细胞与分子免疫学杂志
Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology 세포여분자면역학잡지
- 主管单位： 中国免疫学会；第四军医大学
- 主办单位： 陕西省免疫学会,中国免疫学会
- 影响因子： 0.81
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 1007-8738
- 国内刊号： 61-1304/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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表达GFP的重组减毒鼠伤寒沙门氏菌体内感染抗原呈递细胞的动态变化
目的:阐明重组减毒鼠伤寒沙门氏菌在体内早期感染抗原呈递细胞(APC)的动态变化规律.方法: 用一定剂量的表达绿色荧光蛋白(GFP)的重组减毒鼠伤寒沙门氏菌X4550(Pyagfp)口服接种BALB/c小鼠.3 d后, 取腹腔巨噬细胞培养24 h, 用荧光显微镜观察.另以该细菌静脉注射小鼠, 于感染后3、6和12 h, 制备脾脏、肝脏低浮密度细胞.用流式细胞术检测巨噬细胞和树突状细胞的感染率.结果: 巨噬细胞感染X4550(Pyagfp)的百分率, 腹腔中约为50%, 肝脏和脾脏中约为20%～40%. 树突状细胞感染X4550(Pyagfp)的百分率, 脾脏中约为4%～10%, 肝脏中约为10%～20%.巨噬细胞的吞噬能力明显高于树突状细胞.结论: 感染早期, 重组减毒鼠伤寒沙门氏菌在体内已被APC所摄取, 为诱导有效的免疫应答提供了先决条件.
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结核杆菌热休克蛋白70基因的克隆与原核表达
目的:克隆结核杆菌热休克蛋白70(TBhsp70)基因,并在大肠杆菌中表达.方法:利用PCR技术从结核杆菌H37Rv中扩增Hsp70基因,并将其克隆到pUC19中,进行测序.将得到的Hsp70基因克隆到表达载体pGEX-4T-1中,构建重组表达质粒pGEX-TBhsp70,在大肠杆菌DH5α中进行表达.结果:成功地克隆了TBhsp70基因.DNA测序证实,与GenBank公布的序列一致.含pGEX-TBhsp70基因表达质粒的大肠杆菌经IPTG诱导后,能够表达相对分子质量(Mr)约为96 000的融合蛋白.结论:获得了TBhsp70基因,成功地构建了原核表达质粒pGEX-TBhsp70,并在大肠杆菌得到表达,为其相关研究奠定了一定的基础.
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酵母双杂交随机环肽库的构建、鉴定与扩增
目的:构建含16个氨基酸的酵母双杂交随机环肽库.方法: 以PCR扩增人工合成的随机DNA模板, 经BamH I和EcoR I酶切后, 克隆入酵母表达质粒pGADT7 GH, 构建酵母双杂交随机环肽库并检验其库容及随机性, 扩增、抽提并纯化酵母双杂交环肽库质粒.结果: 构建了酵母双杂交随机环肽库, 库容为1.28×107, 氨基酸分布与理论频数无显著差异, 并扩增获得大量高纯度的环肽库质粒.结论: 成功地构建酵母双杂交随机环肽库, 并获得大量高纯度的环肽库质粒.
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大鼠心脏移植后淋巴细胞5种免疫分子表达的变化
目的:观察大鼠异体异位心脏移植术后不同时间点, 淋巴细胞相关免疫分子的表达水平、供心存活率及心肌组织的病理学改变, 探讨免疫排斥反应的相关时间进程.方法: 分别经供体SD大鼠的心脏主动脉、肺动脉与受体Wistar大鼠的腹主动脉及下腔静脉吻合, 进行异位心脏移植术.于术前及术后不同时间点, 取血分离淋巴细胞.用流式细胞仪分别检测淋巴细胞上CD4、CD8、IL-2R、ICAM-I和MHC-II类分子的表达水平.对供心心肌组织进行常规病理学检查.结果: 于移植后24 h, 只有MHC-II类分子的表达水平增加, CD4 、IL-2R和ICAM-I的表达水平降低, CD8无改变.术后72 h, CD4 、CD8及IL-2R的表达增加, 其中CD8和IL-2R达峰值.术后7～10 d, 除CD4的表达继续增加外, 其他4种免疫分子的表达水平逐渐降低.术后不同时间点移植心脏的存活率分别为: 100%(24 h)、85.7%(72 h)、16.7%(7 d)、0(10 d和12 d).病理学检查显示, 移植后24 h, 心肌组织无明显的病理学变化, 术后3 d, 7只大鼠中4只出现Ⅰ A级及以上病理改变.术后7 d, 6只大鼠全部发生Ⅱ级以上的病理学变化.结论: 大鼠心脏移植后的24 h内, 外周血淋巴细胞为以MHC-II分子表达为主的抗原识别、呈递期, 并伴有一过性免疫功能降低; 术后24～72 h为T细胞活化期, 术后3～7 d为免疫排斥反应效应期.CD4、CD8和IL-2R等免疫分子表达的峰值与开始出现轻度排斥反应时病理学变化的时间相一致.
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TR基因重组腺病毒载体的构建和鉴定
目的:构建含人硫氧还蛋白还原酶(TR)基因的重组腺病毒载体,探讨TR的抗氧化功能与神经退行性疾病的相关性.方法:从重组质粒pGEM-TR上用内切酶切下编码500个氨基酸的全长TR cDNA片段,并连接穿梭质粒pShuttle,再双酶切pShuttle-TR.将带有CMV启动子的目的片段,插入E1、E3缺失的Adeno-X病毒DNA中,以Adeno-TR DNA通过脂质体转染HEK293细胞,获得重组腺病毒Adeno-TR进行PCR鉴定及病毒滴度测定.用重组腺病毒感染CV1细胞,通过免疫荧光染色与Western blot分别检测重组腺病毒感染的细胞上和裂解液中TR蛋白的表达.结果:重组腺病毒Adeno-TR的病毒滴度为4.4×1011pfu/L.PCR、荧光显微镜证实,以及Western bolt分析,在相对分子质量(Mr)约55 000处均出现特异性条带.结论:成功地构建了重组腺病毒载体,并能介导外源基因TR表达,为进一步研究TR的功能及其与疾病的相关性奠定了基础.
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淋巴细胞中NF-κB p65活性水平在Fx1A诱导的口服耐受大鼠中的变化
目的:探讨核因子-κB(NF-κB)p65在口服耐受发生中的活性改变及其意义.方法: 雌性Wistar大鼠30只随机分成两组: ①口服耐受组, 用小剂量(每次8 mg/2 mL PBS)的Fx1A抗原灌胃.②对照组, 用PBS 2 mL/次灌胃.观察大鼠迟发型超敏反应(DTH), 进行脾淋巴细胞增殖试验, 了解大鼠免疫功能的改变.以免疫组化和ELISA法, 检测大鼠淋巴组织中NF-κB p65的活性及TGF-β1的表达.结果: 与对照组相比较, 口服耐受组大鼠DTH和抗原特异性淋巴细胞增殖反应明显受抑制; 肠黏膜Peyer's淋巴结(PP结)中NF-κB p65的活性及TGF-β1的表达明显增加.脾淋巴组织中NF-κB p65的活性降低, 但TGF-β1的表达明显增加.结论: 低剂量Fx1A抗原诱导的口服耐受的发生, 可能与不同部位免疫细胞内NF-κB p65的活性改变有关.
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细胞内钙离子螯合剂抑制HSV-1诱导Hela细胞的凋亡作用
目的:探讨HSV-1在诱导Hela细胞凋亡中, 细胞内游离钙浓度的变化及钙离子螯合剂对HSV-1诱导Hela细胞凋亡的抑制作用.方法: HSV-1感染Hela细胞后, 用扫描电镜及透射电镜观察凋亡情况.用荧光探针标记细胞内游离Ca2+, 在不同时间观察细胞内游离Ca2+浓度的变化.结果: HSV-1感染Hela细胞后,出现了典型的凋亡形态学变化.细胞内游离Ca2+浓度在HSV-1感染Hela细胞后12 h达高峰; 典型的凋亡形态学变化出现在HSV-1感染Hela细胞后24 h.细胞内Ca2+螯合剂能显著抑制HSV-1诱导的Hela细胞凋亡.结论: 细胞内游离Ca2+在HSV-1诱导的Hela细胞凋亡过程中, 具有重要作用, 此实验结果为临床治疗相关疾病提供了有用的线索.
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构建可抑制HLA-DR/DQ表达的MHC-Ⅱ类分子反式激活因子基因的突变体及其机制
目的:构建能抑制MHC-Ⅱ类分子表达的MHC-Ⅱ类分子反式激活因子(MHC class Ⅱ transactivator, CⅡTA)基因的突变体, 并探讨其抑制MHC-Ⅱ类分子表达的机制.方法: 用PCR、酶切及连接技术, 构建不含起始密码子的pcDNA3mCⅡTA2, 含起始密码子的pcDNA3mCⅡTA3以及含起始密码子及NLS(nuclear localization signal)的pcDNA3mCⅡTA4突变体.用脂质体转染法, 将上述3种突变体及空载体pcDNA3转入Hela细胞和Raji细胞中.用流式细胞术和RT-PCR法, 观察他们对Hela/Raji细胞HLA-DR/DQ分子的诱导性和组成性表达的影响.将mCⅡTA4转移到对四环素浓度依赖的质粒pUHD10-3上, 通过改变培养环境中四环素的浓度, 调节外源CⅡ TA突变体的表达量, 观察突变体的表达量与MHC-Ⅱ类分子受抑率的关系.结果: 细胞和基因水平证实, pcDNA3mCⅡTA3和pcDNA3mCⅡTA4对Hela/Raji细胞HLA-DR/DQ的表达均有明显的抑制作用; 而pcDNA3mCⅡTA2和空载体pcDNA3无此作用.MHC-Ⅱ类分子被抑制的程度与外源转入CⅡTA突变体(pUHD10-3mCⅡTA4)的量明显相关.结论: 成功地构建pcDNA3mCⅡTA3和pcDNA3mCⅡTA4, 并能抑制HLA-Ⅱ类分子的表达.初步证实CⅡTA突变体是通过与胞内的野生型CⅡTA竞争性结合反式激活蛋白, 来抑制MHC-Ⅱ类分子的转录和表达.
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截短型转位肽重组抗体/颗粒酶B基因的构建及表达
目的:构建携带截短型转位肽重组抗体/颗粒酶B基因的真核表达载体, 并将其在HER2阳性SKBR-3肿瘤细胞及HER2阴性Hela肿瘤细胞中表达.方法: 用 PCR法获得截短型转位肽重组抗体/颗粒酶B基因片段, 并克隆构建真核表达载体,以脂质体法转染SKBR-3细胞及Hela细胞, 用免疫细胞化学染色检测其在不同细胞中的表达及对细胞形态的影响.结果: 成功构建了编码截短型转位肽重组抗体/颗粒酶B基因的真核表达载体pCMV-e23sFv-FSD-GrB, 用免疫细胞化学检测发现, 绝大多数Hela细胞可高表达e23sFv-FSD-GrB 蛋白, 且细胞形态正常, 而表达e23sFv-FSD-GrB 蛋白的SKBR-3细胞形态发生变化, 出现固缩细胞.结论: 截短型转位肽重组抗体/颗粒酶B基因真核表达体系的建立, 为确定PE转位肽的小转位功能区段奠定了基础.
关键词： 绿脓杆菌外毒素转位肽 重组颗粒酶B -
重组乙型肝炎病毒变异s基因疫苗诱导小鼠产生特异性体液免疫应答
目的:构建乙型肝炎病毒(HBV)变异s基因真核表达载体,检测其诱导小鼠产生特异性体液免疫应答.方法:利用限制性内切酶定位克隆构建s基因nt587 G→A的真核表达载体pCMV-S2.S+145R(PR).用其转染人肝癌细胞系Hep G2后,用EIA、ELISA及免疫细胞化学法,观察其抗原性.以重组变异型s基因真核表达载体(PR)和载体pcDNA3.0分别免疫C57BL/6小鼠各5只.每只小鼠各肌肉注射纯化质粒100 μg.用ELISA法检测血清抗-HBs及抗-HBs2抗体的效价.结果:体外实验证实,变异型HBsAg可与抗-HBs结合;PR免疫小鼠可诱导其产生抗-HBs抗体及抗-HBs2抗体,但抗-HBs2抗体的出现早于抗-HBs抗体约1～2 wk.结论:HBV变异s基因(nt587 G→A)的真核表达载体的表达产物具有良好的抗原性,能够诱导C57BL/6小鼠产生体液免疫应答.
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乙酰肝素酶、层黏连蛋白及其受体的表达以及在卵巢癌转移中的作用
目的:探讨乙酰肝素酶mRNA(acetyl-heparanase mRNA)、层黏连蛋白(laminin,LN)及其受体(laminin recepter,LR),在50例卵巢癌、33例淋巴结转移卵巢癌及10例浆液性囊腺瘤中的表达,及其在卵巢癌转移中的作用.方法:应用原位杂交和免疫组化染色方法,检测乙酰肝素酶mRNA转录水平及LN和LR的蛋白的表达及定位.结果:乙酰肝素酶mRNA在卵巢癌病灶及转移淋巴结中的转录水平明显增强,原发灶与转移灶之间的表达差异显著(P<0.05),恶性肿瘤与良性肿瘤之间表达的差异更为明显(P<0.01).LN在癌组织及转移淋巴结中的表达少;而LR的表达却明显增强.乙酰肝素酶mRNA与LN表达呈负相关,与LR的表达呈正相关.结论:乙酰肝素酶mRNA的表达与LN和LR的表达之间分别呈正、负相关性,提示乙酰肝素酶是参与肿瘤的生长、侵袭和转移的方式之一.
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海马内注射5-HT3受体激动剂后c-fos在不同脑区的表达
目的:探讨海马5-HT3受体神经免疫调节的神经功能通路及可能的途径.方法:采用SABC免疫组化染色法,测定不同脑区c-fos的表达.结果:给海马核团内注射5-HT3受体激动l-phenylbiguanide(1-PBG)后1 h,海马及大脑皮层中有大量的c-fos表达,随时间的推移表达量渐减少.下丘脑在注射1-PBG后8 h,中脑导水管周围灰质在16 h出现有意义的表达.1-PBG诱导的c-fos的表达可被其相应受体拮抗剂tropisetron(TROP)所阻断.结论:海马-大脑皮层-下丘脑-中脑导水管周围灰质形成一个神经网络,这个神经网络可能与免疫调节有关.
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胃癌特异性血管结合多肽的体内筛选和初步鉴定
目的:利用噬菌体随机肽库,体内筛选可与胃癌移植瘤血管内皮细胞特异结合的多肽片段,为肿瘤的血管抑制治疗提供有效的方法和手段.方法:采用肾包膜下移植法(SRCA),建立免疫抑制小鼠肾包膜下人胃癌移植瘤模型.在小鼠体内对噬菌体十二肽库进行4轮淘筛,回收移植瘤和对照组织(脑)中的噬菌体并滴定计数.同时,用免疫组织化学染色法,检测噬菌体在移植瘤组织中的分布情况.结果:与胃癌移植瘤血管特异结合的噬菌体得到富集,为对照组织(脑)的3.4倍.随机挑取单个克隆测序鉴定,发现十二肽YESIRIGVAPSQ的出现次数多,免疫组化染色显示,噬菌体注入小鼠尾静脉5 min 后,定位于移植瘤血管的内皮细胞.向小鼠体内单独注入呈现十二肽YESIRIGVAPSQ的噬菌体,从胃癌移植瘤组织回收的噬菌体数量为对照组织(脑)的4.2倍,肺的4.9倍,心脏的5.4倍.结论:筛选到的模拟短肽YESIRIGVAPSQ,有可能成为肿瘤血管靶向治疗的有效工具.体内淘筛噬菌体随机肽库,筛选与靶器官血管内皮细胞特异结合的短肽是可行的,具有推广和应用价值.
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重症肌无力患者胸腺细胞凋亡障碍与Fas表达异常的关系
目的:探讨重症肌无力(MG)胸腺细胞凋亡异常、Fas表达异常在自身免疫应答形成中的作用.方法:用手术切除的MG患者的胸腺,制备胸腺提取液和胸腺细胞悬液,用MTT比色法测定胸腺细胞的增殖;用DNA电泳及细胞形态学观察细胞凋亡;用流式细胞仪检测细胞表面Fas的表达,用RT-PCR结合单链多态构象性分析(SSCP),探讨Fas基因的转录及可能存在的Fas基因突变.结果:MG患者的胸腺提取液,能抑制正常胸腺细胞增殖,但不能抑制MG患者胸腺细胞增殖.在地塞米松作用下,正常人及患者胸腺细胞的增殖均可被抑制,细胞增殖抑制率分别为58.33%和54.26%.MG患者胸腺细胞的DNA电泳可见梯状条带,并且胸腺细胞上Fas的表达百分率增加[(20.38±6.07)%],与空白对照组[(12.43±4.32)%]相比较P<0.05.对MG患者胸腺细胞Fas mRNA进行RT-PCR-SSCP分析,部分MG患者出现异常电泳条带.结论:MG患者胸腺细胞的凋亡及Fas分子表达均异常,而且存在Fas基因突变,提示与本病的发生发展有关.
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抗ssDNA单抗免疫组化法用于检测肿瘤细胞株对化疗药物敏感性的研究
目的:应用本室制备的抗单链DNA(ssDNA)单克隆抗体(mAb),检测多种化疗药物对不同肿瘤细胞株凋亡的诱导作用,并根据凋亡率判断肿瘤细胞对化疗药物的敏感性. 方法:用血浆峰值浓度(PPC)的9种化疗药物,分别诱导肿瘤细胞株K562和Hep-2的凋亡.用抗ssDNA mAb免疫组化染色法,检测肿瘤细胞株的凋亡并计算调亡率.结果:以抗ssDNA mAb建立的检测细胞凋亡的免疫组化法,能够区分凋亡细胞和非凋亡细胞.该法检测证明,化疗药物可诱导敏感肿瘤细胞株凋亡,但不同化疗药物诱导同一肿瘤细胞株或不同肿瘤细胞株凋亡的程度不同.结论:抗ssDNA mAb免疫组化法,可用于检测肿瘤细胞对化疗药物的敏感性.
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腹腔液中巨噬细胞产生血管内皮细胞生长因子及其受体的表达
目的:探讨腹腔环境在子宫内膜异位症发病机制中的作用,以及腹腔液血管内皮细胞生长因子(VEGF)的来源和调节.方法:将14例子宫内膜异位症患者和10例正常妇女腹腔液中的巨噬细胞体外培养,并在培养的正常妇女腹腔液巨噬细胞中加入17-β雌二醇、孕酮和脂多糖(LPS)共培养.用ELISA法检测培养的巨噬细胞上清液中VEGF的水平.同时将二者无血清培养的上清液,加入到内皮细胞中培养,用MTT比色法检测其对内皮细胞增殖活性的影响.用免疫组化法检测两者的巨噬细胞表达受体flt-1和flt-4 的水平. 结果:子宫内膜异位症患者的巨噬细胞培养上清液中,VEGF的浓度明显高于正常对照组(P<0.05),且无周期性变化(P>0.05).子宫内膜异位症患者的巨噬细胞无血清培养上清液,在体外能显著提高内皮细胞的增殖活性(P<0.05).雌激素和孕激素能显著增加体外巨噬细胞分泌VEGF的水平(P<0.05),与LPS组相比较差异显著(P<0.05),即激素的调节作用大于LPS的作用.但雌激素和孕激素调节巨噬细胞分泌VEGF的程度无明显差别(P>0.05).LPS激活的巨噬细胞能增加雌激素、孕激素对巨噬细胞分泌VEGF的调节作用(P<0.05).巨噬细胞能表达受体flt-1和flt-4,无周期性变化(P>0.05).结论:子宫内膜异位症患者的腹腔液中的巨噬细胞可分泌VEGF,改变腹腔液的环境,可促使内皮细胞增殖,促进子宫内膜异位症的血管形成.
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炎症反应在冠心病患者中的作用及临床意义
目的:探讨炎症反应与冠心病(CHD)之间的关系.方法:101例CHD患者分为3组,即稳定型心绞痛(SAP)组(19例)、不稳定型心绞痛(UAP)组(33例)和急性心肌梗死(AMI)组(49例).分别采用免疫浊度法及血细胞计数仪,检测外周血中的C-反应性蛋白(CRP)水平及白细胞(WBC)总数.20例AMI死亡患者的心肌组织切片进行病理学检查.结果:AMI和UAP组血中CRP的水平和WBC总数明显高于对照组(P<0.01).病理学检查发现,AMI患者心肌中有大量白细胞浸润.结论:CHD发生、发展有炎症反应的参与,检测血中的CRP和WBC可作为监测病情、预测冠心病危险性的常规指标之一.
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BLCAP蛋白表达与骨肉瘤恶性程度的关系
目的:了解BLCAP蛋白表达与骨肉瘤恶性程度的关系.方法:采用SABC法,对临床收集骨肉瘤病理标本进行检测,观察BLCAP蛋白表达情况,结合临床随访结果,判断BLCAP蛋白表达与骨肉瘤恶性程度之间的关系.结果:BLCAP蛋白在原发骨肉瘤组织中表达阳性率约为65.6%,而在复发性骨肉瘤组织中表达阳性率只有25.0%.结论:BLCAP蛋白表达水平与骨肉瘤恶性程度之间有一定的相关性,对临床判断骨肉瘤的预后有一定参考价值.
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抗人精浆蛋白抗体Fab片段在大肠杆菌中表达及活性鉴定
目的:构建编码抗人精浆蛋白抗体Fab基因的表达载体,并在大肠杆菌中进行表达.方法:从克隆载体pUC19-К和pBluescript KS(M13-)-Fd中,酶切获得抗人精浆蛋白单克隆抗体(mAb)Fd基因和К链基因.然后将Fd和К链基因重组到Fab表达载体pComb3中,构建抗人精浆蛋白Fab基因的重组表达载体pComb3-Fab,并在XL1-Blue菌中表达.结果:经重组表达载体转化的XL1-Blue菌株可表达Fab基因.Western blot和免疫细胞化学分析表明,表达产物Fab具有特异性结合精浆蛋白的活性.结论:抗人精浆蛋白Fab基因成功地获得,为进一步将其与抗肿瘤药物偶联用于前列腺癌的导向治疗创造了条件.表达为构建其它基因工程抗体提供了基础.
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GAP-43原核表达载体的构建、表达及抗GAP-43单克隆抗体的制备
目的:原核表达神经生长相关蛋白-43(GAP-43),并制备抗GAP-43的单克隆抗体(mAb).方法:从含有GAP-43 cDNA的质粒中,用PCR扩增GAP-43 cDNA的全长编码序列,克隆入表达载体pGEX-4T-1中,构建GAP-43的高表达工程菌,并以IPTG诱导表达目的蛋白.通过亲和层析法纯化表达的GST-GAP-43融合蛋白,并以此为抗原制备mAb.结果:酶切鉴定证明,获得含有目的基因片段的重组质粒.表达的GST-GAP-43融合蛋白以可溶性的形式存在.ELISA检测表明,获得的抗GAP-43 mAb效价为1∶108,其IgG的亚类为IgG2a,亚型问型. 用Western blot 检测大鼠脑匀浆蛋白,在相对分子质量(Mr)为50 000处有一条特异性带.用此mAb进行荧光免疫法检测表明,在致敏豚鼠的肺切片中,有GAP-43阳性的神经纤维.结论:所获抗GAP-43 mAb的特异性强、效价高,对进一步研究GAP-43在神经系统中的作用提供了有用的试剂.
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BSA-Y-DOTA免疫噬菌体Fab抗体库的构建及鉴定
目的:构建钇-十二烷四乙酸(Y-DOTA)免疫噬菌体Fab抗体库.方法:将牛血清白蛋白(BSA)与DOTA交联,并与金属Y鳌合制备成BSA-Y-DOTA,用其免疫BALB/c小鼠.检测抗血清的滴度后,分离抗体阳性的小鼠脾淋巴细胞,提取总RNA.利用RT-PCR扩增全套重链Fd和轻链基因,依次插入经改造的噬菌体载体pComb3M的相应酶切位点,构建成Fab噬菌体抗体库.用酶切、序列测定及ELISA等方法,对重组率、多样性及Fab的展示情况进行鉴定.结果:成功得制备了BSA-Y-DOTA交联物,并获得较好的免疫效果.免疫小鼠的全套重链Fd片段和轻链均得到正确扩增;d片断和轻链基因均插入到载体pComb3M中;ab抗体库的库容量达8×107;重组率约为90%,且具有良好的抗体基因多样性.另外,Fab片段也被展示于噬菌体表面.结论:成功地构建了半抗原Y-DOTA的Fab噬菌体抗体库,为筛选Y-DOTA特异性抗体奠定了基础.
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兔抗Syk抗体制备和在乳腺癌诊断中的应用
目的:制备兔抗小鼠脾酪氨酸激酶(Syk)抗体,分析其在乳腺癌诊断中的价值.方法:应用重组小鼠Syk蛋白,常规免疫雄性家兔制备抗Syk抗体.用免疫印迹法检测Syk抗体的纯度和特异性.应用免疫组化法,检测乳腺组织中Syk蛋白的表达.结果:用重组小鼠Syk蛋白免疫家兔6 wk后,静脉血中抗Syk抗体效价为1∶6 400(A450=1.03).将Syk经SDS-PAGE分离,可见1条相对分子质量(Mr)为72 000的蛋白条带,与理论值相符.用抗Syk血清做免疫印迹证实,在Mr为72 000处有1条明显的带,证明是抗Syk特异性抗体.乳腺组织切片经抗Syk抗体免疫组化染色,在正常乳腺组织细胞胞浆中可见棕黄色颗粒,而浸润性乳腺导管癌组织的细胞浆不着色.结论:制备了高效价、特异性的兔抗Syk抗体.用该抗体检测证实,Syk在正常乳腺组织细胞中呈高表达,在乳腺癌组织细胞中表达缺失. 有可能用于乳腺癌的临床诊断.
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抗戊型肝炎病毒噬菌体抗体库的构建与筛选
目的:构建人抗戊型肝炎病毒 (HEV) 噬菌体抗体库,筛选人源中和性抗HEV的单克隆抗体(mAb) .方法:取抗HEV抗体阳性的6例HE患者静脉血,分离淋巴细胞,提取细胞总RNA后逆转录.用一组人IgG Fab基因特异性引物,分别扩增IgG κ0轻链与重链Fd 段基因.将κ轻链与Fd段基因先后克隆入噬菌体载体pComb3的相应位点,经电穿孔法转化大肠杆菌XL1-Blue,再以辅助噬菌体VCSM13超感染,构建人抗HEV噬菌体抗体库.采用独特的5轮筛选法(逐渐降低抗原包被量,严格洗脱条件),以固相化的4种含中和抗原表位的HEV 代表株ORF2重组混合抗原,筛选人噬菌体抗体库,并以 ELISA鉴定噬菌体抗体.结果:经数次电转化构建了容量为1.9×107重组率为80%的κ轻链基因库;容量为1.8×107重组率为20%的Fab基因库.以含中和抗原表位的HEV代表株ORF2重组混合抗原特异淘筛5次,出现特异富集.ELISA鉴定第5轮筛选产物,得到4株与HEV ORF2重组混合抗原具有较高亲和力的Fab噬菌体抗体,可能为中和抗体.结论:成功地构建了人抗HEV噬菌体抗体库,并获得人源抗HEV特异性噬菌体抗体.
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双特异性IgG的研究进展
传统的免疫球蛋白只能结合单一特异性的抗原分子,而双特异性抗体的两个抗原结合位点具有不同的特异性,能够结合不同的抗原分子.双特异性抗体在生物医学领域特别是在肿瘤免疫治疗方面已取得了较大成就.鉴于用传统的方法很难大量制备符合临床要求的双特异性抗体,近年来,双特异性抗体片断制备技术进展很快.然而,在双特异性抗体的临床应用中,许多需要其具备完整的IgG形式.因为这种形式含有包括CH2区域和CH3区域的Fc片段,可以提供较长的血浆半寿期及引发效应功能.因此,随着高效制备双特异性IgG(BsIgG)新技术的日臻成熟,BsIgG的应用研究将会进一步深入.
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B7家族新成员PD-L1、PD-L2的研究进展
"协同刺激信号"是1970年由Bretscher和Cohn在T细胞活化双信号模型的基础上提出的[1],即除了通过APC递呈MHC处理过的抗原给抗原特异性T细胞提供第1信号外,还需协同刺激分子作为辅助信号的协同作用,达到生理活化阈值后才能使T细胞产生正常的免疫应答,从而在理论上更好地解释了免疫系统对自身和非自身抗原不同识别的调节机制.如果缺少共刺激分子的第2信号,将会导致调节性 T细胞的无反应性或特异性免疫耐受[2].
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地龙提取物对小鼠腹腔MΦ和脾细胞NO及TNF-α产生的影响
目的:探讨地龙提取物(AL)对小鼠腹腔MΦ和脾细胞分泌NO和TNF-α的影响.方法:将不同剂量的AL与小鼠腹腔MΦ或脾细胞孵育24 h,收集上清液分别采用重氮化反应和MTT比色法,检测NO和TNF-α的水平.结果:0.1 g/L的AL组与正常对照相比较,可明显提高MΦ和脾细胞分泌NO的水平,并可以拮抗地塞米松(Dex)对MΦ和脾细胞分泌NO的抑制作用.1×10-4,1×10-3 g /L的AL组可促进MΦ和脾细胞分泌TNF-α,并可拮抗Dex的抑制作用.结论:AL可以激活ΜΦ和脾细胞,使其分泌NO和TNF-α的水平增加,并可拮抗Dex对ΜΦ和脾细胞的抑制作用.
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碘化钠对人甲状腺细胞HLA-DR抗原表达及其超微结构的影响
碘是人体必需的微量元素之一,是机体合成甲状腺激素T3、T4的主要原料,而且又是重要的甲状腺功能调节因子,在自身免疫性甲状腺疾病(autoimmune thyroid disease,AITD)的发病机制中起着非常重要的作用,但其具体的发病机制尚未阐明.
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反义CD40RNA对EB病毒转化的B细胞CD40分子表达和增殖能力的影响
目的:探讨瞬时表达的反义CD40 RNA,对EB病毒转化的健康人B细胞膜表面CD40分子表达和增殖能力的影响. 方法:应用T-A克隆技术和亚克隆技术,构建人反义CD40 RNA的真核表达载体pcDNA3/CD40,并以其转染本室建立的EB病毒转化的健康人B细胞.应用流式细胞仪(FACS),检测B细胞膜上CD40分子表达的变化.应用MTT比色法检测反义CD40 RNA对B细胞增殖能力的影响.结果:与转染空载体pcDNA3组相比,转染pcDNA3/CD40细胞上CD40分子的表达降低(P<0.01),其增殖能力明显降低(P<0.01).结论:反义CD40 RNA技术,可作为有效的免疫调控手段.CD40基因本身在细胞的生长代谢中也起着重要作用.
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胰岛素对滋养层细胞凋亡的调节作用及机制
目的:探讨胰岛素对培养的滋养细胞凋亡的影响及可能的机制. 方法:将培养的妊娠早期滋养层细胞,分为正常对照组(细胞+培养液)、H2O2组(细胞+培养液+H2O2)和胰岛素+H2O2组(细胞+H2O2+胰岛素).采用透射电镜观察及流式细胞术,观察H2O2诱导的细胞凋亡及胰岛素对H2O2诱导的细胞凋亡的抑制作用.并检测胰岛素对滋养细胞caspase-3的活性及Bcl-2蛋白表达的影响.结果:H2O2可诱导培养的滋养细胞凋亡,透射电镜下可见特征性的细胞核改变.胰岛素可显著抑制H2O2诱导的细胞凋亡,流式细胞仪检测其凋亡率较H2O2组显著下降(P<0.01).H2O2组滋养细胞中caspase-3的活性较对照组显著增高(P<0.01),而Bcl-2蛋白的表达则较对照组显著下降(P<0.01).结论:胰岛素可明显抑制H2O2诱导的滋养细胞凋亡,其机制可能与降低caspase-3的活性和促进Bcl-2蛋白的表达有关.
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胶质细胞源性神经营养因子体外对脊髓运动神经元的作用
目的:观察不同浓度的胶质细胞源性神经营养因子(GDNF),对大鼠胚胎脊髓运动神经元生长活性的作用.方法:取大鼠胚胎脊髓腹侧组织体外分离,进行原代细胞培养,应用抗神经微丝单克隆抗体(mAb) SMI32进行运动神经元的免疫细胞化学染色,从细胞形态学及应用MTT比色法,研究GDNF对大鼠脊髓运动神经元的影响.结果:GDNF能明显促进体外培养的大鼠脊髓运动神经元存活及突起的生长(P<0.05),且具有剂量依赖的趋势.结论:不同浓度的GDNF对体外培养的大鼠胚胎脊髓运动神经元,有不同程度的促生长作用.
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小鼠淋巴细胞体外抗弓形虫作用的实验研究
目的:了解小鼠淋巴细胞体外抗御弓形虫速殖子的效果.方法:采用大鼠脾细胞培养技术,以乙酰螺旋霉素作为阳性对照,观察淋巴细胞本身以及加入扁桃酸(MA)后,对虫体侵入淋巴细胞及在淋巴细胞内增殖的影响.结果:与其他体细胞相比较,淋巴细胞在受到弓形虫侵害时,仍可抑制和杀灭弓形虫.当存在免疫作用的情况下,安全剂量的MA抑制弓形虫侵入的作用不显著,但抑制细胞内弓形虫增殖的作用显著.结论:以细胞介导的免疫作用是宿主抗弓形虫感染的重要因素,因此,应注重提高机体的细胞免疫,同时加用药物,以增强机体抗虫的效果.
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腺苷和抗IgE抗体对哮喘患者BALF中肥大细胞分泌组胺的影响
目的:研究支气管哮喘(哮喘)患者支气管肺泡灌洗液(BALF)中肥大细胞的功能特性.方法:29例轻度哮喘患者BALF中的细胞经冲洗后,加入含抗IgE抗体、腺苷、缓冲液或腺苷+抗IgE抗体的LP4试管中进行激发试验.检测BALF肥大细胞中的组胺释放量.结果:腺苷浓度达100 μmol/L时,仍无明显刺激组胺释放的作用,仅在浓度高达1 000 μmol/L时,方可诱导哮喘患者BALF中肥大细胞释放约17%的组胺.抗IgE抗体的浓度大于1×10-4 g/L时对哮喘患者BALF中肥大细胞的释放组胺有明显的促进作用;仅3×10-5 g/L的抗IgE抗体与腺苷联合应用的实测值,明显高于对应的单独作用组的相加值.结论:哮喘患者BALF中的肥大细胞对腺苷的刺激反应较差,但对抗IgE抗体刺激的反应性明显增强.仅低浓度的抗IgE抗体和腺苷具有协同作用.
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人重组LIGHT-Fc分子的真核表达及其抗肿瘤活性研究
目的:构建人LIGHT-Fc基因的真核表达质粒,并表达获得有较高生物学活性的纯化人LIGHT-Fc融合蛋白.方法:从cDNA文库中PCR扩增LIGHT全长编码基因,并导入克隆载体.测序证实后,继续用PCR扩增其膜外区cDNA,用重叠延伸技术(SOE)引入CD137信号肽基因.将SOE产物与hIgG1Fc基因一起装入真核表达载体pcDNA3中,瞬时转染293T细胞,用夹心ELISA检测其表达情况,经蛋白A亲和纯化,用SDS-PAGE检测其纯度与Mr,并以肿瘤细胞为靶细胞,检测其生物学活性.结果:测序证实构建的LIGHT与LIGHT-Fc cDNA阅读框完整,连接部位序列正确;ELISA和SDS-PAGE证实LIGHT-Fc融合蛋白的表达与纯度;MTT证明人LIGHT-Fc蛋白对一些肿瘤细胞系具有生长抑制作用.结论:获得了有抗肿瘤活性的纯化hLIGHT-Fc融合蛋白,为探讨LIGHT在免疫自稳调节中的地位、结合相应受体后的动力学与信号转导机制,以及探索LIGHT的其他生物学功能奠定了坚实的实验基础.
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抗蓖麻毒素单克隆抗体的制备及应用
蓖麻毒素(Ricin)是一种毒素蛋白,由A、B两条多肽链组成,通过二硫键结合,毒素进入人体后,B链结合到细胞表面,A链内转化到细胞浆,使核糖体失活,从而抑制蛋白质的合成,造成人体中毒死亡,对成人的平均致死剂量为1.5 μg[1].
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宫颈癌中HPV16变异的CTSE与HPV16物理状态关系的分析
宫颈癌是常见的女性生殖道恶性肿瘤,高危型人乳头瘤病毒16型(Human papillomavirus 16,HPV16)感染与其密切相关.该病毒的长控制区(long control region,LCR)内有细胞型特异性增强子(cell-type-specific enhancer,CTSE),是LCR的重要组成部分,参与诱导启动子P97的活性,从而调控转化基因E6/E7转录的水平.本研究旨在检测HPV16 CTSE变异株在宿主细胞内的物理状态和CTSE变异的关系,探讨两者在宫颈癌发生、发展中的地位和作用,为深入揭示HPV的致癌机制奠定基础.
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荧光定量聚合酶链反应检测血清中HBV-DNA
目的:研究荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测HBV-DNA对辨别病毒复制的临床意义.方法:采用FQ-PCR和ELISA方法,检测79例患者血清HBV-DNA拷贝数和免疫学血清指标.结果:26例HBsAg、HBeAg、抗-HBc均阳性的标本,HBV-DNA也全部阳性,平均拷贝数为2.7×105/mL.8例HBsAg、HBeAg阳性的标本,HBV-DNA也全部阳性,平均拷贝数为5.2×104/mL.21例HBsAg、抗-HBe、抗-HBc均阳性的标本HBV-DNA阳性率为66.7%,平均拷贝数为3.1×104/mL.9例HBsAg阳性的标本HBV-DNA阳性率为11%.平均拷贝数为1.4×103/mL.结论:荧光定量聚合酶链反应检测HBV-DNA可以更加准确地判断HBV的感染和复制情况.
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多发性肌炎/皮肌炎外周血单个核细胞HLA-DR抗原的表达
有关多发性肌炎(PM)/皮肌炎(DM)外周血淋巴细胞亚群的研究仅见早期报道,且尚无统一结论.为探讨PM/DM外周血单个核细胞(PBMC)HLA-DR的表达及其意义,我们应用双荧光抗体标记、流式细胞仪(FACS)进行了检测.
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广东地区严重急性呼吸综合征(SARS)患者血清的IFA检测
目的:证实新分离出的冠状病毒与SARS患者的关糸.方法:应用IFA诊断试剂做免疫荧光染色,检测2003-02-04～04-13期间,广东地区3所医院临床诊断为SARS的72例患者血清特异性抗体,以及直接参加救治SARS患者但末发生感染的109名医护人员的血清标本,并以疾病流行期间70例健康体检者作为正常对照组.结果:72例SARS患者中,62例血清特异性IgG呈阳性;而109例密切接触但末发生感染的医护人员及70例SARS流行期间健康体检者,血清特异性IgG和IgM均呈阴性.结论:SARS冠状病毒是引发广东地区SARS的病原体.
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在鸡痘病毒中共表达HIV-1 gp120与IL-2基因
外膜蛋白gp120是HIV-1主要结构蛋白之一,它的V3区存在着中和抗体决定簇、CTL决定簇,以及对巨噬细胞和脑组织纤维特异性识别的区,与HIV-1可诱导中和抗体应答、特异性细胞毒反应及分子致病机制密切相关[1,2].
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美罗华在非何杰金淋巴瘤治疗方面的新用法及疗效观察
目的:探讨131I标记的美罗华用于CD20表达阳性的晚期难治非何杰金淋巴瘤(NHL)患者治疗的疗效.方法:15例晚期NHL患者,年龄46～68岁,以剂量为50～100 Bq的131I作为标记物标记100 mg的Rituxan,按剂量的1/3直接注射于局部病灶,2/3静脉滴注.每2～3个月1次,2～3次为1疗程.结果:完全缓解(CR)者5例,部分缓解(PR)者7例,病情稳定(SD)者2例,病情进展(PD)者1例,总有效率(ORR)80%.定期检查患者血清HAMA,未发现阳性者.结论:131I标记的美罗华是NHL极有前景的治疗方法.
| 年 | 期数 |
| 2018 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2017 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2016 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2015 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2014 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2013 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2012 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2011 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2010 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2009 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2008 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2007 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2006 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2005 | 01 02 03 04 05 06 z1 |
| 2004 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2003 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2002 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2001 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2000 | 01 02 03 04 05 06 |
| 1999 | 01 02 |
| 1995 | 01 02 03 |
| 1994 | 01 02 |
| 1993 | 01 02 03 04 |
| 1992 | 01 02 03 04 |
| 1991 | 01 02 03 04 |
| 1990 | 01 02 |
| 1989 | 01 02 03 04 |
