细胞与分子免疫学杂志
Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology 세포여분자면역학잡지
- 主管单位： 中国免疫学会；第四军医大学
- 主办单位： 陕西省免疫学会,中国免疫学会
- 影响因子： 0.81
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 1007-8738
- 国内刊号： 61-1304/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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兔外周血两种内皮祖细胞的分离培养和鉴定
目的:研究新西兰大白兔外周血两种内皮祖细胞(EPC和EOC)的分离培养和鉴定.方法:由兔耳中央动脉采集外周血, 以密度梯度离心法分离单个核细胞(MNC), 置于EGM-2培养基中培养.用DiI标记的乙酰化低密度脂蛋白(DiI-acLDL)摄取试验和FITC标记的荆豆凝集素(FITC-UEA-1)结合试验, 检测flk-1表达的免疫荧光法和检测CD34、Ⅷ因子表达的免疫组化染色法, 以及体外血管形成试验对EPC/EOC进行鉴定.结果:从新西兰大白兔外周血MNC中可成功地培养出EPC和EOC.培养第7天的EPC和第16天的EOC均能吞噬ac-LDL 并与凝集素UEA-1相结合, 同时均可表达CD34、 flk-1和Ⅷ因子相关抗原.EOC在matrigel凝胶上可形成血管腔样的结构.结论:用密度梯度离心法从兔外周血中分离的MNC在一定的培养条件下, 能分化成为EPC和EOC, 为后续的实验研究提供了细胞来源.
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携带pcDNA3s与EGFPC3质粒的重组减毒沙门氏菌的免疫性与EGFP的表达
目的:研究HBsAg DNA重组减毒鼠伤寒沙门氏菌的免疫性与增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因EGFPC3在小鼠体内的表达.方法:将质粒pcDNA3s与pEGFPC3分别电转化减毒鼠伤寒沙门氏菌SL8786, 构建重组减毒鼠伤寒沙门氏菌SL8786/EGFPC3与SL8786/pcDNA3s.利用时间分辨荧光免疫分析技术(TRFIA)检测小鼠的血清抗体的含量, 以及重组菌引起的T细胞增殖和细胞毒性T淋巴细胞(CTL)应答.用荧光显微镜观察EGFPC3表达.结果:口服SL8786/pcDNA3s免疫小鼠后, 可诱导产生较强的特异性CTL应答.口服免疫小鼠后第11周抗-HBs含量高.用流式细胞术检测贴壁培养的2只小鼠的脾细胞中SL8786/EGFPC3阳性率分别为19.20%和17.36%, 而SL8786/pcDNA3口服的2只小鼠脾细胞中的EGFP阳性率分别仅为1.95%和1.63%.给小鼠口服SL8786/EGFPC3 3周后, 在小鼠肝脏、脾脏、肾脏、胸腺、十二指肠及肌肉等组织中, 均有EGFPC3的表达.结论:口服SL8786/pcDNA3s在小鼠体内诱导了特异性细胞和体液免疫应答.携带EGFPC3的重组鼠伤寒沙门氏菌SL8786/EGFPC3在小鼠的部分组织中产生绿色荧光表达, 该重组菌的构建为减毒沙门氏菌作为活载体基因工程疫苗的研制提供了一个优良模型.
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美法仑治愈荷瘤小鼠的过程与TNFα的关系
目的:探讨单一剂量的美法仑治愈荷瘤野生型C57BL/6小鼠的过程与肿瘤坏死因子α(TNFα)的关系. 方法:以3种遗传背景相同、肿瘤坏死因子受体1(TNFR1)基因型不同的TNFR1+/+、 TNFR1+/-和TNFR1-/-C57BL/6小鼠为实验动物, 皮下接种数量相同的小鼠淋巴瘤EL4细胞.接种瘤细胞后12 d, 给基因型不同的各组荷瘤小鼠腹腔内单次注射7.5 mg/kg的美法仑.以荷瘤野生型C57BL/6小鼠(TNFR1+/+)为对照, 观察美法仑对荷瘤TNFR1+/-C57BL/6小鼠和荷瘤TNFR1-/-C57BL/6小鼠的治疗效应.结果:在美法仑(7.5 mg/kg)治疗后的1周内, 基因型不同的各组荷瘤小鼠肿瘤消退的速度基本相同.在随后的2月内, 荷瘤TNFR1+/+和TNFR1+/-C57BL/6小鼠的肿瘤结节逐渐消退、肿瘤治愈;而多数荷瘤TNFR1-/-C57BL/6小鼠的肿瘤结节缩小后又再次出现并逐渐长大、肿瘤复发.结论:TNFα与美法仑治愈肿瘤的过程密切相关, 其中美法仑的抗肿瘤作用与荷瘤小鼠TNFR1的表达无关, 但在美法仑治疗后, 机体预防或避免肿瘤复发方面需要TNFR1在机体细胞的表达, 而不是在肿瘤细胞的表达.
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pEGFP-C3 -insig2融合基因真核表达质粒的构建、表达及其对下游基因的影响
目的:构建insig 2基因的真核表达质粒, 转染3T3-L1细胞并观察对下游脂肪酸结合蛋白(AP2)mRNA、脂联素mRNA表达的影响.方法:采用RT-PCR法获取小鼠全长insig 2基因, 并克隆入真核表达载体pEGFP-C3中.酶切、测序鉴定后, 经脂质体转染入3T3-L1细胞, 通过荧光显微镜观察及RT-PCR检测其在3T3-L1细胞中的表达及下游基因的变化.结果:成功地构建了pEGFP-C3-insig 2融合基因的真核表达载体, 荧光显微镜观察到pEGFP-C3-insig 2融合蛋白在转染的3T3-L1细胞胞质中的表达, insig 2基因的转录明显上调.转染后24 h、 72 h较0 h AP 2 mRNA和脂联素mRNA的转录水平明显下调.结论:构建了insig 2基因的真核表达质粒, 在转染的3T3-L1细胞中insig 2的过表达可能影响该细胞的脂肪代谢.
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脂肪酸结合蛋白在人乳腺癌组织的表达及意义
目的:研究脂肪酸结合蛋白(FABP)mRNA及蛋白质在浸润性乳腺导管癌和乳腺纤维腺瘤的表达及分布, 探寻人浸润性乳腺导管癌新的分子标志, 为乳腺癌的靶向治疗提供理论依据.方法:用半定量逆转录聚合酶链反应、免疫组织化学染色和Western blot等方法检测脂肪细胞型FABP、心型或骨骼肌型FABP、脑型FABP、表皮或牛皮癣型FABP、肝型FABP、小肠型FABP和胃型FABP mRNA及蛋白质在35例浸润性乳腺导管癌, 16例乳腺纤维腺瘤组织中的表达变化.结果:RT-PCR 结果显示A-、 B-、 I-和G-FABPs mRNA在两种组织的表达差异无统计学意义(P＞0.05);但E-、 H-和L-FABP mRNA在浸润性导管癌的表达较纤维腺瘤显著升高(P＜0.05).免疫组织化学染色显示, E-、 L-和H-FABP在浸润性导管癌的阳性细胞百分数较纤维腺瘤明显上调(P＜0.05), 分布范围更广.Western blot分析结果进一步证实, E-、 L-和H-FABP蛋白质在浸润性导管癌表达明显上调(P＜0.05).结论:E-、 L-和H-FABP与浸润性乳腺导管癌的发生发展有关, 对进一步探寻浸润性乳腺导管癌的分子标志及治疗途径具有理论意义.
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人IL-12表达质粒联合含信号肽Mtb8.4基因疫苗对小鼠结核杆菌感染的免疫保护效果
目的:研究结核分枝杆菌含信号肽Mtb8.4(MS)基因疫苗与人白细胞介素12(hIL-12)联合免疫小鼠后, 诱导的细胞免疫应答及对小鼠结核杆菌感染的免疫保护效果.方法:将40只C57BL/6N小鼠随机分为联合免疫组(MS基因疫苗+hIL-12组)、 MS基因疫苗组、卡介苗(BCG)组、空载体组和PBS组.将基因疫苗、空载体和PBS, 经肌内注射免疫各组小鼠, 每隔3周免疫1次, 共免疫3次;BCG组经尾部皮下注射1×106 CFU BCG免疫1次.采用ELISA法检测小鼠脾细胞培养上清中细胞因子的水平;用乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测免疫小鼠细胞毒性T细胞的杀伤活性.用结核杆菌强毒株H37Rv静脉攻击小鼠后, 计数肺和脾组织中结核杆菌的菌落数.对小鼠的部分肺和脾组织作病理切片, 经HE染色观察组织病变的程度, 经ZN染色检查抗酸杆菌, 观察该疫苗对小鼠结核杆菌感染的免疫保护效果.结果:联合免疫组能诱导较强的抗原特异性Th1型细胞免疫应答, 免疫小鼠脾细胞培养上清液中IFN-γ和IL-2的水平, 与BCG组相当, 显著高于MS基因疫苗组, IL- 4分泌减少, 特异性CTL的杀伤活性增强, 对小鼠结核杆菌感染有较好的免疫保护效果.表现为小鼠肺和脾组织中结核杆菌的菌落数显著减少, 组织病变明显减轻, 其效果与卡介苗(BCG)组相当, 但优于MS基因疫苗组.结论:以hIL-12表达质粒与MS基因疫苗联合免疫后, 能显著增强MS基因疫苗对小鼠结核杆菌感染的免疫保护效果.
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TGFβ1及其受体在大鼠整胚及胎肺发育过程中的表达
目的:观察TGFβ1及TβRⅠ、 TβRⅡ在大鼠整胚及胎肺发育中的表达, 探讨它们与大鼠整胚及胎肺发育间的相互关系和作用机制.方法:半定量RT-PCR分析3种因子在13 ～17 d 全胚中的变化情况;免疫组化法检测3种因子在15 ～17 d 胎肺中的表达及该组织发育结构特点.结果:半定量RT-PCR示, 3种因子在发育13 ～15 d表达呈递增趋势, 16 ～17 d 出现下降.免疫组化结果显示, TGFβ1主要位于发育中支气管上皮细胞内, TβRⅠ、 TβRⅡ位于原始肺泡组织.结论:TGFβ1及TβRⅠ、 TβRⅡ在大鼠整胚及胎肺发育过程中起着重要的调控作用, 尤其是对组织器官形态的发生.
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γ射线对C57BL/6J和C3H/HeN小鼠肺成纤维细胞生物学行为影响的比较研究
目的:比较C57BL/6J和C3H/HeN两种小鼠肺成纤维细胞以不同剂量的60Coγ射线照射后生物学行为的异同.方法:原代分离培养C57BL/6J和C3H/HeN两种小鼠肺成纤维细胞(LF), 应用2、 4、 6和8 Gy的60Coγ射线照射后, 通过MTT比色法、流式细胞术、 AgNOR染色和免疫荧光细胞化学染色法,检测照射后两种LF的增殖活力、细胞周期以及a-平滑肌肌动蛋白(a-SMA)、基质金属蛋白酶-1(MMP-1)和金属蛋白酶组织抑制剂-1(TIMP-1)表达的变化.结果:以2 ～8 Gy照射后, C57BL/6J和C3H/HeN小鼠的LF增殖活力与正常对照组相比较未见明显增强.照射后, C57BL/6J小鼠的LF非整倍体增多, a-SMA高表达, MMP-1的表达呈弱阳性, TIMP-1的表达呈增强趋势.照射后, C3H/HeN小鼠的LF出现G2-M期阻滞, a-SMA的表达减弱至消失, MMP-1和TIMP-1的表达均呈增强趋势.结论:以60Coγ射线照射后, C57BL/6J和C3H/HeN两种小鼠的LF生物学行为不同, C57BL/6J小鼠的LF呈"活化"状态, 为该种小鼠易发生肺纤维化的细胞学基础提供了实验依据.
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pDC515-nr2B重组质粒的构建及其免疫效应
目的:构建pDC515-nr2B重组质粒, 并研究其在体外表达及体内的免疫效应.方法:根据本研究前期从噬菌体随机12肽库中筛选出的NR2B(N-甲基-D-天门冬氨酸受体2B亚基)表位DNA序列, 合成两条部分互补的DNA单链, 用PCR法合成NR2B表位DNA片段.将NR2B表位编码基因克隆入真核高效表达载体pDC515中, 构建pDC515-nr2B重组质粒, 经EcoRⅠ和SalⅠ双酶切和DNA测序鉴定其正确性.在293fectinTM 介导下将pDC515-nr2B体外转染293细胞后, 经RT-PCR及免疫细胞化学染色法鉴定目的基因的表达.将10只SD大鼠随机分为实验组和对照组, 实验组用100 μg的 pDC515-nr 2B免疫, 0 d及7 d各肌注1次, 对照组于相同时间注射相同剂量的空质粒pDC515.免疫后14 d, 检测大鼠血清中抗NR2B抗体的水平.结果:正确构建了pDC515-nr2B重组质粒.以其转染293细胞后, 在转染的293细胞中用RT-PCR可检测到NR2B的mRNA, 用免疫细胞化学染色法检测其胞质染色呈阳性.实验组大鼠的血清中可检测到抗NR2B抗体.结论:成功地构建pDC515-nr2B重组质粒并可诱导SD大鼠产生相应的抗体.
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STAT3、 Bcl-xL、 Bax和CyclinD1在非小细胞肺癌中的表达
目的:分析STAT3、 Bcl-xL、 Bax和CyclinD1在非小细胞肺癌和正常肺组织中的表达及关系, 以进一步探讨其与非小细胞肺癌发生发展的关系.方法:利用SABC免疫组织化学技术检测84例非小细胞肺癌组织及30例正常肺组织中STAT3、 Bcl-xL、 Bax和CyclinD1的表达.结果:(1)STAT3、 Bcl-xL和CyclinD1在非小细胞肺癌组织中的表达水平明显高于正常肺组织(P＜0.05), Bax在非小细胞肺癌组织有一定表达, 但与其在正常肺组织的表达比较无统计学意义(P＞0.05);(2)STAT3、 Bcl-xL表达水平与非小细胞肺癌组织学类型有关, 在腺癌组织中的表达明显高于鳞癌, 与肿瘤大小、组织分化程度、 TNM分期及淋巴结转移无关;(3)Bax、 CyclinD1的表达水平与与组织学类型、肿瘤大小、组织分化程度、 TNM分期及淋巴结转移无关(P＞0.05).结论:STAT3、 Bcl-xL和CyclinD1可能在肺癌的发生发展中发挥重要作用, 由此可望寻找到新的非小细胞肺癌的诊断方法和治疗靶点.
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朗格汉斯细胞相关趋化因子基因在尖锐湿疣表皮中的表达
目的:了解朗格汉斯细胞(LC)相关趋化因子基因在尖锐湿疣(CA)以及正常表皮中的表达.方法:采用Affymetrix HG-U 133A2.0寡核苷酸芯片, 对3例CA表皮和3例正常表皮LC相关趋化因子基因的表达进行了检测, 并应用半定量RT-PCR验证其中部分基因的差异表达.结果:基因芯片检测到CXCL2、 CXCL8、 CXCR4、 CCL3/CCL3L1、 CCL5、 CCL20及CCL27共7个LC相关趋化因子基因在CA表皮中的表达普遍下调;半定量RT-PCR验证表明, CCL20和CXCR4基因在CA表皮中的表达显著下调.结论:LC相关趋化因子基因在CA表皮中的表达普遍下调, 这些基因表达的下调可能与CA表皮中LC数目减少和归巢障碍有关.
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脂多糖通过核因子-κB途径影响腹膜间皮细胞生长及TNF的表达
目的:研究脂多糖(LPS)是否通过核因子κB, 即IκBα、 NF-κB p65途径引起腹膜间皮细胞(peritoneal mesothelial cells, PMC)凋亡、抑制细胞生长和诱导肿瘤坏死因子(TNF)的表达.方法:胰蛋白酶-EDTA消化法用于PMC的原代培养、传代, 经鉴定分组:①不同浓度LPS组(正常对照组、 0.1 mg/L、 1.0 mg/L、 10 mg/L、 50 mg/L、 100 mg/L);②不同时间组:LPS作用于PMC 0、 1、 3、 6、 12、 24 h.Hoechst33258染色法检测PMC的凋亡;MTT法检测PMC的生长增殖抑制情况;免疫荧光法检测p65的活性;Western blot检测IκBα的表达;用L929细胞株检测TNF的活性;RT-PCR检测TNFα mRNA的表达.结果:LPS抑制PMC生长并诱导凋亡、引起IκBα的降解、 p65的核移位;LPS诱导PMC表达TNF, 1 h TNF-α mRNA达大值、 3 h TNF-α活性达大值.结论:LPS可抑制PMC的生长及诱导凋亡;LPS诱导PMC表达TNF-α呈浓度依赖性, 在LPS作用早期TNF-α明显升高, 随后下降.这一过程中IκBα-NF-κB p65信号途径可能发挥了重要作用.
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C型CpG单链寡核苷酸对肿瘤疫苗抑瘤效果的增强作用
目的:研究C型CpG单链寡脱氧核苷酸(CpG ODN)对肿瘤疫苗抑瘤效果的增强作用.方法:利用体外淋巴细胞增生实验和病毒保护实验确定新C型CpG ODN, 采用小鼠体内抑瘤实验观察CpG ODN对肿瘤疫苗HSP65-MUC1重组蛋白抑制MUC1阳性肿瘤生长的增强作用, 并对小鼠血清中抗HSP65-MUC1抗体的类型进行了初步鉴定.结果:自行设计的CpG ODN BW005能刺激人PBMC和小鼠脾细胞增生,其刺激后的培养上清具有保护Vero E6细胞免受VSV感染的作用, 属于新型C型CpG ODN.将BW005与HSP65-MUC1联合应用于C57BL/6小鼠后, MUC1阳性肿瘤的发生明显延缓(平均44.8 d), 其终末肿瘤发生率低(33.33%);荷瘤小鼠的生存期明显延长(平均49.5 d), 其终末生存率高(66.67%).小鼠血清中抗HSP65和抗MUC1的IgG2a抗体水平增加.结论:C型CpG ODN可以增强肿瘤疫苗HSP65-MUC1的抑瘤效果, 考虑与小鼠体内Th1环境的形成有关.
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结肠癌相关抗原的制备及其临床意义
目的:从培养的结肠癌细胞LOVO中纯化结肠癌相关抗原, 探讨其在结肠癌患者血清中的表达.方法:裂解结肠癌细胞LOVO, 以抗结肠癌相关抗原单克隆抗体(mAb)4D10作为配基进行亲和层析纯化结肠癌相关抗原, SDS-PAGE电泳和Western blot进行鉴定, 并用双抗夹心ELISA法检测该相关抗原在结肠癌患者及正常人血清中的表达.结果:纯化所获与4D10特异结合的结肠癌相关抗原, 其相对分子质量(Mr)约为65 000, 该抗原由Mr约为30 000和35 000两种亚基组成.人血清检测实验表明,该抗原在结肠癌患者血清中有较高的表达, 与正常人血清相比存在显著的统计学差异(P＜0.01).结论:利用mAb 4D10进行免疫亲和层析, 从结肠癌细胞LOVO中获得纯化的肿瘤相关抗原, 该抗原有可能在临床上为结肠癌的诊断提供一定的参考价值.
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雷帕霉素对同种移植耐受模型CD4+CD25+ T细胞活性的影响
目的:研究雷帕霉素(Rapa)对同种移植耐受个体CD4+CD25+ T细胞体内负免疫调节作用的影响.方法:建立同种皮肤移植模型, 受体鼠术前预输注供体鼠脾细胞, 术后给予环孢素A(CsA)进行耐受诱导.移植后第14天提取耐受诱导模型鼠的T细胞, 经不同浓度Rapa和/或IL-2体外处理后, 混合淋巴细胞反应(MLR)确定T细胞特异增殖水平;流式细胞术(FCM)检测CD4+CD25+ T细胞比例变化;RT-PCR检测Foxp3 mRNA表达情况;ELISA检测细胞培养不同时间后上清中IL-10的变化.然后将Rapa和/或IL-2处理的T细胞过继转移给同种移植后的BALB/c-SCID鼠, 观察移植物存活状态.结果:CsA加供体脾细胞预先注射可明显延长小鼠移植皮片的存活期(P＜0.05);移植耐受状态的T细胞经Rapa和/或IL-2体外处理后CD4+CD25+ T细胞比例升高、增殖水平明显降低、 Foxp3表达量明显增加;过继转输给同种移植SCID鼠后, 其移植皮片存活时间显著延长(P＜0.05).结论:Rapa可体外扩增耐受诱导模型中CD4+CD25+ T细胞, 使CD4+CD25+ T细胞相关的Foxp3和IL-10明显升高, 过继免疫后, 小鼠同种移植物存活时间明显延长, 而低浓度IL-2可以协同Rapa的这一作用.
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肌球蛋白活化的T淋巴细胞诱导心肌自身免疫反应
目的:研究心肌肌球蛋白活化的T淋巴细胞能否介导心肌的自身免疫反应.方法:分离、提纯大鼠脾脏树突状细胞(DC)和T淋巴细胞, 分为两组在体外混合培养:活化组加入大鼠心肌肌球蛋白;未活化组不加大鼠心肌肌球蛋白.将活化组或未活化组的T淋巴细胞分别经尾静脉转输入大鼠体内.在转输后3 d、 1周和4周末处死大鼠, 观察心肌的病理改变.结果:转输活化T细胞的大鼠, 于转输后3 d即出现心肌的淋巴细胞浸润, 1周末达到高峰伴有少许心肌坏死, 4周末心肌的淋巴细胞浸润明显减轻, 各组间差异有显著性(P＜0.01).转入活化T细胞大鼠的肝、肺、肾、脑和甲状腺等组织均未见淋巴细胞浸润.转输未活化T淋巴细胞的大鼠心肌未见淋巴细胞浸润.结论:肌球蛋白活化的T淋巴细胞能够介导心肌的自身免疫反应.
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CD4+CD25high调节性T细胞在类风湿性关节炎病程中的消长及其意义
目的:研究类风湿性关节炎(RA)患者病情发展不同阶段外周血及滑液中CD4+CD25high调节性T细胞数量的差别, 及其与类风湿性关节炎活动程度的相关性, 探讨CD4+CD25high T细胞在RA发生发展中所发挥的免疫抑制和调节作用.方法:分别选取未经过缓解病情抗风湿药(DMARDs)治疗的活动性RA患者11例, 经DMARDs治疗病情缓解的RA患者12例, 和DMARDs治疗后效果不佳的RA患者9例, 以及正常对照8例, 检测他们的外周血淋巴细胞, 以流式细胞术检测CD4+CD25high调节性T细胞的百分率, 并研究CD4+CD25high T细胞百分率与抗环瓜氨酸(CCP)抗体, C反应蛋白(CRP), 血沉(ESR)及类风湿因子(RF)的相关性.对其中部分患者的血液和关节滑液同时进行分析.结果:RA未经治疗组和治疗效果不佳组CD4+CD25high T细胞的百分率(分别是5.24%和6.43%)明显低于正常对照组和治疗后病情缓解组(分别是17.17%和11.79%, P＜0.01).RA患者CD4+CD25high T细胞的百分率与抗CCP抗体(58.0 Ru/mL), ESR(38.8 mm/h)及CRP(2.73 μg/L)呈明显负相关(P＜0.05), 与类风湿因子(RF=14.4 Iu/mL)无明显的相关性(P=0.054).正常对照组的CD4+CD25high T细胞百分率与抗CCP抗体(均＜5.0 Ru/mL), ESR(4.67 mm/h), CRP(0.15 μg/L)及RF(1.37)无明显相关性(P＞0.1).RA患者关节滑液中CD4+CD25high T百分率明显低于强直性脊柱炎(ankilosing spondylitis, AS)关节积液患者(P＜0.05).结论:试验结果表明未经缓解病情治疗和治疗后效果不佳者的外周血中, CD4+CD25high调节性T细胞相对减少, 且与病情活动程度负相关, 这可能是RA发生和发展的一个重要因素.
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抗人BORIS单克隆抗体的制备及在乳腺疾病和正常乳腺组织中的分布
目的:制备抗BORIS的单克隆抗体(mAb), 并在蛋白水平上研究BORIS抗原在乳腺癌、良性乳腺病及正常乳腺组织(癌旁远端组织)上的分布特点.方法:以人BORIS重组蛋白免疫BALB/c小鼠, 应用B淋巴细胞杂交瘤技术建立分泌抗BORIS mAb的杂交瘤细胞株.用免疫组化染色法检测BORIS抗原在睾丸组织、乳腺癌、乳腺良性病和正常乳腺组织(癌旁远端组织)中的表达.结果:获得 4株稳定分泌抗BORIS mAb的杂交瘤细胞株.其中抗体编号为FMU-BORIS13( IgG1)可用于免疫组化的染色.结果显示, BORIS抗原在正常睾丸的精原细胞和精母细胞的细胞核内表达, 符合CT抗原的表达特点.组织芯片的免疫组化染色结果显示其在乳腺癌组织中呈高水平的表达, 阳性率为85% (94/110), 在良性乳腺病组织中其表达的阳性率为95%(21/22 ).另外, 在6例乳腺癌癌旁远端近似于正常的乳腺组织中也检测到BORIS抗原的表达.BORIS抗原在乳腺癌组织中的表达远高于其在良性乳腺病和正常的乳腺组织(癌旁远端组织)中的表达.结论:BORIS的高表达可能与乳腺癌的发生发展有一定的关系.
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人源抗NH-LBP Fab抗体的制备和初步鉴定
目的:构建人源抗脂多糖结合蛋白氨基端片段(NH-LBP)Fab抗体的原核表达载体, 并制备高稳定性Fab抗体.方法:用PCR方法, 从可溶性表达抗NH-LBP抗体的重组质粒pComb3H-Fab中扩增出VH链和VL链基因序列, 分别构建表达质粒pET-28a(+)-VH和pET-28a(+)-VL, 并于工程菌BL21(DE3)star中分别表达及TALON柱芯亲和纯化, 将抗体片段VH和VL共同复性, 通过二硫键形成Fab抗体, 再采用ELISA法初步鉴定其与NH-LBP的结合力.结果:扩增出VL链和VH基因片段长约为650 bp和700 bp, 经BL21star表达出相对分子质量(Mr)约为28 000和30 000的目的蛋白, 共同折叠后所获得Fab抗体与NH-LBP具有较高的结合力.结论:成功地制备抗NH-LBP Fab抗体, 为临床抗炎研究提供了条件.
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人CD112(Nectin2/PRR2)单克隆抗体的制备和鉴定
目的:表达和纯化CD112 胞膜外区重组蛋白, 制备针对CD112胞膜外区的单克隆抗体(mAb), 并且研究CD112的分布.方法:采用基因重组技术在真核系统表达CD112-Fc融合蛋白, 亲和层析法进行蛋白纯化;纯化的CD112-Fc融合蛋白免疫BALB/c小鼠, 杂交瘤技术建立分泌CD112 mAb的杂交瘤细胞株, 间接ELISA、 Western blot及FCM鉴定mAb 的特异性.用流式细胞术(FCM)检测 CD112 的细胞系分布.结果:构建了高效真核表达载体pIg3C-CD112, 表达并纯化了CD112-Fc融合蛋白, 其纯度大于 90%.以纯化重组蛋白为免疫原共制备9株分泌抗CD112 mAb的杂交瘤细胞株(命名为FMU-CD112.1 ～FMU-CD112.9), 制备腹水并纯化 mAb.FMU-CD112.1、 3、 6和8能用于Western blot, FMU-CD112.1、 4、 6和8可用于 FCM.CD112细胞分布检测显示该分子主要分布在正常上皮及内皮细胞系、巨核细胞谱系和部分T细胞系, 并高表达于上皮及内皮来源的肿瘤、胶质瘤等细胞系.结论:成功地表达纯化了CD112-Fc融合蛋白并建立了稳定分泌CD112 mAb的杂交瘤细胞株, 为CD112的功能研究打下坚实的基础.
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人核糖体蛋白S13的原核表达、纯化及多克隆抗体的制备
目的:克隆人核糖体蛋白S13(ribosomal protein S13, RPS13)cDNA全长, 构建原核表达质粒, 诱导表达、纯化RPS13蛋白并制备其多克隆抗体.方法:应用RT-PCR方法从胃癌多药耐药细胞SGC7901/VCR中扩增出RPS13的cDNA全长, 利用DNA重组技术构建重组原核表达载体pET-28a(+)-RPS13, 双酶切及测序鉴定.将重组载体转化入大肠杆菌BL21中, 筛选抗性克隆并经DNA测序证实.IPTG诱导融合蛋白的表达, 利用镍离子亲和层析柱提纯融合蛋白, 经SDS-PAGE和Western blot鉴定.用纯化的融合蛋白His-RPS13免疫BALB/c小鼠, ELISA法测定抗体效价, 饱和硫酸铵沉淀法纯化抗体, Western blot检测抗体活性.结果:RT-PCR扩增片段与预计目的基因片段大小一致;双酶切鉴定表明,重组表达载体pET-28a(+)-RPS13构建成功, DNA测序结果显示所获基因序列与GenBank中收录完全相同.IPTG诱导3 h后, 经SDS-PAGE检测显示在Mr 19 000处出现一新生条带, 与预计的融合白大小一致;利用抗His标签的抗体进行Western blot, 结果证实融合蛋白表达成功.其免疫血清经Western blot证实可特异性的识别蛋白RPS13.结论:成功地获得了RPS13的编码基因序列, 并获得了纯化的RPS13蛋白质, 为制备RPS13的单克隆抗体、进一步研究RPS13在肿瘤中的作用奠定了基础.
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抗白念珠菌芽管单克隆抗体的制备及特性鉴定
目的:制备抗白念珠菌芽管的单克隆抗体mAb03 2C1 C2, 并对其特性进行分析, 以探讨其应用于实验室检测的可行性.方法:利用杂交瘤技术制备分泌抗白念珠菌芽管胞壁外膜抗原mAb的杂交瘤细胞株, 对mAb的Ig亚类进行鉴定.用间接免疫荧光(IIF)法对mAb的抗体活性及特异性进行测定.在白念珠菌芽管形成条件下, 加入mAb, 观察其对白念珠菌芽管诱导的抑制及白念珠菌对上皮细胞、 内皮细胞黏附的抑制.复苏冻存的杂交瘤细胞株, 分析其持续分泌mAb的能力.结果:获得1株mAb03 2C1 C2, 其Ig亚类为IgG1.该mAb仅与白念珠菌芽管特异性结合, 并能显著降低白念珠菌芽管的生成率以及在芽管形成条件下对上皮细胞、 内皮细胞的黏附, 其抑制作用与该mAb的浓度呈正比.结论:制备的mAb03 2C1 C2抗体效价高, 在体外能抑制白念珠菌芽管的形成, 降低白念珠菌的侵袭力.而且其对白念珠菌芽管具有高度的特异性, 可用于白念珠菌和都柏林念珠菌的快速鉴别.
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抗白念珠菌天然抗体的检测与分析
目的:检测正常机体内是否存在抗白念珠菌天然抗体.方法:取饲养于无菌条件下的C57BL/6小鼠和SCID小鼠外周血, ELISA和流式细胞术检测血清中抗白念珠菌IgM和IgG抗体的水平.结果:ELISA结果显示, 与SCID小鼠相比, C57BL/6小鼠血清中存在一定滴度的抗白念珠菌IgM, 但没有抗白念珠菌IgG;经白念珠菌预先吸附后, 正常血清IgM与白念珠菌的结合明显减弱.流式细胞术分析显示, C57BL/6小鼠血清与白念珠菌的反应明显增强.结论:正常机体内天然存在与白念珠菌结合的以IgM型为主的天然抗体.
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病毒感染与细胞凋亡
细胞凋亡(apoptosis)是在个体发育过程中为维护机体内环境的稳定、调控机体发育、由基因编码的细胞程序性死亡过程, 是机体对外界刺激进行的主动应答, 贯穿于机体的整个生命活动过程中.
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GITR/GITRL系统在免疫调节中的作用
糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子受体(glucocorticoid-induced tumor necrosis factor receptor, GITR) 是肿瘤坏死因子受体超家族(TNFRSF)中的第18个成员, 是胸腺来源的CD4+CD25+调节性T细胞(regulatory T cell, Treg)上的一个表面分子, 其配体为GITRL.
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Neuropilin-1(NRP1)的研究进展
Neuropilin-1(NRP1)是细胞表面相对分子质量(Mr)为102 000的Ⅰ型跨膜糖蛋白, 通过杂交瘤技术在欧洲蟾蜍的神经系统内首次被发现.
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低血清培养对骨髓间充质干细胞细胞周期同步化的影响
目的:探索骨髓间充质干细胞细胞周期同步在G0/G1期的培养条件.方法:培养骨髓间充质干细胞并用CD44、 CD90、 CD71、 CD11b进行流式细胞术鉴定, 观察50、 5和100 mL/L胎牛血清培养条件下细胞周期的变化情况及对细胞凋亡的影响.结果:骨髓间充质干细胞CD44、 CD90、 CD71阳性, CD11b阴性.50 mL/L胎牛血清培养1 d和5 mL/L胎牛血清培养1 ～3 d可使G0/G1期细胞比例减少, S期和G2期细胞比例增加, 但随着时间延长, G0/G1期细胞比例明显增加, S期和G2期细胞比例减少, 细胞周期阻滞在G0/G1期, 50 mL/L胎牛血清不增加细胞凋亡比例, 5 mL/L胎牛血清在3 d内使细胞凋亡比例明显增加, 随时间延长又逐渐下降.5 mL/L胎牛血清培养5 d组G0/G1期细胞比例增加为明显, 由75.9%上升到89.4%, 凋亡细胞比例仅为0.162%.结论:5 mL/L胎牛血清培养5 d是使间充质干细胞细胞周期同步在G0/G1期的理想的培养条件.
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Ⅰ型胶原吡啶交联终肽(ICTP)在骨肿瘤鉴别诊断中的意义
目的:检测原发性恶性骨肿瘤、 骨转移性肿瘤患者血清中的Ⅰ型胶原吡啶交联终肽(ICTP)活性, 以评价ICTP在骨肿瘤诊断和鉴别诊断中的意义.方法:对2004年本院骨肿瘤科收治的40例恶性骨肿瘤、 14例骨转移性肿瘤患者, 采用酶免疫测定(EIA)方法测定ICTP活性.结果:恶性骨肿瘤组的ICTP活性为(16.33±11.82) μg/L, 与健康对照组比较有统计学差异(P＜0.01).而骨转移性肿瘤组ICTP活性为(8.97±6.08) μg/L与对照组相比无统计学意义(P＞0.05).两组骨肿瘤组间也有统计学意义(P＜0.05).结论:血清ICTP是反映骨肿瘤骨代谢的一个灵敏而简便的检测指标, 并对骨肿瘤的诊断及鉴别诊断具有一定的临床意义.
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人微小病毒B19 VP1独特区蛋白的表达及纯化
目的:利用原核表达系统表达人微小病毒B19的VP1独特区蛋白, 大量发酵培养细菌后纯化蛋白, 为制备VP1蛋白的mAb奠定基础.方法:构建重组质粒VP1-PQE30, 转化大肠杆菌M15, 测序正确后发酵培养、 IPTG诱导表达, 通过SDS-PAGE及Western blot分析表达产物, 表达蛋白经AKTA explorer 100快速纯化系统纯化.结果:成功地构建原核表达系统VP1-PQE30-M15, 经IPTG诱导发酵培养细菌可大量表达VP1蛋白, 纯化后蛋白纯度达95%以上.结论:重组表达质粒可表达VP1独特区蛋白, 高纯度蛋白对制备VP1 mAb及疫苗具有重要意义.
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新型重组α型干扰素原核表达载体的构建、表达及活性检测
目的:合成一种新型重组α型干扰素(IFN-α)基因序列, 使其在大肠杆菌中表达, 并检测其生物活性.方法:人工合成新型重组IFN-α基因全长, 将PCR扩增产物与pUC18进行双酶切后构建克隆载体, 并转化至大肠杆菌, 经蓝白斑筛选, 提取质粒, 以EcoR I和BamH I双酶切, 插入表达载体pBV220, 转化至大肠杆菌, 42℃热诱导表达目的蛋白.超声破菌, 抽提复性后以Sephacryl S-200HR分离获得目标蛋白.在转染有乙型肝炎病毒基因的人肝癌细胞系2.2.15细胞中, 研究其对HBsAg和HBeAg的分泌的影响.结果:重组质粒读码框经测序与预期一致, 表达产物经SDS-PAGE分析获得证实, 与2.2.15细胞培养8 d, 对HBeAg和HBsAg的分泌具有一定的抑制作用.结论:成功地构建原核表达载体pBV220-IFN-α, 并使其在大肠杆菌中获得融合表达, 重组表达的新型重组IFN-α具有抗病毒作用.
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人β防御素4基因的合成及克隆载体的构建
目的:合成人β防御素4(HBD4)基因并构建其克隆载体.方法:根据GenBank中HBD4结构基因的序列, 设计合成了6条长度为32 ～60 bp的寡聚核苷酸片段, 用重叠延伸PCR法扩增合成HBD4 cDNA全长.PCR产物经双酶切后, 克隆入载体pMD18-T中, 并导入细菌中进行扩增.结果:HBD4基因的PCR产物和重组载体经凝胶电泳和酶切鉴定、 测序分析证实, 合成的目的基因与设计的HBD4 cDNA的序列相一致, 并成功地克隆入克隆载体pMD18-T中.结论:用重叠延伸PCR法能方便、 准确地获得目的基因片段.重组克隆载体pMD18-T-HBD4 的获得, 为构建HBD4基因的表达载体并表达奠定了基础.
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幽门螺杆菌cagA蛋白的制备级复性和纯化
目的:通过优化复性液的组成、 pH值、稀释度等, 建立幽门螺杆菌细胞毒素相关基因A(cytotoxin associated gene A, cagA)表达产物的制备级复性及纯化方法.方法:以包涵体形式存在的cagA表达产物先用5 mL/L Triton X-100进行初步纯化, 使其纯度达到约90%;再用含8 mol/L脲的变性剂溶解包涵体, 用复性液[0.1 mol/L Tris-HCl、 2 mmol/L 乙二胺四乙酸(EDTA)、 0.1 mmol/L 氧化型谷胱甘肽(GSSG)、 8 mmol/L还原型谷胱甘肽(GSH)及 50 mmol/L 精氨酸(Arg), pH8.0]稀释复性后, 用DEAE-HP阴离子交换色谱进行纯化.结果:用稀释法复性及液相色谱法纯化, 一次可得到100～140 mg的cagA.ELISA检测其抗原活性为1∶ 16 000;SDS-PAGE检测纯度为98%.结论:用制备级复性、纯化制备的cagA, 可作为抗原用于制备检测抗幽门螺杆菌抗体的检测芯片, 效果良好, 并已获得国家新药批文.
| 年 | 期数 |
| 2018 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2017 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2016 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2015 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2014 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2013 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2012 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2011 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2010 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2009 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2008 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2007 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2006 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2005 | 01 02 03 04 05 06 z1 |
| 2004 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2003 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2002 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2001 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2000 | 01 02 03 04 05 06 |
| 1999 | 01 02 |
| 1995 | 01 02 03 |
| 1994 | 01 02 |
| 1993 | 01 02 03 04 |
| 1992 | 01 02 03 04 |
| 1991 | 01 02 03 04 |
| 1990 | 01 02 |
| 1989 | 01 02 03 04 |
