细胞与分子免疫学杂志
Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology 세포여분자면역학잡지
- 主管单位： 中国免疫学会；第四军医大学
- 主办单位： 陕西省免疫学会,中国免疫学会
- 影响因子： 0.81
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 1007-8738
- 国内刊号： 61-1304/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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α-硫辛酸对高糖状态下内皮祖细胞的影响
目的:应用高浓度葡萄糖孵育大鼠骨髓内皮祖细胞(EPCs),测定培养上清的丙二醛(MDA)、一氧化氮(N0)水平,同时观察EPCs GPx-1、eNOS的表达,然后应用抗氧化剂ALA进行干预,来探讨葡萄糖引发EPCs损伤的机制及治疗措施.方法:清洁级健康雄性Wistar大鼠(体质量180～200g) 15只,分离培养EPCs,用2.5 g/L胰酶/0.2g/LEDTA消化培养4d的EPCs,分组贴壁24h后分别给予葡萄糖5 mmol/L作为正常对照组(NC)、30 mmol/L葡萄糖作为高糖组(HS)以及葡萄糖(30 mmol/L)+α硫辛酸(40 μg/L)作为ALA组,孵育EPCs 48 h,实时荧光定量PCR技术及Western blot法测定EPCs GPx-1及eNOS的mRNA及蛋白表达,测定培养液上清的一氧化氮(N0)及MDA水平.结果:(1)不同干预措施对EPCs分泌MDA的影响:高浓度葡萄糖干预48 h后培养上清MDA水平高于正常对照组(P＜0.05)；应用ALA干预后与高糖组比较MDA水平下降(P＜0.05).(2)不同干预措施对EPCs GPx-1表达的影响:高糖干预48 h后EPCs GPx-1表达显著低于对照组,而ALA干预后EPCs GPx-1表达较高糖组显著增加(P＜0.05).(3)不同干预措施对EPCs eNOS表达及分泌NO的影响:高糖干预48 h后EPCs eNOS表达显著低于对照组,培养上清NO水平低正常对照组(P＜0.05),而ALA干预后EPCseNOS表达较高糖组显著增加(P＜0.05),培养上清NO水平升高(P＜0.05).结论:高浓度葡萄糖可以诱发EPCs产生氧化应激,减弱EPCs的抗氧化能力及eNOS表达,使EPCs分泌NO减少,α硫辛酸能够改善高糖导致的EPCs抗氧化能力减弱及NO的分泌.
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核糖核酸酶抑制因子对人乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡和侵袭的影响
目的:将核糖核酸酶抑制因子(RI)转染乳腺癌细胞株MDA-MB-231中,探讨RI对细胞凋亡和侵袭的影响.方法:(1)应用脂质体LipofectamineTM 2000分别将重组表达载体pLNCX-RI和空载体pLNCX导入MDA-MB-231细胞,G418筛选阳性克隆并扩增传代.RT-PCR和Western blot检测RI表达.(2)流式细胞术、Transwell细胞侵袭实验分别观察RI对乳腺癌细胞凋亡、侵袭的影响.(3)RT-PCR和Westem blot法检测Survivin mRNA和蛋白的表达,Western blot方法检测Caspase-3蛋白的活化情况,初步探讨RI诱导乳腺癌细胞凋亡的相关机制.(4) RT-PCR和Westem blot法检测CD24mRNA和蛋白的表达,初步探讨RI抑制细胞侵袭的机制.结果:(1)成功构建表达外源性RI的亚克隆细胞系MDA-MB-231/pLNCX-RI.(2)与未转染的MDA-MB-231细胞及转染空载体的MDA-MB-231/pLNCX细胞相比,MDA-MB-231/pLNCX-RI细胞凋亡率增加(P＜0.01)；细胞穿膜数减少(P＜0.01)；Survivin mRNA和蛋白的表达量下降(P＜0.01),且能活化Caspase-3；CD24 mRNA和蛋白的表达量亦下降(P＜0.01).结论:(1)外源性RI基因在乳腺癌MDA-MB-231细胞中的稳定表达可以通过抑制Survivin的表达和激活Caspase-3促进细胞凋亡,并能通过抑制CD24表达降低细胞侵袭力.
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人GST-Cdc25C融合蛋白的原核表达、纯化及功能初步检测
目的:构建人Cdc25C基因原核表达载体,获得纯化的GST-Cdc25C融合蛋白,并对其功能进行初步检测.方法:用PCR方法从乳腺文库中扩增Cdc25C基因编码序列,将其正确插入pGEX-KG载体,重组质粒转化大肠杆菌Rossate表达后,用GST-Sepharose 4B珠子纯化融合蛋白,并用SDS-PAGE和Western blot方法检测融合蛋白表达,通过GST pull-down技术检测纯化蛋白与已知结合蛋白Chk2的相互作用.结果:构建得到Cdc25C基因的原核表达载体,双酶切鉴定得到与预期片段大小相符的外源基因插入片段,经测序与目的序列完全一致；在Rossate菌中诱导表达出相对分子质量(Mr)约为80 000的目的蛋白,经SDS-PAGE和Western blot 检测,融合蛋白成功表达,并纯化得到GST-Cdc25C融合蛋白,GST pull-down检测证实GST-Cdc25C蛋白可以和已知相互作用蛋白Chk2相互作用.结论:成功克隆Cdc25C基因,并获得了活性良好的GST-Cdc25C蛋白,为进一步研究细胞周期蛋白调控机制奠定了实验基础.
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强磁重力环境对MG63成骨样细胞钙离子/钙调蛋白信号的影响
目的:研究强磁重力环境对MG63成骨样细胞钙离子浓度和钙离子下游信号分子表达的影响.方法:利用大梯度强磁场提供μg(12 T),1 g(16 T)和2 g(12 T)三组不同强磁重力复合环境处理MG63成骨样细胞后,经Fluo-3/AM标记的细胞用激光共聚焦显微镜检测处理0.5h对细胞胞内游离钙离子浓度([Ca2+]i)的影响；用Western blot检测处理3h对钙调蛋白(CaM)和肌球蛋白轻链激酶(MLCK)表达以及钙离子/钙调蛋白依赖蛋白激酶Ⅱ( CaMKⅡ)活性的变化.结果:钙离子浓度检测结果表明,与对照组细胞(1 g,地磁)相比,1 g(16 T)组细胞Fluo-3荧光强度增加,结果显示强磁场导致[Ca2+]i增加；与2 g(12 T)组相比,μg( 12 T)组细胞Fluo-3荧光强度下降,结果显示模拟失重导致[Ca2+]i降低,抑制钙离子信号.蛋白质表达的检测结果表明,与对照组相比,1 g组细胞CaM和MLCK表达以及CaMKⅡ活性没有明显变化；与2 g(12 T)组相比,μg( 12 T)组细胞CaM表达以及CaMK活性下降,结果显示模拟失重抑制CaM/CaMKⅡ信号.结论:强磁场导致MG63成骨样细胞胞内游离钙离子浓度增加,模拟失重抑制成骨样细胞钙离子/钙调蛋白信号.
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TLR4、MyD88、NF-κBmRNA在实验性自身免疫性肌炎小鼠淋巴结中的表达及意义
目的:研究TLR4、MyD88、NF-κB mRNA在实验性自身免疫性肌炎小鼠淋巴结中的表达情况,探讨TLR4在肌炎发病中的作用.方法:将30只雌性BALB/c小鼠随机分为5组(每组6只):第1组为正常对照组,其它4组分别为肌炎模型1周处理组、2周处理组、3周处理组和4周处理组,后4组均应用肌球蛋白诱导实验性自身免疫性肌炎模型(EAM).采用实时荧光定量PCR方法检测各组小鼠淋巴结TLR4、MyD88、NF-κB mRNA表达水平.结果:(1)与正常小鼠相比,肌炎各组小鼠淋巴结中TLR4、MyD88、NF-κB mRNA表达均有统计学差异,表现为不同程度升高(P＜0.01),第3组升高为显著(P＜0.01),第4组较第5组升高(P＜0.01)；(2)各组淋巴结中TLR4 mRNA表达水平与MyD88 mRNA、NF-κBmRNA表达水平均呈正相关(r=0.906,r=0.967,P＜O.01),MyD88 mRNA表达水平与NF-κB mRNA表达水平呈正相关(r =0.919,P＜0.01).结论:TLR4在自身免疫性肌炎发生发展过程中发挥重要作用,且以MyD88依赖型信号途径为主,并通过激活NF-κB促进炎性因子释放.
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通痹合剂乙酸乙酯部位调节活化T细胞双信号分子的机制研究
目的:明确通痹合剂抑制T淋巴细胞活化的活性部位,研究其对T细胞双信号分子的影响,阐明通痹合剂免疫调控作用的机制.方法:分离大鼠淋巴细胞,加入通痹合剂不同提取部位,ConA刺激48 h,流式细胞术(FCM)检测CD3阳性细胞表达CD71；加入不同浓度通痹合剂乙酸乙酯部位和甲氨蝶呤(MTX),ConA刺激48 h,FCM检测T细胞表达TCR、CD28和ICOS.结果:ConA刺激后CD3阳性细胞表达CD71显著上调至69.7％,通痹合剂乙酸乙酯部位(TBHJ)可抑制CD3+ CD71+表达(32.5％)；ConA刺激T细胞表达TCR、CD28和ICOS明显升高,与阴性对照组(Control)有非常显著性差异(P ＜0.001),TBHJ可明显抑制T细胞表达TCR、CD28和ICOS,尤其抑制ICOS作用较强,呈浓度依赖效应；MTX可明显抑制T细胞表达TCR、CD71.结论:TBHJ可明显抑制T淋巴细胞活化,其对T细胞活化的双信号分子途径均有下调作用,尤其以抑制ICOS明显,提示TBHJ可通过阻断CD28-ICOS第二信号途径,诱导免疫耐受.本研究为通痹合剂治疗类风湿性关节炎等自身免疫性疾病提供了实验依据.
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rAd/MDC-VP1初免pcDNA3/MDC-VP1加强策略抗CVB3的免疫效果研究
目的:应用柯萨奇病毒B3( CVB3)腺病毒载体疫苗rAd/MDC-VP1初免,核酸疫苗pcDNA3/MDC-VP1加强免疫的策略免疫小鼠,观察其免疫效果.方法:BALB/c小鼠随机分为A～D4组,分别肌肉注射PBS、rAd/MDC-VP1、pcD-NA3/MDC-VP1、rAd/MDC-VP1+pcDNA3/MDC-VP1,用ELISA和微量中和试验法分别检测CVB3 VP1特异性IgG和中和抗体滴度,CCK-8法检测脾淋巴细胞增殖活性和特异性CTL杀伤活性；用致死量的CVB3攻击小鼠后,检测小鼠血中病毒滴度并观察动物的存活情况.结果:D组CVB3 IgG、非特异性淋巴细胞增殖活性及特异性CTL杀伤活性明显高于其他各组(P＜0.05)；CVB3攻击后,D组小鼠血中病毒滴度较其他各组显著降低,生存率为41.67％,明显高于其他各组(P＜0.05).结论:rAd/MDC-VP1初免pcDNA3/MDC-VP1加强的免疫策略能显著提高小鼠细胞和体液免疫水平,提高致死量病毒攻击后的保护率.
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间充质干细胞移植对小鼠动脉粥样斑块形成的影响
目的:研究间充质干细胞移植对ApoE-/-小鼠动脉粥样斑块形成的影响.方法:分离培养ApoE-/-小鼠骨髓间充质干细胞(MSCs),并进行鉴定.将30只ApoE-/-小鼠分为阴性对照组、阳性对照组、MSCs移植组,每组10只,阳性对照组和MSCs移植组从尾静脉注射MSCs.比较各组小鼠的斑块面积；分析各组小鼠不同组织中CD4+ CD25+ Treg细胞的数目和功能；利用ELISA法检测各组小鼠脾细胞炎性因子浓度.结果:与对照组比较,MSCs移植组小鼠斑块面积明显缩小(P＜0.05),CD4+ CD25+ Treg细胞的数目显著增加(P＜0.05),CD4+ CD25+ Treg细胞增殖反应下降；上清液中TGF-β和IL-10浓度显著升高,而IFN-γ浓度显著下降.结论:MSCs移植可能通过调控体内炎症反应而产生抗动脉粥样硬化作用.
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针对CD44的siRNA对脑胶质瘤细胞A172增殖与凋亡的影响
目的:通过RNA干涉下调CD44在脑胶质瘤细胞A172中的表达,观察CD44下调后对胶质瘤细胞增殖、迁移和侵袭的影响.方法:根据CD44基因序列设计并合成的siRNA片段(CD44-siRNA)转染A172细胞,利用荧光实时定量qRT-PCR检测细胞中CD44基因mRNA水平的变化；Western blot检测CD44蛋白水平的变化；MTT法检测A172细胞增殖；流式细胞术( FCM)检测A172细胞周期与凋亡.结果:CD44-siRNA下调了A172细胞中CD44 mRNA水平与蛋白水平的表达,A172细胞的增殖能力明显降低,并将A172细胞阻滞于G0/G1期,A172细胞的凋亡数量明显增加,尤其是晚期凋亡细胞数.结论:CD44-siRNA能够下调CD44的表达,有效抑制A172脑胶质瘤细胞的增殖,并促进其凋亡,为以CD44为靶点的脑胶质瘤基因治疗提供理论依据.
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骨肉瘤细胞中ArgBP2的表达和定位
目的:构建真核表达载体GFP-hArgBP2并检测在骨肉瘤细胞内的表达及定位.方法:以pcDNA3.1-hArgBP2为模板,利用PCR扩增hArgBP2基因cDNA全长,并将其克隆至真核表达载体pEGFP-C1中.进一步将构建的重组质粒进行酶切和测序鉴定,并转染到骨肉瘤细胞MG-63中,提取细胞蛋白进行Western blot检测.同时利用共聚焦激光扫描显微镜观察GFP-hArgBP2在MG-63细胞中的定位,免疫沉淀的方法纯化hArgBP2蛋白.结果:hArgBP2基因cDNA全长成功构建到真核表达载体pEGFP-C1中,Western blot检测到了GFP-hArgBP2融合蛋白表达,相对分子质量(Mr)约为97 000.GFP-hArgBP2在骨肉瘤细胞MG-63中主要定位于细胞质和核周,并成功纯化hArgBP2蛋白.结论:成功地构建了GFP-hArgBP2真核表达质粒,同时鉴定了GFP-hArgBP2融合蛋白的表达,并纯化hArgBP2蛋白.GFP-hArgBP2蛋白主要定位在细胞质和核周.
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人白介素-17B真核蛋白表达及生物学功能的初步研究
目的:在真核细胞中表达hIL-17B/mFc融合蛋白并初步研究IL-17B生物学特性.方法:应用RT-PCR法克隆hIL-17B的CDS段基因序列.将测序正确的hIL-17B序列插入pCEP4质粒构建pCEP4/hIL-17B真核表达载体.转染人肾上皮293T细胞后,筛选阳性表达细胞株.RT-PCR、ELISA和Western blot等法鉴定hIL-17B分子的mRNA和蛋白水平表达.体外和体内实验验证其生物学功能.结果:成功构建了pCEP4/hIL-17B重组表达载体,并在293T细胞中稳定表达.获得的hIL-17B重组蛋白能稳定结合人单核THP-1细胞系上IL-17B受体.体外刺激THP-1,能显著促进IL-1 β和NF-α等炎症因子的分泌.体内实验发现其具有促进中性粒细胞迁移的作用.结论:稳定表达hIL-17B重组蛋白的293T细胞系的建立,为进一步研究hIL-17B的生物学功能奠定了良好的基础.
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hsa-miR-128慢病毒载体的构建及其对胶质瘤细胞增殖的影响
目的:构建含hsa-miR-128-1和hsa-miR-128-2前体的慢病毒表达载体,建立能够稳定表达目的基因的人胶质瘤U87细胞株.研究hsa-miR-128对胶质瘤细胞增殖的影响.方法:扩增hsa-miR-128前体片段,克隆入Pentr3c载体,利用LR clonaseⅡ酶将目的片段转接于Plenti6.3质粒,包装病毒,以改构的Plenti6.3-mCherry载体包装的病毒为对照,感染人胶质瘤U87细胞,通过Blasticidin筛选出能够稳定表达抗生素抗性的细胞株.荧光显微镜观察mCherry的荧光表达,实时荧光定量检测miR-128的表达量,流式细胞仪检测细胞周期,MTT检测细胞增殖.结果:成功构建重组慢病毒载体Plenti6.3-miR-128-1和Plenti6.3-miR-128-2,经Blasticidin筛选细胞株、mCherry荧光表达和实时荧光定量PCR验证,成功包装出慢病毒.病毒滴度测定在1.1×107 - 8.3×107 TU/mL之间,细胞周期和MTT结果提示miR-128-1和miR-128-2高表达的U87细胞株均表现增殖抑制.结论:成功构建了分别含有两种hsa-miR-128前体的慢病毒表达载体,筛选出稳定表达hsa-miR-128的U87细胞株.miR-128-1和miR-128-2均抑制胶质瘤U87细胞增殖.
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高氧对脂多糖诱导N9小胶质细胞促炎症作用的影响
目的:观察常压高浓度氧对脂多糖诱导N9小胶质细胞Toll受体4、TNF-α表达时序变化,初步探讨高氧对小胶质细胞促炎反应的作用及调控机制.方法:体外培养N9小胶质细胞,随机分为6组(n=3):空气组、sLPS组、hLPS组、高氧组、高氧+ sLPS组、高氧+hLPS组.LPS浓度为100 ng/mL(sLPS)、1 mg/L( hLPS).高氧(900 mL/L)暴露时间分别为2h、6h、12 h、16 h、24h.RT-PCR检测TLR4的表达时序变化；Western blot检测处理12 h后各组TLR4蛋白表达；ELISA检测各组处理6h、12 h、16 h、24h培养上清中TNF-α的含量.结果:RT-PCR显示hLPS组在6h后、sLPS组在16 h后TLR4 mRNA均表达上调,并随LPS浓度增加、暴露时间延长逐渐升高(P＜0.05),24 h时hLPS组表达高.6h后在各个时间点高氧+ hLPS组与hLPS比较TLR4 mRNA下调(P＜0.05),在16 h、24h为明显(P＜0.05).Western blot检测12 h高氧+sLPS组、高氧+hLPS组TLR4蛋白水平均低于相应浓度的LPS组(P＜0.05).ELISA结果示在各个时间点高氧+ sLPS组、高氧+hLPS组与相应浓度的LPS组比较TNF-α均明显上调(P＜0.05).结论:高浓度氧暴露促进LPS诱导N9小胶质细胞的促炎症反应,TLR4可能参与此过程的负向调控.
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环孢素A抑制博来霉素诱导的小鼠肺间质病变
目的:观察环孢素A(CsA)对博来霉素(BLM)所致肺间质病变的治疗作用,并探讨其作用机制.方法:将120只C57BL/6小鼠随机分为5组,模型组、模型对照组、CsA30mg治疗组、CsA50 mg治疗组和治疗对照组,每组24只；模型组及治疗组小鼠均经气管滴入BLM建立肺间质病变模型,模型对照组小鼠则经气管滴入同体积生理盐水.于造模当日起,治疗组经腹腔注射CsA,治疗对照组经腹腔注射等体积生理盐水,模型组及模型对照组不予治疗.在实验第4、7和14天分别抽取小鼠外周血,用细胞计数板计数白细胞总数,以流式细胞术检测CD4+T细胞、CD14+单核细胞和CD19+B细胞的数量比例；同步取支气管肺泡灌洗液(BLAF)细胞计数及细胞涂片Giemsa染色分析；并进行肺组织病理学研究.结果:模型组外周血白细胞总数明显升高,细胞分类显示CD14+单核细胞和CD19+B细胞在造模4d、7d、14 d均较模型对照组显著增高.CsA治疗后,CD14+细胞比例在4d时下降为明显,显著低于同一时间点模型组；7d、14 d亦低于同一时间点模型组；治疗组CD19+B细胞比例在7d、14 d时均显著低于同一时间点模型组,各组间CD4+T细胞比较均未见明显统计学差异；BALF细胞分析显示,模型组4d、7d、14 d时细胞总数及分类计数均明显高于同一时间点模型对照组,CsA治疗后均显著减少；肺组织病理学观察可见,在第4～14天,模型组及治疗对照组小鼠肺间质内浸润细胞逐渐增多,其中以淋巴细胞浸润为主,可见少量单核-巨噬细胞浸润,同时见间质内胶原纤维沉积逐渐增多.CsA治疗组小鼠肺间质炎症明显减轻,间质内及小支气管周围胶原纤维沉积减少；免疫组化研究显示,模型组小鼠和治疗对照组肺内组织内浸润的单核-巨噬细胞、中性粒细胞和淋巴细胞均高表达CD147分子,治疗组肺内表达CD147的细胞减少.结论:环孢素A可能通过抑制CD147-CypA的相互作用,抑制炎性细胞向肺内的趋化聚集,减轻肺部炎症、减少胶原沉积.
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细胞周期蛋白E2在人鼻咽癌组织中的表达及临床意义
目的:研究细胞周期蛋白E2( Cyclin E2)在人鼻咽癌(NPC)组织中的表达及临床意义.方法:应用免疫组织化学法和RT-PCR法检测NPC组织及鼻咽非肿瘤组织Cyclin E2蛋白和mRNA的表达.结果:Cyclin E2蛋白在NPC和鼻咽非肿瘤组织中的表达率分别为75％ (45/60)和9.5％ (2/21),两者相比有统计学意义(P＜0.01)；鼻咽癌组织中Cyclin E2蛋白的过表达对同年龄、性别的患者无统计学差异(P＞0.05),但与淋巴结转移、分期和5年生存率有相关性(P＜0.01).鼻咽癌组与对照组相比,Cyclin E2 mRNA表达亦有统计学差异(P＜0.01).结论:Cyclin E2表达对判断鼻咽癌病变进展、生存率及转移有重要参考价值.
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流式微球阵列法检测肺结核患者血清部分细胞因子的临床意义
目的:探讨流式微球阵列法(CBA)检测不同类型肺结核患者血清中细胞因子IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、TNF-α和IFN-γ水平的临床意义.方法:采用BD CBA Flex Set检测试剂盒和流式微球阵列法(CBA)检测84例肺结核患者(46例活动性肺结核患者及38例非活动性肺结核患者)和30例正常人的6种细胞因子(IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、TNF-α、IFN-γ)的水平.结果:肺结核患者血清IL-2、IL-6、IL-10和IFN-γ的水平显著高于正常对照组(P＜0.01或P＜0.05),且活动性结核组高于非活动性结核组(P＜0.01或P＜0.05).血清IL-4与TNF-α水平肺结核患者与正常对照组无显著性差异.结论:CBA法能快速、灵敏、多参数批量同步定量检测血清中6种细胞因子；这些细胞因子在肺结核的免疫发病中具有重要的意义.
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滋养细胞自噬在重度子痫前期发病中的作用与分子机制
目的:研究重度子痫前期患者胎盘滋养细胞自噬的发生规律及其导致细胞受损的可能机制.方法:收集23例重度子痫前期患者及23例正常孕妇的胎盘组织,应用扫描电镜观察胎盘绒毛表面的变化；透射电镜观察滋养细胞超微结构及自噬体形成；免疫组化检测胎盘组织自噬相关蛋白Beclin1、LC3Ⅱ的表达变化,并将其相对表达量与胎盘重量、新生儿体质量进行相关性分析.结果:与对照组相比,重度子痫前期患者胎盘组织在扫描电镜下见绒毛稀少、排列紊乱等结构异常；透射电镜下见细胞质中典型的自噬体形成；免疫组化提示Beclin-1、LC3Ⅱ等蛋白表达显著升高(P＜0.01),其相对表达量与胎盘重量、新生儿体质量呈负相关,Beclin-1,LC3Ⅱ与胎盘重量、新生儿体质量的相关系数分别为-0.977、-0.930,-0.812、-0.849.结论:重度子痫前期患者滋养细胞Beclin-1、LC3Ⅱ等蛋白的表达增加,自噬活性增高,与胎盘重量、新生儿体质量呈负相关.
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HIV/AIDS感染者体外诱导的γδT细胞亚群的特点
目的:了解HIV/AIDS感染者外周血中γδ T细胞亚群的特点以及体外诱导后γδ T细胞的增殖情况和Vδ1、Vδ2亚群的变化,为γδT细胞体外扩增方法的建立打下基础.方法:流式细胞术( FCM)检测25例HIV/AIDS感染者(HIV组)和31例健康对照者(HC组)外周血中的γδ T细胞、Vδ1亚群、Vδ2亚群的频率和绝对值；选择两组中各10例外周血单个核细胞(PBMC),用anti-γδ TCR单克隆抗体(mAb)和IL-2在体外诱导培养14 d,在0d、7d、14 d分别进行细胞计数和FCM检测,分析比较γδ T细胞亚群的比例和培养情况.结果:HIV组外周血中γδ T细胞、Vδ2亚群百分比和绝对值都显著低于HC组,而Vδ1亚群百分比和绝对值显著高于HC组；体外诱导培养14 d时,HC组总细胞数量增加3倍,HIV组总细胞数量稍有增加；HC组的γδ T细胞比例可达到80％以上,其中Vδ2亚群可以增加到65％左右,而HIV组的γδ T细胞比例达35％左右,Vδ2亚群比例仅增加到17％左右.结论:HIV/AIDS感染者外周血中γδ T细胞比例显著降低,Vδ1/Vδ2比值倒置；用anti-γδ TCR mAb和IL-2在体外诱导HIV/AIDS感染者的Vδ2亚群扩增效果不佳,不能逆转Vδ1/Vδ2倒置现象.应进一步寻找更加有效的诱导培养方法.
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磷酸化STAT3在非小细胞肺癌组织中的表达及其临床意义
目的:探讨磷酸化信号转导与转录激活因子3(pSTAT3)在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达及其与NSCLC各临床病理因素的关系.方法:采用免疫组织化学染色法检测59例NSCLC及其癌旁组织中pSTAT3的表达.结果:(1)NSCLC组织中,pSTAT3的表达明显高于癌旁组织(P＜0.01)；(2)pSTAT3的阳性表达与肿瘤组织的大小及NSCLC患者的吸烟状况有关,与性别、年龄、淋巴结转移、临床分期及组织分化程度无关.pSTAT3在腺癌中的阳性表达率较鳞癌高,但无统计学意义.结论:pSTAT3可能在肺癌的发生发展及指导靶向治疗中发挥重要作用.
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铅接触及铅中毒工人外周血单个核细胞TCR Vγ基因表达的变化
目的:了解铅接触及铅中毒工人外周血中T细胞抗原受体(TCR)的Vγ基因表达水平.方法:利用SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR分别检测12例铅接触工人、8例铅中毒工人和20例正常人外周血单个核细胞中TCRVγ基因表达情况,以β2微球蛋白基因(β2M)作为内参,根据相对定量公式(2-△Ct×100％)计算铅接触、铅中毒工人与正常人的TCR VγⅠ、TCR VγⅡ和TCR VγⅢ基因表达水平差异.结果:正常人、铅接触和铅中毒工人外周血的TCR Vγ Ⅰ基因表达水平的中位数分别为0.79％、1.22％和0.96％；TCR VγⅡ基因表达水平分别为0.94％、1.26％和2.74％；TCR VγⅢ基因表达水平分别为0.46％、0.43％和1.04％.与正常人相比,铅中毒工人的TCRVγⅡ基因表达显著上升(P＜0.05).结论:铅接触及铅中毒工人中外周血TCRVγ基因表达异常.
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白介素17A受体在系统性红斑狼疮患者外周血B淋巴细胞的表达及意义
目的:研究白介素17A受体(IL-17AR)在系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血B淋巴细胞内的表达情况及其临床意义.方法:流式细胞术检测60例SLE患者及33例健康人外周血B细胞上IL-17AR的表达水平.并将其与有关临床及实验室指标进行相关性分析.结果:SLE患者组的IL-17AR+细胞表达比例为(47.58±17.20)％,高于正常对照组(40.71 +11.82)％(P＜0.05).在SLE患者中:口腔溃疡组、有浆膜炎组、有肾脏病变组、有免疫异常组分别高于相应的无症状组(P＜0.05).在抗Sm-D1抗体阳性组及抗核小体抗体阳性组分别高于相应的抗体阴性组(P＜0.05).IL-17AR+细胞比例与SLE疾病活动指数(SLEDAI)、C反应蛋白(CRP)、甘油三酯呈正相关；与间接胆红素、血清白蛋白的表达负相关(P＜0.05).B淋巴细胞比例与血清IgG、ALT、直接胆红素的表达呈正相关；与胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白的表达呈负相关(P＜0.05).结论:IL-17AR在SLE患者B细胞上表达上调,且与病情有一定的相关性.提示IL-17/IL-17AR可能在SLE发病中起着重要作用.
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抗人肺鳞癌单克隆抗体的制备及其特性鉴定
目的:制备和鉴定抗人肺鳞癌单克隆抗体(mAb),为肺癌的早期诊断和靶向治疗提供候选抗体药物及为肺癌抗原的筛选提供工具.方法:用肺癌细胞株YTMLC-90做抗原免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞Sp2/0融合,间接ELISA和有限稀释法筛选抗体阳性的杂交瘤细胞获得mAb.染色体计数法鉴定杂交瘤细胞,并进行mAb同种型鉴定；对细胞培养上清液和腹水中的mAb采用间接ELISA法进行初步特异性检测及效价测定；采用Western blot法鉴定其与不同组织抗原结合活性；采用免疫组化染色法鉴定其在肺癌组织中的分布.结果:筛选出5株可稳定分泌抗肺鳞癌mAb的杂交瘤细胞株E2、F9、E11、D5和C6,分泌的抗体均为IgG1亚类,κ亚型.C6染色体数目为89～ 112条,细胞培养上清和腹水效价分别为1∶1004和1∶104,ELSA和Western blot 结果显示其能特异性与肺癌细胞结合,未见与其他高发癌组织和正常组织结合.结论:成功地制备了能够特异识别肺癌组织的mAb.
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抗创伤弧菌单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立及特性鉴定
目的:制备高效、特异的抗创伤弧菌的单克隆抗体(mAb),并进行特性鉴定.方法:用创伤弧菌菌体蛋白抗原免疫小鼠,利用杂交瘤细胞融合技术,制备抗创伤弧菌的杂交瘤细胞株.用ELISA法及Western blot等筛选、鉴定其与创伤弧菌溶血素蛋白(vvhA)及其他重要海洋细菌的交叉反应性和效价.结果:共获得5株抗创伤弧菌的mAb,鉴定结果表明,5株mAb均具有良好的特异性和免疫反应性.结论:获得5株抗创伤弧菌的特异性mAb,为建立创伤弧菌快速检测试剂盒提供了重要制剂.
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PAR-1促进肿瘤恶性行为机制的研究进展
蛋白酶活化受体-1(PAR-1)是PARs家族中第一个被发现的成员,也称凝血酶受体.PAR-1被肿瘤微环境中的蛋白酶水解激活后,介导多种肿瘤细胞的生物学行为:促进肿瘤细胞增殖、黏附、迁移、侵袭,并参与肿瘤生长、血管新生等多个环节和多条通路.同时,通过调控下游分子和细胞因子,PAR-1可对肿瘤微环境进行重塑,促进肿瘤的进展.
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新生血管靶向基序NGR的研究进展
含有精氨酸-甘氨酸-天冬酰胺( Asn-Gly-Arg,NGR)基序的肽类能选择性识别肿瘤的新生血管,含有NGR基序的环状和直链多肽已用于配体介导的靶向性肿瘤新生血管的显像和治疗[1].这些肽类的结合特性依赖于内皮相关的氨肽酶N(CD13),而CD13与血管新生和肿瘤生长关系密切.有研究证明NGR可以通过天冬酰胺的脱酰胺作用快速转化为异构天冬氨酸-甘氨酸-精氨酸(isoDGR),产生的αvβ3可以影响内皮细胞的功能和肿瘤的生长[2].我们着重综述了NGR基序的结构、功能、应用以及NGR在天然蛋白中转化为isoDGR的时间依赖性以及在新生血管形成时作为分子计时器在新整合素结合位点形成时的潜在作用.
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浆细胞样树突状细胞与调节性T细胞在移植免疫研究中的新进展
浆细胞样树突状细胞(pDC)是一类在病毒入侵时分泌Ⅰ型IFN并介导细胞免疫应答的抗原提呈细胞,除了启动获得性免疫应答,它们在扩增调节性T细胞及介导免疫耐受方面也发挥着重要的作用.结合新研究,此文着重介绍pDC诱导、扩增调节性T细胞及其介导免疫耐受的分子机制,并对pDC来源在介导耐受中的作用进行了介绍,其对于免疫耐受的影响与受者所处的免疫环境、免疫效应发生部位密切有关.深入研究pDC与移植免疫耐受间的密切联系将有助于探讨临床细胞免疫治疗的更多可能性.
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间充质干细胞的免疫学特点及其临床应用
间充质干细胞(MSCs)是一种具有多分化潜能、低免疫原性和免疫调节功能的成体干细胞.其免疫学特点得到越来越多的重视.MSCs能够抑制免疫细胞的功能、维持免疫稳定,并开始应用于移植及自身免疫性疾病的治疗.近的研究揭示了其在特定的免疫环境中的表现出一些新的免疫学特点.现就MSCs的免疫学特点及其临床应用予以综述.
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PKCθ的结构和功能及其在免疫相关疾病中的研究进展
PKCθ是一种不依赖Ca2+激活的nPKC亚型之一,主要在T细胞、骨骼肌细胞和造血系统中表达.它是抗原刺激T细胞后唯一转位于免疫突触的PKC亚型,通过参与胞内信号转导进而调控T细胞的活化和存活以及肿瘤的发生和发展.此外,PKCθ在不同的组织中发挥不同的生理作用.PKCθ参与骨骼肌内胰岛素信号通路的调控,与胰岛素抵抗相关联；PKCθ与血小板的激活和血栓形成密切相关.本文对近年来PKCθ及其在相关疾病中的新研究作一综述.
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星形胶质细胞在癫痫发病机制中的研究进展
癫痫是神经系统常见疾病之一.星形胶质细胞活化作为癫痫的病理学标志,将极大程度地影响大脑控制细胞兴奋性能力.本文通过综合国内外新研究进展,对星形胶质细胞介导的突触间隙神经递质的转运以及细胞因子的信号转导进行详细的阐述,以期对癫痫的治疗提供新策略.
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NK细胞的活化及其介导的抗病毒作用
NK细胞是一类独特的淋巴细胞亚群,占人外周血淋巴细胞的10％～15％,其表面标志为CD3- CD19- CD16+CD56+.根据CD56分子的表面密度,将NK细胞分为:CD56bright和CD56dim两个亚群,前者以分泌细胞因子为主,后者以杀伤功能为主.NK细胞不表达T细胞的表型(CD3或TCR),也不表达B细胞的表型(CD19或BCR).NK细胞具有如下特点:①强大的细胞毒活性.它对刺激因素产生的应答十分迅速,而且免疫应答强度高.②杀伤活性无需抗原刺激,也不受MHC分子的限制.病毒感染或恶性转化细胞的MHC Ⅰ类分子表达下降或消失,借这一机制逃避T细胞识别,但又可能使NK细胞处于活化状态,从而与T细胞应答互为补充发挥免疫防御功能.③强大的细胞因子/趋化因子分泌功能,有助于启动和活化其他免疫细胞(如T细胞、B细胞、树突状细胞和内皮细胞等)的应答.因此,NK细胞在固有免疫和适应性免疫中均发挥重要作用.
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miRNAs在干细胞自我更新和分化中的作用
干细胞的一个特点是能够自我更新并产生分化的细胞,这种独特的属性是由细胞内各种调控因素作用的结果.近期研究表明,小分子RNA (miRNAs)在调节干细胞的自我更新与分化中起重要作用,miRNAs通过对抑制靶mRNA的翻译来调节细胞或已分化的子细胞.这些发现说明miRNAs在控制干细胞命运上具有重要的意义.
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Ⅰ型和Ⅱ型NKT细胞与肿瘤免疫
NKT细胞是一类特殊的T细胞,根据T细胞受体(TCR)的恒定性,将NKT细胞分为Ⅰ型和Ⅱ型.近年来研究表明,NKT细胞在肿瘤免疫中具有重要作用,其中Ⅰ型NKT细胞主要发挥抗肿瘤作用,Ⅱ型NKT细胞可以促进肿瘤的发展.本文将从Ⅰ型和Ⅱ型NKT细胞在肿瘤免疫中的作用、机制以及相互调节等方面作一综述.
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荧光法研究免疫试验抗体包被过程
目的:以荧光法作为定量和示踪手段,研究免疫试验中抗体在固相载体上包被的行为及意义.方法:以异硫氰酸荧光素( FITC)标记后的抗体包被固相载体,构建化学发光免疫分析(CLIA)体系.通过荧光光度计精确测定包被前后包被液中游离抗体的浓度,定量抗体的包被量,并研究其包被量对免疫反应的影响.结果:抗体包被量与CLIA发光值非线性相关；间接法较直接吸附法包被更有利于保持抗体活性；热处理后化学发光系统发光值降低与包被抗体脱落有关.结论:荧光法为构建有效CLIA体系提供了一种研究方法.
| 年 | 期数 |
| 2018 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2017 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2016 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2015 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2014 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2013 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2012 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2011 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2010 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2009 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2008 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2007 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2006 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2005 | 01 02 03 04 05 06 z1 |
| 2004 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2003 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2002 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2001 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2000 | 01 02 03 04 05 06 |
| 1999 | 01 02 |
| 1995 | 01 02 03 |
| 1994 | 01 02 |
| 1993 | 01 02 03 04 |
| 1992 | 01 02 03 04 |
| 1991 | 01 02 03 04 |
| 1990 | 01 02 |
| 1989 | 01 02 03 04 |
