮长耿

    目的: 构建人源性Fab噬菌体抗体库, 为进一步从抗体库中筛选人源性抗GPIIb/IIIa Fab抗体奠定基础.方法: 利用RT-PCR和噬菌体表面展示技术, 直接从血小板膜糖蛋白抗体(抗-GPIIb/IIIa)阳性的特发性血小板减少性紫癜(ITP)患者脾细胞中提取总RNA, 逆转录合成cDNA, 扩增抗体轻链和重链Fd基因.经Sac I/Xba I和Xho I/Spe I双酶切, 依次将PCR产物插入噬粒载体pComb3H相应位点, 电转化大肠杆菌XL1-blue, 以辅助噬菌体VCSM13进行超感染, 构建成人源性Fab噬菌体抗体库.结果: 成功地构建库容量达6.2×106的抗血小板膜糖蛋白GPIIb/IIIa Fab噬菌体抗体库.结论: 构建了人源性Fab抗体库, 并达到建库标准, 可进一步从中筛选人源性Fab 抗体.

  • 兔抗人CXCR3-B分子N端多肽多克隆抗体的制备与初步应用

    作者:高媛;杨金菊;柳晓兰;刘莉;刘超燕;Visentin Gian Paolo;高建恩;孙启鸿

    目的: 获得兔抗人CXCR3-B分子N端第1~19、第17~35及第33~51个氨基酸多肽的多克隆抗体, 并对多克隆抗体进行初步鉴定和应用.方法: 应用Fmoc法化学合成CXCR3-B分子N端第1~19、第17~35及第33~51个氨基酸多肽, 经C18的RP-HPLC纯化后, 通过高碘酸钠法将纯化的CXCR3-B分子的多肽与KLH交联;皮下注射抗原免疫日本大耳白兔, 加强免疫得到抗血清, 应用蛋白G纯化获得多克隆抗体.对纯化的抗体进行ELISA、免疫印迹、免疫组化等初步鉴定和应用.结果: 分别化学合成CXCR3-B分子N端第1~19、第17~35及第33~51个氨基酸多肽, 纯化后多肽纯度分别为98%、 88.54%及80%, 达到免疫用抗原标准.多肽与KLH交联, 用于免疫动物.经纯化后的抗体效价分别为1∶ 32 000(0.1 mg/L), 1∶ 4 000(3 mg/L)和1∶ 1 000(10 mg/L).3种多肽的抗体可特异识别胎心组织中相对分子质量(Mr)约为50的CXCR3-B分子, 相应抗原定位于3种多肽的抗体可特异识别胎心组织中的血管内皮细胞.结论: 所制备的多克隆抗体可应用于ELISA、免疫印迹和免疫组化等实验, 为确定CXCR3-B分子的组织及细胞分布和定位、寻找CXCR3-B相互作用的分子提供了有力的工具.

  • 抗环孢菌素A单克隆抗体的制备和特性鉴定

    作者:王琳;齐孟文;冯才伟;何方洋

    目的: 制备环孢菌素A(CsA)的单克隆抗体(mAb)并鉴定其特性.方法: 采用光化学反应制备CsA全抗原, 免疫BALB/c小鼠, 取免疫小鼠的脾细胞与Sp2/0骨髓瘤细胞融合, 间接ELISA筛选, 阳性杂交瘤细胞用有限稀释法克隆, 以ELISA法对杂交瘤细胞的稳定性和mAb的特性进行鉴定.结果: 获得1株可稳定分泌mAb的杂交瘤细胞4E1-C4-E12, 细胞培养上清效价、腹水效价分别为1∶ 200和1∶ 105, 为IgG1类, 可特异性识别CsA, 与其类似物CsC、 CsD交叉反应率为13.3%、 21.5%.结论: 成功地制备了针对CsA的mAb, 为进一步研制检测CsA的 ELISA试剂盒奠定基础.

  • 抗豚鼠气单胞菌单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及其特性鉴定

    作者:唐旭;于辉;金晓航;吕葆真;黄威权

    目的: 制备抗豚鼠气单胞菌(Aeromonas caviae)单克隆抗体(mAb)并进行鉴定.方法: 用灭活的豚鼠气单胞菌全菌免疫BALB/c小鼠, 采用杂交瘤技术制备mAb.用间接ELISA法对mAb的效价及其与其他细菌的交叉反应性进行鉴定;用免疫组化染色法对mAb的免疫反应性进行鉴定.结果: 获得7株能稳定分泌抗豚鼠气单胞菌mAb的杂交瘤细胞株, 分别命名为0E10、 1A2、 1C4、 1F1、 1F10、 1H8和2A1.经测定杂交瘤细胞培养上清及腹水mAb的效价, 分别为10-1~10-2和10-3~10-5.mAb的Ig亚类鉴定表明, 1F1为IgG1, 1C4、 1F10和1H8为IgG2a, 2A1为IgG2b, 0E10和1A2为IgG3.交叉反应试验显示, 各株mAb均具有较好的特异性.免疫组化染色结果表明, mAb能和豚鼠气单胞菌特异性结合.结论: 成功地制备分泌抗豚鼠气单胞菌mAb的杂交瘤细胞株, 为该菌的快速检测及免疫学研究奠定了基础.

  • 抗人IgG单克隆抗体的制备及鉴定

    作者:段春光;杨守京;余璐;吴艺舟;刘彦仿

    目的: 制备高效价的抗人IgG单克隆抗体(mAb), 并用于肾脏免疫性疾病的免疫荧光诊断.方法: 以人IgG全长分子免疫BALB/c小鼠, 按常规方法进行细胞融合, 经筛选及克隆化, 建立可稳定分泌抗IgG mAb的杂交瘤细胞株.用ELISA及Western blot鉴定mAb的特性(效价、 Ig亚类、特异性及相对亲和力).以纯化的mAb建立免疫荧光染色法, 并用于肾小球肾炎的诊断.结果: 筛选到1株可稳定分泌抗人IgG mAb的细胞株, 腹水效价为1×10-6, Ig亚类为IgG2a(κ), 相对亲和力达到1×10-5, Western blot显示在相对分子质量(Mr)为53×103 处出现特异性的条带, 说明mAb能与IgG的γ链特异性结合.免疫荧光染色的结果显示, IgG分子在肾小球肾炎的活检组织中表达.结论: 获得1株能特异性识别人IgG的mAb, 可用于肾脏免疫性疾病的病理诊断.

  • 抗解脲脲原体单克隆抗体的制备及鉴定

    作者:于辉;唐旭;吕葆真;金晓航;黄威权

    目的: 制备抗解脲脲原体(Uu)的单克隆抗体(mAb)并进行鉴定.方法: 用灭活的Uu免疫BALB/c小鼠, 采用常规的细胞融合技术制备抗Uu的mAb.以ELISA和免疫组织化学染色法对mAb的亚类、效价及特异性进行鉴定.结果: 获得3株抗Uu的mAb, 均为IgG2b亚类.3株mAb的腹水ELISA效价为10-4~10-5.有2株只与Uu产生反应而不与肺炎支原体、淋球菌(gonococcus/GC)及豚鼠气单胞菌(A.cariae)等病原体发生交叉反应.免疫组化结果表明, mAb能和解脲脲原体特异性结合.结论: 制备了3株具有较高的特异性和效价的抗Uu mAb, 为Uu的免疫学检测及相关研究提供重要的制剂.

  • 抗HLA-G单克隆抗体G11E5的制备

    作者:陆盛军;梁智辉;朱慧芬;吴雄文;龚非力

    HLA-G被推测能帮助细胞或组织逃脱免疫监视和排斥反应, 实现免疫耐受和逃逸[1].但也有一些证据持相反观点[2, 3].因而, 其功能的明确和对其发挥功能的机制的深入研究, 对实现移植耐受和有效的肿瘤治疗具有重要意义.本研究中, 建立了抗HLA-G单克隆抗体(mAb)的杂交瘤细胞株, 命名为G11E5, 经初步鉴定显示G11E5有HLA-G特异性.

    关键词: 单克隆抗体 G11E5 HLA-G
  • 人CIDE-3基因原核表达载体的构建及蛋白的初步表达

    作者:姚丽;李青;李蓬;张静;叶菁;陈广生;王淑芳

    目的: 构建人CIDE-3基因的原核表达载体, 并在E.coli BL21(DE3)中表达.方法: 提取人肝母细胞瘤细胞系HepG2细胞的总RNA, 经RT-PCR扩增人CIDE-3基因片段, 并将其克隆入原核表达载体pET28a(+)中, 构建重组质粒pET28a(+)-CIDE-3.经限制性内切酶BamH I、 Xho I双酶切鉴定及序列测定后, 转化E.coli BL21(DE3), 经IPTG诱导表达组氨酸融合蛋白.结果: 获得全长为516 bp的人CIDE-3基因片段.以构建的重组质粒pET28a(+)-CIDE-3转化E.coli BL21(DE3)后, 经IPTG诱导, 表达出相对分子质量(Mr)约为23 000的重组CIDE-3蛋白.SDS-PAGE分析显示, 表达的蛋白主要以不溶性包涵体的形式存在于E.coli BL21(DE3)的胞质中, 表达量约占全菌蛋白的32%.结论: 成功地构建了原核表达载体pET28a(+)-CIDE-3, 并表达出重组CIDE-3蛋白, 为进一步多克隆抗体的制备和凋亡的相关研究奠定了实验基础.

  • YZ-2蛋白的生物信息学分析及其多克隆抗体制备

    作者:臧林泉;邱鹏新;肖茹;颜光美

    目的: 生物信息学分析与脑缺氧密切相关的新蛋白质YZ-2, 以及制备其多克隆抗体.方法: 根据生物信息学分析预测出YZ-2蛋白质的二级结构、亲水性、抗原性等理化特性, 以这些分析预测为依据, 经过同源性检索后设计出一段由22个氨基酸组成的多肽, 免疫家兔得到多克隆抗体, 并用ELISA、 Western blot等方法鉴定其特异性和滴度.结果: ①成功分析预测其抗原性和亲水性;②制备了抗YZ-2蛋白多克隆抗体;③以此多克隆抗体经酶联免疫吸附测定、蛋白质印迹, 检测YZ-2蛋白的表达, 证实此抗体效价较高、特异性强.结论: 利用生物信息学较好地预测出YZ-2的亲水性和抗原性, 并成功制备了其较高特异性的多克隆抗体.

  • 人源化抗人肺癌单域抗体基因的构建、表达及活性分析

    作者:王阶平;庄国洪;杨桂旺;王臻;李文珠;谢莲英;颜江华

    目的: 构建人源化的抗人肺癌单域抗体hu3D3VH基因, 在大肠杆菌中表达, 对其蛋白活性进行分析.方法: 采用CDR移植技术对mAb3D3的重链可变区进行人源化, 通过重叠PCR获得hu3D3VH的基因.构建pET22(b+)/hu3D3VH表达载体, 并转化大肠杆菌BL21(DE3), 在IPTG诱导下表达.表达产物通过Ni亲和层析柱纯化.采用间接ELISA和竞争抑制ELISA法进行活性分析.结果: 通过重叠PCR获得序列正确的目的基因.目的蛋白以包涵体的形式表达, 表达量占菌体总蛋白的30%以上.纯化后, 目的蛋白的纯度达95%以上.hu3D3VH具有与亲本抗体相同的抗原反应性, 并能抑制mAb3D3与L342细胞的结合.结论: 获得的人源化单域抗体hu3D3VH, 保留了与mAb3D3相同的反应性和特异性, 为进一步临床应用奠定了基础.

  • 宫内移植的免疫学研究进展

    作者:马芳;王智彪

    随着应用于某些遗传性疾病产前诊断的宫内羊膜腔穿刺术和绒毛活检术的普及, 越来越多的遗传性疾病已能在妊娠早期明确诊断, 为出生前子宫内介入性治疗创造了先决条件.目前, 宫内移植 (intrauterine transplantation, IUT)或宫内基因治疗作为遗传性疾病出生前一种有希望的治疗方法, 已用于动物实验研究和少数临床病例中.尽管IUT的研究已能为某些产前诊断的严重遗传性疾病(如SCID)提供新的治疗方法, 但由于对胎儿免疫发育和IUT技术本身的限制, IUT在临床的应用目前还不成熟.IUT是在发育中的胎儿进行的, 其移植免疫的特点与成年个体移植免疫是不同的.我们对IUT的研究进展进行了简要综述.

  • HLA-A2+供者外周血hCMV特异性CTL的定量及其表型分析

    作者:查庆兵;何贤辉;徐丽慧;迟晓云;曾耀英

    目的: 利用加载人巨细胞病毒(hCMV)结构蛋白pp65衍生抗原肽NLV(pp65495-503)的HLA-A*0201(A2-NLV)四聚体, 探讨四聚体染色条件的优化及其在特异性CTL表型分析中的应用.方法: 取HLA-A2+供者外周血, 以A2-NLV四聚体/PE在不同条件下染色, 然后以anti-CD3-FITC和anti-CD8-APC标记, 流式细胞术分析染色结果, 寻找四聚体佳染色条件, 并分析特异性CTL的表型和活化抗原表达.结果: 以全血样进行四聚体染色结果优于分离的PBMC.A2-NLV四聚体用量为0.3 μg时, 与100 μL全血于4℃温育1 h, 特异性染色效果佳, 而与CD8- T细胞非特异性结合很低.以此优化条件进行特异性CTL表型分析, 结果显示CD28阳性的A2-NLV四聚体特异性CTL的百分率较非特异性CTL低, 表达CD57的百分率较非特异性CTL高, CD25分子只表达于活化的特异性CTL上.结论: 通过对染色条件进行优化可明显提高四聚体染色的特异性, 降低非特异性结合, 优化的四聚体染色法能用于抗原特异性CTL的表型和功能分析.

  • 乙型肝炎表面抗原和抗体双阳性模式浅析

    作者:朱浩稳;任碧琼;周志虹

    乙型肝炎病毒(HBV)的标志物在免疫学实验室检测中很常见, 随着乙肝疫苗的推广, 乙肝表面抗原(HBsAg)和乙肝表面抗体(HBsAb)的血清学模式更为临床关注.有些病例在不同时期采血重复试验时, 仍能测得HBsAg和HBsAb同时阳性, 且HBsAb的水平也不低, 提示HBsAb确实能与HBsAg同时存在.研究中我们分析了HBsAg和HBsAb在体外反应一些特性.

    关键词: HBsAg HBsAb 血清学模式
  • 人外周血CD4+CD25+调节性T细胞的分离、鉴定和功能特征

    作者:杨江华;张永祥;王芳;喻荣彬;苏川;孙南雄

    目的: 分离人外周血CD4+ CD25+ Treg细胞, 并检测其功能.方法: RT-PCR技术检测CD4+ CD25+ Treg细胞中Foxp3的mRNA表达;与CD8+ T细胞和CD4+ CD25- T细胞共同培养, 或加入外源性IL-2及IL- 4, 检测其抑制功能;流式细胞术检测IFN-γ、 IL- 4和IL-10.结果: CD4+ CD25+ Treg细胞高表达Foxp3, 主要分泌IL-10, 能够抑制CD8+ T细胞和CD4+ CD25- T细胞的增殖, 高浓度IL-2能够阻断CD4+ CD25+ Treg细胞的抑制功能.结论: CD4+ CD25+ Treg细胞是一群具有免疫抑制功能的调节性T细胞, 这种抑制作用能够被高浓度IL-2阻断.

  • 双抗体夹心ELISA检测碱性成纤维细胞生长因子

    作者:徐晓鹏;向军俭;李贵生;邓宁;唐勇;王宏;杨红宇

    碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor, bFGF)分布于几乎所有来源于中胚层和神经外胚层的组织中, 等电点9.6, 是相对分子质量(Mr)为18 000的单亚基多肽.bFGF在促进血管生成、创伤愈合、骨骼修复、神经营养与修复、眼晶体再生以及胚胎的发育与分化方面均显示出生物学活性[1, 2], 其生产和应用过程中需要高灵敏度的定量检测方法.1992年本室用鼠抗bFGF多克隆抗体(pAb)在国内首次建立了bFGF间接ELISA检测方法[3], 已经应用于bFGF生产过程中的质控和定量检测以及科学研究等工作.在此基础上, 用本室制备的bFGF单克隆抗体(mAb)与抗bFGF酶标pAb, 建立了bFGF双抗体夹心ELISA方法, 并对其重复性、精密度和适合性做了分析, 为bFGF的定量检测提供了有效的手段.

  • 抗醋酸甲羟孕酮抗体的制备及初步鉴定

    作者:郭金花;胥传来;金征宇;王武康;彭池方;余德河

    目前, 我国使用的检测醋酸甲羟孕酮(Medroxyprogesterone acetate, MPA)的ELISA试剂盒主要依靠国外进口, 因其价格非常昂贵, 不可能在国内推广使用.本研究旨在提供原料研究了相关抗原的合成以及研制合格的抗MPA的抗体, 组装检测MPA的ELISA试剂盒.

  • RNA干扰技术抑制JEG-3细胞中HLA-G的表达

    作者:侯开波;姚元庆;雷迎峰;王晓红;赵宏喜;尹文;朱晓明

    目的: 以人类白细胞抗原G基因(HLA-G)为靶基因, 采用RNA干扰(RNAi)技术特异性地抑制JEG-3细胞中HLA-G的表达.方法: 针对HLA-G基因设计一段小干扰RNA(siRNA), 由Ambion公司化学合成, 用脂质体lipofectamine2000将该siRNA转染JEG-3细胞, 采用RT-PCR、流式细胞术和Western blot 分别从mRNA和蛋白质水平检测该siRNA对HLA-G表达的影响.结果: 针对HLA-G的siRNA能够明显下调JEG-3细胞中HLA-G的表达水平, 并具有良好的特异性.结论: 在JEG-3细胞系中采用RNAi技术特异性下调了HLA-G基因的表达, 为进一步研究HLA-G在人类的母胎免疫耐受、正常妊娠的维持及助孕技术应用等方面的作用奠定了实验基础.

    关键词: HLA-G RNA干扰 JEG-3细胞
  • 高活性的人白细胞介素-3突变体的构建与表达

    作者:邹晓燕;杨胜利;龚毅

    目的: 在大肠杆菌中构建表达高活性的人白细胞介素-3(hIL-3)突变体.方法: 通过定点突变的方法构建hIL-3突变体K116V和 K116W的表达载体, 并实现hIL-3突变体在大肠杆菌中的表达.对所得包涵体蛋白依次溶解、纯化、透析复性.用Western blot检测hIL-3突变体的特异性.单溶液细胞增殖(MTS)测定hIL-3突变体的生物学活性.结果: hIL-3在大肠杆菌中高效表达, 表达量占菌体总蛋白的40%以上, 主要以包涵体的形式存在.将包涵体溶解在8 mol/L脲中, 经Ni-NTA-Sepharose柱纯化后纯度达90%以上.MTS法测定hIL-3突变体K116V的活性为野生型的5倍, K116W的生物学活性也有所增加.结论: 获得了高活性的hIL-3突变体K116V, 有望成为hIL-3的替代品, 也证明了hIL-3第116位的赖氨酸残基对于hIL-3的生物学活性很重要.

  • 嗜酸性粒细胞提呈抗原对肺组织CD4+细胞分化的影响

    作者:尹琦;施焕中;覃雪军

    目的: 探讨嗜酸性粒细胞(EOS)对肺组织中的CD4+细胞分化的影响.方法: 以鸡卵清蛋白(OVA)致敏和雾化吸入刺激BALB/c小鼠以诱发气道的EOS在气道聚集后将其分离纯化, 然后与来源于致敏小鼠肺组织的CD4+细胞共同培养.在部分试验中加入抗CD80和(或)抗CD86 mAb.同时, 将EOS注入致敏小鼠气道, 3 d后, 取出肺组织, 并将其制成细胞悬液进行培养.收集培养上清液, 用ELISA测定其中IL- 4、 IL-5、 IL-13及INF-γ的含量.结果: 在和EOS体外共同培养的条件下, 肺组织CD4+淋巴细胞产生IL- 4、 IL-5、和IL-13等Th2类因子, 但不产生INF-γ等Th1类因子;抗CD80和(或)抗CD86 mAb可以明显抑制Th2类细胞因子的产生.将EOS注入致敏小鼠气道后, 同样在体内能激发肺组织CD4+活化, 产生Th2细胞因子IL- 4, IL-5, IL-13, 但不产生INF-γ, 与体外结果相似, 抗CD80和(或)抗CD86 mAb可以抑制EOS在体内的抗原提呈过程.结论: EOS细胞在体内或体外均能摄取和处理抗原, 激发CD4+的Th2反应.

  • 重肌灵片体内对EAMG大鼠IFN-γ、IL-10、TGF-β水平的影响

    作者:吴以岭;杨颖;袁国强;王静;周勇;王旭丹

    目的: 探讨重肌灵片(ZJL)对细胞因子水平的影响.方法: 将50只Lewis大鼠随机等量分为佐剂对照组、模型组、地塞米松组及重肌灵大、小剂量组, 用从电鳐电器官提取的烟碱型乙酰胆碱受体(N2AchR)纯品, 加完全弗氏佐剂(CFA)免疫大鼠制成实验性自身免疫性重症肌无力(EAMG).大鼠免疫后第24天, 用ELISA检测细胞培养上清及血清中IFN-γ、 IL-10和TGF-β的含量.结果: 在细胞培养上清中, 模型组与CFA组比较IFN-γ、 IL-10及TGF-β的水平升高(P<0.01);ZJL两剂量组与模型组比较IFN-γ、 IL-10的含量均显著下降(P<0.01或P<0.05);而TGF-β的含量均显著升高(P<0.01或P<0.05).阳性药组与模型组比较, 三者含量均显著降低(P<0.01或P<0.05).结论: ZJL片可通过上调TGF-β的含量, 抑制IFN-γ、 IL-10的过量分泌, 从而降低抗N2AchR抗体的水平, 抑制EAMG的发生.

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