细胞与分子免疫学杂志
Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology 세포여분자면역학잡지
- 主管单位： 中国免疫学会；第四军医大学
- 主办单位： 陕西省免疫学会,中国免疫学会
- 影响因子： 0.81
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 1007-8738
- 国内刊号： 61-1304/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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小鼠胸膜间皮细胞培养上清对胸腺细胞增殖的影响
目的: 研究小鼠胸膜间皮细胞培养上清(MPMS)及参照组小牛胸腺肽(IOT)对胸腺细胞增殖与功能的影响.方法: 取BALB/c小鼠胸膜组织块直接培养和用胰蛋白酶消化后培养胸膜间皮细胞.于培养的不同时间, 取MPMS及IOT对ConA刺激胸腺细胞的增殖, 采用3 H-TdR掺入法测定.结果: 直接培养法收集的MPMS-A在以1∶ 1及1∶ 10稀释时, 对胸腺细胞的增殖均具有明显地抑制作用, 与对照组(培基+胸腺细胞, MT)相比较差异显著(P<0.05 ～0.01); 用胰蛋白酶消化法收集的培养3 d的MPMS-B, 在同样的稀释度时, 对小鼠胸腺细胞的增殖也具有抑制作用(P<0.05).但培养9 d收集的MPMS-A及培养3 d收集的MPMS-B, 均作1∶ 10稀释时, 两者对ConA刺激的胸腺细胞的增殖具有促进作用, 与对照组(MT+ConA)相比较差异显著(P＜0.05～0.01).结论: MPMS对正常胸腺细胞的增殖具有抑制作用; 但对ConA刺激的胸腺细胞的增殖却具有双向作用, 1∶ 10稀释时, 表现为抑制作用; 而培养3 d的MPMS-B作1∶ 10稀释时, 表现为增强作用.
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束缚应激对S180荷瘤小鼠Th1/Th2型细胞因子及肿瘤生长的影响
目的:观察束缚应激对荷S180瘤小鼠Th1/Th2型细胞因子及肿瘤生长的影响.方法:取腹腔传代第7天的肿瘤细胞S180,调细胞密度至1×1010/L,注射于昆明小鼠右腋皮下,每只0.2 mL.接种后束缚限制活动,8 h/d,并设单纯束缚组、单纯肿瘤组和正常对照组.10 d后处死小鼠,剥取肿瘤称瘤重,计算胸腺指数,分别采用MTT比色法和丝裂原激活淋巴母细胞法检测脾T细胞增殖及产生Th1型细胞因子IL-2、IFN-γ的能力,并取血清用ELISA法检测Th2型细胞因子IL-4、IL-10的含量.结果:束缚应激可明显增加荷瘤小鼠的瘤重(P＜0.01),降低小鼠胸腺指数和脾T细胞的增殖能力(P值分别＜0.01),降低荷瘤小鼠脾细胞产生IL-2和IFN-γ的能力(P值分别＜0.01),并可使小鼠血清IL-4、IL-10的含量明显增加(P值分别＜0.01和＜0.05).结论:束缚应激可显著抑制荷瘤小鼠的细胞免疫功能,使产生Th1型细胞因子的功能减弱,Th2型细胞因子的含量增加,导致Th1/Th2细胞的平衡进一步向Th2细胞漂移.这可能是其促进肿瘤生长的重要机制.
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小鼠SLC基因真核表达载体的构建及其趋化活性鉴定
目的:克隆小鼠次级淋巴样组织趋化因子(secondary lymph-oid-tissue chemokine,SLC)基因,并构建真核表达载体.在体内外检测该表达载体表达产物的免疫趋化功能.方法:用RT-PCR从C57BL/6小鼠胸腺组织中克隆小鼠SLC基因,构建真核表达载体pcDNA3.1-mSLC.在体外,用基因枪转染小鼠黑色素瘤B16F10细胞;RT-PCR检测转染细胞有SLC的表达;利用趋化小室法,检测表达产物针对淋巴细胞的趋化活性.在体内,用基因枪通过小鼠皮肤局部转染SLC基因,观察转染局部淋巴细胞的浸润.结果:克隆的基因经测序证实,为小鼠SLC基因Scya21b型.转染SLC基因的B16F10细胞体外培养48 h后,RT-PCR检测到SLC的表达,同时培养基上清具有针对淋巴细胞的趋化活性.通过基因枪局部转染小鼠皮肤,24 h后皮肤病理检查显示,局部皮内有明显的淋巴细胞浸润.结论:从小鼠胸腺组织中克隆到小鼠SLC基因,构建的真核表达载体pcDNA3.1-mSLC在体内外均可以表达,并具有针对淋巴细胞的趋化活性.
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DnaJ类分子伴侣PBP的基因克隆及亚细胞定位研究
目的:从人骨骼肌cDNA文库中,分离、鉴定视网膜感光受体外周蛋白的结合蛋白(PBP)-DnaJ(HSP40)类分子伴侣,并初步分析其在转染的哺乳动物细胞中的表达及分布.方法:以32p-dCTP标记探针杂交筛选人骨骼肌cDNA文库,对阳性克隆进行序列分析,并以脂质体介导转染哺乳动物细胞,用免疫印迹及间接免疫荧光染色法检测目的蛋白的表达.结果:筛选出全长pbp基因,经与GenBank中的序列比较分析证实,与DnaJ家族的1个成员-mrj(1.5kb)的序列相同,且含140 bp左右富含GC的非编码区上游序列.在COS-7细胞中瞬时表达的PBP,大多呈典型的胞浆分布,而J-domain缺失的pbp片段多为胞核分布.而在CHO细胞中稳定表达的PBP,在处于不同细胞周期时相的细胞中的分布不同.结论:DnaJ除与HSP70(DnaK)协同发挥重要功能外,其本身作为分子伴侣也可能发挥着重要作用,且与细胞周期可能存在某种密切联系.
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TRAIL-GST融合蛋白基因的表达及其活性的初步研究
目的:获得TRAIL全长基因并在原核表达系统中表达.方法:通过RT-PCR方法,从人外周血细胞中克隆TRAIL全长基因,再克隆其至原核表达载体pGEX-2T中,并在大肠杆菌JM109细胞中表达.结果:获得了TRAIL基因.序列分析表明,该序列与GenBank数据库中的序列一致.其原核表达产物能够抑制肿瘤细胞系KB细胞及Hela细胞的生长,终导致细胞凋亡.结论:原核表达体系表达了具有生物学活性的TRAIL,为进一步研究其抗肿瘤活性奠定了基础.
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人同种异体抗原诱导的T细胞克隆在体外的建立及鉴定
目的: 在体外建立长期培养的人T细胞克隆.方法: 以60Co照射的无关PBMC作为饲养细胞, 在条件培养液中以有限稀释法对经单向混合淋巴细胞反应活化的T细胞进行克隆化.用免疫荧光染色和流式细胞术分析鉴定所获克隆.结果: 获得的16株克隆中, 除1株外, 均为αβT细胞.15株αβT细胞克隆中, 有9株为Th(3株Th0、6株Th2), 6株为Tc(5株Tc0, 1株Tc2).结论: 建立了15株稳定的T细胞克隆并进行了鉴定, 为Tc1和Tc2亚群标记和功能的研究打下了基础.
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CTLA4Ig修饰的树突状细胞在体外对淋巴细胞增殖及胞毒效应的影响
目的: 探讨CTLA4Ig修饰的树突状细胞(DC)对T细胞增殖和细胞毒性T细胞(CTL)细胞毒活性的影响.方法: 采用脂质体转染法, 将质粒pG/CTLA4Ig转入DC.采用ELISA和SDS-PAGE鉴定转染质粒pG/CTLA4Ig的DC培养上清.以C57BL/6小鼠的单个核细胞作为反应细胞, 以未修饰的DC及修饰的DC作为刺激细胞, 共培养6 d, 用MTT比色法检测细胞的增殖.用乳酸脱氢酶法和ELISA法, 分别测定细胞毒活性及T细胞凋亡.结果: CTLA4Ig融合蛋白和修饰的DC, 对同种细胞刺激的增殖反应有明显地抑制作用; 而未修饰的DC可显著诱导淋巴细胞增殖反应.CTLA4Ig融合蛋白和修饰的DC, 对特异性CTL的细胞毒活性有明显地抑制作用, 且可诱导T细胞凋亡.结论: 稳定表达CTLA4Ig融合蛋白的DC, 对T细胞增殖和对CTL的细胞毒活性具有明显地抑制作用, 并可诱导T细胞凋亡.
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可溶性HLA-A2-肽组装复合物的研制及初步鉴定
目的: 诱导表达HLA-A2的两个亚基-重链(HC)和轻链β2m, 并将其纯化产物和特异性肽段结合为HLA-A2-肽复合体.方法: 将HC工程菌和β2m工程菌经0.5 mmol/L IPTG诱导5 h.经超声破菌及专利技术处理获得精制包涵体, 再复性、超滤浓缩后, 用DEAE Sepharose Fast Flow阴离子交换层析进行纯化.然后, 将HC、β2m与两条特异性肽段分别结合, 用Superdex 75凝胶过滤纯化, 并用其天然结构的单克隆抗体(mAb)W6/32进行初步鉴定.结果: HC工程菌和β2m工程菌诱导表达的水平分别为43%和47%, HC和β2m纯化后的纯度均达到95%.两条特异性肽段与HC和β2m可组装成HLA-A2-肽复合体, 纯化的HLA-A2-肽复合物在4℃可保存2个月左右, 并可与mAb W6/32特异性结合.结论: HLA-A2的HC工程菌和轻链β2m工程菌均具有较高的表达水平, 与相应的特异性肽段可形成稳定的可溶性HLA-A2-肽复合物, 为进一步研究细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的识别和应答奠定了基础.
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rhIL-2与阿霉素白蛋白磁微球靶向治疗肿瘤的协同作用
目的: 观察重组人白细胞介素-2(rhIL-2)瘤内注射和阿霉素白蛋白磁微球(ADM-MAM)联合外磁场联合治疗H22荷瘤小鼠的协同作用, 并探讨其抗肿瘤作用机制.方法: 以荷瘤小鼠的瘤重为指标, 观察药物的抗肿瘤活性.以乳酸脱氢酶释放法测NK细胞的杀伤活性.以MTT比色法测淋巴细胞的转化率.以流式细胞术检测肿瘤细胞的凋亡及p53、Fas和FasL的表达.用RT-PCR法测定IL-2及IL-12的表达.探讨抗肿瘤机制.结果: ADM-MAM靶向治疗与rhIL-2联用, 可显著减小荷瘤小鼠的瘤重; 提高NK细胞的杀伤活性和脾脏淋巴细胞的转化率; 减小肿瘤细胞的增殖指数, 上调肿瘤细胞p53、Fas和FasL的表达, 以及增加脾脏淋巴细胞上IL-2及IL-12的表达.结论: ADM-MAM联合外磁场, 具有显著增强抑瘤的作用.rhIL-2能增强ADM-MAM靶向治疗的抗肿瘤作用, 其抗肿瘤协同作用主要是通过促进T细胞增殖, 刺激NK细胞增长等提高机体的免疫功能而实现的.
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肾移植患者尿液MCP-1检测的意义
目的: 检测肾移植受者尿液中单核细胞趋化性肽-1(MCP-1)的含量, 了解其变化规律, 探讨其在肾移植急性排斥反应中的意义.方法: 用ABC-ELISA法, 检测尿液中MCP-1的含量.结果: 肾功能稳定的肾移植受者尿液中MCP-1的水平为(416±21) μg/L, 对照组为(408±11) μg/L, 两者无明显差别.发生急性排斥反应的肾移植受者, 尿液中MCP-1的水平为(1195±58) μg/L, 明显高于对照组和肾功能稳定者(P<0.01).经抗排斥治疗后, 对治疗有反应的急性排斥反应受者, 尿液中MCP-1的水平明显下降.结论: 尿液中MCP-1的水平与肾移植急性排斥反应有密切关系.检测尿液中MCP-1的水平有助于急性排斥反应的诊断及预后判断.
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顺序特异性引物聚合酶链反应技术对HLA-DR DNA的分型
目的: 应用顺序特异性引物聚合酶链反应技术(PCR-SSP)进行临床肾移植供受者HLA-DR位点DNA的分型.方法: 设计并合成HLA-DR位点16对特异性引物和1对阳性对照引物, 建立PCR-SSP法, 对52份临床肾移植供受者的外周血淋巴细胞样本进行DR位点基因的分型.结果与微量PCR-SSP基因分型试剂盒分型方法比较. 结果: 所有临床样本的PCR-SSP基因分型均获得成功, 结果与微量PCR-SSP基因分型试剂盒分型方法完全相同, 分型时间3 h, 特异性和重复性100%. 结论: 应用合成引物为临床肾移植供受者进行HLA-DR位点PCR-SSP基因分型简便快捷, 重复性好, 适合于临床应用.
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人疱疹病毒6型感染与淋巴瘤关系的初步研究
目的: 研究人疱疹病毒6型(HHV-6)感染与淋巴瘤的关系.方法: 用间接免疫荧光法及PCR, 分别检测淋巴瘤患者和对照组患者血清中抗HHV-6 IgG及外周血单个核细胞(PBMC)中HHV-6 DNA序列.用免疫组化染色法, 检测淋巴瘤患者淋巴结组织标本中HHV-6抗原.结果: 淋巴瘤患者血清抗HHV-6抗体的阳性率为95.5%, 几何平均滴度为1∶ 123, PBMC 中HHV-6 DNA的检出率为59.1%, 均明显高于对照组(P<0.05).免疫组化染色检测的5例淋巴瘤患者淋巴结组织标本中, 4例HHV-6抗原阳性.结论: HHV-6感染可能与淋巴瘤的发病有关.
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活化诱导胞嘧啶核苷脱氨酶基因多态性与成人哮喘及IgE的相关性研究
目的: 探讨活化诱导胞嘧啶核苷脱氨酶(Activation-induced cytidine deaminase, AICDA)8408C/T基因的多态性与成人哮喘及血浆总IgE的关系.方法: 采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析技术(PCR-RFLP)检测AICDA基因多态性. 结果: 成人哮喘患者AICDA 8408位T/T基因型频率与对照组相比较差异有显著性(P<0.05), T等位基因频率与对照组相比较差异无显著性(P>0.05).成人哮喘组T/T基因型血浆总IgE高于C/C、C/T基因型(P<0.05). 结论: 成人哮喘患者AICDA 8408 位T/T基因型与成人哮喘的发病及高血浆总IgE均相关.
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慢性乙型肝炎患者外周血细胞因子诱导的杀伤细胞的动态观察
目的: 动态观察慢性乙型肝炎患者细胞因子诱导的杀伤(CIK)细胞的增殖及杀伤活性.方法: 抽取10例健康人及20例慢性乙型肝炎患者的外周血, 常规分离单个核细胞(PBMC), 加IFN-γ、IL-2及抗人CD3单克隆抗体(mAb)后培养, 诱导CIK细胞形成.于培养后3、6、12、24及30 d, 取培养的细胞, 用流式细胞仪检测CIK细胞表面CD3、CD4和CD8以及CD4、 CD25、CD3、 CD56和CD95、 CD28分子的表达水平、增殖及杀伤活性.结果: 慢性乙型肝炎患者CIK细胞的增殖及杀伤活性均低于正常对照组.培养不同时间乙肝患者CIK细胞的增殖倍数、杀伤活性和上述表面标志的表达水平, 均较培养前明显增高, 于培养后12 d达高峰.结论: 慢性乙型肝炎患者CIK细胞的增殖倍数、杀伤活性均低于正常人, 但明显高于培养前; 这可能是导致HBV感染持续发展的原因之一.
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白藜芦醇及与环孢菌素A联用对人外周血T细胞免疫功能的影响
目的: 研究不同浓度白藜芦醇(Res)及与环孢霉素A(CsA)联用时, 对人外周血T细胞(hPBTC)的增殖、淋巴细胞母细胞化及IL-2、INF-γ产生的影响.方法: 采用MTT比色法检测hPBTC的增殖.形态学方法观测T细胞转化率.ELISA法检测淋巴细胞培养上清液中IL-2、INF-γ含量.结果: Res的浓度＞2.5 mg/L时, hPBTC增殖及淋巴细胞的转化率均明显降低(P＜0.05), 以10 mg/L的效果为显著; Res浓度＞5 mg/L时, 培养上清液中IL-2和INF-γ的含量下降明显(P＜0.05).Res浓度＞2.5 mg/L时与CsA联用具有协同作用.结论: Res对人淋巴细胞的增殖及母细胞化具有明显的抑制作用, 在一定的浓度范围内其与CsA联合应用能增强免疫抑制作用.
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抗人肝癌单克隆抗体HAb18 Fab基因的克隆和表达
目的: 克隆抗人肝癌单抗(mAb)HAb18的Fab基因, 并在大肠杆菌中表达.方法: 采用RT-PCR法, 利用设计的引物扩增mAb Fd和κ链全长基因, 并分别克隆到T载体中进行序列分析.然后, 亚克隆到原核表达载体pComb3中, 转化感受态大肠杆菌后以IPTG诱导表达.采用ELISA和免疫荧光法检测表达产物的特异性.结果: 克隆了mAb HAb18的Fab基因, 并在大肠杆菌中获得表达.竞争性ELISA和免疫荧光检测证实, 表达产物具有与相应抗原特异结合的活性.结论: 成功地构建了抗人肝癌小分子Fab抗体, 为其进一步在肝癌诊断与治疗中的应用奠定了基础.
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二硫键稳定的抗肝癌单链抗体-PE38融合基因的构建、表达与功能检测
目的: 制备高特异性有杀伤活性的新型抗肝癌免疫毒素.方法: 应用适当的酶切位点, 将二硫键稳定的人源化抗肝癌单链抗体(dsFv)基因及PE38基因克隆入原核表达载体pTIG中.诱导表达上清经Ni-NTA亲和层析柱纯化, 用MTT比色法检测纯化表达产物的细胞毒活性. 结果: 目的融合蛋白在大肠杆菌中得到可溶性表达, 表达产物的Mr为66 000, 表达量占菌体总可溶性蛋白量的21%.细胞毒实验表明, 抗肝癌免疫毒素对肝癌细胞具有杀伤作用, 而对正常肝细胞无损伤. 结论: 抗肝癌dsFv与PE38融合基因的成功构建及表达, 为其作为抗肝癌药物的进一步研究打下了基础.
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凋亡相关蛋白(eIF-5A)-双向电泳分离、编码基因克隆和表达、多抗制备
蛋白质组是指特定细胞、组织或生物体在特定时间所表达的全部蛋白, 对其进行分析的学科被称为蛋白质组学[1].在蛋白质组学的诸多研究方法中, 出现早且目前仍能提供蛋白质组分析所要求的高分辨率的唯一技术, 是双向电泳(2-D PAGE), 由于其可提高分辨率、重复性和简易性良好, 已成为蛋白质组研究的核心技术[2].2-D PAGE用于蛋白质组蛋白表达的全面分析时, 能够分离特定细胞和组织中成百上千的蛋白形式(包括翻译后的变异体).本研究中, 我们以白血病细胞系(Mo-7e细胞)为例, 采用2-D PAGE技术分离凋亡相关蛋白, 用两种常用的质谱方法MALDI-TOF/MS和ESI/MS/MS, 对其中的T点进行了鉴定.以设计的引物, 采用RT-PCR从基因组中钓取了该基因(eIF-5A), 并在E.coli中获得表达.纯化的重组蛋白免疫家兔获得了抗eIF-5A的多抗, 为后续的eIF-5A功能研究提供了检测工具.在应用宽pH范围胶条(pH 3～10)分离白血病细胞凋亡相关蛋白的基础上, 进一步采用窄pH范围胶条(pH 4～7)分离凋亡相关蛋白, 使分离和识别差异蛋白的效果明显得到改善, 且能够识别相同区域中更多的差异蛋白.
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人源抗乳腺癌单链抗体ScFv的基因克隆
乳腺癌的发病率在我国呈上升趋势.鼠源性单克隆抗体(mAb)抗不适用于人体, 而人源化mAb则在乳腺癌的诊断、靶向治疗中具有较高的应用价值[1,2].为此,我们从乳腺癌细胞体外致敏乳腺癌患者外周血中分离的淋巴细胞, 利用噬菌体抗体库技术克隆了人抗体基因, 以期获得抗乳腺癌的人源化单链抗体.
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鼠抗人内皮抑素单克隆抗体的制备与鉴定
目的: 制备抗人内皮抑素的单克隆抗体(mAb), 为深入研究内皮抑素的作用机制提供一种有用的试剂.方法: 以毕赤酵母表达的内皮抑素为免疫原免疫BALB/c小鼠, 采用B细胞杂交瘤技术, 以间接ELISA法筛选分泌抗人内皮抑素的特异性mAb的杂交瘤细胞株, 并诱生腹水. 腹水中的mAb采用Protein A Sepharose CL- 4B进行纯化.以标准的抗Ig血清做ELISA, 鉴定mAb的Ig类、亚类及型; 用免疫印迹法鉴定mAb的特异性.结果: 获得1株可分泌抗人内皮抑素mAb的杂交瘤细胞株4E7, 该株杂交细胞分泌的mAb属于IgG1(λ型).腹水mAb的效价为1×10-4～1×10-6, 纯化后大于1×10-10.免疫印迹结果显示, mAb 4E7可特异性地与酵母及大肠杆菌表达的内皮抑素起反应, 而与bFGF等其他细胞因子不发生交叉反应.结论: 分泌抗人内皮抑素mAb杂交瘤细胞株的建立, 为进一步研究奠定了基础.
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CML66基因的克隆、原核表达及多克隆抗体的制备
目的: 获得原核表达的新的肿瘤抗原CML66蛋白, 并制备兔多克隆抗体.方法: 采用RT-PCR技术从睾丸中获得CML66的cDNA, 亚克隆至pGEMT载体中, 经测序确证后, 将该基因插入原核表达载体pET32b(+)中, 通过电穿孔技术转化E.coli表达菌BL21(DE3), 以IPTG诱导6×His融合蛋白的表达, 并经Ni2+亲和柱层析纯化.通过SDS-PAGE、Western blot鉴定后, 应用纯化蛋白免疫家兔, 制备多克隆抗体.结果: 获得的CML cDNA序列与GenBank登录的cDNA序列一致.用纯化的目的蛋白免疫家兔后, 获得高滴度的特异性兔抗血清.结论: 成功地克隆CML66基因, 建立了原核表达、纯化体系.制备纯化的CML66蛋白和高滴度、特异的兔抗血清.
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用于构建抗人TNF嵌合抗体的鼠单克隆抗体中和活性的鉴定
目的: 筛选构建抗人TNF嵌合抗体所需高质量的鼠源性mAb. 方法: 从一组分泌抗人TNF mAb杂交瘤细胞中, 挑取3株D2、E6和F6, 按常规方法制备腹水.用饱和硫酸铵盐析后, 分别用蛋白A亲和层析和QFF阴离子交换层析法, 纯化D2株分泌的mAb(IgG2b)和E6和F6株分泌的mAb(均为IgG1).纯化前后, 3株mAb的效价, 采用间接ELISA法测定.纯化的3株mAb的中和活性, 通过它们对TNF诱导的L929细胞死亡和上调ECV304细胞上ICAM-1表达的抑制作用来进行鉴定.结果: 间接ELISA检测表明, 3株mAb D2、E6和F6纯化前的效价分别为1×10-6、1×10-7和1×10-7, 纯化后效价分别为0.01、0.002和0.002 mg/L.mAb中和活性的检测表明, 浓度为0.16、0.40和0.50 mg/L的D2、E6和F6, 可保护2×104 U/L TNF诱导的L929细胞半数不发生死亡.1.0 mg/L的mAb D2、E6和F6, 对2×105 U/L TNF使ECV304细胞上ICAM-1表达上调的抑制率, 分别为70.1%、60.1%和60.1%; 3株mAb的浓度降到0.1 mg/L时, 抑制率仍可达到60.1%、53.7%和59.0%.结论: 所选3株mAb的效价及中和活性均较高, 可作为抗人TNF嵌合抗体的候选mAb.
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抗大鼠Nogo分子单克隆抗体的制备与初步鉴定
目的: 制备抗大鼠Nogo分子单克隆抗体(mAb), 为研究Nogo分子的组织分布和功能提供实验手段.方法: 应用淋巴细胞杂交瘤技术制备小鼠源性抗大鼠Nogo mAb.用免疫荧光组织化学技术, 对Nogo分子在大鼠中枢神经系统(CNS)的分布进行鉴定.结果: 获得3株分泌抗Nogo mAb的杂交瘤细胞株.间接ELISA测定腹水效价达10-6, 两株mAb为IgG1(κ)亚类, 另一株为IgG2b(κ), 在免疫荧光组织化学技术应用中获得较满意效果.结论: 获得3株能特异性识别天然Nogo分子的mAb, 为进一步研究Nogo分子的结构和功能奠定了基础.
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细胞因子佐剂对HIV DNA疫苗免疫效果的影响
根据联合国艾滋病规划署(UNAIDS)资料, 在艾滋病流行的20年里, 全世界已有6 000万人感染了人类获得性免疫缺陷病毒(HIV), 其中1/3已因艾滋病或HIV感染相关疾病而死亡.尽管目前公认疗效较好的高效抗逆转录病毒治疗(HAART)在抗HIV感染中取得一定效果, 但由于药物昂贵和HIV耐药株的产生影响了艾滋病治疗, 限制了其在发展中国家使用.因此, 终将需要一种有效的疫苗来控制HIV感染的流行及传播.近年来, 不少学者研究了多种类型的HIV疫苗, 其中引人关注的是HIV-1 DNA疫苗(核酸疫苗).
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骨代谢与免疫功能的相互调节
骨骼与免疫系统在细胞起源、空间分布、功能及调控等方面存在许多相似性, 尤其是近年来对OPG/RANKL/RANK系统研究的深入, 使我们对骨与免疫系统间的相互作用机制有了更进一步的认识, 在此基础上, 有些学者提出了骨骼免疫学(Osteoimmunology)的概念[1,2].骨骼免疫学的概念对于我们了解骨与免疫系统间的相互作用, 理解各种自身免疫性疾病的骨损伤机制, 并进行针对性地治疗具有重要意义.
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共受体信号传导与HIV
众所周知, CD4分子是HIV-1感染靶细胞的主要受体, 但单纯CD4分子对于病毒进入细胞既不是充分的, 也不是唯一的途径.例如一些高水平表达CD4蛋白的人类细胞, 包括未分化的CD4+单核细胞, 对HIV的感染并不敏感.人-人细胞杂交以及人CD4+细胞与啮齿动物体细胞杂交的研究提示, 除CD4分子外, 细胞膜上的其他某些分子也是HIV进入细胞所必需的.基于此, 1996年Feng等证明, 趋化性细胞因子受体CXCR4可辅助嗜T细胞性HIV-1(X4株)进入宿主细胞.此后, 很快又证明, CCR5可辅助嗜单核-巨噬细胞性HIV-1(R5株)感染靶细胞.这些受体称为HIV-1入侵靶细胞的共受体(coreceptor), 又称辅助受体.由于目前所发现的HIV的共受体绝大多数均是趋化性细胞因子受体, 因此共受体一般多指趋化性细胞因子受体.
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肿瘤的靶向治疗不同途径的研究进展
肿瘤的靶向治疗是一种恶性肿瘤的生物治疗方法之一, 其原理是借助高度特异的亲肿瘤物质作为载体, 以有细胞毒作用的物质如放射性核素、化疗药、毒素等与载体结合, 依靠载体的特异性和肿瘤的亲和力, 将细胞毒物质尽量集中在肿瘤部位发挥稳定地杀伤作用, 而对宿主正常组织无害.近20多年来的研究已取得了很大的进展.开辟了多条不同的靶向治疗途径.本文就此方面的研究进展作一综述.
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内毒素体外诱导巨噬细胞炎症蛋白-2γ的表达
目的: 体外研究内毒素对巨噬细胞炎症蛋白-2γ(MIP-2γ)表达的作用. 方法: 选用小鼠单核-巨噬细胞株RAW264.7及原代培养的BALB/c小鼠肾脏细胞用LPS刺激, 以实时荧光定量RT-PCR检测不同时间点MIP-2γ mRNA表达水平的变化. 结果: RAW264.7细胞在LPS 刺激后2 h, MIP-2γ mRNA表达水平快速到达峰值(较正常水平增加约7倍), 以后缓慢下降, 至刺激后16 h基本恢复正常水平.原代培养肾脏细胞经LPS刺激后12 h, MIP-2γ mRNA表达水平增长约50倍. 结论: LPS在体外可明显诱导单核-巨噬细胞和肾脏细胞MIP-2γ mRNA的表达, 提示MIP-2γ参与了炎症过程.
关键词： 内毒素 巨噬细胞炎症蛋白-2γ -
人骨肉瘤9901细胞cDNA表达文库的构建和鉴定
目的: 构建骨肉瘤9901细胞cDNA表达文库, 为筛选骨肉瘤特异性抗原创造条件. 方法: 从9901细胞中提取总RNA, 分离mRNA, 反转录合成双链cDNA, 末端削平, 和EcoRⅠ适配子连接.磷酸化EcoRⅠ适配子5′端, 过Sephacryl-S400柱除去小于400 bp的cDNA片段, 与噬菌体λgt11(载体)连接, 用包装蛋白体外包装后形成初级cDNA文库.取适量包装体系倍比稀释后感染E.coli Y1090, 测定文库克隆数、重组率, 用PCR法测定cDNA插入片段的大小.后扩增cDNA文库. 结果: 建成含1.5×106个重组子的骨肉瘤9901细胞cDNA表达文库, 重组率为94.3%.重组子中插入的外源片段不小于0.5 kb, 平均长约1.4 kb. 结论: 达到良好文库的质量标准, 适合进一步筛选目的cDNA克隆.
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硫化砷诱导HL-60细胞凋亡中端粒酶活性和hTERT mRNA表达的改变
目的: 探讨硫化砷在诱导急性非淋巴细胞白血病(APL)细胞株HL-60凋亡的同时, 对端粒酶活性的影响及作用机制.方法: 采用 PCR-ELISA法测定端粒酶活性; 半定量RT-PCR检测hTERT mRNA的表达; 流式细胞仪分析细胞周期、细胞凋亡及CD11b表达.结果: 用0.3～0.6 mg/L的硫化砷作用72 h, 不能诱导HL-60细胞凋亡, 将剂量增至1.5～3.0 mg/L时, 凋亡细胞的比率逐渐增高, 同时伴随HL-60细胞端粒酶活性和hTERT mRNA表达受抑.随着硫化砷浓度的增高, HL-60细胞在G2/M期的比率渐增高.3.0 mg/L 的硫化砷作用72 h, HL-60细胞CD11b的表达由1.27%升至6.07%.结论: 硫化砷在诱导HL-60细胞凋亡的同时, 下调其端粒酶活性.G2/M期细胞比率的增高可能与端粒酶活性降低相关.高浓度硫化砷72 h可轻度诱导HL-60细胞分化.
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一氧化氮在巨噬细胞的细胞毒效应中的作用
目的: 探讨一氧化氮(NO)对巨噬细胞细胞毒效应的影响. 方法: 将20只昆明种小鼠分为两组, 一组皮下接种S180横纹肌肉瘤细胞, 另一组作为正常对照组.分别取两组小鼠腹腔灌洗液中的巨噬细胞与K562肿瘤细胞共同培养, 检测在培养液中加入左旋精氨酸(L-Arg)和G-单甲基左旋精氨酸(L-NAME)后巨噬细胞杀伤率的改变. 结果: 正常小鼠腹腔灌洗液中的巨噬细胞在L-Arg和L-NAME存在的情况下细胞毒效应没有改变; 荷瘤小鼠腹腔灌洗液中的巨噬细胞在L-Arg组和空白组中的细胞毒效应明显增强. 结论: NO是巨噬细胞细胞毒作用的一个效应分子.
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5-脂氧合酶及其激活蛋白在大鼠腹腔巨噬细胞中的表达
白三烯类是一类花生四烯酸(AA)的5-脂氧合酶(5-lo)代谢通路的产物, 具有多种生物学活性, 与炎性疾病、肿瘤和老年性痴呆等有密切的关系.5-lo是这一通路的关键酶, 可催化AA转变为5-氢过氧化二十碳四烯酸(5-HPETE), 并进一步使其转化为白三烯A4(LTA4)[1].5-lo的活性除了依赖钙离子和ATP外, 还必须有5-脂氧合酶激活蛋白(FLAP)的存在[2].5-lo和5-脂氧合酶激活蛋白(flap)都不是看家基因[2,3].5-lo和flap表达于中性粒细胞、单核巨噬细胞和肥大细胞等细胞中.人外周血单核细胞在培养到第6 d后, 表现出明显的巨噬细胞特征, 但5-lo和FLAP的表达则在培养的过程中明显降低[ 4].本实验中, 我们观察了体外培养的大鼠腹腔巨噬细胞中5-lo和FLAP的表达.
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结核分枝杆菌Ag85B-MPT64融合基因疫苗的免疫效果观察
目的: 研究并比较结核分枝杆菌(H37Rv)Ag85B、MPT64 DNA, 以及两者的融合基因(AM)的免疫原性.方法: 雌性C57BL/6小鼠25只, 随机分为5 组, 即A组(PBS)、B组(pcDNA3.1)、C组(pcDNA/Ag85B)、D组(pcDNA/MPT64)和E组(pcDNA/AM).分别于胫前肌注射7.5 g/L利多卡因和质粒混合物(1∶ 4, 100 μL, 含质粒70 μg/次), 间隔2 wk免疫1次, 共3次.末次免疫后4 wk取血分离血清测定总IgG, 同时分离脾淋巴细胞, 用PPD刺激后分别做脾淋巴细胞增殖实验(MTT比色法)和测定脾淋巴细胞培养上清中IFN-γ的水平.结果: Ag85B、MPT64和AM质粒DNA, 均能诱导小鼠产生较高水平的PPD特异性IgG.免疫小鼠脾淋巴细胞体外经PPD刺激后, 能产生特异性淋巴细胞增殖和分泌IFN-γ.pcDNA/AM组IFN-γ的分泌水平明显高于pcDNA/Ag85B和pcDNA/MPT64免疫组(P<0.05).结论: 结核分枝杆菌Ag85B-MPT64融合基因疫苗, 能在小鼠体内诱导特异性细胞和体液免疫.
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人CD81分子的肝组织特异性稳定表达
目的: 用肝组织特异性启动子, 实现人CD81分子在小鼠肝癌细胞Hepa 1- 6中的稳定表达. 方法: 从能感染丙型肝炎病毒(HCV)的人肝癌细胞系HepG2中提取RNA, 用随机引物合成cDNA的第1条链, 然后用人CD81基因的特异性引物进行PCR扩增, 克隆PCR扩增片段.将经测序证明为人CD81基因的正确序列, 连接到肝特异性启动子的下游, 使CD81基因的3′端与SV40 polyA加尾序列融合, 得到肝组织特异性表达的人CD81融合基因片段.将该融合基因插入真核表达载体pcDNA3中, 转染小鼠肝癌细胞系Hepa 1- 6.经G418加压筛选后, 分别用RT-PCR检测人CD81 mRNA的转录, 用FACS检测人CD81蛋白的表达. 结果: 克隆序列的测序结果与GenBank中登录的序列进行对比表明, 得到了人CD81 cDNA的正确序列.构建的人CD81肝特异性融合基因片段可稳定转染Hepa 1- 6细胞, 并可检测到人CD81在mRNA水平上的转录和在蛋白质水平上的稳定表达.结论: 由于CD81是HCV的感染受体, 稳定表达HCV感染受体-人CD81分子的小鼠肝癌细胞克隆的获得, 为今后研究HCV包膜蛋白与CD81的相互作用、筛选感染阻断药物, 以及发展HCV感染的小鼠动物模型奠定了基础.
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双价痢疾菌苗滴鼻免疫小鼠后不同部位淋巴细胞表型的变化
目的: 观测双价痢疾工程菌苗滴鼻免疫小鼠后, 不同时间、不同部位淋巴组织细胞表型的变化, 探讨痢疾菌苗滴鼻免疫对黏膜和系统免疫应答的影响.方法: BALB/c小鼠随机分为3组, 每组30只, 分别以FSM-2117和FS-5416痢疾菌苗经滴鼻途径免疫小鼠4次, 菌量依次为5×106、1×107、4×107和4×107 CFU/只, 对照组给予PBS, 间隔2 wk.4次免疫后7、30和90 d活杀, 分离NALT、鼻通道、脾、小肠PP结淋巴细胞, 采用流式细胞术检测其淋巴细胞表型的变化.结果: 4次免疫后7 d, 小鼠鼻相关淋巴组织(NALT)、鼻通道(NP)和Peyer ' s结(PP)淋巴细胞中, CD3+ T细胞数均显著增加, 其中以CD4+ T细胞增加为主.FSM-2117免疫组的脾细胞中B220+细胞显著增加; 而FS-5416免疫组的脾细胞中CD3+ T细胞显著增加.4次免疫后30 d, NALT、NP和脾淋巴细胞仍出现上述变化; 而90 d, 仅NALT和NP淋巴细胞出现上述同样变化.结论: 两株双价痢疾菌苗滴鼻免疫小鼠后, 能有效地诱导黏膜和系统免疫应答, 且持续时间较长, 但该免疫应答的减弱是从距免疫部位较远的部位而开始的.
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脑出血患者血中T细胞亚群、IL-2及Sil-2R的检测
急性出血性脑血管病(acute hemorrhagic cerebrovascular disease, AHCVD)是一种严重影响中老年人健康的疾病, 易导致死亡和重残.AHCVD发病后机体免疫功能变化的研究报道较少.我们对43例脑出血患者血T细胞亚群及血清IL-2、可溶性白细胞介素-2受体(sIL-2R)水平变化进行了检测, 目的在于探讨AHCVD患者免疫功能状态及其临床意义, 进而为阐明AHCVD的发病机制、病程演变提供线索, 并为AHCVD的治疗提供一定的依据.
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人疱疹病毒6型感染与白血病关系的初步研究
白血病是来源于造血系统的一种恶性肿瘤, 好发于儿童和青少年, 其病因和发病机制尚不完全清楚, 但病毒病因学较受重视.人疱疹病毒6型(HHV-6)是1986年发现的疱疹病毒科中的一个新成员[1].研究发现, HHV-6的感染与淋巴瘤的发生有一定关系[2,3], 在白血病患者中具有较高的感染率[4].为了探讨HHV-6感染与白血病的关系, 我们采用间接免疫荧光试验(IFA )和PCR, 分别检测了白血病患者血清抗HHV-6 IgG和外周血单个核细胞(PBMC)中HHV-6 DNA的序列.
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抗精子抗体检测法在不育不孕症中的应用
抗精子抗体(AsAb)阳性引起的不孕、不育和自发性流产为自身免疫所致, 占有一定的比例.我们采用酶联免疫法(EIA)检测了不孕、不育和自发性流产患者血清AsAb, 探讨了AsAb阳性与影响生育之间的相互关系.
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玉屏风散对小鼠红细胞免疫黏附功能及腹腔Mφ吞噬活性的影响
玉屏风散由黄芪、白术和防风等组成, 具有扶正止汗、益气固表之功效, 临床上主要用于体虚易感风寒等的治疗.现代研究表明, 方中的黄芪等对机体的部分免疫指标具有促进作用, 我们观察了玉屏风散对小鼠红细胞黏附功能及巨噬细胞吞噬活性的影响, 以探讨其对机体的免疫调节作用.
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外周血中可溶型P选择素的ELISA检测
P选择素是重要的选择素家族成员, 为高度糖基化的I型穿膜蛋白分子, 主要介导中性粒细胞在活化内皮细胞上的滚动, 在炎症早期甚为重要[1].可溶型P选择素(sP选择素)在正常人外周血中以单体形式存在.主要来源于血小板和内皮细胞[2].本实验以已录取军校学员作为研究对象, 获取外周血血清以夹心ELISA检测sP选择素的含量.
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贫血患者红细胞免疫功能的探讨
红细胞具有多种免疫功能[1], 特别是通过其表面C3b受体(R)的免疫黏附功能, 捕获抗原、清除体内免疫复合物(IC)的能力, 更引起人们的重视.红细胞是血液中其他有形成分的100多倍, 故清除外周循环系统中的IC主要靠红细胞.贫血患者由于红细胞数量大量减少, 必将影响机体的免疫黏附功能.为此我们探讨了不同贫血患者红细胞的免疫黏附功能, 以作为鉴别诊断各种贫血的参考指标.
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息敏胶囊对I型超敏反应模型鼠IgE、IL- 4及INF-γ水平的影响
20世纪60年代中期以来, 由于精制特异性变应原的制备、抗组胺药、皮质激素药和β2兴奋剂的合成及应用, 使Ⅰ型超敏反应的治疗效果有了明显提高, 但并没有得到扼制.祖国传统医药在防治I型超敏反应性疾病方面有其独到之处, 中药息敏饮是经多年临床实践经验而配制的验方, 由白藓皮、蛇床子、地肤子、土茯苓、苦参、丹皮、生地、蝉蜕、芥穗、甘草、黄芪、赤芍及山楂等组成[1].新剂型息敏胶囊具有服用方便、剂量容易控制等优点, 在荨麻疹的治疗中已显示出较好的疗效, 但其作用机制尚不明确, 我们拟通过研究其对致敏大鼠IgE、IL- 4及IFN-γ水平的影响, 探讨其抗Ⅰ型超敏反应的免疫学机制.
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类风湿关节炎患者血清IL-6、TNF-α与性激素水平的变化
类风湿关节炎(RA)是一种自身免疫性疾病, 其发病机制与多种因素有关.其中细胞因子与性激素分泌异常在RA发病中起到重要作用.我们对RA患者血清白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)以及雌二醇(E2)、睾酮(TEST)的水平进行了检测, 以探讨其在RA的发生、发展中的作用.
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肿瘤特异性凋亡基因对荷瘤小鼠基因治疗的实验研究
随着分子生物学研究的不断深入和人类基因组计划的完成, 人类正在进入基因诊断和基因治疗的时代, 特别是恶性肿瘤的基因诊断和基因治疗日益受到人们的重视.肿瘤的基因治疗虽然不能替代手术、化疗和放疗, 但其可能对提高化疗、放疗的敏感性, 减少肿瘤术后复发和转移具有一定的作用.近年研究发现, 鸡贫血病毒(chicken anemia virus, CAV)VP3基因编码的一种蛋白质, 可通过独立于p53作用途径、不被Bcl-2抑制的方式, 诱导人肿瘤细胞或转化细胞凋亡, 而对人正常细胞没有毒性作用, 故称之为肿瘤特异性凋亡因子, 鉴于其独特诱导凋亡的作用, 有望成为一种有效的抗肿瘤药物[1,2].我们在克隆和构建了VP3基因真核表达载体的基础上, 进一步研究了其在肿瘤基因治疗中的作用.
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广州地区住院患儿血清抗SARS病毒抗体的检测
非典型肺炎即重症急性呼吸道综合征(SARS)曾蔓延到30多个国家和地区, 造成感染患者达7 000多例, 死亡500多人, 某些地区病死率高达15%[1].但感染人群中儿童很少被感染, 此现象是否与儿童体内存在抗SARS病毒的抗体有关?特此, 我们检测了广州市儿童医院住院的1 066例患儿血清抗SARS病毒的抗体, 现报告如下.
| 年 | 期数 |
| 2018 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2017 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2016 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2015 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2014 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2013 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2012 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2011 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2010 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2009 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2008 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2007 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2006 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2005 | 01 02 03 04 05 06 z1 |
| 2004 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2003 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2002 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2001 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2000 | 01 02 03 04 05 06 |
| 1999 | 01 02 |
| 1995 | 01 02 03 |
| 1994 | 01 02 |
| 1993 | 01 02 03 04 |
| 1992 | 01 02 03 04 |
| 1991 | 01 02 03 04 |
| 1990 | 01 02 |
| 1989 | 01 02 03 04 |
