细胞与分子免疫学杂志
Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology 세포여분자면역학잡지
- 主管单位： 中国免疫学会；第四军医大学
- 主办单位： 陕西省免疫学会,中国免疫学会
- 影响因子： 0.81
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 1007-8738
- 国内刊号： 61-1304/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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过表达小鼠干扰素调节因子8抑制RAW264.7细胞向破骨样细胞的分化
目的 构建及鉴定小鼠干扰素调节因子8(IRF8)重组腺病毒Ad-IRF8,并观察过表达的IRF8对小鼠可溶性核因子κB受体活化因子配体(sRANKL)诱导的RAW264.7细胞分化的影响.方法 PCR扩增IRF8,亚克隆到穿梭载体pAdTrack-CMV中,PimeⅠ线性化后与骨架载体pAdEasy-1在大肠杆菌BJ5183中同源重组获得重组腺病毒载体pAd-IRF8.pAd-IRF8经PacⅠ线性化后转染AD293细胞,包装出重组腺病毒(Ad-IRF8).Ad-IRF8感染小鼠RAW264.7细胞,经半定量反转录PCR(RT-PCR)和Western blot法检测IRF8的过表达,通过抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色检测IRF8对sRANKL诱导的RAW264.7细胞分化的影响.结果 成功构建携带IRF8基因的穿梭载体pAdTrack-IRF8-CMV和重组载体pAd-IRF8,并且在AD293细胞中成功包装出重组腺病毒Ad-IRF8.半定量RT-PCR和Western blot法证实IRF8在RAW264.7细胞中有过表达,TRAP染色结果显示过表达的IRF8有效抑制RAW264.7细胞向破骨样细胞分化.结论 成功构建重组腺病毒Ad-IRF8,在RAW264.7细胞中检测到了IRF8过表达,并能有效抑制RAW264.7细胞向破骨样细胞分化.
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人肿瘤坏死因子受体-Fc融合蛋白的表达及生物活性分析
目的 构建携带人肿瘤坏死因子受体(TNFR)胞外区融合人IgG Fc片段的重组腺相关病毒载体(pAAV/hTNFR-Fc),并对融合蛋白hTNFR-Fc的表达和生物学活性进行鉴定.方法 构建hTNFR-Fc融合基因重组腺相关病毒(AAV)载体,体外转染人胚肾HEK293T细胞,收集转染上清,以Western blot法检测目的蛋白的表达,应用L929细胞测定重组表达产物对人和大鼠TNF-α细胞毒中和活性,采用ELISA比较重组表达产物对人和大鼠TNF-α的结合活性.结果 成功构建重组表达载体pAAV/hTNFR-Fc,在转染细胞上清中检测到目的蛋白hTNFR-Fc的表达,重组表达产物可有效结合人TNF-α并中和其L929细胞毒活性,并对大鼠TNF-α具有一定程度的结合和中和活性.结论 成功构建了hTNFR-Fc融合基因,验证了其在AAV载体上的分泌性表达,并对其生物活性进行了鉴定,为进一步病毒包装和大鼠关节炎动物实验研究奠定了基础.
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青藤碱-4-羟基-棕榈酸酯的合成及其抗炎作用
目的 合成并初步探索青藤碱衍生物青藤碱-4-羟基-棕榈酸酯的抗炎作用.方法 以青藤碱(SN)为原料,化学合成青藤碱-4-羟基-棕榈酸酯.用脂多糖(LPS)诱导建立内毒素血症小鼠模型,并在诱模前于治疗组小鼠体内分别注射5 mg/kg、2.5 mg/kg剂量的青藤碱和青藤碱-4-羟基-棕榈酸酯,未治疗组和空白对照组注射生理盐水,观察记录各组小鼠的状态及生存状况.MTT法检测不同浓度青藤碱-4-羟基-棕榈酸酯体外对RAW264.7细胞增殖的影响.用终浓度为(0、1、2、5、10) μmol/L的青藤碱-4-羟基-棕榈酸酯共培养刺激RAW264.7细胞24h,再加终浓度为1 μg/kg的LPS刺激6h后,实时定量PCR检测IL-6mRNA表达水平.结果 成功制备青藤碱-4-羟基-棕榈酸酯.体内研究发现:相同浓度青藤碱-4-羟基-棕榈酸酯治疗组小鼠,生存状态较青藤碱治疗组有所改善;青藤碱-4-羟基-棕榈酸酯体外可以抑制巨噬细胞的增殖和IL-6的表达.结论 青藤碱-4-羟基-棕榈酸酯具有一定的抗炎作用,可能是通过抑制巨噬细胞增殖、减少炎症介质释放而实现的.
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酰基缩肽1经SHH通路下调Gli和Bcl-2表达诱导肾癌细胞凋亡
目的 探讨酰基缩肽1(ADEP1)对肾癌细胞凋亡及SHH信号通路相关蛋白Gli-1和Bcl-2表达的影响.方法 50μmol/L ADEP1处理肾癌ACHN细胞和769-P细胞48 h,采用光学显微镜观察细胞凋亡的细胞形态学和细胞核形态变化,MTT法检测细胞增殖,实时定量PCR (qRT-PCR)检测SHH信号通路SHH和Gli-1 mRNA的表达,Western blot法检测Gli-1和Bcl-2蛋白的表达.结果 ADEP1可诱导肾癌细胞发生凋亡,降低SHH和Gli-1 mRNA表达,以及Gli-1和Bcl-2蛋白的表达.结论 ADEP1可通过抑制SHH信号通路相关蛋白表达,诱导肾癌细胞发生凋亡.
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金雀异黄素对脂多糖诱导的巨噬细胞MAPK和TLR信号转导通路的影响
目的 研究金雀异黄素对脂多糖(LPS)诱导的巨噬细胞丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号转导通路和Toll样受体(TLR)通路的影响.方法 用100 ng/mL脂多糖和金雀异黄素分别处理RAW264.7巨噬细胞不同时间后,采用Western blot法检测对MAPK信号通路蛋白磷酸化的影响;采用RT2 ProfilerTM PCR芯片检测金雀异黄素对LPS诱导的TLR信号转导通路基因表达的影响.结果 LPS能够显著诱导蛋白p38和p42/44磷酸化,激活MAPK信号通路,金雀异黄素能够加强其作用,同时,LPS能够显著诱导TLR信号转导通路的细胞因子基因表达,包括IFN-β、IL-10、IL-1α、IL-1β、IL-6、TNF-α、集落刺激因子2(CSF-2)、CSF-3、趋化因子CCL2和CXCL10、环氧合酶2(COX-2)、NF-κB1和IκB-α等,金雀异黄素能够显著降低这些上调基因的表达.结论 金雀异黄素能够显著增强LPS激活的MAPK信号通路并抑制TLR信号通路的激活.
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Th1型细胞因子在胶原蛋白诱导性关节炎小鼠血清中的动态变化
目的 研究鸡Ⅱ型胶原蛋白诱导性关节炎(CIA)小鼠血清Th1型细胞因子IFN-γIL-2、TNF-α的动态变化.方法 72只DBA1/J小鼠随机分为正常对照组(每组6只)和模型组(每组12只),分别在加强免疫后第7、14、21、35天,无菌摘眼球取血清,应用流式细胞术检测各组小鼠血清中细胞因子IFN-γ、IL-2、TNF-α在关节炎不同时期的动态变化情况.结果 模型组IFN-γ在加强免疫后第7天和第14天显著升高(P＜0.05),加强免疫后第21天、第35天开始下降,与正常组比较无区别(P＞0.05);模型组IL-2和TNF-α在加强免疫后第7天上升明显,与正常组比较有统计学意义(P＜0.05),加强免疫后第14、21、35天IL-2和TNF-α逐渐下降,与正常组比较无统计学意义(P＞0.05).结论 CD4+ Th1型细胞因子参与CIA发病全过程,而且在不同的发病阶段其相关细胞因子的变化与关节炎的炎症进展有一定关系.
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溃疡性结肠炎模型大鼠炎性细胞因子及钙卫蛋白的表达及其相关性分析
目的 观察溃疡性结肠炎(UC)大鼠体内炎性细胞因子及钙卫蛋白(CP)的变化,探讨UC大鼠炎症发生的机制.方法 将20只大鼠随机均分为模型对照(MC)组、正常对照(NC)组.MC组大鼠采用肠道灌注三硝基苯磺酸/乙醇混合液,复制成UC模型大鼠;NC组大鼠予生理盐水灌肠.模型复制成功后3周,观察2组大鼠结肠组织形态学改变,采用酶联免疫吸附法检测大鼠血清细胞因子γ-干扰素(INF-γ)、白细胞介素4(IL-4)、IL-10、IL-12及CP的变化,采用免疫印迹法检测大鼠肠组织INF-γ、IL-4、CP表达.结果 MC组炎性活动性指标升高,结肠组织出现损伤;与NC组相比,MC组大鼠血清INF-γ、IL-12、CP的表达升高(P＜0.01或P＜0.05);血清IL-4、IL-10的表达降低(P＜0.01).MC组大鼠肠组织INF-γ、CP的表达较NC组明显升高(P＜0.01或P＜0.05),IL-4的表达较NC组降低(P＜0.05).相关性分析显示,大鼠肠组织CP与INF-γ呈正相关,与IL-4呈负相关(P＜0.05).结论 UC大鼠CP表达增强,Th1型细胞因子分泌增加,促进溃疡性结肠炎的发生和发展.
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EGFP-Sam68融合蛋白在HeLa细胞的表达和定位
目的 克隆有丝分裂Src相关蛋白p68(Sam68)基因cDNA全长,构建Sam68真核绿色荧光蛋白表达载体,并确定其在HeLa中的表达和定位.方法 提取HeLa细胞总RNA,RT-PCR扩增Sam68基因片段,经酶切鉴定及测序正确后,克隆到真核绿色荧光蛋白表达载体(pcDNA3.0-EGFP)上,并转染HeLa细胞,Western blot法检测Sam68表达,免疫荧光细胞化学染色观察其细胞定位.结果 酶切和测序证实Sam68正确插入pcDNA3.0-EGFP载体中,且载体正确表达了EGFP-Sam68融合蛋白,该蛋白定位在HeLa细胞核内.结论 成功构建了真核表达载体pcDNA3.0-EGFP-Sam68.
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2'-羟基黄烷酮通过阻断AKT/STAT3信号通路抑制膀胱癌细胞增殖、侵袭及迁移
目的 探讨2’-羟基黄烷酮对膀胱癌细胞增殖、侵袭迁移能力的影响及其机制.方法 MTT法检测2’-羟基黄烷酮对膀胱癌细胞增殖的影响,并计算增殖抑制率;划痕实验检测2’-羟基黄烷酮对膀胱癌细胞迁移能力的影响;TranswellTM实验检测2’-羟基黄烷酮对膀胱癌细胞的体外侵袭能力的影响;Western blot法检测2’-羟基黄烷酮处理后侵袭转移相关蛋白表达的变化.结果 2’-羟基黄烷酮对膀胱癌5637、T24、UMUC-3、253J细胞的增殖具有明显的抑制作用,且呈时间、浓度依赖关系;经2’-羟基黄烷酮处理后,T24细胞体外迁移及侵袭能力均明显降低(P＜0.05),并伴随基质金属蛋白酶2(MMP-2)、MMP-9、p-AKT、p-STAT3表达的下调.结论 2’-羟基黄烷酮能抑制膀胱癌细胞的增殖、侵袭迁移,其作用机制可能与阻断AKT/STAT3信号通路有关.
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红藻氨酸致癫痫大鼠外周血调节性T细胞数量与癫痫发作程度相关性研究
癫痫( epilepsy)是以神经元反复过度同步异常放电为特征的中枢神经系统综合征,其发病机制尚未完全阐明.研究表明,癫痫的发病机制与机体的神经免疫系统功能紊乱有密切关系[1-2].CD4+ CD25+调节性T细胞( regulatory T cells,Treg)是一类具有免疫抑制功能的细胞亚群,在神经系统疾病中存在Treg的异常[3-4].癫痫患儿外周血Treg增加[5],目前仍未见Treg数量与癫痫发作程度相关的报道.因此本研究用流式细胞术对红藻氨酸( kainic acid,KA)致大鼠癫痫模型外周血CD4+ CD25+ Treg进行测定,探讨其数量变化与癫痫发作程度的相关性.
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流感病毒性肺炎小鼠肺组织炎性细胞因子表达及疏风宣肺方和解表清里方的调控作用
目的 研究流感病毒性肺炎小鼠肺组织炎性细胞因子表达及疏风宣肺方和解表清里方的调控作用.方法 制备甲型流感病毒性肺炎小鼠模型,随机分为空白组、肺炎模型组、奥司他韦对照组、疏风宣肺方大、中、小剂量组(SL、SM和SS),解表清里方大、中、小剂量组(JL、JM和JS).提取总RNA,采用基因芯片Pathway分析,挑选参与调控炎症相关通路中的靶基因.同时,通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)对IL-1β、IL-8、IL-10、CCL5 (RANTES)、ICAM-1的mRNA表达水平进行验证.采用Western blot法对肺组织IL-1β的表达进行验证.结果 模型组差异表达基因IL-1β、CXCR2、CCL5、IL-10、IL-6、IL-18、TGF-β1、CCL2明显上调,较正常组差异显著.各剂量治疗组对IL-1β、CXCR2、IL-10、IL-6表达有显著的下调作用,SM及SS组下调IL-18、TGF-β1、CCL2、CCL5基因的表达,JM及JL组下调差异表达基因IL-18、CCL5.qRT-PCR和Western blot法结果显示,两种方药各剂量组均可降低IL-1β的mRNA与蛋白表达(P＜0.05或P＜0.01).SM组和JM组对IL-8、IL-10、RANTES、ICAM-1的mRNA有显著抑制(P＜0.05或P＜0.01).qRT-PCR结果与基因芯片结果基本一致.结论 疏风宣肺方和解表清里方均可抑制流感病毒感染后肺组织的免疫炎症损伤.
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破骨细胞骨吸收上清液对骨髓间充质干细胞增殖分化的影响
目的 研究破骨细胞骨吸收活动中的分泌产物对骨髓间充质干细胞增殖、分化的影响.方法 诱导小鼠脾脏细胞为破骨细胞,用抗酒石酸盐酸性磷酸酶(TRAP)染色.破骨细胞与牛骨磨片共培养,扫描电镜观察骨吸收陷窝.收集骨吸收实验破骨细胞培养上清液作用于小鼠骨髓间充质干细胞(BMSC),MTT法检测BMSC生长曲线;成骨诱导后钙化结节茜素红染色法检测BMSC成骨能力;成脂诱导后油红O染色检测BMSC成脂能力;Western blot法检测小鼠BMSC成骨相关蛋白RUNX2、碱性磷酸酶(ALP)及成脂相关蛋白过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPAR-γ)的表达.结果 TRAP染色、扫描电镜显示脾脏细胞可诱导分化为具有骨吸收能力的破骨细胞;与对照组相比,加入破骨细胞培养上清液,BMSC的增殖受到抑制,成骨分化增强,成脂分化减弱(P＜0.05).结论 破骨细胞骨吸收上清液具有使BMSC增殖能力降低,成骨分化增强,成脂分化减弱的作用.
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辛二酰苯胺氧肟酸对血管生成的抑制作用及其机制
目的 研究辛二酰苯胺氧肟酸(SAHA)对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)生物学特性的影响及对血管生成的作用.方法 CCK-8法检测SAHA对HUVEC增殖能力的影响.TranswellTM小室法、基质胶体外成管实验、Western blot法、基质胶体内血管生成实验分别观察15 μmol/L SAHA处理HUVEC 48 h后HUVEC迁移能力的变化;HUVEC在基质胶上形成管腔样结构的能力;HUVEC细胞中血管内皮生长因子(VEGF)信号通路相关蛋白表达的变化以及小鼠体内基质胶栓中新生血管的数量.结果 SAHA能够抑制HUVEC的增殖,抑制作用呈剂量、时间依赖性;与对照组相比较,SAHA处理组迁移过膜的HUVEC细胞数明显降低;HUVEC形成的管腔样结构SAHA处理组明显少于对照组;SAHA抑制HUVEC中VEGF相关信号通路;SAHA处理后小鼠体内的基质胶栓中新生的血管数明显少于对照组.结论 SAHA能够抑制HUVEC增殖及体内外血管形成能力,并且其可能机制是SAHA阻断了VEGF相关的信号通路.
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慢病毒介导的shRNA对A549细胞Pin1表达的干扰作用
目的 构建Pin shRNA慢病毒载体,建立稳定抑制肽基脯氨酰顺反异构酶1(Pin1)表达的A549细胞系.方法 根据查阅文献获得Pin1 shRNA干扰靶点序列并插入pLenR-GPH载体,构建pLenR-GPH-Pin1 shRNA慢病毒载体,随后转入人胚肾HEK293T细胞中,收集其上清进行病毒滴度测定,再行慢病毒的包装,将获得的慢病毒毒液感染A549细胞.通过实时定量PCR(qRT-PCR)及Western blot法检测Pin1在不同组的表达抑制情况.结果 经限制性内切酶鉴定及测序分析,成功构建了pLenR-GPH-Pin1 shRNA慢病毒载体质粒,包装并得到高滴度的病毒颗粒.通过qRT-PCR和Western blot法检测显示,与对照组相比,pLenR-GPH-Pin1shRNA慢病毒载体感染的A549细胞中Pin1的表达在mRNA和蛋白水平均有所下降.结论 慢病毒介导的shRNA能够有效下调A549细胞中Pin 1的表达.
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miR-145在转染的HeLa细胞中的表达及其对CDK6的靶向抑制
目的 构建miR-145高效表达载体,研究其对宫颈癌HeLa细胞增殖的影响.方法 人工合成miR-145基因序列,构建真核重组质粒pcDNATM6.2-GW-miR-145,并转染-HeLa细胞,将HeLa细胞分为转染miR-145组、空载体组和未经处理的HeLa细胞组.采用实时荧光定量PCR (qRT-PCR)和Western blot法分别检测miR-145及其下游靶基因细胞周期蛋白依赖性激酶6(CDK6)在各组中的表达,采用MTT法检测miR-145对HeLa细胞增殖活性的影响.结果 经测序和qRT-PCR分析鉴定证明重组质粒pcDNATM6.2-GW-miR-145构建成功,qRT-PCR和Western blot结果显示转染miR-145组的HeLa细胞中CDK6的表达水平明显降低,MTT试验结果显示转染miR-145的HeLa细胞其增殖活性明显受到抑制(P＜0.05).结论 成功构建miR-145真核表达载体pcDNATM6.2-GW-miR-145,miR-145能够抑制宫颈癌HeLa细胞中CDK6的表达.
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胃癌相关下调基因在胃癌及癌前病变中的表达及其意义
目的 观察胃癌相关下调基因(GDDR)在胃癌及癌前病变中的表达变化,探讨GDDR在胃黏膜癌变过程中的作用和意义.方法 应用免疫组化SP法测定经胃镜活检和病理确诊的40例正常胃黏膜组织,40例慢性浅表性胃炎,40例慢性萎缩性胃炎,40例胃的肠上皮化生,20例轻度异型增生,20例重度异型增生和40例胃癌中的GDDR蛋白表达情况.结果 从正常胃黏膜组织、慢性浅表性胃炎、慢性萎缩性胃炎、胃肠上皮化生、轻度异型增生、重度异型增生、胃癌的发展过程中,GDDR蛋白表达逐渐下调(平均秩次分别为190.70、182.70、146.24、104.40、70.33、47.20和40.20),差异有统计学意义(P＜0.05).结论 GDDR表达下调发生在胃癌形成早期,提示GDDR在胃癌的早期诊断和治疗中起重要作用,有望成为胃癌早诊的分子标记物和分子治疗的新靶点.
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细胞周期蛋白D1、结缔组织生长因子和血管内皮生长因子在食管鳞癌中的表达
目的 探讨细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、结缔组织生长因子(CTGF)和血管内皮生长因子(VEGF)在食管鳞状细胞癌(ESCC)组织中表达特征.方法 应用实时荧光定量PCR法和免疫组织化学法分别检测33例ESCC标本及相应癌旁组织(33例)中的cyclin D1、CTGF、VEGF mRNA和蛋白的表达水平.结果 与癌旁组织相比,在mRNA和蛋白水平,ESCC组织中cyclin D1、CTGF、VEGF表达均增加,差异有统计学意义(P＜0.05);并且在ESCC组织中,上述3个生物因子的mRNA及蛋白水平表达成正相关(r=0.418、0.733、0.659;P＜0.05).结论 ESCC中cyclin D1、CTGF、VEGF在mRNA和蛋白水平表达均增高.
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结直肠癌患者肿瘤浸润Th17细胞与临床病理特征相关性分析
目的 探讨结直肠癌患者肿瘤浸润Th17细胞占淋巴细胞比例与临床病理特征相关性.方法 采用流式细胞术检测28例结直肠癌患者正常黏膜组织和肿瘤组织中Th17细胞占淋巴细胞比例;用ELISA检测患者正常黏膜组织和肿瘤组织培养上清液中IL-17A水平,收集患者临床病理资料分析肿瘤组织中Th17细胞和IL-17A水平与临床病理特征的关系.结果 结直肠癌患者肿瘤组织中Th17细胞占淋巴细胞比例为(2.47±0.34)％,正常黏膜组中为(2.24±0.24)％,二者之间无统计学差异(P＞0.05).肿瘤组织培养上清液中IL-17A水平为(257.74 ±31.36) pg/mL,高于正常黏膜组(163.53±12.62)pg/mL(P ＜0.05).结直肠癌患者肿瘤组织中Th17细胞及IL-17A水平与患者年龄、性别、肿瘤位置、肿瘤大小及肿瘤生长方式无关(P＞0.05),而与肿瘤分化程度、淋巴结转移情况及TNM分期相关(P＜0.05).正常黏膜组织中Th17细胞及IL-17A水平与各项临床病理参数无相关性.结论 Th17细胞可能参与了结直肠癌发生发展的免疫病理过程.
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慢性乙型肝炎患者中性粒细胞中乙型肝炎病毒的检测和分析
目的 探讨乙型肝炎病毒(HBV)能否感染慢性乙肝患者中性粒细胞并在中性粒细胞复制增殖.方法 以中性粒细胞分离液分离、纯化中性粒细胞,PCR检测中性粒细胞内HBV-DNA.结果 慢性乙型肝炎患者治疗前中性粒细胞内HBV-DNA阳检率为30.95％ (13/42),其中“大三阳”、“小三阳”患者中性粒细胞内HBV-DNA阳检率分别为52.94％ (9/17)和16.00％(4/25);阿德福韦酯治疗后中性粒细胞内HBV-DNA阳检率为9.52％ (4/42),其中“大三阳”、“小三阳”患者中性粒细胞内HBV-DNA阳检率分别为17.65％ (3/17)和4.00％ (1/25),慢性乙型肝炎各组治疗前后阳检率相比均有统计学意义(P＜0.05).结论 HBV可感染患者中性粒细胞形成肝外隐匿感染;阿德福韦酯对潜伏或隐匿于中性粒细胞内的HBV具有较好的抑制作用.
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施马伦贝格病毒核衣壳蛋白单克隆抗体的制备及其特性分析
目的 制备施马伦贝格病毒(SBV)核衣壳蛋白(N)的单克隆抗体(mAb)并分析其特性.方法 将SBV N基因分别构建至pET-28a-c(+)和pMAL-c5X载体中,在大肠杆菌中诱导表达带组氨酸标签的融合蛋白His-SBV-N和带麦芽糖结合蛋白(MBP)标签的融合蛋白MBP-SBV-N,分别用镍-次氮基三乙酸(Ni-NTA)树脂和直链淀粉树脂纯化两种蛋白;用纯化的His-SBV-N免疫BALB/c小鼠制备mAb,以MBP-SBV-N为包被抗原间接ELISA筛选分泌mAb的杂交瘤细胞和测定mAb效价,利用蛋白G琼脂糖凝胶从腹水中纯化mAb;应用Western blot和间接免疫荧光分析mAb的反应性和特异性.结果 筛选并纯化出1株抗SBV的mAb(命名为1F2),效价为1∶32 000,重链亚型为IgG2α,轻链为κ;1F2既能与重组SBV N蛋白发生反应,又能识别SBV,但与布尼亚病毒科内亲缘关系较近的沙门达病毒、道格拉斯病毒和赤羽病病毒的N蛋白存在交叉反应,而与裂谷热病毒N蛋白无交叉反应.结论 成功制备了抗SBV核衣壳蛋白的mAb,为SBV的血清学检测提供了工具.
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抗人CA125单克隆抗体的制备、鉴定及化学发光体系的建立
目的 制备抗人糖抗原125(CA125)单克隆抗体(mAb),并建立化学发光免疫分析法检测体系.方法 将人CA125抗原免疫小鼠,通过细胞融合、筛选后得到杂交瘤细胞株.经细胞扩大培养及纯化获得mAb,鉴定其特异性、纯度、亚型及效价,并建立双抗体夹心ELISA.分别对包被缓冲液、包被浓度和加样模式进行优化和选择后,建立化学发光免疫分析法检测体系,并对其进行评估和血样的测定.结果 获得3株抗人CA125的杂交瘤细胞株(30-1-4、31-1-5、43-1-6),不与CA199、CA50、CA724交叉,效价在1∶108以上,用30-1-4和31-1-5建立的化学发光免疫分析法经优化后,检测范围为0～1 000 U/mL,低检测限为0.72 U/mL,与罗氏试剂检测结果的相关系数大于0.90.结论 成功制备了抗人CA125 mAb,建立并优化了人CA125的化学发光免疫分析法检测体系,为CA125检测及卵巢癌的诊断奠定了基础.
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鸡源性高迁移率族蛋白B1多克隆抗体的制备及应用
目的 制备针对鸡的高迁移率族蛋白B1(chHMGB1)特异性抗原亲和层析多克隆抗体,并进行初步应用.方法 反转录PCR扩增chHMGB1的全长编码基因,通过序列比对分析筛选一段特异性的多肽序列,偶联载体后作为抗原免疫新西兰兔,采集血清,通过蛋白A柱及多肽偶联的Seprose4B柱得到亲和层析纯化的多克隆抗体;并利用Western blot法、间接免疫荧光染色、免疫组化方法进行鉴定.结果 成功制备了抗chHMGB1特异性的多克隆抗体.各项实验结果表明该抗体能特异性的识别重组蛋白以及天然的chHMGB1蛋白.结论 成功制备了鸡源性高迁移率族蛋白B1亲和层析多克隆抗体.
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IL-23与哮喘气道炎症关系的研究进展
IL-23是由P40和特异性P19两个亚单位组成的一种新型异源二聚体细胞因子,并与多种自身免疫性疾病及气道炎症性疾病有关.如实验性自身免疫性脑脊髓炎、克罗恩病等,慢性气道炎症性疾病如哮喘、慢性阻塞性肺疾病等.近来临床研究发现哮喘患者血清及肺组织IL-23水平明显升高,且与肺功能改变、激素治疗效果密切相关.本文主要综述了IL-23在哮喘发生发展中的调控作用.
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CD40抗体——一种新型免疫佐剂的机制及应用研究进展
抗体是基础生命科学研究领域不可或缺的工具.CD40信号转导通路参与了抗体的合成与分泌,抗CD40抗体可通过激活CD40信号通路,极大地增强抗原尤其是半抗原的免疫原性,是一种新型、有潜能的免疫佐剂,并且其抗原表达与抗体制备过程相对简单、毒性小,可用于常规免疫和疫苗的生产.本文综述了抗CD40抗体佐剂的特性、作用机理及其影响因素和应用.
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成纤维细胞Toll样受体和NOD的表达及功能研究进展
Toll样受体(TLR)和核苷酸结合寡聚体结构域蛋白(NOD)是先天性免疫应答中识别各种病原微生物保守结构的模式识别受体,与多种细菌和病毒感染性疾病相关.成纤维细胞广泛分布于机体各个组织,通常是一种不活跃的细胞.研究发现,一些组织的成纤维细胞表达多种TLR和NOD,并积极主动参与先天性免疫反应.本文综述了TLR和NOD的组成、结构及功能,并总结了一些重要组织中成纤维细胞TLR和NOD的表达及其介导的免疫相关作用.
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滤泡辅助性T细胞及其与自身免疫性疾病关系的研究进展
滤泡辅助性T(Tfh)细胞是一类新的CD4+T细胞亚群,主要功能是辅助B细胞参与体液免疫.与其他亚群的CD4+T细胞如Th1、Th2和Th17细胞相比,对于Tfh细胞的发育过程及其功能的了解还不是很清楚;此外,对于人体中Tfh细胞的发育以及与自身免疫性疾病的关系也不是很清楚.然而,近几年来通过对系统性红斑狼疮小鼠模型以及患有系统性自身免疫性疾病的患者的研究表明Tfh细胞对致病性自身抗体的产生发挥着重要调控作用.本文主要综述了Tfh细胞的发育、功能以及Tfh细胞异常与自身免疫性疾病的关系.
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警报素IL-33及其与疾病的关系
随着功能基因组学和生物信息学的深入研究,白细胞介素1 (IL-1)家族的新成员不断被发现,人们对其功能的研究也越来越深入.在哺乳动物,IL-1家族至少有11个成员:IL-1F1/IL-1α、IL-1 F2/IL-1β、IL-1 F3/IL-1 Ra、IL-1F4/IL-18、IL-1F5/IL-36Ra、IL-1F6/IL-36α、IL-1F7/IL-37、IL-1 F8/IL-36β3、IL-1 F9/IL-36γ、IL-1F10/IL-38和IL-F11/IL-33,针对IL-1β3、IL-1 Ra及IL-18的中和活性单克隆抗体或重组蛋白已被批准成功应用于多种临床疾病的治疗.IL-33是IL-1家族的新成员,可刺激不同细胞因子的产生,诱导Th2应答,参与抗感染免疫及炎症反应,近年来,已成为白细胞介素研究领域中关注的热点.现就有关IL-33的结构和产生、生物学功能以及IL-33与不同疾病的关系进行综述.
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两种不规则抗体筛查试验的应用比较
目的 比较两种不规则抗体筛查试验的准确性和敏感性.方法 将凝聚胺法筛查出的不规则抗体阳性标本23例用微柱凝胶法进行不规则抗体的复检,然后用经典抗人球蛋白法验证.以经典抗人球蛋白法为标准,分析微柱凝胶法和凝聚胺法的假阳性率.结果 凝聚胺法的假阳性率为8.7％;微柱凝胶法无假阳性;3种不规则抗体检测方法的差异无统计学意义结论 凝聚胺法和微柱凝胶法用于不规则抗体筛查的敏感性均高,凝聚胺法有一定程度的假阳性率.广谱抗人球蛋白微柱凝胶法的方法简单,规范,可以代替经典抗人球蛋白法筛查不规则抗体.
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封闭负压引流促进猪腹部爆炸伤创面愈合的实验研究
目的 探讨在猪腹部爆炸伤合并内脏外露时,使用封闭负压引流(VSD)控制腹腔、创面感染的作用以及对腹部爆炸创面愈合是否有促进作用.方法 爆炸伤导致的全层腹壁缺损的动物随机分为实验组(VSD组)和对照组(盐水纱布组),实验组在6h清创后置入压力为-125mmHg VSD装置;对照组在6h清创后使用盐水纱布覆盖爆炸创面,常规换药治疗.分别采集治疗前6h和治疗后1、3、5、7d的创面肌肉组织进行细菌检测,分析2组的细菌量;ELISA检测伤后1、3、5、7d的腹部引流液肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白细胞介素-1(IL-1)、IL-6的表达水平;采集2组治疗后第7天的皮肤、肌肉组织标本,用实时定量PCR分析血管内皮细胞生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、表皮生长因子(EGF)及基质金属蛋白酶-9(MMP-9)相对表达量.结果 VSD组在治疗后1、3、5、7d创面的细菌数(CFU/g)明显少于对照组,两组比较有统计学差异(P＜0.01).猪腹部引流液中TNF-α,IL-1,IL-6的表达量在伤后治疗第1天两组没有显著性差异,在第3、5、7天VSD组明显低于同时间对照组,三个时间点两组比较均有显著性差异(P＜0.01).VSD组在第7天皮肤软组织中VEGF、EGF、bFGF的表达量均高于对照组(P＜0.01),但MMP-9的表达无明显差异(P＞0.05).结论 VSD可以有效控制创面的细菌量,减少腹腔引流液中TNF-α、IL-1、IL-6的表达量,促进创面生长因子表达.
| 年 | 期数 |
| 2018 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2017 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2016 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2015 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2014 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2013 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2012 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2011 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2010 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2009 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2008 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2007 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2006 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2005 | 01 02 03 04 05 06 z1 |
| 2004 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2003 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2002 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2001 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2000 | 01 02 03 04 05 06 |
| 1999 | 01 02 |
| 1995 | 01 02 03 |
| 1994 | 01 02 |
| 1993 | 01 02 03 04 |
| 1992 | 01 02 03 04 |
| 1991 | 01 02 03 04 |
| 1990 | 01 02 |
| 1989 | 01 02 03 04 |
